测定植物叶绿素含量的方法

叶绿素含量测定方法---丙酮法

由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。

藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。

叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。

取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5

min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：

叶绿素a含量用以下公式进行计算：

Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数

叶绿素b含量用以下公式进行计算：

Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数

叶绿素总含量用以下公式进行计算：

Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数

由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。

叶绿素提取方法

提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英 周百成 底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.

一、直接浸提法：

1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min（根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。随后在盛有藻泥的离心管中加入蒸馏水，与藻泥混匀后再次离心，目的是除去藻细胞表面的盐份，此清洗过程重复三次。

叶绿素的测定

叶绿素是植物中的重要色素，用于光合作用中的光能捕捉和转化。测定叶绿素的含量可以评估植物的光合活性和健康状况。

常用的叶绿素测定方法包括：

1. 酸醇提取法：将植物组织置于酸醇混合液中，利用酸溶解细胞膜，醇提取叶绿素。然后用光度计测定提取液的吸光度，根据吸光度与叶绿素浓度的关系计算出叶绿素的含量。

2. 高效液相色谱法(HPLC)：通过将植物样品制备成溶液，在高效液相色谱仪中进行分离和检测。根据标准曲线或内标法，确定叶绿素的浓度。

3. 光谱分析法：通过测量叶绿素在可见光区域的吸收光谱，计算叶绿素的浓度。常用仪器包括光度计或分光光度计。

4. 荧光光谱法：通过测量样品在激发光下发射的荧光光谱，间接推测出叶绿素的浓度。这种方法可以通过测量不同波长下激发光和荧光信号的比值来评估叶绿素的含量。

5. 无损测定法：利用近红外光谱或其他无损技术，通过样品材料的光学特性来推测叶绿素的含量。这种方法适用于大范围的植物样本测定。

叶绿素测定方法的选择取决于实验条件、设备和样品特性。根据需求，可以选用适当的方法来测定叶绿素的含量。

叶绿素含量测定方法---丙酮法

由于微藻的生长周期比较复杂，包括无性繁殖阶段和有性繁殖阶段，其在不同阶段的生理形态不同，有时藻细胞会聚集在一起，以片状或团状形式存在，在显微镜下难以确定其所包含的细胞数量。

藻细胞中叶绿素的含量（特别是叶绿素a的含量）通常随与细胞的生长呈较好的线性关系，因此可通过测定藻细胞中叶绿素含量变化来反映微藻的生长情况。

叶绿素测定采用丙酮研磨提取法。

取适量藻液于10 mL离心管中在4000 rpm转速下离心10 min，弃去上清液，藻泥中加入适量的100 %的丙酮。采用丙酮提取法时在试管研磨器中冰浴研磨5

min，4000 rpm离心后，上清液转入10 mL容量瓶中。按上述方法对藻体沉淀进行萃取，直至藻体沉淀呈白色为止。定容后，采用722S型可见分光光度计分别测定645 nm和663 nm下萃取液的吸光值，叶绿素含量用以下公式进行计算（Amon,1949）：

叶绿素a含量用以下公式进行计算：

Chlorophyll a (mg/L) = (12.7×A663 nm－2.69×A645 nm)×稀释倍数

叶绿素b含量用以下公式进行计算：

Chlorophyll b (mg/L) = (22.9×A645 nm－4.64×A663 nm)×稀释倍数

叶绿素总含量用以下公式进行计算：

Chlorophyll a＋b (mg/L) = (20.2×A645 nm＋8.02×A663 nm)×稀释倍数

由于丙酮的沸点较低，较高温度下挥发很快。此外，叶绿素稳定性较差，见光易分解，因此，本实验中叶绿素的提取和测定均在低温黑暗条件下进行，以减少提取过程中的损失。

叶绿素提取方法

提取液：本试验用DMSO/80%丙酮(l/2，v/v)提取的叶绿素，谭桂英 周百成 底栖绿藻叶绿素的二甲基亚砜提取和测定法* 海洋与湖沼 1987 18（3）295--300.

一、直接浸提法：

1、准确量取10ml藻液,加到15ml离心管中，放在台式离心机离心，3500r/min（根据不同的藻选择不同那个的离心转速）离心5min倒上清；留藻泥。随后在盛有藻泥的离心管中加入蒸馏水，与藻泥混匀后再次离心，目的是除去藻细胞表面的盐份，此清洗过程重复三次。

叶绿素含量测定仪对叶绿素含量的测定

有相关资料表明，叶绿素是高等植物和其它所有能进行光合作用的生物体含有的一类绿色色素。而植物叶片中的叶绿素含量则能够反映植物本身的状况，一般而言，叶绿素含量高的植物，作物光合作用就会增强，各种物质的合成能力也会增强，促使养分吸收加快，作物生长迅速，膨果快；于此同时，叶绿素含量的高低也能客观地反映植物抗病性的强弱。因此，在植物生理研究中，测叶绿素含量对于试验研究来说具有非常重要的意义。那么，测叶绿素的仪器叫什么呢？叶绿素含量测定仪。

叶绿素含量测定仪是一款专门用来检测叶绿素含量的仪器，该仪器的检测原理是通过测量叶片在两种波长范围内的透光系数来确定叶片当前叶绿素的相对数量，也就是在叶绿素选择吸收特定波长光的两个波长区域，根据叶片透射光的量来计算测量值。叶绿素含量测定仪的测量方法很简单，操作人员只需要手持叶绿素含量测定仪，将叶片插入仪器的感应部位，然后合上测量探头即可。这种测量方法还有一大好处就是，不会对叶片造成损伤，可以实现无损快速测量，尤其是在作物的生长过程中全程对特定的叶片进行监测，可以得到更科学的分析结果。

在文章开头我们也明确的提到，叶绿素含量的检测具有重要的意义，它可以反映植物的健康状况，比如说叶绿素含量少，我们可以了解到植物的病变，因为植物一旦产生病害会出现叶黄的现象，也就是病害会致使叶绿素解体，出现黄化的现象。而使用托普云农TYS-B叶绿素含量测定仪测定叶绿素的含量，可以及时了解植物的生长情况，并且也可以通过测量叶绿素的含量反应植物真实的硝基需求量，从而有利于合理的施加氮肥，提高氮的利用率，并可保护环境。