2019最新版高效液相色谱法操作规程

液相色谱操作规程液相色谱操作规程液相色谱（HPLC）是一种常用的分离和分析技术，广泛应用于制药、化学、食品、环境等领域。

为了确保实验结果的准确性和实验室安全，以下是液相色谱操作的一般规程，供参考。

1. 实验前准备- 检查液相色谱仪的状态，确保仪器正常运行。

检查流动相、样品、色谱柱等试剂和设备的有效性和存放条件。

- 清洗和准备色谱柱。

按照柱内包装说明进行操作，如需更换柱，要将原柱溶液彻底洗净，并严格按照规程存储。

2. 样品准备- 准备样品溶液，注意选用适合的溶剂，并控制样品的浓度在色谱柱适用范围内。

- 对于固体样品，要将其溶解在适当的溶剂中，使用滤膜过滤以除去杂质。

3. 仪器启动和操作- 打开液相色谱仪，确保仪器连接正常并处于待机状态。

- 打开软件，设置操作参数，如流速、检测波长、温度等，并校准仪器。

- 检查进样器和检测器的运行情况，确保它们的正常工作。

- 启动柱温箱并设置温度。

4. 进样和分离- 使用适当的方式进样，如自动进样器或手动进样器，并确保进样量适当。

- 设置适当的流速和柱温，开始分离实验。

- 注意记录实时的色谱图和数据。

5. 后处理和结果解释- 完成分离后，关闭液相色谱仪。

- 分析数据，包括峰面积、保留时间和峰高等，与标准曲线或其他样品对照进行比较。

- 解释和记录实验结果。

6. 清洗和保养- 分离结束后，进行色谱柱的清洗和保养。

根据柱的材质和要求，选择适当的清洗方法和溶剂，彻底清洗柱内的杂质，避免污染或损坏柱。

- 清洗完毕后，根据柱的要求存储或封存，以确保柱的使用寿命。

7. 实验室安全- 在实验过程中，注意个人防护措施，戴上实验手套、护目镜等。

尽量避免将试剂接触皮肤和眼睛，如不慎溅到眼睛或皮肤上应立即用大量清水冲洗。

- 坚持实验室清洁和卫生，在实验后及时清理实验台面、器材和废弃物，保持良好的工作环境。

液相色谱是一项繁琐的实验技术，需要严格遵守操作规程和实验室安全要求。

以上规程仅供参考，具体操作还需根据实验目的、仪器型号和试剂要求进行调整。

高效液相色谱法标准操作规程1. 目的建立高效液相色谱法标准操作规程，规范高效液相色谱法检验操作，保证检验操作规范化。

2. 范围适用于高效液相色谱法检验操作。

3. 术语或定义N/A4. 职责质量控制部对本规程的实施负责。

5. 程序5.1依据《中国药典》2020年四部及2019年版《中国药品检验标准操作规范》。

5.2 简述高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。

注入的供试品，由流动相带入柱内，各组分在柱内被分离，并依次进入检测器，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。

5.3 对仪器的一般要求所用的仪器为高效液相色谱仪，由输液泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理系统组成，仪器应按现行国家技术监督局“液相色谱仪检定规程”定期检定并符合有关规定。

5.3.1色谱柱最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅烷和氨基键合硅烷等) 也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂; 分子排阻色谱系统使用凝胶或高分子多孔微球等填充剂；对映异构体的分离通常使用手性填充剂。

填充剂的性能（如载体的形状、粒径、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、含碳量和键合类型等）以及色谱柱的填充，直接影响供试品的保留行为和分离效果。

孔径在15nm(lnm=10A)以下的填料适于分析分子量小于2000的化合物，分子量大于2000的化合物则应选择孔径在30nm以上的填料。

除另有规定外，分析柱的填充剂粒径一般在3～10μm之间。

粒径更小(约2μm)的填充剂常用于填装微径柱（内径约2mm) 。

使用微径柱时，输液泵的性能、进样体积、检测池体积和系统的死体积等必须与之匹配；如有必要，色谱条件也需作适当的调整。

当对其测定结果产生争议时，应以品种正文规定的色谱条件的测定结果为准。

HPLC高效液相色谱操作规程
1、仪器操作前应仔细阅读操作手册，并在专人指导下进行。

2、打开电源前，检测仪器与电脑的电源线，数据线以及输液管道
是否连接正常。

3、打开电源，在仪器通过自检后，打开操作软件，选择合适的检
测器，建立仪器方法，设定实验方法。

4、将处理好的样品注入样品瓶，封好杯口，将样品瓶按顺序放入
样品盘中。

5、实验结束后，根据色谱柱类型用相应的流动相清洗柱30分钟，
若使用过缓冲液，应该用不少于10%的甲醇或者乙腈水溶液冲洗系统，以防堵塞。

冲洗完成后要用规定的液体保存色谱柱，长期不用要将柱子取下，两端拧紧，密封保存。

6、退出色谱工作站，关闭各模块电源开关，清洁实验工作面。

7、关闭仪器总电源开关，结束实验, 填写仪器使用记录。

注意事项：
1、所使用的流动相、缓冲溶液在使用前需经膜过滤、超声脱气，
样品经针头过滤器（0.02um）过滤。

2、流动相过滤时应注意用相应的有机膜或无机膜，不能混用。

3、停泵时应将泵的流量设置为0，使泵缓慢停止工作。

4、拆装柱时应注意柱子的方向。

hplc操作规程HPLC（高效液相色谱）是一种高效、准确、灵敏的分析技术，广泛应用于化学、生物、药物等领域。

为了确保HPLC分析的准确性和可靠性，有必要制定一份详细的HPLC操作规程。

以下是一个HPLC操作规程的示例，共计1200字。

HPLC操作规程1. 实验前准备工作(1) 确保仪器处于正常工作状态。

检查HPLC系统的压力、流速、温度等参数，确保所有泵、检测器和采样器都能正常工作。

(2) 根据实验的需求，准备好HPLC色谱柱和色谱柱保护柱。

(3) 检查溶液的pH值、浓度等参数，确保样品溶液的配制准确无误。

2. 样品制备(1) 根据实验需求，准确称取适量的样品，并将其溶解于适量的溶剂中。

(2) 需要注意的是，溶解样品时要完全溶解，避免残留物对HPLC柱造成损害。

(3) 使用过滤器或离心机去除样品中的杂质和固体颗粒。

3. 系统平衡(1) 打开HPLC系统的所有阀门，确保流路畅通。

(2) 开始系统平衡前，关闭检测器和采样器，以避免样品流入检测器和采样器。

(3) 启动系统，调整流速至实验所需的流速。

通常流速为0.2-2 mL/min。

(4) 进行15-30分钟的系统平衡，确保系统稳定。

4. 校正和质量控制(1) 定期校正流速、温度和检测器灵敏度等参数，确保实验结果的准确性。

(2) 进行质量控制，包括运行标准曲线、检测器灵敏度和峰面积的稳定性等测试，以确保分析结果的可靠性。

5. 样品注射(1) 将样品以合适的方式注入采样环或自动采样器中。

(2) 确保注射量适当，一般不超过色谱柱的容量的10%。

(3) 使用空白样品作为对照，进行注射前和注射后的检测，以排除注射器、柱等可能引起的峰偏移或异常的情况。

6. 数据采集和分析(1) 设置合适的检测波长和积分时间，以获得准确的检测结果。

(2) 在实验过程中定期检查系统的稳定性和峰形。

(3) 根据实验要求，对分析结果进行计算和解释，包括峰高、峰面积、保留时间等指标。

(4) 记录得到的数据和结果，保存实验记录和报告。

高效液相色谱仪的基本操作和使用1.准备工作：-确保高效液相色谱仪的设备和耗材齐全。

-检查色谱柱，确保色谱柱选择正确并在有效使用期内。

-检查溶剂的质量和纯度，确保溶剂无杂质。

-设置所需的操作温度。

2.连接高效液相色谱仪：-将进样器连接到色谱柱，并将进样针座固定住。

- 将固相柱插入色谱柱座，然后将电导/ UV-Vis检测器连接到色谱柱座。

3.样品制备：-将待测样品溶解于合适的溶剂中，并进行必要的前处理步骤（如过滤、稀释等）。

-对于固体样品，可以采用适当的溶解方法，如超声波处理等。

4.设置色谱仪参数：-开启电源，等待色谱仪预热稳定。

- 打开色谱仪的软件，并设置所需的参数，包括流速、波长（对于UV-Vis检测器）、进样量、运行时间等。

5.校准仪器和程序：-制备标准品溶液，并用标准曲线法对色谱仪进行校准，以确保仪器输出的结果准确可靠。

-确认色谱仪的波长和检测器的线性范围，并根据需要进行修正。

6.进样：-打开进样器盖，用吸尘器吸出残液，然后用纯溶剂将针清洗干净。

-分别进行空白样品和待测样品的进样，保证进样量准确。

7.开始运行：-在软件界面上点击“开始运行”，观察色谱图输出的曲线形状和峰的出现。

-根据需要，可以进行多次重复运行。

8.结果分析：-对于定性分析，根据色谱图的特征峰形状、保留时间和波长，进行物质的鉴别。

-对于定量分析，根据标准曲线和色谱图的峰面积，计算出待测样品中目标物质的浓度。

9.清洗仪器：-运行结束后，关闭仪器，并将进样器和色谱柱进行清洗。

10.维护：-定期检查仪器的性能和功能是否正常。

-及时更换色谱柱、固相柱和检测器，确保仪器的正常运行。

-做好仪器维护和维修记录。

高效液相色谱仪操作规程
《高效液相色谱仪操作规程》
一、实验目的
本实验旨在通过高效液相色谱仪分析样品，准确测定目标化合物的含量，并学习高效液相色谱仪的操作方法和技巧。

二、实验设备
1. 高效液相色谱仪
2. 注射器
3. 色谱柱
4. 移液管
5. 色谱仪软件
三、操作步骤
1. 打开高效液相色谱仪的电源并进行系统初始化，启动色谱仪软件。

2. 调整流速，进样量等参数，使得实验条件符合要求。

3. 将样品通过移液管注入色谱柱中，注意避免样品泡沫和气泡的产生。

4. 设置色谱条件，如梯度洗脱，流速等，启动色谱分析。

5. 记录实验数据和结果，并进行数据处理和分析。

6. 清洗色谱仪，保持设备清洁。

四、实验注意事项
1. 在操作色谱仪时，要严格按照操作步骤进行，严禁随意更改参数。

2. 在进行样品进样时，要小心操作，避免产生气泡和样品泡沫。

3. 在进行色谱分析时，注意梯度洗脱条件的设置，保证分析结果准确。

4. 在实验结束后，及时清洗色谱仪，保持设备干净。

五、实验结果
根据实验数据和结果，可以得出目标化合物的含量和纯度，并进行结果的解释和分析。

通过《高效液相色谱仪操作规程》的学习，使我们更加熟悉高效液相色谱仪的操作方法和技巧，能够准确进行样品分析，为科研工作的开展提供了重要的技术支持。

高效液相色谱法操作规程与注意事项1.程序1.1.仪器及性能要求：所用的仪器为高效液相色谱仪，由泵系统，进样系统，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。

1.1.1.泵系统：HPLC泵系统通过高压力管和设备从溶剂瓶中吸取计量的流动相到柱子中。

现行的泵系统有一元或多元计算机控制的计量泵组成，这些泵可以按照梯度洗脱的要求改变流动相的比例或者是按等度洗脱的要求混合流动相。

1.1.2.进样系统：化合物被溶解在流动相或合适的溶剂中，可以通过手动进样器或定量环，或自动进样器转移到流动相中。

自动进样器由可存放进样瓶的卡盘组成，进样瓶的顶部有一个可以刺入的隔膜，进样针通过这个隔膜将样品转移到一个定量环中然后输送到色谱系统中。

1.1.3.色谱柱：最常用的色谱柱填充剂为化学键合硅胶。

反相色谱系统使用非极性填充剂，以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用，辛基硅烷键合硅胶和其他类型的硅烷键合硅胶（如氰基键合硅胶和氨基键合硅胶）也有使用。

正相色谱系统使用极性填充剂，常用的填充剂有硅胶等。

离子交换色谱系统使用离子交换填充剂量；分子排阻色谱系统凝胶或系统高分子多孔微球等；对映异构体的分离通常使用手性柱。

除另有规定外，柱温为室温。

1.1.4.检测器：常用的检测器包括紫外分光检测器，示差折光检测器，二极管阵列检测器。

固定波长检测器在单一波长下运行，典型的波长是254nm，通过低压力的汞灯发射。

可变波长的检测器包含持续的能源，例如氘灯或高压力氙灯，通过单色器或干涉过滤器产生一定波长的单色光。

1.2.系统适用性试验1.2.1.为了确定最终运行系统的有效性，应当进行系统适用性试验。

整个系统可以用以下指标来评价：信噪比、理论塔板数，分离度，重复性，拖尾因子，其指标及计算方法应在相关分析方法中予以规定，如果没有专门的规定，按以下方法进行计算：信噪比：用于评价色谱系统检测微量物质的能力，美国药典的计算公式：S/N=2H/h，H为峰顶到基线的距离，h为基线中噪声峰最大值与最小值的差，该段基线需取≥5倍半峰高宽的距离，如果有可能，目标峰两侧取相等的距离（如图1）。

高效液相色谱法的标准操作规程1 定义及概述：1.1 高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液作为流动相，用高压输液泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。

由于应用各种性质的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高、分析速度快的特点。

1.2 高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。

有的药品需要在色谱分离前或后经过衍生化反应，方能进行分离或检测。

常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等填充剂是有一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。

1.3 高效液相色谱仪基本由泵、进样器、色谱柱、检测器和色谱数据处理组成。

检测器最常用的为可变波长紫外检测器或紫外—可见检测器。

色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。

梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。

2 高效液相色谱仪的使用要求：2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程”的规定作定期检定，应符合规定。

2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无渗漏连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。

2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

3 操作前的准备：3.1 流动相的制备：用高纯度的试剂配制流动相，必要时照紫外分光光度法进行溶剂检查，应符合要求；水应为新鲜制备的高纯水。

对规定pH值的流动相，应使用精密pH 计进行调节。

配制好的流动相应通过0.45µm适宜的滤膜滤过，用前脱气。