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化妆品的卫生化学检测方法
重金属检测是为了确保化妆品产品中的重金属元素含量符合卫生标准。
检测方法包括原子吸收光谱法（AAS）、电感耦合等离子体质谱法（ICP-MS）和电感耦合等离子体发射光谱法（ICP-OES）等。
这些方法以其高灵
敏度、高选择性和高准确性在化妆品行业得到广泛应用。
残留物检测主要是检测化妆品中残留的药物成分、有害物质、添加剂
和污染物等。
常见的检测方法包括气相色谱法（GC）、液相色谱法（HPLC）和紫外-可见分光光度法等。
这些方法通过提取样品中的有机物或无机物，然后以色谱或光谱技术进行分离和鉴定。
挥发性有机物检测主要是检测化妆品产品中的甲醛、甲苯等有害挥发
性有机物。
检测方法包括气相色谱-质谱联用法（GC-MS）、气相色谱法（GC）和红外光吸收法等。
这些方法通过灵敏的仪器分析技术，可以快速、准确地检测出化妆品中的有害挥发性有机物。
除了以上几个方面的卫生化学检测外，化妆品还需要进行其他物理性
和理化性的测试，例如颗粒度分析、粘度测定、pH值测定、保质期测试等。
这些测试方法可以帮助生产企业确保化妆品产品的质量和安全性。
总之，化妆品的卫生化学检测是确保化妆品产品质量和安全的重要手段。
各种化学检测方法的应用可以全面、准确地评估化妆品产品的卫生性能，为消费者提供安全、可靠的化妆品产品。
化妆品毒理学试验方法样品前处理通则General Rule for Pretreatment of Cosmetic in Toxicological Experiments1范围本规范规定了化妆品毒理学试验样品前处理的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料和产品的毒理学试验检测。
2试验目的在毒理学试验开始之前，首先应对样品进行前处理操作，通过样品前处理可以增加受试物与试验体系（包括实验动物、细胞、细菌等）的接触，增加样品吸收率，使样品性状更利于试验操作，保证毒理学试验的科学性和严谨性。
3定义3.1前处理指在毒理学试验开始前，对受试样品进行溶解、研磨、混匀、赋形、剂量分组、合理保存等一系列的准备性操作。
4前处理的基本原则化妆品原料和产品的前处理方式需要综合考虑样品的理化性质和毒理学试验方案。
对于化妆品原料而言，应根据受试物的理化特性和染毒方式确定前处理方法。
对于化妆品产品而言，则主要考虑化妆品产品的物理性状和实际应用中的使用方法。
化妆品原料和产品的样品前处理均需遵守现用现配原则。
5前处理方法根据毒理学试验的要求，需要对样品进行前处理的准备工作。
受试物的处理不能改变其原有的毒理学性质。
受试物进行不同试验时，应结合毒理学试验项目的染毒方式和受试物的理化性质进行相应的前处理工作。
5.1溶剂的选择化妆品前处理应不改变样品的毒理学性质。
当样品需要溶解时，应注意溶剂的选择，以保证样品充分溶解或混悬。
样品的前处理稀释倍数应保证最终供试品浓度不低于实际使用浓度。
溶剂的选择应充分了解其毒理特性。
溶剂应无特殊刺激性或气味，本身应不产生毒性作用，与受试物各成分之间不发生化学反应，且保持其稳定性，如使用其他溶剂应说明理由。
体外遗传毒性试验中，所选溶剂必须是非致突变物，且不能影响细胞或细菌存活以及S9的活性。
细菌回复突变试验常用溶剂首选无菌蒸馏水，其次DMSO、四氢呋喃、丙酮等。
细胞试验常用溶剂首选培养液（不含血清）或无菌蒸馏水，其次DMSO、丙酮、甘油等；使用有机溶剂时，终浓度应符合具体试验项目的要求，一般而言，DMSO使用终浓度不应大于0.5%，丙酮和甘油使用终浓度不应大于1%。
测试化妆品的方法化妆品的测试方法可以分为两大类：实验室测试和人体试验。
实验室测试是通过在实验室中进行一系列的化学和物理性质测试，来评估化妆品的安全性、稳定性和效果。
以下是几种常见的实验室测试方法：1. 稳定性测试：化妆品在长期存放和使用过程中需要保持其稳定性，不发生分层、沉淀、变质等问题。
实验人员通过模拟不同温度、湿度等条件进行测试，观察化妆品的变化情况。
2. pH值测试：化妆品的pH值对皮肤的影响很大，pH值过高或过低都可能导致皮肤不适，因此需要进行pH值测试。
实验人员使用pH计来测试化妆品的酸碱性，确保其符合皮肤的pH值范围。
3. 致敏性测试：化妆品中的某些成分可能引起过敏反应，所以需要进行致敏性测试。
实验人员将化妆品涂抹在动物的皮肤上，观察是否出现红肿、溃烂等过敏反应。
4. 防腐性测试：化妆品中存在微生物滋生的风险，因此需要进行防腐性测试。
实验人员将不同的细菌、霉菌接种在化妆品中，观察是否能杀灭这些微生物。
5. 安全性评估：对于每一种新的化妆品成分，都需要进行安全性评估。
实验人员通过对化妆品成分进行毒理学测试，以确定其是否对皮肤有害。
人体试验是将化妆品应用在人体上，观察其对皮肤的影响。
这种测试方法比较直接，能够更真实地反映出化妆品的效果和副作用。
以下是几种常见的人体试验方法：1. 斑贴试验：实验人员将化妆品涂抹在人体皮肤的一个小区域上，观察是否会出现红肿、刺痛、过敏等不良反应。
2. 眼刺激试验：将化妆品滴入动物或志愿者的眼睛中，观察是否会引起眼睛不适和损伤。
3. 皮肤刺激试验：实验人员将化妆品涂抹在大面积的人体皮肤上，观察是否会引起红肿、瘙痒、疼痛等不良反应。
4. 群体调查：通过对大量消费者的问卷调查或面对面访谈，了解他们使用某种化妆品后的感受和反馈。
需要注意的是，尽管人体试验可以提供更真实的数据，但在伦理和法律方面都存在一定的限制。
因此，在进行任何人体试验之前，必须确保试验是安全、伦理和法律合规的。
化妆品安全评估报告毒理学研究通过一系列毒理学试验，测定化妆品原料和风险物质的毒理学情况，将其作为危害识别的一部分，也是化妆品安全评估的基础。
毒理学试验首选《规范》收录的方法，选用其他国内外权威机构发布的毒理学试验方法时，应提供所采用方法的来源、与《规范》中方法相关性等信息。
1 急性毒性包括急性经口和/或经皮试验等。
急性毒性试验可提供短时间染毒对健康危害的信息。
试验结果可作为化妆品原料和风险物质毒性分级和标签标识以及确定重复毒性试验和其它毒理学试验剂量的依据。
2刺激性/腐蚀性包括皮肤和/或眼睛的刺激性/腐蚀性试验。
确定和评价原料和风险物质对皮肤局部或眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。
3皮肤致敏性皮肤变态反应试验确定重复接触化妆品原料和风险物质是否可引起变态反应及其程度。
4皮肤光毒性皮肤光毒性试验评价化妆品原料和风险物质引起皮肤光毒性的可能性。
5 皮肤光变态反应皮肤光变态反应试验可评估重复接触化妆品原料和风险物质，并在紫外照射下引起皮肤光变态反应的可能性。
6致突变性/遗传毒性评价化妆品原料和风险物质引起遗传毒性的可能性，至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试验资料。
7重复剂量毒性包括重复剂量经口和/或经皮毒性试验。
通过重复剂量经口毒性试验不仅可获得一定时期内反复接触受试物后引起的健康效应、受试物作用靶器官和受试物体内蓄积能力资料，并可估计接触的无有害作用水平，后者可用于选择和确定慢性试验的接触水平和初步计算人群接触的安全性水平。
通过重复剂量经皮毒性试验不仅可获得在一定时期内反复接触受试物后可能引起的健康影响资料，而且为评价受试物经皮渗透性、作用靶器官和慢性皮肤毒性试验剂量选择提供依据。
8致畸性：致畸试验用于检测妊娠动物接触化妆品原料和风险物质后引起胎鼠畸形的可能性。
9生殖和发育毒性生殖和发育毒性检测妊娠动物接触化妆品原料和风险物质后引起子代发育异常和亲代生殖功能损害的可能性。
10 慢性毒性/致癌性慢性毒性试验是使动物长期地以一定方式接触受试物而引起毒性反应的试验。
化妆品备案毒理学检验的审查要点及评价（二）在化妆品备案申报时，产品都要在国家认可的检验机构按照《化妆品卫生规范》的要求进行检验。
虽然这些试验的具体操作都由检验机构来完成，但如果申请企业的研发申报人员能够对主要试验方法、审查要点和评价标准有一个大致的了解，对研究产品配方、调整产品工艺及把控产品质量都会有所帮助。
下面北京天健华成国际投资顾问有限公司化妆品注册部就主要的毒理试验帮大家进行简单的梳理，供您参考。
化妆品备案毒理学检验之皮肤变态反应试验实验方法◆ 动物数试验组至少20只，对照组至少10只。
◆ 剂量水平诱导接触受试物浓度为能引起皮肤轻度刺激反应的最高浓度激发接触受试物浓度为不能引起皮肤刺激反应的最高浓度。
试验浓度水平可以通过少量动物（2-3只）的预试验获得。
◆ 对于化妆品产品而言，一般使用原霜或原液◆试验方法可靠性的检查使用已知的能引起轻度/中度致敏的阳性物每隔半年检查一次。
局部封闭涂皮法至少有30% 动物出现皮肤过敏反应。
阳性物一般采用2,4-二硝基氯代苯。
试验步骤(1)试验前约24 h ，将豚鼠背部左侧去毛，去毛范围为4cm2-6cm2。
(2)诱导接触：将受试物约0.2mL（g）涂在实验动物左侧去毛区皮肤上，以二层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布封闭固定6 h。
第7d和第14d以同样方法重复一次。
(3)激发接触：末次诱导后14-28d，将约0.2mL的受试物涂于豚鼠背部右侧2cm×2cm 去毛区（接触前24h脱毛），然后用二层纱布和一层玻璃纸覆盖，再以无刺激胶布固定6h。
(4)激发接触后24h和48h观察皮肤反应，按表1评分(5)试验中需设阴性对照组，使用(2)和(3)的方法，在诱导接触时仅涂以溶剂作为对照，在激发接触时涂以受试物。
对照组动物必须和受试物组动物为同一批。
在实验室开展变态反应试验初期，或使用新的动物种属或品系时，需同时设阳性对照组结果判定(1)当受试物组动物出现皮肤反应积分≥1时，按表2判为该动物出现皮肤变态反应阳性，按表3判定受试物的致敏强度。
化妆品中毒性成分的检测与分析随着人们对美容和化妆品的需求日益增长，市面上涌现出了越来越多的化妆品品牌，但是随之而来的问题是化妆品中存在一些毒性成分，这些成分可能会对人体造成不可逆转的损害。
因此，化妆品中毒性成分的检测与分析变得非常必要。
一、为什么化妆品需要检测毒性成分？化妆品作为一种与皮肤最为接近的物质，会直接影响到皮肤的健康。
而毒性成分是指那些会对人体造成一定损害的有害成分。
在化妆品中浓度高、使用频繁的毒性成分可能会对人体造成严重伤害。
此外，化妆品也经常被用于涂抹在唇部，眼部，口腔等敏感部位，因此如果化妆品中含有毒性成分，对人体的危害会更为严重。
二、化妆品中的毒性成分有哪些？化妆品中的毒性成分众多，主要分为以下几类：1. 重金属重金属是一种常见的毒性成分，例如铅、镉等。
它们在人体内积累后会破坏血红蛋白，导致贫血等健康问题。
2. 防腐剂无论身体内外都需要有防腐剂，因为生命体内会有细菌，防腐剂可以帮助避免细菌滋生。
但是如果化妆品中使用过量的防腐剂，可能会导致过敏等问题。
3. 光敏剂光敏剂是一种会使皮肤产生过度反应的化学物质，其会让皮肤变得更容易晒伤、光敏、过敏，严重时甚至会造成皮肤癌变。
4. 色素色素是一种常用的化妆品配料，但是其中的某些成分可能会有致癌性，例如亚油酸胺等。
因此，化妆品中的毒性成分不容忽视，为了保护消费者的身体健康，需要对化妆品中的毒性成分进行检测与分析。
三、化妆品中毒性成分的检测与分析方法1. 气相色谱-质谱联用技术气相色谱-质谱联用技术是一种可靠的化学检测技术，其中的气相色谱可以识别物质的性质，而质谱可以确定物质的化学结构。
因此这种技术非常适用于检测化妆品中的毒性成分。
2. 高效液相色谱分析法高效液相色谱分析法是一种常用于检测化妆品中有毒成分的方法。
它通过将化妆品样品通过高效液相色谱柱处理，并通过检测各组分的峰值面积以及加站光谱图，得到样品中各组分的浓度信息。
3. 质谱成像技术质谱成像技术是一种非常新颖的技术，它可以非常精确地检测化妆品中的毒性成分，能够直接在二维平面图上显现化合物分布及分子的相对含量，对深层鉴定化合物的任务发挥重要作用。
化妆品卫生规范2007版第二部分毒理学试验方法Methods of Toxicological Test一、总则General Principles1 范围本规范规定了化妆品原料及其产品安全性评价的毒理学检测要求。
2 化妆品原料的检测化妆品的新原料，一般需进行下列毒理学试验：（1）急性经口和急性经皮毒性试验；（2 ）皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验；（3 ）皮肤变态反应试验；（4 ）皮肤光毒性和光敏感试验* （原料具有紫外线吸收特性需做该项试验）；（5 ）致突变试验（至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试验）；（6 ）亚慢性经口和经皮毒性试验；（7 ）致畸试验；（8 ）慢性毒性/致癌性结合试验；（9 ）毒物代谢及动力学试验*；（10）根据原料的特性和用途，还可考虑其它必要的试验。
如果该新原料与已用于化妆品的原料化学结构及特性相似，则可考虑减少某些试验。
*试验方法参照GB7919-87 化妆品安全性评价程序和方法；OECD 化学物质试验指南(OECD Guidelines for Testing of Chemicals) 。
3 化妆品产品的检测3.1 检测项目在一般情况下，新开发的化妆品产品在投放市场前,应根据产品的用途和类别进行相应的试验，以评价其安全性。
3.2 检测项目的选择原则3.2.1 由于化妆品种类繁多，在选择试验项目时应根据实际情况确定。
3.2.2 每天使用的化妆品需进行多次皮肤刺激性试验，进行多次皮肤刺激性试验者不再进行急性皮肤刺激性试验，间隔数日使用的和用后冲洗的化妆品进行急性皮肤刺激性试验。
3.2.3 与眼接触可能性小的产品不需进行急性眼刺激性试验。
二、急性经口毒性试验Acute Oral Toxicity Test1 范围本规范规定了动物急性经口毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals （No. 401, Feb. 1987 ）USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines （Series 870.1100, Aug. 1998 ）3 试验目的急性经口毒性试验是评估化妆品原料毒性特性的第一步，通过短时间经口染毒可提供对健康危害的信息。
化妆品中重金属的危害及检测技术化妆品是现代人日常生活中不可或缺的一部分。
不过，在一些廉价化妆品中，人们可能会接触到重金属成分，例如铅、汞和铬等，这些物质常常会对人的健康造成严重危害。
如果大量接触这些重金属，会引起不同程度的中毒症状，包括皮肤病、神经系统病变、肝肾功能不良等，有时候还会出现生殖系统异常和癌症等重大威胁。
化妆品中的重金属主要来自两个方面：一是化妆品原材料中的污染，二是生产过程中的残留。
首先，化妆品原材料中的铅、汞、铬等重金属，是在土壤、水源或大气污染物的存在下形成的。
在化妆品原材料采集过程中，这些重金属与其它成分混合在一起，无法从成分上进行区分和过滤，因此有可能被化妆品厂商使用。
此外，一些海外化妆品可能会在生产过程中，添加了含铅化合物的色素，以便减少生产成本。
其次，在化妆品生产过程中，重金属主要来自化妆品生产原材料和设备中的残留物。
例如，生产过程中常用的铜制设备，会释放少量的铜离子，如果不及时清理，铜离子会被其他化学物质吸附，污染化妆品。
对于消费者来说，选择合格的化妆品能够有效地降低接触到化学成分的风险。
除了选择知名品牌的化妆品外，我们还应使用市场上专门针对重金属检测的化妆品。
市场上的大型化妆品品牌一般会通过专业机构对化妆品进行检测，以确保它们不含有危险成分。
对于一些便宜、未知品牌的产品，我们可以通过一些简单的方法进行检测。
第一种方法是通过化学实验室对它们的成分进行分析。
这种方法比较简单，只需要将化妆品样品交给专业的化学实验室，他们便会用专门的设备进行分析。
不过，这种检测方法比较复杂，可能要花费较长时间进行，而且费用比较高。
第二种检测方法是比较简单和普遍的方法，只需要使用一些简单的工具即可完成。
我们可以在早晨涂抹一些化妆品在手臂上，然后再用一张镀银质量较大的纸将手臂包住，这个过程大约需要10-15分钟。
如果纸张表面有黑点，那么化妆品中就可能含有铅或其他重金属。
综上所述，化妆品中含有重金属的问题应引起我们的重视。
化妆品检测和评价方法理化检验方法总则General Principles1 范围本部分规定了化妆品禁、限用组分的理化检验方法的相关要求。
本部分适用于化妆品产品中禁、限用组分的检验。
2 定义2.1 检出限：被测物质能被检出的最低量。
本部分对各类检验方法的检出限定义如表1。
2.2 定量下限：能够对被测物质准确定量的最低浓度或质量，称为该方法的定量下限。
本部分对各类检验方法定量下限的定义如表1。
表1 检出限及定量下限的定义检出限（对应的质量、浓度）定量下限（对应的质量、浓度）AAS/AES 3 SD(1)10 SDGC 3倍空白噪音10倍空白噪音HPLC 3倍空白噪音10倍空白噪音分光光度法0.005 A(2)0.015 A容量法X(3)+3 SD X(3)+10 SD注：(1) SD为20份空白的标准偏差，AAS/AES的检出限为3倍空白值的标准偏差相对应的质量或浓度；(2) A为吸收强度，分光光度法检出限为吸收强度为0.005时所对应的质量或浓度；(3) X为在终点附近出现可察觉变化的最小试剂体积的平均值。
2.3 检出浓度：按理化检验方法操作时，方法检出限对应的被测物浓度。
2.4 最低定量浓度：按理化检验方法操作时，定量下限对应的被测物浓度。
3 所用试剂凡未指明规格者，均为分析纯（AR）。
当需要其它规格时将另作说明。
但指示剂和生物染料不分规格。
试剂溶液未指明用何种溶剂配制时，均指用纯水配制。
—1 —4 所用水凡未指明规格者均指纯水。
它包括下述的蒸馏水或去离子水等，纯水应符合GB/T 6682规定的一级水。
有特殊要求的纯水，则另作具体说明。
4.1 蒸馏水：用蒸馏器蒸馏制备的水。
4.2 去离子水：通过阴、阳离子树脂交换床制备的水。
4.3 蒸馏去离子水：将蒸馏水通过阴、阳离子树脂交换床制备的水。
5 浓度表示5.1 物质B的浓度：物质B的物质的量除以混合物的体积：c（B）= ｎB；常用单位：mol/L。
V5.2 物质B的质量浓度：物质B的质量除以混合物的体积：ρ（B）= ｍB；常用单位：g/L，mg/L，μg/L。
化妆品中毒化物检测方法化妆品在现代社会中被广泛应用，给人们带来美丽的同时也带来了一定的安全隐患。
化妆品中含有毒性物质或过量使用可能对健康造成危害。
因此，针对化妆品中毒化物的检测方法变得非常重要。
在本文中，将介绍几种常用的化妆品中毒化物检测方法。
一、高效液相色谱法（HPLC）高效液相色谱法是一种常用于化妆品中毒化物检测的准确可靠的方法。
该方法利用高效液相色谱仪将化妆品中的化学物质分离并定量分析。
首先，将样品溶解在适当的溶剂中，并通过进样器进入色谱系统。
然后，通过不同组分在色谱柱上的保留时间和吸光度信号，可以确定化妆品中的毒性物质含量。
高效液相色谱法具有准确、灵敏、快速、复现性好的优点，因此被广泛应用于化妆品中毒化物的检测。
二、气相色谱质谱联用法（GC-MS）气相色谱质谱联用法是一种强大的分析工具，可以用于检测化妆品中的毒性物质。
该方法首先通过气相色谱仪将样品中的化学物质分离，然后将分离的化学物质与质谱联用进行进一步检测和鉴定。
气相色谱可以分离非极性或低极性化合物，而质谱可以对物质的分子结构进行定性和定量分析。
因此，气相色谱质谱联用法能够快速准确地确定化妆品中的毒性物质成分。
三、光谱方法（UV-Vis、FTIR）光谱方法是一种常见的化学分析方法，通过物质与光的相互作用，检测和分析样品中的成分。
在化妆品中毒化物的检测中，UV-Vis光谱和FTIR（傅里叶红外）光谱是常用的方法。
UV-Vis光谱法利用化妆品中毒化物与特定波长的光发生吸收作用，通过测量吸收光强度可以确定物质的浓度。
FTIR光谱则通过检测化妆品中毒化物吸收红外光的特定波长来鉴定化合物的结构。
这两种方法都具有操作简单、快速、可靠的优点，广泛应用于化妆品中毒化物的分析。
四、质量谱法（MS）质谱法是一种高灵敏度、高选择性的分析方法，常用于化学物质的鉴定和分析。
质谱仪通过对样品中的化学物质进行高能量撞击，将分子分解成离子，并通过离子的质量分析确定化合物的质量和结构。
第二节化妆品毒理学检测方法一、总则General Principles1 范围本规范规定了化妆品原料及其产品安全性评价的毒理学检测要求。
2 化妆品原料的检测化妆品的新原料，一般需进行下列毒理学试验：1）急性经口和急性经皮毒性试验；2）皮肤和急性眼刺激性/腐蚀性试验；3）皮肤变态反应试验；4）皮肤光毒性和光敏感试验*（原料具有紫外线吸收特性需做该项试验）；5）致突变试验（至少应包括一项基因突变试验和一项染色体畸变试验）；6）亚慢性经口和经皮毒性试验；7）致畸试验；8）慢性毒性/致癌性结合试验；9）毒物代谢及动力学试验*；10）根据原料的特性和用途，还可考虑其它必要的试验。
如果该新原料与已用于化妆品的原料化学结构及特性相似，则可考虑减少某些试验。
*试验方法参照GB7919-87 化妆品安全性评价程序和方法；OECD 化学物质试验指南(OECD Guidelines for Testing of Chemicals)。
3 化妆品产品的检测1)检测项目在一般情况下，新开发的化妆品产品在投放市场前,应根据产品的用途和类别进行相应的试验，以评价其安全性。
2) 检测项目的选择原则由于化妆品种类繁多，在选择试验项目时应根据实际情况确定。
3)每天使用的化妆品需进行多次皮肤刺激性试验，进行多次皮肤刺激性试验者不再进行急性皮肤刺激性试验，间隔数日使用的和用后冲洗的化妆品进行急性皮肤刺激性试验。
4)与眼接触可能性小的产品不需进行急性眼刺激性试验。
二、毒理学方法的原理与方法基础香波是一种主要的发用化妆品，其发展已有较长的历史。
三、急性经皮毒性试验Acute Dermal Toxicity Test1 范围本规范规定了动物急性皮肤毒性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料安全性毒理学检测。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No.402，Feb. 1987）USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines（Series 870.1200，Aug. 1998）3 试验目的急性皮肤毒性试验可确定受试物能否经皮肤吸收和短期作用所产生的毒性反应，可为化妆品原料毒性分级和标签标识以及确定亚慢性毒性试验和其它毒理学试验剂量提供依据。
4 定义1)急性皮肤毒性（Acute dermal toxicity）：经皮一次涂敷受试物后，动物在短期内出现的健康损害效应。
2) 经皮LD50（半数致死量, Medium lethal dose）：经皮一次涂敷受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学剂量。
以单位体重涂敷受试物的重量（mg/kg 或g/kg）来表示。
5 试验的基本原则受试物以不同剂量经皮给予各组实验动物，每组用一个剂量。
染毒后观察动物的毒性反应和死亡情况。
试验期间死亡的动物要进行尸检，试验结束时仍存活的动物要处死并进行尸检。
若已知受试物具有腐蚀性或强刺激性可不进行急性经皮毒性试验。
6 试验方法1)受试物液体受试物一般不需稀释。
若受试物为固体，应研磨成细粉状，并用适量水或无毒、无刺激性、不影响受试物穿透皮肤、不与受试物反应的介质混匀，以保证受试物与皮肤有良好的接触。
常用的介质有橄榄油、羊毛脂、凡士林等。
2) 实验动物和饲养环境可选用健康成年大鼠、家兔或豚鼠作为实验动物，也可使用其它种属动物进行试验。
使用雌性动物应是未孕和未曾产仔的。
建议实验动物体重范围为：大鼠200g~300g；家兔2kg～3kg；豚鼠350g～450g。
实验动物皮肤应健康无破损。
试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d～5d 时间。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
3) 剂量水平根据所选用的方法要求，原则上应设4~6 个剂量组，每组动物一般为10 只，雌雄各半。
各剂量组间距大小以兼顾产生毒性大小和死亡为宜，通常以较大组距和较少量动物进行预试。
如果受试物毒性很低，可采用一次限量法，即用10 只动物（雌雄各半）皮肤涂抹2000mg/kg体重剂量，当未引起动物死亡，可考虑不再进行多个剂量的急性经皮毒性试验。
4) 试验步骤①试验开始前24h，剪去或剃除动物躯干背部拟染毒区域的被毛，去毛时应非常小心，不要损伤皮肤以免影响皮肤的通透性。
涂皮面积约占动物体表面积的10%，应根据动物体重确定涂皮面积。
体重为200g～300g 的大鼠约为30cm2～40cm2，体重为2kg～3kg 的家兔约为160cm2～210cm2，体重为350g～450g 的豚鼠约为46cm2～54cm2。
②将受试物均匀涂敷于动物背部皮肤染毒区，然后用一层薄胶片覆盖，无刺激胶布固定，防止动物舔食。
若受试物毒性较高，可减少涂敷面积，但涂敷仍需尽可能薄而均匀。
一般封闭接触24h。
③染毒结束后，应使用水或其它适宜的溶液清除残留受试物。
④观察期限一般不超过14d，但要视动物中毒反应的严重程度、症状出现快慢和恢复期长短而定。
若有延迟死亡迹象，可考虑延长观察时间。
⑤对每只动物都应有单独全面的记录，染毒第1d 要定时观察实验动物的中毒表现和死亡情况，其后至少每天进行一次仔细的检查。
包括被毛和皮肤、眼睛和粘膜以及呼吸、循环、自主神经和中枢神经系统、肢体运动和行为活动等的改变。
特别注意观察动物是否出现震颤、抽搐、流涎、腹泻、嗜睡、和昏迷等症状。
死亡时间的记录应尽可能准确。
观察期内存活动物每周称重、观察期结束存活动物应称重，处死后进行尸检。
⑥对实验动物进行大体解剖学检查，并记录全部大体病理改变。
对死亡和存活24h 和24h 以上动物并存在大体病理改变的器官应进行病理组织学检查。
⑦可采用多种方法测定LD50，建议采用霍恩氏法、上-下法、概率单位-对数图解法和寇氏法等。
5）试验结果评价评价试验结果时，应将经皮LD50 与观察到的毒性效应和尸检所见相结合考虑，LD50 值是受试物毒性分级和标签标识以及判定受试物经皮肤吸收后引起动物死亡可能性大小的依据。
引用LD50 值时一定要注明所用实验动物的种属、性别、染毒途径、观察期限等。
评价应包括动物接触受试物与动物异常表现（包括行为和临床改变、大体损伤、体重变化、致死效应及其它毒性作用）的发生率和严重程度之间的关系。
毒性分级见表1。
7 试验报告试验报告应包括如下内容：1）受试物名称、理化性状、配制方法、所用浓度；2）实验动物的种属、品系和来源（注明合格证号和动物级别）；3）实验动物饲养环境，包括饲料来源、室温、相对湿度、实验动物房合格证号；4）所用剂量和动物分组，每组所用动物性别、数量及体重范围；5）染毒后动物中毒表现和死亡情况及出现时间，大体解剖及病理所见；6）计算LD50 的方法；7）列表报告结果和计算LD50 及其95%可信区间（建议的表格形式见表2）；8）结论。
8 试验结果的解释急性经皮毒性试验研究和经皮LD50 的确定提供了受试物经皮染毒的毒性。
其结果外推到人类的有效性很有限。
急性经皮毒性试验的结果应与经其它途径染毒的急性毒性试验结果相结合进行综合评价。
四、眼刺激性实验Acute Eye Irritation/Corrosion Test1 范围本规范规定了动物急性眼刺激性或腐蚀性试验的基本原则、要求和方法。
本规范适用于化妆品原料及其产品安全性毒理学检测。
2 规范性引用文件OECD Guidelines for Testing of Chemicals（No 405，April 2002）USEPA OPPTS Harmonized Test Guidelines（Series 870.2400，Aug.1998）3 试验目的确定和评价化妆品原料及其产品对哺乳动物的眼睛是否有刺激作用或腐蚀作用及其程度。
4 定义1）眼睛刺激性（Eye irritation）：眼球表面接触受试物后所产生的可逆性炎性变化。
2）眼睛腐蚀性（Eye corrosion）：眼球表面接触受试物后引起的不可逆性组织损伤。
5 试验的基本原则受试物以一次剂量滴入每只实验动物的一侧眼睛结膜囊内，以未作处理的另一侧眼睛作为自身对照。
在规定的时间间隔内，观察对动物眼睛的刺激和腐蚀作用程度并评分，以此评价受试物对眼睛的刺激作用。
观察期限应能足以评价刺激效应的可逆性或不可逆性。
动物如果在试验的任何阶段出现严重抑郁、痛苦的表现，则应该给予人道地处死，依据试验情况对受试物进行适当评价。
动物如出现角膜穿孔、角膜溃疡、角膜4 分超过48h、缺乏光反射超过72h、结膜溃疡、坏疽、腐烂等情况，通常为不可逆损伤的症状，也应该给予人道地处死。
6 试验方法1) 受试物液体受试物一般不需稀释，可直接使用原液，染毒量为0.1mL。
若受试物为固体或颗粒状，应将其研磨成细粉状，染毒量应为体积0.1mL 或重量不大于100mg（染毒量应进行记录）。
受试物为强酸或强碱（pH 值≤2 或≥11.5），或已证实对皮肤有腐蚀性或强刺激性时，可以不再进行眼刺激性试验。
气溶胶产品需喷至容器中，收集其液体再使用。
2) 实验动物和饲养环境首选健康成年白色家兔。
至少使用3 只家兔。
试验前动物要在实验动物房环境中至少适应3d 时间。
在试验开始前的24h 内要对试验动物的两只眼睛进行检查（包括使用荧光素钠检查）。
有眼睛刺激症状、角膜缺陷和结膜损伤的动物不能用于试验。
实验动物及实验动物房应符合国家相应规定。
选用常规饲料，饮水不限制。
3) 试验步骤①轻轻拉开家兔一侧眼睛的下眼睑，将受试物0.1mL（100mg）滴入（或涂入）结膜囊中，使上、下眼睑被动闭合1s，以防止受试物丢失。
另一侧眼睛不处理作自身对照。
滴入受试物后24h 内不冲洗眼睛。
若认为必要，在24h 时可进行冲洗。
②若上述试验结果显示受试物有刺激性，需另选用3 只家兔进行冲洗效果试验，即给家兔眼滴入受试物后30s，用足量、流速较快但又不会引起动物眼损伤的水流冲洗至少30s。
③临床检查和评分：在滴入受试物后1、24、48、72h 以及第4d 和第7d 对动物眼睛进行检查。
如果72h 未出现刺激反应，即可终止试验。
如果发现累及角膜或有其它眼刺激作用，7d 内不恢复者，为确定该损害的可逆性或不可逆性需延长观察时间，一般不超过21d，并提供第7d、14d、21d 的观察报告。
除了对角膜、虹膜、结膜进行观察外，其它损害效应均应当记录并报告。
在每次检查中均应按表1 眼损害的评分标准记录眼刺激反应的积分。
可使用放大镜、手持裂隙灯、生物显微镜或其它适用的仪器设备进行眼刺激反应检查。
在24h 观察和记录结束之后，对所有动物的眼睛应用荧光素钠作进一步检查。
④对用后冲洗的产品（如洗面奶、发用品、育发冲洗类等）只做30s 冲洗试验，即滴入受试物后，眼闭合1s，至第30s 时用足量、流速较快但又不会引起动物眼损伤的水流冲洗30s，然后按③进行检查和评分。
