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第1篇一、实验目的1. 了解商业无菌检测的基本原理和方法。
2. 掌握食品商业无菌检测的操作步骤和注意事项。
3. 通过实验，提高食品安全意识和实验技能。
二、实验原理商业无菌是指食品经适度热杀菌后，不含有致病的微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非致病性微生物。
本实验采用平板计数法，通过培养、观察、计数等方法，检测食品中微生物的数量，以判断食品是否达到商业无菌标准。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：（1）待检食品样品；（2）无菌生理盐水；（3）牛肉膏蛋白胨琼脂培养基；（4）无菌培养皿；（5）无菌移液器；（6）酒精灯；（7）恒温培养箱；（8）显微镜。
2. 实验仪器：（1）电子天平；（2）高压蒸汽灭菌器；（3）无菌操作台；（4）超净工作台。
四、实验步骤1. 样品处理：（1）将待检食品样品置于无菌操作台中，用无菌生理盐水进行洗涤；（2）将洗涤后的样品置于无菌培养皿中，加入适量无菌生理盐水；（3）用无菌移液器取适量样品，加入牛肉膏蛋白胨琼脂培养基中，充分混合。
2. 制备菌悬液：（1）将牛肉膏蛋白胨琼脂培养基高压蒸汽灭菌；（2）待培养基冷却至45℃左右，加入适量菌悬液；（3）将混合均匀的培养基倒入无菌培养皿中，待凝固。
3. 涂布平板：（1）用无菌移液器取适量菌悬液，均匀涂布在平板表面；（2）将涂布好的平板倒置，置于恒温培养箱中培养。
4. 计数与观察：（1）观察平板上的菌落生长情况，记录菌落数；（2）根据菌落数计算样品中的微生物数量。
五、实验结果与分析1. 结果：通过实验，我们得到了样品中的微生物数量，并与商业无菌标准进行比较。
2. 分析：根据实验结果，样品中的微生物数量低于商业无菌标准，说明样品达到商业无菌要求。
六、实验总结1. 通过本次实验，我们了解了商业无菌检测的基本原理和方法，掌握了食品商业无菌检测的操作步骤和注意事项。
2. 实验过程中，我们严格遵循无菌操作规程，确保实验结果的准确性。
3. 本次实验结果说明，样品达到商业无菌要求，具有良好的食品安全性。
无菌试验：取样点：原料奶、杀菌机前储罐、杀菌机平衡罐检测：细菌总数，芽孢总数，耐热菌总数，耐热芽孢总数和PH值杀菌机平衡罐：耐热芽孢总数不超过10，芽孢总数不超100 中途不得停机、接纸，换PP条一定要检查双氧水浓度（每次开机前），用波美浓度计，对应温度有个表。
无菌试验前要检查好：双氧水耗量、正压、横封纵封无菌试验前清洗不得少于3次换纸接PP条要洗手无菌试验不能贴吸管无菌试验指导书一、无菌试验的目的验证设备是否满足商业无菌要求。
二、无菌试验启动条件1：在新生产线投产前以及新设备进行安装调试时。
2：设备进行大修（无菌系统被破坏）。
3：无菌输送管路在重新进行改造以及焊接后。
4：设备的主要参数（尤其无菌系统的参数）重新设定后。
5：停产达15天以上。
6：品保人员认为有必要进行无菌试验时。
三、无菌试验的质量记录1原奶：原奶检验主要针对酸度、脂肪、全乳固体、掺假（水、淀粉、盐、亚硝酸盐）、酒精实验、煮沸实验、抗菌（生）素、蛋白质等几项指标进行检测。
2收奶：收奶温度夏季不超过8℃，冬季不超过6℃，一吨奶抽奶时间不超过10分钟。
3预处理：对预处理管路及贮奶罐进行涂抹实验，结果应为符合标准。
对于贮奶的奶仓应采用冰水打循环，保持在5℃以下，牛奶在奶仓中暂存，在12小时内应尽早用于生产。
4超高温(UHT)：对于纯牛奶产品及学生奶系列产品，要求136℃-138℃、4秒钟。
对于优酸乳及优酸乳系列产品，要求121℃、30秒钟。
5灌装(AFM)：对灌装间设备所使用双氧水进行检测，结果应为符合标准(35.0%—47.0%)。
对操作员的双手进行涂抹，结果应为符合标准。
对包材及添料管进行涂抹，结果应为符合标准。
对AFM间进行空气净度检测，结果应为符合标准。
对UHT进料前检测（平衡缸取样），结果应为符合标准。
四、无菌试验过程控制1：参照各工段设备操作规程。
2：设备清洗后，进行生产并检查各仪表指示是否在设定范围内，及时进行过程记录。
3：设备运行开始生产成品时，不可以人为排包以避免坏包的产生。
1、实验内容罐头食品经过适度的热杀菌以后，不含有致病的微生物，也不含有在通常温度下能在其中繁殖的非致病性微生物，这种状态称作商业无菌。
本实验主要通过对在36℃培养有菌生长的溴甲酚紫葡萄糖肉汤管，观察产酸产气情况而来判定有无微生物增殖现象。
2、范围适用于各种密封容器包装的，经过适度的热杀菌后达到商业无菌，在常温下能较长时间保存的罐头食品。
3、操作人员经过培训合格的实验室检验人员。
4、权责化验员。
5、操作规程5.1实验器具及试剂5.1.1高压灭菌锅、烘箱、恒温恒湿培养箱、天平、250mL三角瓶、试管、1ml移液管、小导管、硅胶塞。
5.1.2 实验所有器皿在操作前都要进行清洗并在烘箱中进行干法灭菌。
5.1.3 溴甲酚紫葡萄糖肉汤：取250mL三角瓶，称7g培养基干粉溶于250ml蒸馏水中。
加热溶解，分装于6支含有小导管的试管中，每支装量10mL，用牛皮纸包扎后放入高压灭菌锅内进行115℃/20min灭菌。
其中移液管等玻璃器皿包扎好后要在高压灭菌锅内进行121℃/30min灭菌。
5.2 实验步骤5.2.1 将抽样的待检罐头进行编号，放入36±1℃的恒温恒湿培养箱中保温10天，保温过程中应每天做好检查记录，包括培养基颜色的变化及有无气泡等，如有胖听、泄露等现象，立即拿出做开罐检查。
5.2.2 感官检查在光线充足、空气清洁无异味的检验室中将罐头内容物倒入白色瓷盘中，观察产品的外观、色泽、状态，同时闻气味，用手指进行触感，鉴别食品中有无腐败变质的迹象。
5.2.3 PH测定用PH计进行样品中PH的检测（PH计在使用前必须经过校正），并与同批中正常样进行比较，若PH无显著地差异，则说明检样正常；否则应进行微生物接种试验。
5.2.4 接种试验5.2.4.1将保温过的罐头取出，冷却到常温后，将样罐用温水和洗涤剂洗刷干净，用自来水冲洗后擦干，放入超净工作台，把灭菌好的移液管及超净工作台上所需要的物品准备好（打火机、酒精棉、镊子、吸耳球、酒精灯等，其中酒精灯内的酒精不少于1/3，不大于2/3，每次使用，剪掉棉线上的焦头）打开紫外光杀菌灯照射至少30分钟。
商业无菌检验能力验证技术方案无菌检验是在医疗领域、制药行业、食品行业等对无菌产品进行质量检验的重要环节。
无菌检验的准确性和可靠性对于产品质量和安全至关重要。
因此，进行无菌检验的实验室需要具备强大的检验能力和验证技术。
一、无菌检验能力验证的目的无菌检验能力验证的目的是评估实验室进行无菌检验的能力，确保检验结果的准确性、可靠性和可重复性。
通过验证实验室的检验能力，可以提高无菌检验的质量，降低风险。
二、无菌检验能力验证的内容1.管理体系验证：包括实验室设施、设备的验证，实验室操作规程的完善性和合规性，人员的培训情况等。
2.无菌检验方法验证：验证实验室使用的无菌检验方法的准确性和可靠性，如微生物计数法、膜过滤法等。
3.无菌环境验证：验证实验室的无菌环境是否符合相关标准和要求，如生物安全柜的性能验证、洁净室的验证等。
4.质控样品验证：验证实验室是否能够正确使用质控样品进行无菌检验，确保结果的准确性。
5.数据分析和报告编制验证：验证实验室对无菌检验数据的正确处理和分析能力，以及编制无菌检验报告的能力。
三、无菌检验能力验证的方法和步骤无菌检验能力验证的方法和步骤如下：1.制定验证计划：根据实验室的具体情况制定无菌检验能力验证的计划，包括验证的内容、方法和步骤等。
2.收集验证所需的资料：根据验证计划收集实验室的相关资料，如设备、方法和操作规程等。
3.进行实验室环境验证：验证实验室的环境是否符合无菌检验的要求，如温度、湿度和洁净度等。
4.进行无菌检验方法验证：验证实验室使用的无菌检验方法的准确性和可靠性，包括方法的选择、操作规程的编制和培训等。
5.进行质控样品验证：验证实验室是否能正确使用质控样品进行无菌检验，并进行数据分析和报告编制。
6.结果分析和报告编制：对验证结果进行分析，编制验证报告，提出改进措施和建议。
四、无菌检验能力验证的结果评价无菌检验能力验证的结果应根据相关标准进行评价，主要评估以下几个方面：1.实验室的基础设施和设备是否符合要求，是否能满足无菌检验的需要。
食品微生物学检验
商业无菌检验能力验证技术方案
根据《新项目论证技术要求》，为保证此次能力验证数据准确，结果可靠，特制定如下技术方案：
一、检验依据
《食品微生物学检验商业无菌检验GB4789.26-2013》
二、检品
灭菌乳：取两个品牌的同品种产品
调制乳：灭菌工艺生产的产品
三、人员比对
灭菌乳A：a、b分别试验进行数据比对（双人双平行）；
灭菌乳B：c、a分别试验进行数据比对（双人双平行）；
调制乳：c、b分别试验进行数据比对（双人双平行）。
三、准备工作
仔细核对并灭菌本试验使用试剂、耗材以及玻璃容器等。
四、质量控制
1、按照国家标准规定准确称重并按照不同温度进行保藏或培养。
2、仪器设备性能和检测环境的确认
（1）依据《消毒与灭菌效果的评价方法与标准GB15981-1995》定期对高压蒸汽灭菌锅的灭菌效果进行检测评价并记录；
（2）依据《无菌室消毒灭菌操作规程》定期对对无菌室、生物安全柜、超净台、无菌衣进行清洁消毒灭菌；
（3）依据《实验室质量控制规范食品微生物检测GB/T27405-2008》定期对对无菌室、生物安全柜及超净台进行沉降菌检测并记录。
3、对照
每次实验均应进行低温对照确保实验数据的可靠性。
五、注意事项
1、实验人员要严格按照《无菌检查系统操作规程》进出无菌室；
2、严格按照《食品微生物学检验总则GB4789.1-2016》进行采样
和实验；
3、PH测定所用到的酸度计每次应进行校准；
4、本实验不包含商业无菌异常原因分析；。
作业指导书O P E R A T I N G I N S T R U C T I O N S食品微生物检验商业无菌检验编号：XZJY073-00-2019版本：第一版第0次修改编制：审核：批准：实施日期：2019.01.01一、编制目的为规范单位对食品微生物学检验商业无菌检验的方法，编制本指导书。
二、适用范围本作业指导书适用于食品商业无菌检验的基本要求、操作程序和结果判定。
本指导书适用于食品商业无菌检验。
三、编制依据GB 4789.26-2013《食品安全国家标准食品微生物学检验商业无菌检验》四、设备和材料除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下：a) 冰箱：2 ℃～5 ℃；b)恒温培养箱：30 ℃±1 ℃；36 ℃±1 ℃；55 ℃±1 ℃；c)恒温水浴箱：55 ℃±1 ℃d)均质器及无菌均质袋、均质杯或乳钵e)电位pH计（精确度pH0.05单位）f)显微镜：10倍～100倍；g)开罐器和罐头打孔器h)电子秤或台式天平i)超净工作台或百级洁净实验室。
五、培养基和试剂5.1无菌生理盐水5.2结晶紫染色液 5.3二甲苯。
5.4含4％碘的乙醇溶液：4 g 碘溶于100 mL 的70%乙醇溶液。
六、检验程序商业无菌检验程序见图1.作业指导书文 件 编 号： XZJY073-00-2019 版本号/修订状态： 一/第0次修改 食品微生物商业无菌检验页码/总页数： 2/6实 施 日 期： 2019.01.01作业指导书文 件 编 号： XZJY073-00-2019七、操作步骤7.1样品准备去除表面标签，在包装容器表面用防水的油性记号笔做好标记，并记录容器、编号、产品性状、泄漏情况、是否有小孔或锈蚀、压痕、膨胀及其他异常情况。
7.2称重1 kg及以下的包装物精确到1 g，1 kg以上的包装物精确到2 g，10 kg以上的包装物精确到10 g，并记录。
商业无菌的报告1. 引言商业无菌是指在商业领域中，通过一系列传统和创新的管理措施，以确保产品或服务的无菌状况。
无菌是指不存在任何微生物或细菌的状态，对许多行业来说，保持无菌状况至关重要，特别是在医疗、食品和制药领域。
本报告探讨商业无菌的重要性，提供了一些常见的商业无菌管理措施和实践，并讨论了商业无菌对企业和消费者的好处。
2. 商业无菌的重要性商业无菌在诸多行业中有着重要的地位。
以下是一些领域中商业无菌的重要性的例子：2.1 医疗领域在医疗领域，无菌技术是确保手术过程中感染风险最低的关键因素之一。
手术中的器械、手术室环境和人员都必须保持无菌状态，以避免伤口感染和交叉感染。
商业无菌在医疗机构中是至关重要的，可以减少患者感染和并发症的风险。
2.2 食品行业在食品行业，商业无菌是确保食品安全和质量的重要因素。
无菌技术可以用于食品加工过程中的杀菌和无菌包装。
杀菌可以杀死或去除食品中的细菌，从而延长食品的保质期。
无菌包装可以保证食品在运输和储存过程中不受细菌污染。
2.3 制药领域在制药领域，商业无菌是确保药品质量和有效性的关键因素。
制药过程中的所有步骤都必须严格遵循无菌技术，以避免药品受到细菌或其他微生物的污染。
商业无菌的实践可以保证药品在生产、运输和使用过程中的无菌状态，以避免患者感染或不良反应。
3. 商业无菌管理措施和实践商业无菌需要采取一系列管理措施和实践来确保产品或服务的无菌状态。
以下是一些常见的商业无菌管理措施和实践的例子：3.1 空气过滤空气过滤是常见的商业无菌措施之一。
通过使用高效过滤器和空气处理系统，可以有效地去除空气中的微生物和细菌，从而保持环境的无菌状态。
在医疗机构、食品加工厂和制药实验室等场所中广泛使用空气过滤技术。
3.2 清洁和消毒清洁和消毒是保持商业无菌的重要步骤。
定期清洁表面、设备和器具，可以有效地去除细菌和微生物。
消毒是使用化学物质或热处理方法杀灭细菌的过程。
正确的清洁和消毒程序可以减少细菌的生长和传播，保持环境的无菌状态。
软烤虾商业无菌的检验
一、设备和材料
除微生物实验室常规灭菌及培养设备外，其他设备和材料如下
a) 冰箱：2 ℃～5 ℃；
b) 恒温培养箱：30 ℃±1 ℃；36 ℃±1 ℃；55 ℃±1 ℃；
c) 恒温水浴箱：55 ℃±1 ℃；
d) 均质器及无菌均质袋；
e) 电位pH计（精确度pH0.05单位）；
f) 显微镜：10倍～100倍；
g) 无菌剪刀；
h) 电子秤或台式天平；
i) 超净工作台或百级洁净实验室。
培养基和试剂
a) 无菌生理盐水。
b) 结晶紫染色液。
c) 含4％碘的乙醇溶液：4 g碘溶于100 mL的70%乙醇溶液。
二、实验步骤
实验前准备：
实验前3-4h将制冰机打开，开始制冰。
将对虾从—80℃的冰箱中取出，流水解冻至个体分离，调节水浴锅温度至指定温度，打开水浴锅提前加热。
1、软烤虾的制作：
冷冻南美白对虾-------
二次杀菌——冷却——成品
二次杀菌：
将样品放入80℃水浴锅中加热30min，取出放入冷水，立即冷却，进行感官评定，色差分析和质构测定。
90℃同上，真空包装后的样品进行100℃水浴加热时要注意样品会浮起，用重物压住样品以免样品露出受热不均（参考温度：93℃以上会浮起）。
将样品放入100℃的灭菌锅中，调节灭菌锅参数至110℃，灭菌30min后，待灭菌锅内温度降至100℃以下再取出样品用冷水立即冷却至室温。
110℃和120℃同上。
将杀菌冷却后的样品，一部分进行色差，质构，感官评定，另一部分放入4℃冰箱中进行商业无菌检验。
样品准备
去除表面标签，在包装容器表面用防水的油性记号笔做好标记，并记录容器、编号、产品性状、泄漏情况、是否有小孔或锈蚀、压痕、膨胀及其他异常情况。
2、检验步骤
2.1 称重
1 kg及以下的包装物精确到1 g，1 kg以上的包装物精确到
2 g，10 kg 以上的包装物精确到10 g，并记录。
2.2 保温
2.2.1 每个批次取1个样品置2 ℃～5 ℃冰箱保存作为对照，将其余样品在36 ℃±1 ℃下保温10 d。
保温过程中应每天检查，如有膨胀或泄漏现象，应立即剔出，开启检查。
2.2.2 保温结束时，再次称重并记录，比较保温前后样品重量有无变化。
如有变轻，表明样品发生泄漏。
将所有包装物置于室温直至开启检查。
2.3 开启
2.3.1 如有膨胀的样品，则将样品先置于2℃～5℃冰箱内冷藏数小时后开启。
2.3.2 如有膨用冷水和洗涤剂清洗待检样品的光滑面。
水冲洗后用无菌毛巾擦干。
以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面15 min 后用无菌毛巾擦干，在密闭罩内点燃至表面残余的碘乙醇溶液全部燃烧完。
膨胀样品以及采用易燃包装材料包装的样品不能灼烧，以含4%碘的乙醇溶液浸泡消毒光滑面30 min后用无菌毛巾擦干。
2.3.3 在超净工作台或百级洁净实验室中开启。
样品为软包装，可以使用灭菌剪刀开启，不得损坏接口处。
立即在开口上方嗅闻气味，并记录。
注：严重膨胀样品可能会发生爆炸，喷出有毒物。
可以采取在膨胀样品上盖一条灭菌毛巾或者用一个无菌漏斗倒扣在样品上等预防措施来防止这类危险的发生。
2.4 留样
开启后，用灭菌吸管或其他适当工具以无菌操作取出内容物至少30 mL（g）至灭菌容器内，保存2 ℃～5 ℃冰箱中，在需要时可用于进一步试验，待该批样品得出检验结论后可弃去。
开启后的样品可进行适当的保存，以备日后容器检查时使用。
2.5 感官检查
在光线充足、空气清洁无异味的检验室中，将样品内容物倾入白色搪瓷盘内，对产品的组织、形态、色泽和气味等进行观察和嗅闻，按压食品检查产品性状，鉴别食品有无腐败变质的迹象，同时观察包装容器内部和外部的情况，并记录。
2.6 pH测定
2.6.1 样品处理
2.6.1.1 液态制品混匀备用，有固相和液相的制品则取混匀的液相部分备用。
2.6.1.2 对于稠厚或半稠厚制品以及难以从中分出汁液的制品（如：糖浆、果酱、果冻、油脂等），取一部分样品在均质器或研钵中研磨，如果研磨后的样品仍太稠厚，加入等量的无菌蒸馏水，混匀备用。
2.6.2 测定
2.6.2.1 将电极插入被测试样液中，并将pH计的温度校正器调节到被测液的温度。
如果仪器没有温度校正系统，被测试样液的温度应调到20 ℃±2 ℃的范围之内，采用适合于所用pH计的步骤进行测定。
当读数稳定后，从仪器的标度上直接读出pH，精确到pH 0.05单位。
2.6.2.2 同一个制备试样至少进行两次测定。
两次测定结果之差应不超过0.1 pH 单位。
取两次测定的算术平均值作为结果，报告精确到0.05 pH 单位。
2.6.3 分析结果
与同批中冷藏保存对照样品相比，比较是否有显著差异。
pH 相差0.5及以上判为显著差异。
2.7 涂片染色镜检
2.7.1 涂片
取样品内容物进行涂片。
带汤汁的样品可用接种环挑取汤汁涂于载玻片上，固态食品可直接涂片或用少量灭菌生理盐水稀释后涂片，待干后用火焰固定。
2.7.2 染色镜检
对2.7.1中涂片用结晶紫染色液进行单染色，干燥后镜检，至少观察5个视野，记录菌体的形态特征以及每个视野的菌数。
与同批冷藏保存对照样品相比，判断是否有明显的微生物增殖现象。
菌数有百倍或百倍以上的增长则判为明显增殖。
3 结果判定
样品经保温试验未出现泄漏；保温后开启，经感官检验、pH 测定、涂片镜检，确证无微生物增殖现象，则可报告该样品为商业无菌。
样品经保温试验出现泄漏；保温后开启，经感官检验、pH测定、涂片镜检，确证有微生物增殖现象，则可报告该样品为非商业无菌。
若需核查样品出现膨胀、pH 或感官异常、微生物增殖等原因，可取样品内容物的留样按照附录B进行接种培养并报告。
若需判定样品包装容器是否出现泄漏，可取开启后的样品按照附录B 进行密封性检查并报告。
培养基和试剂
A.1 无菌生理盐水
A.1.1 成分
氯化钠8.5 g
蒸馏水 1 000.0 mL
A.1.2 制法
称取8.5 g氯化钠溶于1000 mL蒸馏水中，121 ℃高压灭菌15 min。
A.2 结晶紫染色液
A.2.1 成分
结晶紫 1.0 g
95%乙醇20.0 mL
1%草酸铵溶液80.0 mL
A.2.2 制法
将1.0 g结晶紫完全溶解于95%乙醇中，再与1%草酸铵溶液混合。
A.2.3 染色法
将涂片在酒精灯火焰上固定，滴加结晶紫染液，染1 min，水洗。
