实验四 培养基的制备、器具包扎和.

【关键字】报告培养基制备实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告陕西师范大学远程教育学院生物学实验报告报告题目培养基的制备与灭菌姓名刘伟学号专业生物科学批次/层次指导教师学习中心培养基的制备与灭菌一、目的要求1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。

2. 掌握培养基的配置原则和方法。

3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。

二、基本原理牛肉膏蛋白胨培养基：是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。

由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。

高压蒸汽灭菌：主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。

将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。

待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。

此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。

三、实验材料1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂、1mol/L的NaOH和HCl溶液。

2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。

3. 其他物品：药匙、称量纸、pH试纸、记号笔、棉花等。

四、操作步骤（一）玻璃器皿的洗涤和包装1．玻璃器皿的洗涤玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。

将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。

移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。

洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。

2．灭菌前玻璃器皿的包装（1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。

包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。

（2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。

一、实验目的1. 掌握培养基的基本成分和配制方法。

2. 熟悉培养基的灭菌操作流程。

3. 了解培养基在微生物培养中的应用。

二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基质，通常由碳源、氮源、无机盐、生长因子和水等组成。

根据微生物的营养需求和实验目的，可以配制不同类型的培养基。

灭菌是保证培养基无菌的关键步骤，常用的灭菌方法包括高压蒸汽灭菌、干热灭菌和过滤灭菌等。

三、实验材料与仪器1. 材料：- 酵母提取物- 胰蛋白胨- 琼脂- NaCl- K2HPO4- MgSO4·7H2O- 水- 水平式电热灭菌锅- 高压蒸汽灭菌锅- 烧杯- 玻璃棒- 试管- 移液器- 灭菌指示剂- 灭菌棉塞2. 仪器：- 电子天平- 灭菌器- 玻璃器皿四、实验步骤1. 培养基的配制：- 称取酵母提取物10g、胰蛋白胨20g、琼脂15g、NaCl 5g、K2HPO4 1g、MgSO4·7H2O 0.5g，加入适量水溶解。

- 将溶液转移至烧杯中，用玻璃棒搅拌至完全溶解。

- 将溶液转移至锥形瓶中，用移液器定容至1000mL。

- 将锥形瓶置于电热灭菌锅中，进行121℃、20min的高压蒸汽灭菌。

2. 灭菌指示剂的加入：- 在灭菌后的培养基中，加入灭菌指示剂，观察指示剂的变化，确认培养基是否灭菌彻底。

3. 培养基的倒平板：- 将灭菌后的培养基冷却至50℃左右，倒入平板中，待凝固后，用无菌镊子取出平板，标记并放置于培养箱中。

五、实验结果与分析1. 培养基灭菌效果：- 通过观察灭菌指示剂的变化，确认培养基灭菌彻底。

2. 培养基平板制备：- 倒平板过程中，注意无菌操作，防止污染。

六、实验讨论1. 培养基的配制过程中，应注意称量准确，避免误差。

2. 灭菌过程中，应控制好温度和时间，确保培养基灭菌彻底。

3. 倒平板过程中，应注意无菌操作，防止污染。

七、实验总结通过本次实验，我们掌握了培养基的基本成分和配制方法，熟悉了培养基的灭菌操作流程，了解了培养基在微生物培养中的应用。

微生物学实验实验一一、目的要求二、基本原理➢➢➢三、实验材料每组同学需要准备以下材料（2人/组）：●●●●●●●●●●●●●●四、实验内容（一）、培养基的配制：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。

操作图示：四、实验内容培养基配方：1．配制肉汤斜面培养基50 mL 2．配制麦芽汁斜面培养基3．注意事项：◆◆◆◆（二）培养基灭菌四、实验内容（三）包扎1．培养皿：2．吸管：3．三角玻扒：五、实验报告思考题：◆◆◆◆◆◆◆◆实验二一、目的要求➢➢二、基本原理三、实验材料1．各组所需的物品●●●●2．注意事项：①②①②③④四、实验内容1．微生物的斜面接种技术：斜面接种的操作方法：转下页接种菌名及接种划线方式、接种工具：细菌：霉菌：酵母菌：图2-1 各种无菌操作接种技术示意图图2-2 穿刺接种操作过程示意图2．生物的培养技术——培养箱恒温培养法3. 为下次实验准备平板培养基：注意：标签用铅笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。

培养基配方：(1)配制肉汤平板培养基100 mL(2)配制麦芽汁平板培养基配制好的培养基进行灭菌！五、实验报告1．观察记录实验结果:微生物琼脂斜面上的生长状况。

2．思考题:◆◆实验三一、目的要求●●二、基本原理三、实验材料1、各组所需物品：•••••2、平板的制备：四、实验内容1. 平板混合分离法：大肠杆菌，枯草杆菌，单球菌（3皿）图3-1 混合倒平板操作法示意图四、实验内容2. 平板划线分离法：（3皿）图3-2 平板划线分离操作法示意图图3-3 平板划线菌落分离效果图四、实验内容3. 平板涂布分离法(3皿)：图3-4 涂布平板操作法示意图四、实验内容4. 平板点殖：黑曲霉，黄曲霉，根霉（3皿）四、实验内容5. 生物的培养技术：培养箱恒温培养法➢➢五、实验报告1、观察记录实验结果：微生物的菌落特征注:菌落特征描写方法参考如下：五、实验报告2、思考题:实验四一、目的要求二、基本原理转下页二、基本原理三、实验材料1. 菌种：2. 每组制片用具：3. 染色剂1套：四、实验内容四、实验内容3.细菌、酵母菌、霉菌的制片技术及个体形态观察：●●●图4-10 涂片制备过程四、实验内容4 注意事项：●●●●。

常用培养基的制备及注意事项一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法;二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物;培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水;根据微生物的种类和实验目的不同,培养基也有不同的种类和配制方法;牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基,有时又称为普通培养基;由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质,所以可供微生物生长繁殖之用; 干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果;三、试剂与器材1.器材试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、培养基、分装器、天平、牛角匙、高压蒸汽灭菌锅、pH度纸、棉花、牛皮纸、记号笔、麻绳、纱布、吸管、培养皿、电烘箱、注射器、微孔滤膜过滤器、镊子等;2.试剂牛肉膏、蛋白胨、NaCl、琼脂四、实验内容1.称量→溶化→调pH→过滤→分装→加塞→包扎→灭菌→无菌检查2.干热灭菌：装入待灭菌物品→升温→恒温→降温→开箱取物3.高压蒸汽灭菌：加水→装物品→加盖→加热→排冷空气→加压→恒压→降压回零→排汽→取物→无菌检查4.过滤除菌：组装灭菌→连接→压滤→无菌检查→清洗灭菌五、关键步骤及注意事项1.要严格按配方配制;2.调pH不要过头;3.干热灭菌要注意物品不要堆放过紧,注意温度的时间控制,70oC以下放物、取物;4.高压灭菌要注意物品不要过多,加热后排除冷空气,到时降压回零取物;5.过滤除菌要注意各部件灭菌,压滤时,压力要适当,不可太猛太快,滤膜要注意清洗保存;。

实验五培养基的制备、器具包扎和灭菌一、实验目的1、了解培养基的配制原理和方法，掌握其配制过程。

2、了解几种灭菌方法，掌握干热灭菌法和加压蒸汽灭菌法的原理及其使用方法。

3、熟悉分离、培养微生物前的有关准备工作及操作方法。

二、实验原理①培养基分类：据组成成分可分为:1.合成培养基：由各种纯化学物质按一定比例配制而成。

2.半合成培养基：有一部分纯化学物质和另一部分天然物质配制而成。

3.天然培养基：利用天然来源的有机物配制而成。

据用途可分为1.选择培养基：用来从环境中筛选微生物的培养基加富培养基：加入某种微生物生长繁殖所需的营养物质，使其快速生长，便于分离抑制性培养基：加入某种物质抑制其他微生物生长，使目标微生物得到富集，便于分离2.鉴别培养基：用来检测微生物的某些代谢特性，以便鉴别。

据培养基的物理状态可分为：1.液体培养基：不加凝固剂的液体状态培养基。

2.固体培养基：在液体培养基中加入2%左右的凝固剂的固体状态的培养基或农副产品培养基。

3.半固体培养基：在液体培养基中加入0.2—0.5%凝固剂而成的半固体状培养基。

②配置好的培养基必须立即进行灭菌③实验室常用加压蒸汽灭菌法三、实验材料药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、琼脂、马铃薯、蔗糖；可溶性淀粉、K2HPO4、KNO3、MgSO4•7H2O、FeSO4•7H2O等。

高压蒸汽灭菌锅、恒温干热灭菌箱。

其它：天平、牛角匙、电磁炉、1N HCl、1N NaOH、pH试纸、刻度搪瓷杯、量筒、玻棒、带玻璃珠的三角瓶、带塞子的无菌试管、培养皿、枪头、枪头盒、标签等。

四、实验步骤1、培养基的配制2、分离培养微生物常用器皿的准备3、培养基和玻璃器材的灭菌培养基的配制方法和步骤：1.称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。

2.溶化：在搪瓷杯中加入所需水量，玻棒搅匀，加热溶解。

3.调pH值：用NaOH或HCl调pH，用pH试纸对照。

4.加琼脂溶化：加热过程中要不断搅拌，可适当补水。

一、实验目的1. 掌握培养基的基本制备原理和方法。

2. 学会牛肉膏蛋白胨培养基的配制过程。

3. 了解培养基灭菌的重要性及常用灭菌方法。

4. 熟悉实验室无菌操作的基本规范。

二、实验原理培养基是微生物生长繁殖的营养基质，主要由碳源、氮源、无机盐、生长因素和水等成分组成。

根据微生物的种类和实验目的，培养基可以有不同的配方和种类。

牛肉膏蛋白胨培养基是一种常用的细菌基础培养基，适用于培养大多数细菌。

三、实验材料与仪器实验材料：- 牛肉膏- 蛋白胨- 氯化钠- 琼脂- 蒸馏水- pH试纸- 灭菌棉塞- 高压蒸汽灭菌锅- 三角瓶- 烧杯- 量筒- 移液管- 玻璃棒- 培养皿- 等等。

四、实验步骤1. 称量：根据牛肉膏蛋白胨培养基的配方，准确称取牛肉膏、蛋白胨、氯化钠等成分。

2. 溶解：将称量好的牛肉膏、蛋白胨等成分放入烧杯中，加入适量的蒸馏水，用玻璃棒搅拌使其充分溶解。

3. 调整pH值：用pH试纸测定溶液的pH值，根据需要加入适量的1M盐酸或氢氧化钠溶液调整pH值至7.2-7.6。

4. 灭菌：将溶解好的培养基转移至三角瓶中，加入灭菌棉塞，用高压蒸汽灭菌锅进行灭菌，灭菌时间为15-20分钟。

5. 冷却：灭菌后，待培养基冷却至50-60℃，加入适量的琼脂，充分搅拌使其溶解。

6. 分装：将冷却后的培养基分装至培养皿中，待凝固后备用。

7. 无菌操作：在无菌操作条件下，用移液管吸取适量的菌液，接种至培养基中。

五、实验结果与分析1. 培养基制备：成功制备了牛肉膏蛋白胨培养基，颜色呈淡黄色，透明度高。

2. 灭菌效果：通过高压蒸汽灭菌，确保了培养基的无菌状态，避免了微生物污染。

3. 接种结果：接种后，培养基上出现了菌落生长，表明培养基对细菌具有良好的培养效果。

六、实验讨论1. 在培养基的制备过程中，称量、溶解、调整pH值等步骤对培养基的质量至关重要，应严格按照实验步骤进行操作。

2. 灭菌是防止培养基污染的关键环节，应选择合适的灭菌方法，确保灭菌效果。

无菌操作技术—用品的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术是实验室中非常重要的技术，可以保证实验结果的准确性和可靠性。

以下是用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的一些建议和步骤：用品的清洗在进行无菌实验前，确保所有用品是干净的，没有任何污染物。

1. 使用洗碗液和温水彻底清洗所有用品，包括培养皿、试管、移液器等。

2. 用专用的刷子和洗涤剂清洗玻璃器皿，保证器皿内外表面完全清洁。

3. 用去离子水或者超纯水冲洗所有用品，以除去洗涤剂和其他杂质。

4. 沥干并摆放用品在干净的工作台上。

用品的包扎包扎是为了防止用品在操作过程中受到外界污染。

1. 在无菌环境下，将用品放在无菌纸上。

2. 使用无菌纸或箔纸将用品包裹好，封口处用无菌胶带固定。

3. 将包扎好的用品放入无菌中，并密封。

用品的灭菌灭菌是为了杀死用品上的细菌和其他微生物。

1. 使用常见的灭菌方法包括高温干热灭菌和湿热灭菌。

2. 对于耐高温的器皿，如玻璃器皿，可以选择高温干热灭菌。

将器皿放入预热至160°C的高温灭菌器中，保持30分钟。

3. 对于耐湿热的器皿，如塑料器皿，可以选择湿热灭菌。

将器皿放入预热至121°C的压力灭菌器中，保持15-20分钟。

培养基的配制培养基是进行微生物培养的基础，配制过程需要严谨操作。

1. 根据需要的培养基种类和配方，准备所需的培养基成分。

2. 使用称量器具准确称量所需成分，并将其加入无菌中。

3. 向无菌中添加适量的热蒸馏水，并搅拌混合，直到成分溶解彻底。

4. 根据需要调整pH值，并使用pH计进行测量和校准。

5. 分装培养基到无菌培养皿或试管中。

6. 对于固体培养基，添加适量琼脂糖，并将其加热至混合溶解。

然后将培养皿冷却，直到琼脂糖凝固。

以上是无菌操作技术中用品的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的基本步骤和建议。

通过严格遵循这些步骤，可以提高实验的可靠性，并避免实验结果的污染和误差。

实验四培养基的配制与灭菌一、实验教学目标基本与要求1、明确培养基的配制原理。

2、掌握配制培养基的一般方法和步骤。

3、熟悉准备微生物培养准备器械的方法二、实验内容1.无菌移液管、无菌平皿，准备无菌水、棉塞（试管和在三角瓶）；2.配制五类菌培养基(细菌、放线菌、霉菌、酵母培养基，双歧杆菌厌氧培养基)、分装。

(每人参与配制一种，但要求四种都会配)3.高压蒸汽灭菌，灭菌后摆放斜面；4.实验室常用消毒灭菌方法(示范)。

三、实验操作（一）吸管的包扎与灭菌：•在距其粗头顶端约0.5cm处，塞一小段1.5cm长的棉花。

•棉花要塞得松紧恰当（过紧，吹吸液体太费劲；过松，吹气时棉花会下滑）；•然后分别将每支吸管尖端斜放在旧报纸条的的近左端，与报纸约呈60º角，并将右端多余的报纸打一小结。

（二）培养皿的灭菌：以旧报纸密密包紧，一般以6套做一包，待灭菌。

（三）无菌水的制备无菌水为下一次微生物分离实验中所需要的材料。

1.无菌分离试管水的准备●试管中装入4.5ml自来水，每组共准备12支，盖上塑料盖，包扎；2.三角瓶无菌水的准备●三角瓶装入99ml水，共装3瓶，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。

3.无菌玻璃珠的准备●三角瓶中装入玻璃珠，封口膜包扎，外包牛皮纸或报纸。

（四）培养基的配制：1、标识同学们先将试管和三角瓶贴好标签。

注明培养基名称，组别，日期。

标签粘贴位置在离管口1/3管身处。

注意：标签用记号笔书写，以防高温灭菌时蒸汽模糊字迹。

2、培养基的配制程序●称量：按照配方正确称取各种原料放于搪瓷杯中。

●溶化：在搪瓷杯中加入所需水量自来水，玻棒搅匀，加热溶解。

●调pH值：用1N NaOH或1N HCl调pH，用pH试纸对照。

●定容：将溶化的培养基倒入量筒中，补充水量至所需体积；●加琼脂溶化：加所需量的琼脂，加热融化并不断搅拌。

3、培养基配方●牛肉膏蛋白胨培养基(常用的细菌培养基)（1组）（p275）●牛肉膏0.5克，蛋白胨1克，NaCl 0.5克，水100mL，琼脂2g ，pH7.2～7.4●高氏一号培养基(常用的放线菌培养基)（2组）（p275）●可溶性淀粉2.0g，KNO300.1g ，K2HPO40.05g，MgSO40.05g，NaCl 0.05g，FeSO40.001g，水100mL，琼脂2g ，pH7.2～7.4●马铃薯（或豆芽汁）蔗糖（或葡萄糖）琼脂培养基（3组）（p276）（用于分离和培养真菌之用，是一种半合成培养基），其配方如下：去皮马铃薯20g （或鲜豆芽10g），葡萄糖5g，自来水100mL ，琼脂2g ，pH 自然。

无菌操作技术—器具的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术是在实验室中进行微生物学实验时必不可少的操作技术之一。

它的目的是确保实验过程不受外界微生物的污染，保证实验结果的准确性和可靠性。

本文将介绍无菌操作技术中器具的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制等关键步骤。

器具的清洗在进行实验前，必须对所有使用的器具进行彻底的清洗。

清洗的目的是去除器具表面的污物和微生物，减少污染的可能性。

清洗器具的基本步骤包括：1. 使用肥皂水或清洁剂将器具浸泡并搓洗，彻底清洗器具表面。

2. 用去离子水或蒸馏水冲洗器具，确保彻底去除清洁剂残留物。

3. 使用含有消毒剂的溶液浸泡器具，有效杀灭残留的微生物。

包扎器具清洗后的器具应立即包扎以保持无菌状态。

包扎的目的是防止任何微生物重新污染器具表面。

包扎器具的基本步骤包括：1. 使用无菌纱布或绷带将器具进行包裹，确保器具表面完全覆盖。

2. 使用无菌胶带或无菌绷带将包扎好的器具固定住，防止松动或破损。

灭菌器具灭菌是无菌操作技术中非常重要的一步，它可以有效杀灭器具表面残留的微生物。

常用的灭菌方法包括：1. 蒸汽灭菌：使用高温蒸汽对器具进行灭菌，常用于玻璃器具和金属器具。

2. 高压灭菌：将器具置于高压下，常用于塑料器具和液体培养基。

3. 过滤灭菌：使用微孔滤膜对液体培养基进行过滤，去除其中的微生物。

培养基的配制在无菌操作技术中，培养基的配制也是非常重要的一步。

正确的培养基配制可以提供适合微生物生长和繁殖的营养物质。

培养基的基本配制步骤包括：1. 根据实验需要选择合适的培养基类型，如富含营养物质的琼脂培养基或液体培养基。

2. 按照培养基配方中的比例准确称量所需的成分，将它们加入适量的水中。

3. 调节pH值，常用的方法是使用 pH计和酸碱试剂来调节。

4. 将配制好的培养基装入无菌培养皿或试管中，并进行灭菌处理。

以上就是无菌操作技术中器具的清洗、包扎、灭菌以及培养基的配制的基本步骤。

通过严格遵循这些步骤，可以有效地保证实验过程的无菌性，提高实验结果的可靠性。

无菌操作技术—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制无菌操作技术（一）—器皿的清洗、包扎、灭菌及培养基的配制实验目的：1、掌握实验用器皿的清洗、包扎方法2、了解常用的灭菌方法—干热灭菌、湿热灭菌、紫外线灭菌及化学灭菌3、掌握培养基的配制及不同类型灭菌器的使用。

一、实验用器皿的清洗及洗涤液的配制1、洗涤液的种类及配制（1）去垢剂溶液（常用洗涤液）。

生化去垢剂（detergent）A．中性去垢剂又称非离子表面活性剂，对蛋白质的变性作用影响较少，宜于蛋白质或酶提取之用。

一般市售有聚乙二醇类，如PEG200；多元醇类表面活性剂，如山梨醇、XXX和吐温类：司班-80和XXX-20B．阴离子去垢剂：常见的有十二烷基硫酸钠和十二烷基璜酸钠。

常用于核酸的提取。

C．阳离子去垢剂：如洁尔灭、新洁尔灭、消毒净等，消毒灭菌类占多数。

D．自然表面活性剂：又称为生物表面活性剂，如各种树胶（阿拉伯胶、果胶）、明胶、皂甙、卵磷脂、琼脂、海藻酸钠、酪蛋白、多糖类（如环糊精）等。

E．两性表面活性剂：在碱性水溶液中呈阴离子表面活性剂的性质，起泡性好，去污力也强；在酸性溶液中则出现阳离子表面活性剂特征，其杀菌性很强。

（2）铬酸洗液：[又称重铬酸钾（或钠）——浓硫酸洗涤液，简称洗液]广泛用于玻璃仪器的洗涤。

其配制方法如下：①称取5g重铬酸钾(或钠)粉末放入250ml烧杯中，加5ml 水，尽量使其溶解。

然后边搅拌，边缓缓注入浓H2SO4l00ml，待洗液温度冷却至40℃以下，将其转移到具玻塞的细颈干燥的试剂瓶内贮存备用。

②称取10g重铬酸钾粉末置于500ml烧杯中，加水20ml，尽量使其消融。

然后慢慢注入浓H2SO4180ml，随加随搅拌。

冷却后贮于具玻塞的细颈试剂瓶中备用。

（3）浓HCl（工业用）常用于洗去水垢或某些无机盐沉淀。

（4）浓HNO3（常用于洗涤除去金属离子）。

（5）1mol/LKOH溶液。

（6）8mol/L尿素洗涤液（PH1.0）适用于洗涤盛蛋白质溶液及血样的器皿。

竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基制备实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）n源：包括无机氮和有机氮。

（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。

微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

实验一玻璃器皿的准备、常用仪器的使用及培养基的制备[实验目的]1、系统掌握玻璃器皿的准备方法及常用仪器的使用。

2、掌握一般培养基制备的原则和要求，熟悉一般培养基制备的过程。

[实验原理]一、玻璃器皿的无害处理：1、新购置的玻璃器皿因含有游离碱，一般在2%的盐酸溶液中浸泡数小时后再用清水洗净，也可在洗衣粉水中煮30-60min，取出用清水洗净。

2、常用玻璃器皿洗涤时可用鬃刷蘸取洗衣粉刷洗，然后用自来水冲洗干净。

3、带油污玻璃器皿先将倒空的玻璃器皿用10%的氢氧化钠浸泡半小时或放在5%的苏打液内煮两次，去掉油污，再用洗衣粉和热水刷洗。

4、带菌玻璃器皿经121℃高压蒸汽灭菌20min后，趁热倒去内容物，再用洗衣粉水刷洗干净，以水在内壁均匀分布成一薄层而不出现水珠为油垢除尽的标准。

经以上处理的玻璃器皿，可满足一般实验用。

少数实验对玻璃器皿清洁度要求较高，除用上述方法外，还应先用2%的HCl溶液浸泡数10min，再用自来水冲洗，蒸馏水淋洗2-3次。

有的尚需超纯水淋洗然后烘干备用。

二、玻璃器皿的包扎：吸管、平皿、瓶口等的包扎。

三、玻璃器皿的灭菌：分为两种，高压蒸汽灭菌法和干热灭菌法。

高压蒸汽灭菌法是湿热灭菌中应用最为广泛的一种方法。

其原理是依据在一个密闭的高压蒸汽灭菌器中，水的沸点随水蒸汽压的增加而上升，加压是为了提高水蒸汽的温度。

把待灭菌物品放在灭菌器内，当灭菌器内压力为0.1MPa时，温度可达到121℃，一般维持20min，即可杀死一切微生物的营养体及其孢子。

一般的培养基、玻璃器皿、金属用具、实验服、传染性标本等均可用这种方法有效灭菌。

灭菌的温度及时间视灭菌物品中的微生物种类及数量而定。

干热灭菌法也叫热空气灭菌法。

实验室通常使用恒温控制的电热鼓风干燥箱作为干热灭菌器。

此法常用于空的玻璃器皿、金属器具和其他耐高温的物品（如陶瓷培养皿盖、石蜡油、碳酸钙）的灭菌。

其优点是灭菌器皿保持干燥。

但带有胶皮、塑料的物品、液体及固体培养基不能用此法。

培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验打下基础。

一、培养基的制备。

1.准备所需试剂和设备，蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、蒸馏水、培养皿、量筒、坩埚、移液器等。

2.称取适量蔗糖、蛋白胨、酵母提取物加入蒸馏水中，充分溶解后调节pH值至7.0。

3.加入适量琼脂，搅拌均匀。

4.分装至培养皿中，待凝固后进行灭菌处理。

二、培养基的灭菌。

1.将制备好的培养基装入培养皿中，封口。

2.将培养皿放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理。

3.灭菌条件，121℃，压力为15psi，持续20分钟。

4.取出培养皿，放置在无菌工作台上待凉，避免细菌再次污染。

5.观察培养基表面是否有凝固不均匀或气泡，如有则说明灭菌不彻底，需重新处理。

三、实验结果。

1.经过灭菌处理的培养基表面平整，无气泡，无明显异物。

2.在无菌条件下打开培养皿，用无菌移液器移取适量微生物菌种接种于培养基表面。

3.将接种好的培养皿放入培养箱中，进行培养观察。

4.培养箱条件，温度控制在37℃，培养时间根据不同微生物而定。

四、实验结论。

本次实验通过制备培养基和灭菌处理，成功培养出微生物菌种，并观察到了微生物的生长情况。

培养基的制备和灭菌是微生物实验中非常重要的步骤，只有保证培养基的无菌，才能得到准确的实验结果。

通过本次实验的学习，相信对于今后的微生物实验有了更深入的认识和理解。

五、实验注意事项。

1.在制备培养基时，需注意称取试剂的准确性和加入顺序。

2.灭菌处理时，要确保培养基充分接受高压蒸汽的灭菌作用。

3.实验操作要在无菌条件下进行，避免外界污染。

4.培养箱的温度和培养时间要根据不同微生物的生长特性进行调整。

六、实验延伸。

在今后的实验中，可以尝试不同种类的培养基制备和灭菌处理，观察其对微生物生长的影响，进一步探索微生物的生长规律和特性。

总之，培养基的制备和灭菌是微生物实验中不可或缺的重要环节，只有掌握了这些基本技能，才能进行准确可靠的微生物实验。