基因复习题

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分子生物学和基因工程复习题

分子生物学和基因工程复习题一、名词解释1.分子生物学2。

基因工程3、dna的变性与复性4、细胞学说5、遗传密码的简并性6.DNA半保留复制，半不连续复制7，SD序列8、开放阅读框（orf）9、多顺反子10、蓝白斑筛选11、中心法则12、限制修饰系统13、断裂基因14、单链结合蛋白15、核酶16、密码子家族17、ta克隆18、pcr19、snp20、操纵子学说21、dna重组技术22、减色效应-增色效应23、可变剪接24、反转录25、同尾酶26、加帽反应27、蓝白斑筛选28、表观基因组学29、dna的溶解温度30、dna的大c值31、重叠基因32、引物酶33、逆转录34、限制性内切酶35、载体的选择标记36、dna甲基化37.端粒38、端粒酶39、先导链40、启动子41、反式作用因子42、同义密码子43、多克隆位点（MCS）44、基因组计划45、C值悖论46、顺式作用元件47、胸腺嘧啶二聚体48、宿主限制性修饰49、拓扑异构酶50、DNA溶解51、拓扑异构体52、间隔基因53、，假基因54同源蛋白55，翻译56，多重PCR 57，抗终止58，SD序列59，空tRNA 60，cDNA ace61，分子杂交62，cDNA文库63，载体64，RT-PCR 65，反义RNA 66，扩展tRNA67、起始trna68、探针69、反式剪接70、增强子71、动物基因工程72、基因组73、限制性内切酶74、单顺反子75，密码子76，转录77，RNA干扰78、中心法则79、回环模型80、tatabox81、前导链82、目的基因83、rflp84.种族二、判断1.DNA聚合酶I在大肠杆菌DNA生物合成中主要起聚合作用。

()2、dna半保留复制时，后随链的总体延伸方向与先导链的延伸方向相反。

()3、原核生物dna的合成是单点起始，真核生物为多点起始。

（）4.当单亲DNA（3'→ 以5′为模板，子代链的合成方向为5′→ 3'，另一个亲本DNA链用作模板5’→3’为模板时，子代链合成方向3’→5’。

基因组学复习题

第1章1)什么是C-值悖理?什么是N-值悖理?C-值悖理：生物基因组的大小同生物进化所处地位的高低无关的现象。

N-值悖理：基因数目与进化程度或生物复杂性的不对应性，称之为N值悖理2)什么是序列复杂性?基因组中不同序列的DNA总长，用bp 表示。

3)RNA分子有哪些种类?mRNA tRNA rRNA scRNA snRNA snoRNA 小分子干扰RNA4)不编码蛋白质的RNA包括哪些类型?tRNA rRNA scRNA snRNA snoRNA 小分子干扰RNA5)什么是假基因?假基因是如何形成的?来源于功能基因但已失去活性的DNA序列，有沉默的假基因，也有可转录的假基因。

产生假基因的原因有很多，如编码序列出现终止密码子突变，或者插入和缺失某些核苷酸使mRNA移码，造成翻译中途停止或者异常延伸，合成无活性的蛋白质。

6)假基因能否表达? 为什么?能，假基因相对于原来的基因已经失去功能但是可能产生新的功能。

最初人们认为, 假基因是不能转录的基因, 随着基因组数据的积累, 现在已知有不少假基因仍然保持转录的活性, 特别是起源于重复基因的假基因和获得启动子加工的假基因，但假基因的转录产物已失去原有的功能, 如产生残缺蛋白质。

7)如何划分基因家族? 什么是超基因家族?基因家族：将来自共同的祖先，因基因加倍或变异产生了许多在DNA序列组成上基本一致而略有不同的成员划分为一个基因家族。

超基因家族：起源于共同祖先，由相似DNA序列组成的许多基因亚家族或相似的基因成员构成的群体，它们具有相似的功能。

8)低等生物与高等生物基因组组成有何差别?为什么会产生这些差别?低等生物：1)结构紧凑，一般不存在内含子（古细菌除外）；2)大小在5 Mb以下；3)缺少重复序列；4)很少非编码序列。

高等生物：1)结构松弛，含有大量重复序列；2）基因大多为断裂基因，由内含子和外显子构成；3)由线性DNA与蛋白质组成染色体结构； 4)含有细胞器基因组。

复习题 2基因重组与基因工程

复习题 2 基因重组与基因工程一、A型题1.实验室内常用的连接外源性DNA和载体DNA的酶是：（ A ）A．DNA连接酶B．DNA聚合酶ⅠC．DNA聚合酶ⅡD．DNA聚合酶ⅢE．反转录酶2.用来鉴定DNA的技术是：（ B ）A．Northern印迹B．Southern印迹C．Western印迹D．亲和层析E．离子交换层析3.下列那项不是重组DNA技术中常用的工具酶：（ D ）A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶C．DNA聚合酶Ⅰ D．RNA聚合酶E．反转录酶4.关于限制性核酸内切酶的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A．限制性核酸内切酶分为三类，用于基因工程的为Ⅱ酶B．限制性核酸内切酶切割后可产生粘性末端或平端C．识别的核苷酸序列个数可以是6个或8个D. 识别的序列一般具有回文结构E．识别的DN A为单链5.关于基因工程的叙述，下列哪项是错误的？（ B ）A．基因工程也称基因克隆B．只有质粒DNA可作为载体C．重组体DNA转化或转染宿主细胞D．需获得目的基因E．需对重组DN A进行纯化、筛选6.有关质粒的叙述，下列哪项是错误的？（ E ）A．小型环状双链DNA分子B．可小到2～3Kb大到数百个KbC．能在宿主细胞中独立自主地进行复制D．常含有耐药基因E．只有一种限制性核酸内切酶切口7．下列哪项不是重组DN A的连接方式？（C ）A．粘性末端与粘性末端的连接B．平端与平端的连接C. 粘性末端与平端的连接D．人工接头连接E．同聚物加尾连接8．DNA克隆不包括下列哪项步骤？（ E ）A．选择一个适合的载体B．限制性核酸内切酶在特异位点裂解质粒和目的基因C．用连接酶连接载体DNA和目的DNA，形成重组体D．用载体的相应抗生素抗性筛选含重组体的细菌E．重组体用融合法导入细胞9．基因重组是指DNA分子的：（ A ）A．共价连接B．氢键连接C．离子键连接D．交换E．退火10．在分子生物学中，重组DNA又称为：（ D ）A.酶工程B.蛋白质工程C.细胞工程D.基因工程E.DNA工程11．基因工程中，不常用到的酶是（ E ）A．限制性核酸内切酶 B．DNA聚合酶C．DNA连接酶D．逆转录酶E．DNA解酶12．能识别DNA的特异序列，并在识别位点或其周围切割双链DNA的一类酶称为：（ B ）A. DNA内切酶 B．限制性内切核酸酶C．非限制性内切核酸酶 D．限制性外切核酸酶E．非限制性外切核酸酶13．cDNA是指：（ A ）A．在体外经反转录合成的与RNA互补的DNAB．在体外经反转录合成的与DNA互补的DNAC．在体外经反转录合成的与RNA互补的RNAD．在体内经反转录合成的与RNA互补的RNAE．在体内经反转录合成的与RNA互补的DNA14．质粒的分子结构是：（ A ）A．环状双链DNA B．环状单链DNA C．环状单链RNAD．线状双链DNA E．线状单链DNA15．聚合酶链式反应常常缩写为：（ E ）A．PRC B．PER C．PDR D．BCR E．PCR16．用于PCR反应的酶是：（ E ）A．DNA连接酶B．碱性磷酸酶C．逆转录酶D．限制性内切核酸E．Taq DNA聚合酶17．基因工程中使目的基因与载体拼接的酶是：（ C ）A．DNA聚合酶B．RNA聚合酶C．DNA连接酶D．RNA连接酶E．限制性核酸内切酶18．α互补筛选属于：（C ）A．抗药性标志筛选B．酶联免疫筛选 C．标志补救筛选D．原位杂交筛选E．免疫化学筛选19．确切地讲，cDNA文库包含：（ E ）A．一个物种的全部基因信息B．一个物种的全部RNA信息C．一个生物体组织或细胞的全部基因信息D．一个生物体组织或细胞的全部RNA信息E．一个生物体组织或细胞所表达mRNA信息20．下烈描述最能确切表达质粒DNA作为克隆载体特性的是：（D ）A．小型环状双链DNA分子B．携带有某些耐药基因C．在细胞分裂时恒定地传递给子代细胞D．具有自我复制能力E．获得目的基因21.基因工程中常用限制性内切酶Ⅱ的识别序列，正确的说法是：（ E ）A.聚胞苷酸B.聚腺苷酸C.6或8个任意核苷酸D.4或6个任意核苷酸E 具有回文结构22．基因工程的基本过程不包含：（ E ）A.DNA重组体的形成及转化B.限制酶的切割C.载体及目的基因的分离D.重组体的筛选与鉴定E.重组体的序列分析23.有关理想质粒载体的特征，正确的是：（ B ）A.其复制受宿主控制B.含有多种限制性内切酶的单一切点C．含有同一限制酶的多个切点D．为线性单链DNAE．不含耐药基因24.下列那个物质一般不用作基因工程的载体：（ C ）A．噬菌体B．质粒C．大肠杆菌基因组D．反转录病毒DNAE．人工酵母染色体25.基因工程的操作程序可简单的概括为：（E ）A．将重组体导入宿主细胞并筛选B．限制酶的应用C．将载体和目的基因接合成重组体D．目的基因和载体的分离提纯与鉴定E．分、切、接、转、筛26.基因表达的多级调控不包括：（ A ）A．DNA复制B．转录起始C．转录后加工D. 翻译起始E. 翻译后加工27.下列基因工程中的目的基因的来源，最不常用的是：（ C ）A. 人工合成DNAB．从mRNA合成cDNAC. 从真核生物染色体DNA中直接分离D．从基因文库中获取E．从细菌基因组DNA中直接分离28.Ⅱ型限制性内切酶是：（ B ）A．有内切酶和甲基化酶活性B.仅有内切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供C．有外切酶和甲基化酶活性D．限制性识别非甲基化的核苷酸序列E．仅有外切酶活性，甲基化酶活性由另外一种酶提供29.基因工程操作应用的许多载体质粒都有抗生素的抗性基因，这是为了便于：（ D ） A．外源基因插入质粒B.宿主菌的生物繁殖C．质粒的转化D．带有目的基因的宿主菌的筛选E．目的基因的表达30.有关目的基因与载体连接的叙述错误的是：（ E ）A.可以同一限制酶切割产生粘性末端连接B.平末端切口可采用“尾接法”C．平末端切口可直接连接D．均需DNA连接酶参与E．不同限制型内切酶切割不能连接1．基因工程的单元操作顺序是（ A ）Ａ．酶切，连接，转化，筛选，验证Ｂ．酶切，转化，连接，筛选，验证Ｃ．连接，转化，筛选，验证，酶切Ｄ．验证，酶切，连接，筛选，转化Ｅ．酶切，连接，筛选，转化，验证2．下列五个DNA 片段中含有回文结构的是（D、E ）Ａ．GAAACTGCTTTGAC Ｂ．GAAACTGGAAACTGＣ．GAAACTGGTCAAAG Ｄ．GAAACTGCAGTTTCＥ．GAAACTGCAGAAAG3．T 4 -DNA 连接酶是通过形成磷酸二酯键将两段DNA 片段连接在一起，其底物的关键基团是（ D ）Ａ．2' -OH 和5' -P Ｂ．2' -OH 和3' -PＣ．3' -OH 和2' -P Ｄ．3' -OH 和5' -PＥ．5' -OH 和3' -P4．噬菌体l-DNA 体外包装的上下限是天然l-DNA 长度的（D ）Ａ．25 - 50 % Ｂ．50 - 100 %Ｃ．75 - 100 % Ｄ．75 - 105 %Ｅ．100 - 125 %8．分子杂交的化学原理是形成（E ）Ａ．共价键Ｂ．离子键Ｃ．疏水键Ｄ．配位键Ｅ．氢键9．促红细胞生长素（EPO ）基因能在大肠杆菌中表达，但却不能用大肠杆菌的基因工程菌生产人的促红细胞生长素，这是因为（ E ）Ａ．人的促红细胞生长素对大肠杆菌有毒性作用Ｂ．人的促红细胞生长素基因在大肠杆菌中极不稳定Ｃ．大肠杆菌内毒素与人的促红细胞生长素特异性结合并使其灭活Ｄ．人的促红细胞生长素对大肠杆菌蛋白水解酶极为敏感Ｅ．大肠杆菌不能使人的促红细胞生长素糖基化10．鸟枪法克隆目的基因的战略适用于（ A ）Ａ．原核细菌Ｂ．酵母菌Ｃ．丝状真菌Ｄ．植物Ｅ．人类11．cDNA第一链合成所需的引物是（D ）Ａ．Poly A Ｂ．Poly CＣ．Poly G Ｄ．Poly T Ｅ．发夹结构12．cDNA法获得目的基因的优点是（ B ）Ａ．成功率高Ｂ．不含内含子Ｃ．操作简便Ｄ．表达产物可以分泌Ｅ．能纠正密码子的偏爱性13．人工合成DNA 的单元操作包括（ E ）I 去保护II 偶联III 封端IV 氧化Ａ．I + II Ｂ．II + IVＣ．I + II + III Ｄ．II + III + IV Ｅ．I + II + III + IV二、B型题A．抗药性筛选B．分子杂交筛选C．RNA反转录D．免疫学方法 E．体外翻译1．用于鉴定质粒是否转化的一般方法是：（ A ）2．用于鉴定转化子细胞是否含有目的基因的常用方法是：（ B ）3．利用目的基因表达产物的特异性抗体来筛选含有目的基因的转化子细胞价方法是：（D ）A．限制性核酸内切酶B．DNA连接酶 C．反转录酶D. Taq DNA聚合酶E．碱性磷酸酶4.识别DNA回文结构并对其双链进行切割的是：（ A ）5.用于PCR反应的酶是：（ D ）6.将目的基因与载体进行拼接的酶是：（ B ）A．转染B．转化C．感染D．转导E．转位7．以质粒为载体，细菌为宿主的导入方式是：（ B ）8．以噬菌体为载体，细菌为宿主的导入方式是：（D ）9．以病毒为载体，哺乳动物细胞为宿主的导入方式是：（ C ）A.94℃B.85℃C.50℃D.72℃E.100℃10.PCR变性温度一般为：（ A ）11.PCR退火温度一般为：（C ）12.PCR延伸温度一般为：（ D ）A分 B 切 C接 D 转 E 筛13．获取目的基因属于基因工程中的步骤是（ A ）14.DNA连接酶用于基因工程中的步骤是（ C ）15.DNA重组子转化宿主细胞的步骤是（ D ）16.限制性内切酶切割目的基因和载体的步骤是（ B ）17.对含有DNA重组体的宿主细胞进行筛选的步骤是（ E ）三、C型题A、含有该生物的全部基因B、含有该生物的结构基因C、两者都是D、两者都不是1、基因组文库（ A ）2、cDNA文库（ B ）A、需要逆转录酶B、需要限制性内切酶C、两者都是D、两者都不是3、建立cDNA文库（ C ）4、建立基因组文库（ B ）A、连接酶B、逆转录酶C、两者都是D、两者都不是5、建立cDNA文库需要（C ）6、建立基因组文库需要（ A ）四、X型题1.可用于基因工程载体的DNA分子有：( BDE )A．染色体DNA B．病毒DNA C．细菌DNAD．噬菌体DNA E．质粒DNA2.重组DNA技术的基本过程包括：( ACDE )A．目的基因的获取B．PCR反应C．克隆载体的构建D．目的基因与载体的连接E．重组体分子导入受体菌3.基因克隆又称为：( AC )A．重组DNA B．重组RNA C．DNA克隆D．RNA克隆E．蛋白质复制4.组成PCR反应体系的物质包括：( BD )A．RNA引物B．Taq DNA聚合酶C．RNA聚合酶D．DNA模板E．ddNTP5.对于重组体的筛选，属于直接选择法的是：( BCD )A．免疫化学法B．原位杂交法C．Southern印迹D．补救标志筛选E．抗药性标志筛选6.对于重组体的筛选，属于非直接选择法的是：( AE )A．免疫化学法B．原位杂交法C．Southern印迹D．补救标志筛选E．酶联免疫筛选7.限制性核酸内切酶切割DNA时可产生：( ABCE )A．5’粘性末端B．3’粘性末端C．平末端D．单链缺口 E．粘性末端8.基因工程中目的基因的来源有：( ABCDE )A．化学合成B．PCR合成C．cDNA文库D．基因组文库E．组织细胞中染色体DNA直接提取9.基因工程中外源性基因又称为：( ABD )A．目的基因 B．目的DNA C．目的RNAD．target DNA E．外源RNA10．重组DNA技术中常用的工具酶有：( ABCDE )A．限制性核酸内切酶B．DNA聚合酶ⅠC．DNA连接酶D．反转录酶E．末端转移酶11．作为基因工程的载体必须具备的条件是：( ABCD )A．能独立自主复制B．易转化C．易检测（含有抗药性基因等）D．具有限制性内切核酸酶的位点E．易提取获得五、填空题1．基因工程的一个理想的载体必须具备的条件有__至少有一个复制起点____、___有克隆位点、具备转化的功能、遗传标记基因___、___具有较高的装载能力___。

基因工程复习题及答案

基因工程复习题及答案一、选择题1. 基因工程是指：A. 基因的自然突变B. 基因的人工重组C. 基因的自然选择D. 基因的自然进化答案：B2. 基因工程中常用的载体是：A. 噬菌体B. 质粒C. 病毒D. 所有以上选项答案：D3. 以下哪个不是基因工程中常用的受体细胞？A. 细菌B. 酵母C. 植物D. 动物答案：C4. 基因枪法属于哪种基因转移技术？A. 化学介导法B. 电穿孔法C. 微注射法D. 粒子轰击法答案：D5. 基因编辑技术CRISPR-Cas9中，Cas9蛋白的主要作用是：A. 识别目标DNA序列B. 切割目标DNA序列C. 连接DNA片段D. 转录mRNA答案：B二、填空题6. 基因工程的基本操作步骤包括：目的基因的________、________、检测与表达。

答案：提取、重组7. 基因工程在医学领域的应用包括________、________和基因治疗。

答案：基因诊断、基因疫苗8. 在基因工程中，________技术可以用于快速繁殖转基因植物。

答案：组织培养9. 基因工程中，________是将目的基因导入植物细胞的常用方法。

答案：农杆菌介导法10. 基因工程在农业上的应用包括提高作物的________、________和改良品质。

答案：抗病性、抗虫性三、简答题11. 简述基因工程在环境保护方面的应用。

答案：基因工程在环境保护方面的应用主要包括：- 利用基因工程改造微生物，以降解环境中的有毒物质，如石油污染物。

- 通过基因工程改良植物，使其能够耐受重金属污染，从而净化土壤。

- 利用基因工程改造的微生物处理工业废水，减少水体污染。

12. 阐述基因工程在生物制药领域的主要应用。

答案：基因工程在生物制药领域的主要应用包括：- 生产重组蛋白质药物，如胰岛素、干扰素等。

- 利用转基因动物生产药物，如转基因羊产生的抗凝血酶。

- 利用基因工程改造的微生物生产抗生素等药物。

- 开发基因治疗药物，用于治疗遗传性疾病。

高考生物专题复习《基因的表达》真题汇编含答案

高考生物专题复习《基因的表达》真题汇编2023年1、（2023·湖北）科学家破解了遗传密码，得知mRNA上3个相邻的碱基决定1个氨基酸。

每3个这样的碱基叫作1个密码子，科学家将密码子编制成了密码子表，表中共有多少个密码子（）A．21B．61C．62D．64【答案】D【分析】有关密码子，可从以下几方面把握：1、概念：密码子是mRNA上相邻的3个碱基。

2、种类：64种，其中有3种是终止密码子，不编码氨基酸。

3、特点：（1）一种密码子只能编码一种氨基酸，但一种氨基酸可能由一种或多种密码子编码；（2）密码子具有通用性，即自然界所有的生物共用一套遗传密码。

【详解】ABCD、遗传学上把信使RNA上决定一个氨基酸的三个相邻碱基叫做一个“遗传密码子”，共有64种，D正确，ABC错误。

故选D。

2、（2023·湖北）T2噬菌体侵染大肠杆菌后，会在宿主细胞内合成自身的外壳蛋白。

该过程中，遗传信息的流向是（）A．DNA→蛋白质B．DNA→mRNA→蛋白质C．DNA→mRNA→tRNA→蛋白质D．RNA→mRNA→tRNA→蛋白质【答案】B【分析】噬菌体属于DNA病毒，在繁殖时只会提供模板DNA，其余的原料、酶以及能量均由大肠杆菌提供。

【详解】噬菌体属于DNA病毒，在繁殖时提供模板DNA，在大肠杆菌体内，通过转录、翻译的过程合成自身的外壳蛋白，故该过程中，遗传信息的流向是DNA→mRNA→蛋白质，B正确，ACD错误。

故选B。

3、（2023·湖北）某种小鼠的黄色体毛遗传与A vy基因的表达直接相关。

研究发现，小鼠A vy基因的碱基序列不变，但部分碱基发生了甲基化修饰，抑制了基因的表达，进而导致小鼠毛色发生改变。

这种DNA甲基化修饰可以遗传给后代，使后代出现同样的表型。

该现象属于（）A．表观遗传B．伴性遗传C．显性遗传D．常染色体遗传【答案】A【分析】表观遗传是生物体基因的碱基序列保持不变，但基因表达和表型发生可遗传变化的现象，常见的修饰有甲基化和组蛋白乙酷化等。

基因工程期末复习题(含答案)

一、填空题1、基因文库的构建通常采用cDNA 法和鸟枪法两种方法。

2 、限制性内切酶识别序列的结构普通为具有 180 度旋转对称的回文结构。

3、DNA 连接酶主要有两种：T4 噬菌体和大肠杆菌 DAN 连接酶。

4、根据质粒在宿主细胞中所含拷贝数的多少，可以把质粒分为两种类型：密切型质粒和松弛型质粒。

5、原核受体细胞通常包括大肠杆菌、枯草芽孢杆菌和蓝细菌。

6、原核生物或者低等真核生物，将外源重组 DNA 导入受体细胞的方法有借助生物载体的转化、转染、转导。

7、对细菌细胞进行转化的关键是细胞处于感受态。

8、基因工程是_____1970’____年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

9、部份酶切可采取的措施有：(1)减少酶量； (2)缩短反应时间； (3)增大反应体积等。

10、第一个分离的限制性内切核酸酶是EcoK；而第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是EcoRl。

11、DNA 聚合酶 I 的 Klenow 大片段是用枯草杆菌蛋白酶切割 DNA 聚合酶I 得到的份子量为 76kDa 的大片段，具有两种酶活性：(1)5'-3'合成酶的活性； (2)3'-5'外切核酸酶的活性。

12、为了防止 DNA 的自身环化，可用_碱性磷酸酶__去双链 DNA_ 5’端的磷酸基团_。

13、测序酶是修饰了的 T7 DNA 聚合酶，它惟独5'-3'合成酶的活性，而没有 3'-5' 外切酶的活性。

14、切口移位(nick translation)法标记 DNA 的基本原理在于利用 DNA 聚合酶 I 的5'一 3'合成酶和 5'一 3'合成酶的作用。

15、欲将某一具有突出单链末端的双链 DNA 份子转变成平末端的双链形式，通常可采用S1 核酸酶切割或者DNA 聚合酶补平。

16、反转录酶除了催化 DNA 的合成外，还具有核酸水解酶 H 的作用，可以将DNA-RNA 杂种双链中的 RNA 水解掉。

基因工程复习题

基因工程复习题一、名词解释 201.转导：由噬菌体和细胞病毒介导的遗传信息转移过程。

2.转染：以噬菌体为载体，不经过蛋白包装成病毒颗粒，而是用DNA连接酶使噬菌体DNA 环化，再通过质粒转化方式导入受体菌的过程。

3.质粒：是独立于染色体以外的能自主复制的双链闭合环状DNA分子。

4.基因库：特定生物体全基因组的集合（天然存在）。

5.转化率：每μgDNA转化成功的细菌克隆数。

6.同尾酶：来源和识别序列不同，但能切出相同的粘性末端的限制性内切酶。

7.同裂酶：来源不同，识别位点的序列相同的限制性内切酶。

8.Ti质粒：在根瘤土壤杆菌细胞中存在的一种染色体外自主复制的环形双链DNA分子，它控制根瘤的形成，可作为基因工程的载体。

9.SD序列：mRNA的核糖体结合位点，含有一个启始密码子和一段同核糖体16S RNA3’末端碱基互补的序列，3-9个核苷酸,富含嘌呤,位于起始密码子上游3-11个核苷酸处10.cos位点：DNA两端各有12bp的粘性末端，粘性末端形成的双链区域称为cos位点。

11.基因工程：通过基因操作，将目的基因或DNA片段与合适的载体连接转入目标生物细胞，通过复制、转录、翻译外源目的基因以及蛋白质的活性表达，使转基因生物获得新的遗传性状的操作。

12.报告基因：编码产物能够被快速测定、不依赖于外界压力的一类基因。

13.平台效应：PCR反应经过一定数量的循环后，随着产物的对数积累趋于饱和，DNA片段不再呈指数积累，而是进入线性增长期或静止期，此过程称为平台效应。

14.受体细胞：是能摄取外源重组DNA并使其稳定维持和表达，或有待于实施遗传改良的细胞。

15.cDNA library：将生物特定的组织器官或特定发育时期的全部mRNA反转录成cDNA，并全部克隆成重组子，在该重组子群集中包含了其全部表达基因的转录本。

16.穿梭质粒载体：人工构建的、具有两种不同复制起点和选择标记、可以在两种不同的寄主细胞中存活和复制的质粒载体。

基因工程复习(含答案)

基因工程复习题一、名词解释: （10～20%）基因工程基因工程工具酶限制性内切酶限制性内切酶得Star活性PCR引物PCR扩增平台期DNA芯片基因组文库cDNA文库转化限制与修饰系统原位杂交: 将细胞或组织得核酸固定保持在原来得位置上, 然后用探针与之杂交得一种核酸分子杂交技术, 该方法可较好地反映目得基因在细胞或组织中得分布与表达变化。

粘性末端: 双链DNA被限制性内切酶切割后, 形成得两条链错开几个碱基, 而不就是平齐得末端。

Northern印迹杂交: 将RNA进行变性电泳后, 再转移到固相支持物上与探针杂交得一种核酸分子杂交技术, 可用于检测目得基因得转录水平。

转位: 一个或一组基因片段从基因组得一个位置转移到另一个位置得现象。

基因工程: 在体外, 用酶学方法将各种来源得DNA与载体DNA连接成为重组DNA, 继而通过转化与筛选得到含有目得基因得宿主细胞, 最后进行扩增得到大量相同重组DNA分子得过程称为基因工程, 又称基因克隆、DNA克隆与重组DNA等。

目得基因：基因工程中, 那些被感兴趣得、被选作研究对象得基因就叫作目得基因。

连接器: 人工合成得一段含有某些酶切位点寡核苷酸片段, 连接到目得基因得两端, 便于基因重组中得切割与连接。

转化: 受体细胞被导入外源DNA并使其生物性状发生改变得过程。

停滞效应: PCR中后期, 随着目得DNA扩展产物逐渐积累, 酶得催化反应趋于饱与, DNA扩增产物得增加减慢, 进入相对稳定状态, 即为停滞效应, 又称平台期。

逆转录PCR: 以mRNA为原始模板进行得PCR反应。

PCR: 即聚合酶链式反应。

在模板, 引物, 4种dNTP与耐热DNA聚合酶存在得条件下, 特异性地扩增位于两段已知序列之间得DNA区段地酶促合成反应。

α-互补（α-complementation）：指在M13噬菌体DNA或PUC质粒序列中, 插入了lac 启动子-操纵子基因序列以及编码β-半乳糖苷酶N-端145个氨基酸得核苷酸序列（又称α-肽）, 该序列不能产生有活性得β-半乳糖苷酶。

基因工程复习题及参考答案

【基因工程复习题及参考答案】绪论、基因工程基础一、填空题1. 基因工程是20 世纪70 年代发展起来的遗传学的一个分支学科。

基因工程技术的诞生使人们从简单地利用现存的生物资源进行诸如发酵、酿酒、制醋和酱油等传统的生物技术时代，走向按人们的需要定向地改造和创造具有新的遗传性品种的时代。

2．Cohen 等在1973 年构建了第一个有功能的重组DNA 分子。

3．基因工程的两个基本特点是：（1）分子水平上的操作，（2）细胞水平上的表达。

4．基因克隆中三个基本要点是：克隆基因的类型、受体的选择和载体的选择。

5．克隆基因的主要目的有四个：①扩增DNA ；②获得基因产物；③研究基因的表达调控；④改造生物的遗传特性。

6．基因工程的基本程序包括DNA 制备、体外DNA 重组、遗传转化、转化细胞的筛选等方面。

7．基因工程又称重组DNA 技术/基因操作技术/基因克隆/分子克隆/遗传修饰/新遗传学。

8．克隆的进行依赖于各种参与DNA 新陈代谢的酶的使用，它们主要是从原核细胞中分离的。

限制性内切核酸酶能够将DNA 切割成特定大小的片段。

各种各样的DNA 聚合酶也是克隆所必需的，包括将RNA 转录出单链DNA 的反转录酶。

DNA 连接酶用于连接限制性片段。

克隆也需要来源于微生物的DNA 序列，包括用来运载被被克隆DNA 的克隆载体。

质粒载体来源于天然细菌质粒，通常携带有抗生素抗性基因。

其他载体来源于噬菌体，如λ噬菌体，它们经过修饰后可以运输外源DNA。

要想克隆一个感兴趣的真核生物的基因就必须先制作一个能与该基因杂交的探针。

人们已经发展了很多有效而精细的技术来分析克隆的DNA。

例如，极微量的DNA 片段可以通过PCR 得到扩增。

在感兴趣基因的启动子上连接，如CAT 或LacZ 之类的报告基因能够定量检测基因的活性。

二、选项题（单选或多选）1．因研究重组DNA 技术而获得诺贝尔奖的科学家是（C ）。

A. Kornberg AB. Gilbert WC. Berg PD. McClintock2．第一个用于构建重组体的限制性内切核酸酶是（A ）。

基因工程期末考试复习题

一、名词基因工程（遗传工程）、基因操作、基因分离、DNA重组、Tm值、分子杂交、探针、Southern印迹杂交、Northern印迹杂交、Western印迹杂交、选择标记基因、报告基因、α-互补、转化、受体细胞、转染、转导、复制子、转基因沉默、启动子、增强子、终止子、绝缘子、反义子、SD序列、外显子、内含子、融合蛋白、包涵体、同裂酶、同尾酶、基因组文库、cDNA文库、载体、多克隆位点（MCS）、基因克隆、亚克隆、cosmid、噬菌粒载体、T-DNA、反式作用因子、顺式作用元件、定位整合克隆载体、基因打靶、穿梭载体、基因芯片、基因治疗、SSH、RDA、DDRT-PCR、ESTs、PCR、RT-PCR、反向PCR、巢式PCR、识别位点、限制性核酸内切酶、限制性（物理）图谱、严紧性质粒、松弛型质粒、结合型质粒、非结合型质粒、质粒不亲和性、迁移作用、显性质粒、隐蔽质粒、RNA干扰（RNAi）、MicroRNA、转化子、重组子、目的基因、目标生物、人工染色体载体、连接酶、T/A克隆、定向克隆、限制修饰系统、杂交探针、复制子、感受态细胞、酵母附加体质粒、酵母复制质粒、酵母整合质粒、DNA聚合酶、蓝白斑筛选二、简答与问答题1 简述乳腺生物反应器的原理。

2 简述基因工程研究发展历史。

3 简述基因工程研究的主要内容。

4 举例说明浓缩DNA或RNA的方法。

5 说明限制性核酸内切酶产生Star活性的原因及其克服措施。

6 DNA修饰酶有哪些？各有何功能？7 按介质分，DNA片段凝胶电泳可分为哪几类？各自的主要分离范围是什么？8 按来源可将基因克隆载体分为哪几类？并说明各自的主要特点。

9 作为克隆载体必须具备的主要条件是什么？10 作为基因工程宿主必须具备的主要条件是什么？11 列举外源基因表达系统中的载体和宿主。

12 特殊用途克隆载体有哪些？13 简要说明目的基因制备的主要方法。

14 特殊用途PCR有哪些？15 简述转基因生物的主要鉴定方法的原理和过程。

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3酶联免疫吸附测定（ELISA原理：
一抗（primary antibody）:与目标分子的特异结合。
二抗（secondary antibody）：与一抗的特异性结合。
酶连（enzyme-linke）：二抗上携带一种酶能催化一种反应将无色的底物转变为有色的物质（或发光），再通过比色测定有色物质的含量（或光强度），从而推测目标分子的含量。
（2着丝粒型质粒载体
该型质粒载体是在自主复制型的基础上，增加了酵母染色体有丝分裂稳定序列元件。在细胞分裂时，质粒载体能平均分配到子细胞中，稳定性较高，但拷贝数很低，通常只有1～2个拷贝。
（3酵母人工染色体
该载体在酵母细胞中以线性双链DNA的形式存在，每个细胞内只有单拷贝。
在细胞分裂和遗传过程中，能将染色体载体均匀分配到子细胞中，并保持相对独立和稳定。
3）二抗结合：加入二抗，与一抗结合后再将未结合的二抗冲洗掉。二抗只识别一抗。二抗上联着一种酶（碱性磷酸酶、过氧化物酶、脲酶等）。
4）显色反应：加入无色的底物，被二抗上所带的酶催化反应转变成有色物质（或发光）。
5）比色：在特殊的分光光度仪（酶标仪）上比色，打印出结果。
ELISA的局限性
有效，但准确性稍差（主要取决于一抗的特异性）。
2）真核生物基因表达系统
1转录是在核内进行的，先生成hnRNA，再加工去掉内含子，外显子相连接，并修饰5′和3′末端后才形成成熟的、有功能的mRNA。
2mRNA只能在细胞质中的核糖体上转译成多肽或蛋白质，再经过加工、糖化，形成高级结构
2原核生物作为基因表达系统的受体细胞所具有的特点：
1原核生物多为单细胞异养，生长快，代谢易于控制，可通过发酵迅速获得大量基因表达产物。
优点：肽疫苗可以诱发很强的细胞反应，持续时间较长，有记忆功能且不需要佐剂。
缺点：某些抗原要制造肽段疫苗有很大困难，要求肽段的构象必须与完整病毒上的抗原决定簇构象一致，选定的单一抗原决定簇必须要有足够强的免疫原性。目前合成肽疫苗的生产成本昂贵，只限于对人和比较珍贵动物危害严重而又无其他安全、有效疫苗的疾病。(
增强其免疫原性的方法：
①调整基因组合使之表达成颗粒性结构
②是在体外加以聚团化，包入脂质体或胶囊微球
③加入有免疫增强作用的化合物作为佐剂（adjuvant）。
2、核酸疫苗（nucleic acid vaccine）
核酸疫苗或称基因疫苗（gene vaccine），指使用能够表达抗原的基因本身，即核酸制成的疫苗。
酶联免疫吸附测定（ELISA）步骤：
①抗体制备（普通抗体、酶标记抗体[一抗、二抗]）
②抗体或抗原的包被(固定在固相载体上）
③免疫反应
④特异性表达产物的检测
具体步骤：
1）固定样品：将待测样品加入96孔微量滴定板（microtiter plate）的孔中，干燥后就被固定在孔底。
2）一抗结合：加入一抗，反应后冲洗掉未结合的抗体。
2基因组结构简单，便于基因操作和分析。
3多数原核生物细胞内含有质粒或噬菌体，便于构建相应的表达载体。
4生理代谢途径及基因表达调控机制比较清楚。
5不具备真核生物的蛋白质加工系统，表达产物无特定的空间构象。
6内源蛋白酶会降解表达的外源蛋白，造成表达产物的不稳定。]
3真核细胞表达系统表达外源基因的特点：
真核生物可识别并切除外源基因的内含子，从而表达目的多肽，所以不必向原核细胞表达体系那样从mRNA制备cDNA。2真核基因在真核细胞中表达是，其SD序列与细胞核糖体RNA16S亚基3‘末端的互补程度较高，对于翻译水平的调节有利3在真核细胞内由外源基因表达的蛋白可被糖基化，成为糖蛋白，有利于保持或提高免疫原性4外源基因导入真核细胞表达效率较低，其在染色体DNA上的整合是随机的和自发的，还无法控制整合的位置和适当的拷贝数5真核细胞的培养要求较高，大量生产比较困难，成本较高。
寡聚型外源蛋白：为提高外源蛋白表达量，在构建外源蛋白表达载体时，将多个外源目的蛋白基因串连在一起，克隆在质粒载体上，以这种方式表达的外源蛋白称为寡聚型外源蛋白.
整合型外源蛋白:为防止外源基因随质粒丢失，将要表达的外源基因整合到染色体的非必需编码区上，使之成为染色体结构的一部分而稳定地遗传，以此种方式表达的外源蛋白即为整合型外源蛋白。
优点：①易于制备；②便于保存；③可多次免疫并且容易制成多联多价疫苗。
缺点：①外源核酸是否会整合到染色体中引起癌变；②能否引起免疫病理作用，如自身抗核酸抗体的产生，免疫耐受等。
3、基因缺失活疫苗（gene deleted live vaccine）
基因缺失活疫苗使用分子生物学技术去除与毒力有关的基因获得的缺失突变毒株制成的疫苗。
优点：①有突变性状明确、稳定；②不易返祖、毒力恢复；③是研究安全有效的新型疫苗的重要途径。
缺点：免疫效率、低用量大。
5、蛋白工程疫苗（protein engineering vaccine）
蛋白工程疫苗是指将抗原基因加以改造，使之发生点突变、插入、缺失、构型改变，甚至进行不同基因或部分结构域的人工组合，以期达到增强其产物的免疫原性，扩大反应谱，去除有害作用或副反应的一类疫苗。
（2）(2)需要在真核生物基因的上游加入SD序列.
(3)使用原核生物的强启动子.
(4)如果人工合成某一蛋白质的基因,需要考虑原核生物对密码子的偏爱性.
(5)为了防止原核生物分解目的蛋白可以考虑分泌表达和融合表达等方法.
(6)需要较复杂翻译后加工的蛋白质最好不用原核细胞表达.
信号肽：(signalpeptide)是引导新合成肽链转移到内质网上的一段多肽，一般位于新合成肽链的N端，含有6～15个带正电荷的非极性氨基酸，由于信号肽又是引导肽链进入内质网腔的一段序列，又称开始转移序列(start transfer sequence)。
2um质粒：：一个闭合环状超螺旋DNA分子，长约2um。在酿酒酵母中发现的一种模
拟微生物。可用于研究基因调控、染色体复制的理想系统，也可作为酵母菌转化的有效载体，并组建基因工程菌
YEP质粒：含有酿酒酵母2um质粒和DNA复制有关的部分或全部序列，是一种酵母附加体型质粒。
2基因工程疫苗种类
主要包括基因工程亚单位疫苗，核酸疫苗，基因缺失活疫苗，及蛋白工程疫苗等四种
酵母菌选择标记基因赭石突变抑制基因SUP4表达时菌落呈白色，不表达时呈红色。外源基因的插入可灭活SUP4基因，获得红色的重组转化子。
YAC载体可插入200～800kb的外源基因片段，因而特别适合高等真核生物基因组的克隆与表达研究。
第十一章
1原核细胞表达真核基因的障碍和措施：
障碍：
1细菌RNA聚合酶不能识Байду номын сангаас真和基因的启动子
2酵母基因表达载体
1）自主复制型质粒载体（yeast replicating plasmid，YRP）
该载体含有酵母基因组的DNA复制起始区、选择标记和基因克隆位点等元件，能够在酵母细胞中进行自我复制。
优点：在酵母细胞中的转化效率较高，每个细胞中的拷贝数可达200个。
缺点：经过多代培养后，子细胞中的拷贝数会迅速减少。
1、基因工程亚单位疫苗(gene engineering subunit vaccine)
基因工程亚单位疫苗，主要是指将基因工程表达的蛋白抗原纯化后制成的疫苗。
优点：①产量高；②纯度高；③安全性高；④用于病原体难于培养或有潜在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。
缺点：与传统亚单位疫苗相比，免疫效果较差。
2从真和基因转录的mRNA缺乏SD序列，不能结合到核糖核蛋白体上
3真核基因中一般含有内含子，而原核基因缺乏真核细胞的转录后加工系统，不能切除内含子，不能形成成熟的mRNA，不能表达真核蛋白。
4表达的真核蛋白在原核细胞中不稳定，容易被细菌蛋白酶破坏。
措施：
（1）可以通过人工合成的方法或者从cDNA库中获取.
2.不同一限制酶切位点连接：双酶切
优点：
①不必将原有的内切酶失活，可以直接进行重组连接；
②有原有限制性内切酶的重组，载体自连就不会发生，不必用碱性磷酸酶进行处理，从而得到高效连接。
缺点：
同尾酶的粘性末端互相结合后形成的新位点一般不能再被原来的酶识别
（二）平头末端连接法：常用①同聚物加尾连接②人工接头连接等
第八章
外源DNA片段与载体DNA的重组主要有哪几种方法？各自的优缺点？
（一）黏性末端连接法：.
1同一限制酶切位点连接：单酶切
优点：
黏性末端连接可抑制载体和目的DNA分子的自连，因而可大大提高连接的效率。更重要是不同限制性酶切位点的黏性末端连接可以控制目的DNA和载体DNA的连接方向。
缺点：
载体易自身环化；不易定向克隆；产生串联重组体；难以插入特定的基因；大片段DAN的重组率低，
必须与其他方法一起综合考虑
第十章
外源基因表达系统：泛指目的基因与表达载体重组后，导入合适的受体细胞，并能在其中有效表达，产生目的基因产物（目的蛋白）。
包涵体蛋白：在一定条件下，外源基因的表达产物在大肠杆菌中积累并致密地集中在一起形成无膜的裸露结构，这种结构称为包涵体。涵体存在部位：细胞质、细胞周质
融合蛋白：将外源蛋白基因与受体菌自身蛋白基因重组在一起，但不改变两个基因的阅读框，以这种方式表达的蛋白称为融合蛋白。①稳定性好；②表达效率高；③较易于分离纯化
分泌型外源蛋白:外源基因的表达产物，通过运输或分泌的方式穿过细胞的外膜进入培养基中，即为分泌型外源蛋白.
1基因表达在原核生物与真核生物中的差别和特点：
1）原核生物表达系统
1基因表达是以操纵子的形式进行的。
2当操纵子的调节基因与RNA聚合酶作用时，结构基因则开始转录成相应的mRNA;
3与此同时，mRNA立即与核糖体结合转译出相应的多肽或蛋白质，转录完毕时转译也完成，随之mRNA也被水解掉。
缺点：1效率很低2平头末端连接常常破坏原有的识别性序列3双向插入，由于平头末端没有粘性末端的碱基互补限制，只要是平头末端均能连接，造成插入方向良种可性。4造成多拷贝外源DNA片段插入载体可能性。