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不同产地灵芝中重金属含量比较朱龙平1姚文明1陈建文1（1.中山大学药学院，广东广州5100062.）摘要用原子吸收光谱法、原子荧光光谱法测定不同产地灵芝中铅、镉、砷、汞、铜的含量，结果样品中铅含量<0.061mg/kg、镉含量<0.006mg/kg、砷含量<0.168mg/kg、汞含量<0.013mg/kg、铜含量<6.33mg/kg均符合国家标准。
关键词：原子吸收光谱法、原子荧光光谱法、灵芝、重金属灵芝又称灵芝草、神芝、芝草、仙草、瑞草，是担子菌纲多孔菌科灵芝属真菌赤芝（G．lucid um·karst）和紫芝（G．japonicrn L loyd）的总称。
灵芝作为拥有数千年药用历史的中国传统珍惜药材，具备很高的药用价值，现代药理学研究证实，灵芝对于增强人体免疫力，调节血糖，控制血压，辅助肿瘤放化疗，保肝护肝，促进睡眠等方面均具有显著疗效。
市面上灵芝类保健品种类繁多，目前国内的每年销售额约十几亿元人民币。
据报道灵芝中含有铅、镉、砷、汞等有害元素，因此测定灵芝中的铅、镉、砷、汞、铜等元素的含量对灵芝的质量控制和合理使用具有重要意义。
本实验利用原子吸收光谱法和原子荧光光谱法测定了不同产地的灵芝中重金属元素的含量，方法准确可靠。
1实验部分1、试品与试剂、仪器１.１试品灵芝，无限极（中国）有限公司提供，产地如下：经中山大学药学院生药学教研室杨得坡教授鉴定为多孔菌科灵芝属真菌紫芝（G．japonicrn L loyd）。
1.2 仪器试剂原子吸收光谱仪(附石墨炉)（美国Thermo公司）；AG285分析天平（梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司）；XDY—2A型双道原子荧光光度计（北京海光仪器公司）；高压消解罐（100ml）；硝酸、硫酸、盐酸、高氯酸等均为分析纯，去离子水实验室自制；单元素标准溶液购于国家有色金属及电子材料分析测试中心，镉标准液，编号：GSB04-1721-2004，标识号107100、铅标准液，编号：GSB04-1742-2004，标识号10646，铜标准液，编号：GSB04-1725-2004，标识号10619，汞标准液，编号：GSB04-1725-2004，标识号10619、砷标准液，编号：GSB04-1714-2004，标识号10708。
灵芝多糖灵芝属真菌具有很高的药用价值从而得到广泛的研究与应用,而多糖类化合物是灵芝属真菌的主要化学成分之一。
灵芝多糖结构如分子量、单糖组成和糖苷键类型等，对其活性影响很大，本文列举了灵芝多糖结构通用的检测方法。
已有实验证实，灵芝多糖的生物保健功能主要体现在降血糖、降血脂、抗肿瘤、提高免疫力和抗氧化方面。
灵芝是担子菌门担子菌纲多孔菌科灵芝属药用真菌，古代就认为其有扶正固本、滋补强壮的功效，对其药性十分推崇。
灵芝类所含化学成分复杂,且因所用菌种培养方法、提取方法等不同而异.研究灵芝类的化学成分的目的,在于了解和比较灵芝属不同品种及同一品种的不同发育阶段(如子实体、菌丝体、孢子体)所含的化学成分,通过药理及临床研究确定其有效成分或有效部分.目前研究较多的灵芝化学成分主要有:三萜类化合物、多糖类、核苷类、甾醇类、生物碱类、呋喃衍生物、氨基酸多肽类、无机元素、脂肪酸等现代科学检测表明，灵芝在免疫系统的调节、通过增强宿主免疫调节功能达到抗肿瘤作用、抗病毒作用、通过提高氧化酶活性而清除体内自由基达到抗衰老的作用、降血脂等方面有着极其重要的医学作用。
随着近年来对灵芝研究的不断深入，发现灵芝多糖是灵芝的主要活性物质之一，其重要性不言而喻。
本文综述了近年来国内外对灵芝多糖的主要研究进展。
灵芝多糖的结构如同其他的生物活性大分子，灵芝多糖的生物活性依赖于化学结构，因此，要研究灵芝多糖生物活性的机理，不可避免的要研究其化学结构。
对灵芝多糖的化学结构的研究，主要集中于其单糖的组成、多糖分子量范围、单糖连接方式等方面。
近年来，随着研究的不断深入，对灵芝多糖的化学结构已经有了一定的了解。
虽然灵芝多糖化学结构由于灵芝种类的不同而有所差异，但其化学结构的某些方面是固定不变的。
灵芝多糖的组成灵芝多糖是由肽多糖、葡萄糖、杂多糖等多糖均一体组成的混合物,是灵芝中的主要有效成分[9].从构成来看,灵芝多糖大多为杂多糖,即除葡萄糖基外,还含有少量D-阿拉伯糖、D-木糖、D-半乳糖、D-甘露糖、L-岩藻糖、L-鼠李糖、L-阿拉伯糖等单糖。
其中灵芝酸类成分具有直接杀伤肿瘤细胞的作用[3―4]。
灵芝多糖含量、灵芝酸总量是2020年版《中国药典》中灵芝质量控制的指标，然而紫外分光光度法的专属性不强，检测时易受皂苷、油酸等物质干扰，无法保证测得的总三萜酸含量准确度[5]。
近年来，高效液相色谱（high-performance liquid chromatography，HPLC）法已成为测定酸类成分的主要手段之一，能有效解决专属性问题[6―7]。
但灵芝酸类成分的对照品不易获得，价格昂贵，限制了HPLC法在灵芝酸类成分检测中的应用。
一测多评（quantitative analysis of multi-components by single marker，QAMS）法是利用中药有效成分间的内在函数关系和比例关系，仅测定1种成分（对照品易得），来实现多种成分（对照品没有或难以供应）的同步监控[8]，该方法已广泛应用于中药的质量控制工作中[9―10]。
2010年版《中国药典》首次在中药材黄连项下收载了QAMS法，2015年版《中国药典》增加至9个品种[11]，2020年版《中国药典》增加至16个品种[4]。
本研究在前期建立的灵芝HPLC指纹图谱[12]基础上，拟采用QAMS法，以灵芝酸A为内参物，得到灵芝酸B、灵芝酸C2、灵芝酸D、灵芝酸F、灵芝酸H、灵芝烯酸A、灵芝烯酸B、灵芝烯酸C、灵芝烯酸D与灵芝酸A之间的相对校正因子，计算出这9种灵芝酸的含量，并与外标法（external standard method，ESM）比较，建立快捷、经济、全面的灵芝酸类成分含量测定的QAMS法，并对不同产地灵芝进行质量控制，为其质量标准修订提供参考。
1 材料1.1 主要仪器本研究所用的主要仪器有Series Ⅲ型HPLC仪（美国SSI/ALLCHROM公司）、Waters 1525型HPLC仪（美国Waters公司）、AL104型分析电子天平[梅特勒·托利多仪器（上海）有限公司]等。
灵芝的化学成分、功效及药理作用○冯道俊 (潍坊学院生物工程学院 山东 潍坊 261061) 灵芝[Ganoderma lucid um(Fr.)Karst]为担子菌纲灵芝属真菌,自古就有“仙草”、“瑞草”之称,是中医扶正固本、滋补强壮的珍贵中药,在我国有悠久的药用历史,药用价值极高,被视为珍贵的中药材,是中医药宝库中的珍品。
东汉《神农本草经》将灵芝列为上品,认为“久食,轻身不老,延年神仙”。
现代医学证明:灵芝含有多种生理活性物质,能够调节和增强人体免疫力。
最新研究表明,灵芝还具有抗疲劳、美容养颜、延缓衰老和防治艾滋病等功效。
2000年版《中华人民共和国药典》收载灵芝(赤芝、紫芝)子实体为法定中药材。
目前国际医药学界也非常重视灵芝的研究与开发,2000年美国出版的《美国草药药典和治疗概要》收载了灵芝,该书迄今共收载10种中药或草药,灵芝为其中之一。
1 化学成分及其功效到目前为止,科学研究工作者已从灵芝中分离出近200种化合物,实验室及临床研究都已分别揭示了这些化合物就是灵芝这一中国古老珍贵中药防病治病的药理活性成分。
日本、美国等发达国家也先后对灵芝进行了研发及临床验证。
世界医学界已公认了灵芝的生物理化医药作用。
1.1 微量元素 灵芝子实体含有多种微量元素,有锰、镁、钙、铜、锗、锶、锌、铁、铍、硼、铬、镍、钒,钛等。
灵芝对锗的富集能力较强,有机锗的含量是人参的4～6倍、枸杞的100倍,有机锗能使血液循环畅通,增加红血球携氧能力,延缓衰老,并能与体内污染物、重金属相结合形成锗化合物排出体外,还有调整人体不正常电位的功能,抑制病症的恶化。
1.2 灵芝多糖 灵芝多糖是灵芝中的有效成分之一,是灵芝中提高人体免疫功能、扶正固本的主要成分。
灵芝的多种药理活性大多和灵芝多糖有关,目前已分离出200多种。
现在已知灵芝多糖有广泛的药理活性,能提高肌体免疫力和肌体耐缺氧能力,消除自由基,抑制肿瘤,抗放射,提高肝脏、骨髓、血液合成DNA、RNA和蛋白质能力,延年益寿等。
灵芝药典三萜标准
根据2020版《中国药典》，灵芝孢子粉中三萜的含量标准不得少于0.50%，这是以齐墩果酸（C30H48O3）为计算基准的。
然而，这只是一个基础标准，实际市场上很多灵芝类制品的三萜含量都超过了这个数值。
值得注意的是，三萜含量只是评价灵芝质量的一个指标，多糖含量也是一个非常重要的指标。
根据同样的药典规定，灵芝孢子粉的多糖含量标准不得少于0.90%，这是以无水葡萄糖（C6H12O6）为计算基准的。
另外，灵芝三萜的含量可能会因品种、产地和栽培方式的不同而有所差异。
例如，野生灵芝的三萜含量一般高于栽培灵芝，而台湾产的灵芝三萜含量普遍较高。
因此，在选择灵芝产品时，除了关注三萜含量，还应综合考虑产品的品种、产地和整体质量评价等因素。
总的来说，灵芝三萜含量是评价灵芝质量的重要指标之一，但并非唯一指标。
在选择灵芝产品时，应全面考虑各种因素，以确保选择到安全、有效的产品。
不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较
采用Dikma C18（250 mm×4.6 mm， 5 μm），以10 mmol/mL KH2PO4水溶液（pH 4.4）-甲醇为流动相梯度洗脱（流速∶1 mL/min）在260 nm波长、柱温25 ℃条件下用HPLC考察尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷在不同品种灵芝中的含量差异。
结果表明，不同品种的灵芝中四种核苷类成分的含量存在显著差异，而且这种方法简便快速，稳定性和重复性良好，适用于灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷含量的同时测定。
灵芝；尿嘧啶；尿苷；腺嘌呤；鸟苷
灵芝（Ganoderma lucidum）作为一种药食两用菌，具有补气安神，止咳平喘的功效，可用于多种疾病的治疗和保健。
灵芝化学成分主要有多糖、三萜、核苷、甾醇等。
其中核苷类是具有广泛生理活性的成分，已有文献报道从灵芝中分离出多种核苷类成分[1，2]。
不同品种灵芝中的核苷类成分含量是否存在差异，这些差异与灵芝的质量是否存在一定的联系，这些研究尚未见报道。
本研究参考文献中的核苷类物质的分析检测方法[35]，采用HPLC法建立了同时检测灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷四种核苷类成分的方法，并对不同品种之间的含量进行比较，为灵芝中核苷类成分与灵芝质量之间的联系建立基础。
1仪器与材料
Waters AcquityHPLCTM（Waters公司，包括：四元溶剂泵，自动进样器，柱温箱，紫外检测器，Empower化学工作站等）；KQ600B型超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）
灵芝子实体来源：收集灵芝菌种156，119，140，D6，D111，D133，D164于2003年在上海市崇明县栽培获得的子实体。
样品剪碎后用万能粉碎机粉成细粉过100目用于提取。
尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤及鸟苷标准品（供含量测定用）购自SIGMA公司。
2方法与结果
2.1色谱条件
2.2对照品溶液制备
精密称取尿嘧啶2.4 mg、尿苷2.2 mg、腺嘌呤2.7 mg及鸟苷2.06 mg分别置10 mL量瓶中，加水并稀释至刻度，摇匀，即得尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷对照品储备液。
分别精密移取等量尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷对照标准品储备液，制成混合溶液。
2.3供试品溶液制备
取样品细粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精确加入蒸馏水15 mL，超声处理（功率250 W，频率40 KHz）1 h，放冷，摇匀，滤过，滤液用0.45 μm 微孔滤膜滤过，即得。
2.4线性关系考察
2.5精密度试验
取混合对照品，连续进样5次，计算峰面积，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的RSD（n=5）分别为0.80%、 2.52%、3.37%、 1.75%。
表明仪器精密度良好。
2.6重复性试验
取同一品种灵芝样品5份，按2.3中方法制备供试品溶液、进样测定；计算出含量，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的含量RSD（n=5）分别为2.46%、3.52%、4.80%、3.45%。
表明方法重复性良好。
2.7稳定性试验
取同一供试品溶液，分别于0，2，4，8 h进样测定，计算峰面积，结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷的峰面积RSD分别为1.26%、2.54%、3.13%、3.90%。
表明供试品溶液在8 h内稳定性良好。
2.8加样回收率试验
取同一批已知含量的灵芝样品5份，各约0.5 g，精密称定，准确加入一定量的尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤、鸟苷对照品溶液，按“2.3”项下制备供试品溶液并进样测定，计算加样回收率。
结果尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤和鸟苷的平均加样回收率（n=5）和RSD分别为100.8%，2.3%；100.2%，2.1%；103.8，1.1%；101.5%，1.5%。
张圣龙，等：不同品种灵芝中四种核苷类成分的含量比较
2.9样品的含量测定
分别精密称取样品粉末各2份，按“2.3”项下制备供试品溶液，按“2.1”项下色谱条件测定四种核苷类成分的峰面积，外标法计算含量，色谱图见图1，含量测定结果见表2和图2。
3讨论
灵芝中核苷类成分比较复杂，等度洗脱相很难将4种成分在短时间同时分开，通过对不同流动相的比较采用梯度洗脱程序使核苷类成分得到满意分离。
同时对流动相pH值的影响进行比较，选择10 mmol/L的KH2PO4水溶液pH值在4.85左右，并用磷酸单独调整到不同pH值，通过对比，pH值为4.40时，四种核苷类成分的分离效果最佳。
不同灵芝品种的核苷的含量差异非常大，由于这些品种的栽培条件、地点和管理方式都相同，而核苷类成分差异大的原因与品种有很大的关系。
栽培条件的改变是否会改变核苷类成分的种类和含量的差异，而这些改变与灵芝的质量是否相关也值得我们进一步研究。
本研究建立的HPLC方法，简便快速，且稳定性和重复性良好，适合灵芝中尿嘧啶、尿苷、腺嘌呤以及鸟苷含量的同时测定，是一种理想的分析测定方法。
余竞光，申福臻等.薄盖灵芝深层发酵菌丝体化学成分的研究（Ⅱ）[J].中草药，1981，12（7）：78.
[2] 邓海林，吴佩颖，王建新.灵芝的研究进展[J].时珍国医国药，2005，16（2）：141143.
[3] 任爱农，居明乔.反相高效液相色谱法测定薄芝菌丝体中3种核苷类成分的含量[J]. 时珍国医国药，2008，19（10）：24352437.
[4] 肖维强，赖志勇，戴宏芬，等. 龙眼肉中9种核苷类成分的高效液相色谱分析[J].华中农业大学学报，2007，26（5）：722727.
[5] 罗珊珊，陈畅，史艳秋，等. 九州虫草中核苷类成分的HPLC法测定[J].中草药，2005，36（10）：14961498.。
