实验六：薄层层析与柱层析

柱层析和薄层层析实验报告篇一：柱层析实验报告柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。

2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。

二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。

从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。

利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。

分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。

柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。

常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。

吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。

由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。

继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。

用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。

本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。

由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。

三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂6．饱和氯化钠溶液3．丙酮7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃）8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用.2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。

实验柱层析和薄层层析层析法是通过分离混合物组分的一种方法，主要有柱层析和薄层层析两种。

本文将介绍它们的原理、步骤和应用。

实验柱层析原理实验柱层析是一种液相色谱分离技术，基于混合物组分在固定相和流动相之间相互分配的差异进行分离。

实验柱层析一般采用正交试验法，即通过改变柱填料、流动相、流速和溶质质量浓度等参数，以缩小响应面，得到最佳分离条件。

步骤1.选择合适的柱径和柱高，并选用合适的柱填料。

2.准备流动相，并过滤除杂质。

将柱填料与流动相充分浸泡，使柱填料达到平衡状态。

3.将混合物加到柱顶，并开始淋洗。

此时各组分在流动相和固定相之间交替分配，被固定相吸附或溶解，同时前进，终于分离。

4.根据检测结果，确定样品组分并计算出分离效果和纯度。

应用实验柱层析作为一种分离技术，广泛应用于医药、化学、生物学等领域。

常见的应用包括：1.分离蛋白质、核苷酸等生物大分子。

2.对化合物进行分离、纯化和定量分析。

3.分离和提取天然产物和药物。

薄层层析原理薄层层析是一种比较简单、快速的分离方法，其原理与柱层析类似，只是采用了薄层硅胶或氧化铝等作为固定相，可直接对液态和固态样品进行分离。

步骤1.准备薄层柱。

2.准备固定相毛细管与混合样品。

3.在薄层柱上涂上一层液态固定相，然后将其晾干。

4.将样品分别点于薄层柱的一端，放入发展槽中，加入足量发展剂。

5.等到液面距离薄层柱顶端约0.5cm时取出，划线，停发展，晾干。

6.在笼罩于发展剂蒸汽中的小钵中烘干至静止。

应用薄层层析作为快速分离、纯化和检测生物和化学样品的一种常用手段，其应用包括：1.对合成的物质进行纯化和分离。

2.植物药的含量测定。

3.对复杂化学物质进行溶剂系统选择和定性分析。

实验柱层析和薄层层析都是常见的层析法，虽然原理类似但有各自的优缺点和应用场景。

在实际应用中，需要根据具体的分离任务选择合适的方法。

实验六薄层层析及柱层析实验目的1.了解偶氮苯的光学异构反应，加深对光化学反应的理解。

2.掌握薄层层析的基本操作,薄层层析分离顺、反式偶氮苯。

3.了解柱层析分离有机化合物的原理，初步掌握层析柱装填和洗脱的操作方法4.采用柱层析分离反式偶氮苯及靛红的混合物实验原理偶氮苯是最简单的芳香偶氮化合物，众多偶氮染料的母体结构。

含有两个苯基分别及偶氮基–N=N–两端相连的结构。

偶氮苯有毒，易燃。

偶氮苯有顺（Z）-反（E）-异构体。

反式为橙红色棱形晶体，蒸气为深红色，溶于乙醇、乙醚、醋酸和水。

反式的热力学性质稳定。

当溶于乙醇的偶氮苯用一定强度的紫外光照射时，顺式的比例逐渐增大，直至达到平衡，形成顺反异构体的混合物。

偶氮苯的光致异构是很多偶氮类功能材料光响应的基础。

顺式为橙红色片状晶体，不稳定，在加热或可见光照射下能够变成反式。

色谱方法是通过在固定相和流动相间分配的不同而将物质分离开。

待分离混合物各组分在固定相上的吸附强度不同，及流动相一起移动的速度也不同，因此被分离开。

薄层色谱属于固-液吸附色谱。

薄层色谱板中的固定相中的微孔结构使得溶剂在毛细管作用下能够沿着色谱板向上移动。

由于混合物中各组分对吸附剂（固定相）的吸附能力不同，当展开剂（流动相）流经吸附剂时发生无数次吸附解附过程，吸附力弱的组分随流动相迅速向前移动，吸附力强的组分滞留在后，由于各组分具有不同的移动速度，最终在固定相薄层析上分离。

TLC除了用于分离外，还可以通过及已知结构的的化合物比对，鉴定少量有机混合物的组成，它也是柱色谱寻求最佳展开剂的手段。

上图中红色化合物的R f等于竖直红线的长度除以竖直蓝线的长度。

柱层析也属于固-液吸附色谱。

在一根玻璃“分离柱”中进行。

管中装上适当的粉末作为国定相。

待分离或纯化物质的溶液（流动相）在重力作用下流经吸附剂时，不同物质对溶剂和吸附剂的亲和力不同，因而被吸附的程度不同，从而以不同速度流动，使化合物得以分离。

靛红及偶氮苯在极性上具有较大差异，从而可以使用极性适中的展开剂，通过柱层析将二者分离。

柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。

2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。

二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。

从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。

利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。

分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。

柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。

常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。

吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。

由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。

继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。

用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。

本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。

由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。

三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。

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2．掌握柱层析的操作技术。

二．实验原理层析法是一种物理分离方法。

柱层析法是层析方法中的一个类型，分为吸附柱层析法和分配柱层析法。

本实验仅介绍吸附柱层析法。

吸附柱层析法是分离、纯化和鉴定有机物的重要方法。

它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。

吸附柱层析法通常是在玻璃层析柱中装入表面积很大、经过活化的多孔性或粉状固体吸附剂（常用的吸附剂有氧化铝、硅胶等）。

当混合物溶液流过吸附柱时，各组分同时被吸附在柱的上端，然后从柱顶不断加入溶剂（洗脱剂）洗脱。

由于不同化合物吸附能力不同，从而随着溶剂下移的速度不同，于是混合物中各组分按吸附剂对它们所吸附的强弱顺序在柱中自上而下形成了若干色带，如图9-1示。

在洗脱过程中，柱中连续不断地发生吸附和溶解的交替现象。

被吸附的组分被溶解吸出来，随着溶剂向下移动，又遇到新的吸附剂颗粒，把组分从溶液中吸附出来，而继续流下的新溶剂又使组分溶解而向下移动，这样经过适当时间移动后，各种组分就可以完全分开，继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分随溶剂首先流出，再继续加溶剂直至各组分依次全部由柱中洗出为止，分别收集各组分。

本实验是用活性氧化铝作吸附剂，分离甲基橙和亚甲蓝混合物。

氧化铝是一种极性吸附剂，对极性较强的物质（如甲基橙）的吸附力强；对极性较弱的物质（如亚甲蓝）的吸附力较弱。

所以应选择极性小的洗脱剂（乙醇）首先将亚甲蓝洗脱，甲基橙则留在层析柱的上部，甲基橙的洗脱则要用极性大的水为洗脱剂。

三．实验仪器及药品1．仪器层析柱，抽滤瓶，烧杯，铁架台，水泵（或油泵），长玻棒，小量筒，脱脂棉。

2．药品活性氧化铝，95%乙醇，0.5%甲基橙与亚甲蓝的乙醇溶液。

关于柱层析的实验方法和技巧常说的过柱子应该叫柱层析分离，也叫柱色谱。

我们常用的是以硅胶或氧化铝作固定相的吸附柱。

由于柱分的经验成分太多，所以下面我就几年来过柱的体会写些心得，希望能有所帮助。

1、柱子可以分为：加压，常压，减压压力可以增加淋洗剂的流动速度，减少产品收集的时间，但是会减低柱子的塔板数。

所以其他条件相同的时候，常压柱是效率最高的，但是时间也最长，比如天然化合物的分离，一个柱子几个月也是有的。

减压柱能够减少硅胶的使用量，感觉能够节省一半甚至更多，但是由于大量的空气通过硅胶会使溶剂挥发（有时在柱子外面有水汽凝结），以及有些比较易分解的东西可能得不到，而且还必须同时使用水泵抽气（很大的噪音，而且时间长）。

以前曾经大量的过减压柱，对它有比较深厚的感情，但是自从尝试了加压后，就几乎再也没动过减压的念头了。

加压柱是一种比较好的方法，与常压柱类似，只不过外加压力使淋洗剂走的快些。

压力的提供可以是压缩空气，双连球或者小气泵（给鱼缸供气的就行）。

特别是在容易分解的样品的分离中适用。

压力不可过大，不然溶剂走的太快就会减低分离效果。

个人觉得加压柱在普通的有机化合物的分离中是比较适用的。

2、关于柱子的尺寸，应该是粗长的最好柱子长了，相应的塔板数就高。

柱子粗了，上样后样品的原点就小（反映在柱子上就是样品层比较薄），这样相对的减小了分离的难度。

试想如果柱子十厘米，而样品就有二厘米，那么分离的难度可想而知，恐怕要用很低极性的溶剂慢慢冲了。

而如果样品层只有0.5厘米，那么各组分就比较容易得到完全分离了。

当然采用粗大的柱子要牺牲比较多的硅胶和溶剂了，不过这些成本相对于产品来说也许就不算什么了（有些不环保的说，不过溶剂回收重蒸后也就减小了部分浪费）。

现在见到的柱子径高比一般在1：5～10，书中写硅胶量是样品量的30～40倍，具体的选择要具体分析。

如果所需组分和杂质分的比较开（是指在所需组分rf在0.2～0.4，杂质相差0.1以上），就可以少用硅胶，用小柱子（例如200毫克的样品，用2cm×20cm的柱子）；如果相差不到0.1，就要加大柱子，我觉得可以增加柱子的直径，比如用3cm的，也可以减小淋洗剂的极性等等。

柱色谱、薄层色谱一、实验目的1、了解色谱法分离提纯有机化合物的基本原理和应用。

2、掌握柱层析、薄层层析的操作技术。

二、实验原理色谱法（Chromatography）亦称色层法、层析法等。

色谱法是分离、纯化和鉴定有机化合物的重要方法之一。

色谱法的基本原理是利用混合物各组分在某一物质中的吸附或溶解性能（分配）的不同，或其亲和性的差异，使混合物的溶液流经该种物质进行反复的吸附或分配作用，从而使各组分分离。

色谱法在有机化学中的应用主要包括以下几方面:1、分离混合物一些结构类似、理化性质也相似的化合物组成的混合物，一般应用化学方法分离很困难，但应用色谱法分离，有时可得到满意的结果。

2、精制提纯化合物有机化合物中含有少量结构类似的杂质，不易除去，可利用色谱法分离以除去杂质，得到纯品。

3、鉴定化合物在条件完全一致的情况，纯粹的化合物在薄层色谱或纸色谱中都呈现一定的移动距离，称比移值（Rf值），所以利用色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相似的化合物是否为同一物质。

但影响比移值的因素很多，如薄层的厚度，吸附剂颗粒的大小，酸碱性，活性等级，外界温度和展开剂纯度、组成、挥发性等。

所以，要获得重现的比移值就比较困难。

为此，在测定某一试样时，最好用已知样品进行对照。

4、观察一些化学反应是否完成，可以利用薄层色谱或纸色谱观察原料色点的逐步消失，以证明反应完成与否。

吸附色谱主要是以氧化铝、硅胶等为吸附剂，将一些物质自溶液中吸附到它的表面上，而后用溶剂洗脱或展开，利用不同化合物受到吸附剂的不同吸附作用，和它们在溶剂中不同的溶解度，也就是利用不同化合物在吸附剂上和溶液之间分布情况的不同而得到分离。

吸附色谱分离可采用柱色谱和薄层色谱两种方式。

柱色谱常用的有吸附色谱和分配色谱两种。

吸附色谱常用氧化铝和硅胶为吸附剂。

分配色谱以硅胶、硅藻土和纤维素为支持剂，以吸收较大量的液体作为固定相。

柱色谱常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、氧化镁、碳酸钙和活性炭等。

最全的TLC经验薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。

薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。

流动相则是一种极性待选的溶剂。

在中以及大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。

将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。

根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。

极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。

而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。

化合物移动的距离大小用Rf 值来表达。

这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。

薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。

通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。

在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。

借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。

当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。

（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。

）2) 选取合适的溶剂体系。

化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。

在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。

相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。

一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在~之间。

虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在~之间）。

那么，应该选取哪些溶剂呢？一些标准溶剂和他们的相对极性（从LLP中摘录）列于如下：强极性溶剂：甲醇〉乙醇〉异丙醇中等极性溶剂：乙氰〉乙酸乙酯〉氯仿〉二氯甲烷〉乙醚〉甲苯非极性溶剂：环己烷，石油醚，己烷，戊烷常用混合溶剂：乙酸乙酯/己烷：常用浓度0~30%。

一、实验目的1. 了解柱层析的基本原理和操作技术。

2. 掌握利用柱层析分离植物叶片中叶绿素的方法。

3. 通过实验，加深对植物叶绿素成分和结构的认识。

二、实验原理柱层析是一种利用固定相和移动相之间的相互作用，将混合物中的组分进行分离的技术。

本实验采用吸附柱层析法，利用叶绿素能溶于有机溶剂的特性，将植物叶片中的叶绿素提取出来，并通过吸附剂（如氧化铝或硅胶）的吸附作用，使不同成分的叶绿素在柱层析柱中分离。

三、实验材料与仪器1. 材料：新鲜植物叶片、无水乙醇、硅胶、氧化铝、洗脱剂（如乙酸乙酯）、层析缸、毛细管、烧杯、玻璃棒、滤纸、剪刀、镊子等。

2. 仪器：柱层析柱、抽滤瓶、电子天平、移液器、显微镜等。

四、实验步骤1. 提取叶绿素：将新鲜植物叶片剪碎，加入无水乙醇，用玻璃棒充分研磨，使叶绿素充分溶解。

过滤，收集滤液。

2. 准备柱层析柱：将硅胶或氧化铝均匀铺在柱层析柱底部，用玻璃棒轻轻压紧。

3. 加入样品：用移液器将提取的叶绿素滤液加入柱层析柱，待滤液自然流出。

4. 洗脱：在柱层析柱顶部加入适量洗脱剂，待洗脱剂自然流出。

观察并记录不同颜色成分的流出顺序。

5. 收集分离的叶绿素：将收集到的各组分分别倒入烧杯中，用无水乙醇洗涤，过滤，干燥，得到分离的叶绿素。

五、结果与分析1. 通过柱层析实验，成功分离出植物叶片中的叶绿素，观察到四种主要成分：叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素。

2. 根据实验结果，叶绿素a和叶绿素b在柱层析柱中的吸附能力较强，先被洗脱出来；胡萝卜素和叶黄素吸附能力较弱，后被洗脱出来。

3. 通过观察分离得到的叶绿素，可以进一步了解植物叶片中叶绿素的成分和结构。

六、实验总结1. 通过本次实验，掌握了柱层析的基本原理和操作技术，为今后进行相关实验奠定了基础。

2. 柱层析是一种有效分离混合物中各组分的色谱技术，广泛应用于植物化学、药物分析等领域。

3. 在实验过程中，注意操作规范，确保实验结果的准确性和可靠性。

一、实验目的1. 了解层析技术的原理和方法。

2. 学习并掌握薄层层析和凝胶过滤层析两种层析技术的操作步骤。

3. 通过实验，分离和鉴定混合物中的不同组分。

二、实验原理层析技术是一种基于物质在固定相和流动相之间分配系数的差异，使混合物中的各组分分离的方法。

本实验采用薄层层析和凝胶过滤层析两种技术进行分离。

1. 薄层层析（TLC）：利用样品中各组分在固定相（薄层板）和流动相（溶剂）中的吸附或溶解性能差异，使各组分在薄层板上分离。

2. 凝胶过滤层析：利用凝胶介质中的孔径梯度，只允许小分子通过，而大分子被阻拦，从而实现不同大小分子的分离。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：混合物、硅胶薄层板、氧化铝薄层板、凝胶柱、凝胶片、溶剂、显色剂等。

2. 实验仪器：薄层层析仪、凝胶过滤层析仪、显微镜、电子天平等。

四、实验步骤1. 薄层层析分离实验（1）制备薄层板：将硅胶或氧化铝均匀涂布在玻璃板上，晾干后切成小块。

（2）点样：用微量移液器吸取混合物，点在薄层板上，点样原点尽量小而圆，直径不超过2mm。

（3）展开：将点样后的薄层板放入装有溶剂的层析缸中，使溶剂前沿距离薄层板边缘约2cm，盖上盖子，待溶剂前沿到达预定位置时取出薄层板。

（4）显色：将分离后的薄层板放入显色剂中，观察各组分在薄层板上的位置。

2. 凝胶过滤层析分离实验（1）准备凝胶柱：将凝胶柱固定在层析架上，用溶剂冲洗凝胶柱，使凝胶均匀填充柱内。

（2）上样：将混合物样品通过注射器注入凝胶柱中。

（3）洗脱：用溶剂洗脱凝胶柱，收集洗脱液。

（4）显色：将收集到的洗脱液进行显色，观察各组分在凝胶柱上的位置。

五、实验结果与分析1. 薄层层析分离实验通过观察薄层板上的分离结果，可以看出混合物中的各组分在薄层板上的位置，从而分离出不同组分。

2. 凝胶过滤层析分离实验通过观察凝胶柱上的分离结果，可以看出混合物中的不同大小分子在凝胶柱上的位置，从而分离出不同大小的分子。

六、实验结论1. 通过薄层层析和凝胶过滤层析两种技术，成功分离了混合物中的不同组分。

一、实验目的1. 学习叶绿素提取和分离的方法。

2. 了解柱层析（薄层层析）的原理及其操作步骤。

3. 掌握天然色素的鉴定和分离技术。

二、实验原理叶绿素是植物体内重要的光合色素，主要包括叶绿素a和叶绿素b。

这两种色素都含有镁离子，具有特殊的吸收光谱，对光的吸收能力较强。

在有机溶剂中，叶绿素可以溶解，从而从植物组织中提取出来。

柱层析是一种常用的分离技术，利用不同物质在固定相和流动相之间的分配系数不同，实现混合物的分离。

三、实验器材1. 新鲜植物叶片2. 研钵3. 漏斗4. 100mL三角瓶5. 无水乙醇6. 石棉板7. 层析板8. 硅胶9. 烧杯10. 移液管11. 显微镜四、实验步骤1. 叶绿素提取：- 将新鲜植物叶片洗净，晾干。

- 将叶片剪碎，放入研钵中。

- 加入少量无水乙醇，研磨至叶片完全破碎。

- 将研磨液倒入三角瓶中，用滤纸过滤。

- 将滤液转移至烧杯中，加入适量无水乙醇，搅拌均匀。

2. 柱层析：- 将层析板固定在石棉板上，并在层析板的一端涂上一层薄薄的硅胶。

- 将提取液用移液管滴加在硅胶层上，注意不要使液滴过大。

- 将层析板放入层析槽中，加入适量的无水乙醇作为流动相。

- 观察层析过程，当溶剂前沿接近层析板底部时，取出层析板。

- 将层析板放置在显微镜下观察，记录各色素带的颜色、位置和宽度。

3. 叶绿素鉴定：- 根据各色素带的颜色、位置和宽度，确定叶绿素a和叶绿素b的位置。

- 叶绿素a呈蓝绿色，位于层析板较窄的位置。

- 叶绿素b呈黄绿色，位于层析板较宽的位置。

五、实验结果与分析1. 在层析板上，成功分离出叶绿素a和叶绿素b两种色素。

2. 叶绿素a的色素带位于层析板较窄的位置，颜色为蓝绿色。

3. 叶绿素b的色素带位于层析板较宽的位置，颜色为黄绿色。

六、实验结论通过本实验，我们成功从植物叶片中提取和分离出叶绿素a和叶绿素b两种色素。

柱层析是一种简单、有效的分离技术，可以用于分离和鉴定天然色素。

七、实验注意事项1. 在研磨叶片时，注意不要用力过猛，以免破坏叶绿素结构。

实验六薄层色谱层析薄层色谱层析是一种常用的分离和分析技术，它基于样品成分在薄层吸附剂上的不同亲和性或化学性质而实现成分分离的方法。

本实验将介绍薄层色谱层析的原理、仪器和实验步骤，并通过实验验证其应用。

一、实验原理：薄层色谱层析是基于组分在吸附剂上的不同亲和性或化学性质进行分析和分离的方法。

子实验有：1.吸附剂的选择：薄层色谱中常用的吸附剂有硅胶、氧化铝和硅胶酸铝等，吸附剂的选择应根据样品特性和分离效果进行选择；2.样品预处理：对于复杂样品，需要进行前处理，如萃取、稀释等；3.薄层层析板的准备：在净化薄层层析板前，需先将其加热至100℃，使其达到无水状态。

然后使用吸管和吸头，将层析剂吸入薄层层析板中，在线风干；4.样品施加：将样品溶液利用微量注射器施加到薄层层析板的起点上，薄层层析板吸附剂将对样品进行分离和吸附；5.染色显示：分离完毕后，将层析板进行染色显示，一般使用碘化铋溶液或紫外灯照射来显示分离的斑点。

二、实验仪器和试剂：1.仪器：薄层层析仪、紫外灯、显微镜；2.试剂：碘化铋溶液，色谱纸，吸附剂（如硅胶）。

三、实验步骤：1.准备薄层层析板：将薄层层析板加热至100℃，然后加入层析剂，使其自然风干；2.样品制备：将待分析的样品加入适当的溶剂中，进行溶解或萃取，并将其稀释至合适的浓度；3.样品施加：利用微量注射器将样品施加到薄层层析板的起点上，注意施加的体积和位置；4.层析：将施加样品的薄层层析板放入薄层层析仪中，选择适当的展开液（移动相）和展开方式进行层析，直到移动相前行至一定距离；5.染色显示：将层析板取出，利用碘化铋溶液进行染色，或者使用紫外灯照射，观察并记录分离的斑点；6.斑点的分析：利用显微镜或量角器等工具测量斑点的Rf值（萃取率），并与已知物质进行对比。

四、实验注意事项：1.样品的制备应严格按照实验要求进行，避免样品净化不彻底或含有杂质的情况；2.施加样品时，注意体积的控制和位置的准确性，避免影响实验结果；3.展开液的选择应根据实验要求，并注意展开液的移动速度，避免太快或太慢导致分离不完整；4.染色显示时，应注意控制染色时间，避免过度染色或染色不足；5.斑点的测量应准确，避免测量误差对结果的影响。

柱层析分离色素一、【实验目的】1．了解柱层析的分类，掌握各种柱层析的原理。

2．熟练掌握吸附层析的原理和操作技术。

二、【实验原理】叶绿体色素是植物吸收太阳光能进行光合作用的重要物质，主要有叶绿素a、叶绿素b、胡萝卜素和叶黄素组成。

从植物叶片中提取和分离叶绿体色素是对其认识和了解的前提。

利用叶绿体色素能溶于有机溶剂的特性，可用95%乙醇或无水乙醇提取。

分离色素的方法有多种，如纸层析、柱层析等。

柱层析法是色谱法中的一种，它是根据混合物中各组分对固定相的吸附能力，以及对洗脱剂（即移动相）的溶解度不同将各组分分离。

常用的柱色谱有吸附色柱谱和分配柱色谱两类。

吸附柱色谱通常是在玻璃管中填入表面积很大，经过活化的多孔性物质或粉状固体作为吸附剂（如氧化铝或硅胶），当混合物的溶液流经吸附柱时，就被吸附在柱的上端，然后从柱顶加入溶剂（洗脱剂）洗脱。

由于不同化合物在吸附柱上的吸附能力不同，在同一溶剂中的溶解度也不同，因此各组分随溶剂以不同速度下移，形成色带。

继续用溶剂洗脱，吸附能力最弱的组分就随溶剂首先流出，整个层析过程进行反复的吸附-解析-再吸附-再解吸。

用柱层析法可以分别收集各组分，并逐个鉴定。

本实验是把三氧化二铝填入玻璃管中（压成柱状）作为吸附剂，将叶绿体色素的石油醚提取液倾于吸附柱上，色素即被吸附。

由于色素的种类不同，被吸附的强弱不同，就在吸附柱上排列成为不同的色层，再利用吸附剂在不同溶剂中有不同的吸附力，用不同的溶剂进行洗脱，从而达到叶绿体主要的4种色素（叶绿素a、叶绿素b、叶黄素、胡萝卜素）的分离。

三、【实验材料】原料：新鲜的菠菜叶试剂：1．无水乙醇或95%乙醇 5.三氧化二铝2．石英砂 6．饱和氯化钠溶液3．丙酮 7.水硫酸钠4．石油醚（60-90℃） 8洗脱液：丙酮：石油醚＝1：9 器材：层析柱（1×30cm），研钵，蒸馏装置，脱脂棉，天平，烧杯，过滤漏斗，玻璃棒，锥形瓶，分液漏斗，试管，铁架台四、【实验操作】1．色素的提取：20克菠菜，加少许石英砂，再加20毫升无水乙醇研磨成浆，脱脂棉过滤，保存滤液，滤渣再用无水乙醇提取一次，合并滤液，滤渣再加入30毫升石油醚提取一次，过滤，合并滤液，转移至分液漏斗中,再加入40毫升饱和氯化钠溶液震荡，弃去下层溶液，再分别加入20毫升水震荡洗涤几次，直至下层无色，保留上层溶液，转移至三角瓶中，加入无水硫酸钠干燥5分钟，备用. 2．样品的浓缩：将提取液放入蒸馏烧瓶中，蒸除多余的石油醚，至剩余液体5-8毫升左右，以备加样使用。

菠菜色素的提取及薄层色谱和柱色谱分离一、实验目的1.通过对菠菜色素的提取和分离，了解天然物质分离提纯方法；2.了解薄层色谱和柱色谱分离的基本原理，掌握柱色谱和薄层色谱分离的操作；3.通过柱色谱和薄层色谱分离操作，加深了解微量有机物色谱分离鉴定的原理。

二、实验原理1.菠菜叶中的叶绿体含有绿色素（包括叶绿素a和叶绿素b）和黄色素（包括胡萝卜素和叶黄素）两大类天然色素。

这两类色素都不溶于水，而溶于有机溶剂，故可用乙醇或丙酮等有机溶剂提取。

2.柱色谱法又称为柱层析法，固定相装于柱内，流动相为液体，样品沿竖直方向由上而下移动而达到分离的色谱法。

本法主要用于分离，有时也起到浓缩富集作用。

柱色谱法分为吸附柱层析法和分配柱层析法，本实验仅介绍吸附柱层析法。

它是根据混合物中各组分的分子结构和性质（极性）来选择合适的吸附剂和洗脱剂，从而利用吸附剂对各组分吸附能力的不同及各组分在洗脱剂中的溶解性能不同达到分离目的。

3.薄层色谱法（TLC），是将适宜的固定相涂布于玻璃板、塑料或铝基片上，成一均匀薄层。

待点样、展开后，根据比移值（R f）与适宜的对照物按同法所得的色谱图的比移值（R f）作对比，用以进行药品的鉴别、杂质检查或含量测定的方法。

薄层色谱法是快速分离和定性分析少量物质的一种很重要的实验技术。

三、仪器与试剂1.仪器: 布氏漏斗、抽滤瓶、研钵、分液漏斗、显微载玻片、毛细管、层析柱( 20×3cm )、分液漏斗、普通漏斗、玻璃棒、锥形瓶、胶头滴管、烧杯（250ml和50ml）、食品保鲜膜、橡皮筋2.试剂和原材料: 石油醚（60℃~90℃）、甲醇( AR )、无水乙醇( AR )、乙醇( AR ) 、乙酸乙酯(AR) 、丙酮（化学纯）、苯( AR )、无水硫酸钠( AR )、硅胶G60型（青岛海洋化工厂，薄层层析用）、中性氧化铝（150目~160目）、菠菜叶、脱脂棉。

四、实验步骤1.硅胶板的制备：硅胶液配制→铺板→干燥→活化（1）硅胶液配制：称取20g硅胶G60型在研钵中，加入约50ml 4%CMC溶液，用研棒不断搅拌，直至感到液体变得较粘稠状，且用研棒蘸取硅胶液可见粘丝状即可；（2）铺板：用药勺取适量硅胶液置于玻璃片上，并用药勺均匀地摊开，然后将该玻璃片放在桌面上，做上下地颠动几次直至硅胶液均匀铺满即可；（3）干燥：自然晾干1小时左右；（4）活化：放在恒温干燥箱里于105-110℃干燥2~3h，然后冷却室温，取出存放在干燥器保存，待用。

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在进行柱层析操作之前，需要进行充分的准备。