实验七染色体核仁组成区的银染色法

作业
• 在油镜下绘制一中期分裂相图，显示 AgNOR的位置、数目和形态。
a ．被银染色的载玻片标本，根据染色深浅可用 2% Giemsa磷酸缓冲液（ pH6.8）复染1min，以便观察和摄影。 b.新鲜制片比片龄长的效果更好。 c.吸50%硝酸银与明胶显影液的吸管最好一样粗细。
实验结果
• 若染色适中，间期核及染色体为金黄色，油镜观察， 可在某些染色体上看到成对的黑色小点，此即为银染 NOR（Ag- NOR）。 • 若整张片子色淡，间期核及染色体都不易看清，为染 色时间不足，在未滴过香柏油的情况下，可重新续染。 • 若染色时间偏长，则染色体为棕色，此时，仍可看到 黑色的NOR，只是NOR与染色体间的反差较低。染色 严重过度时，整张片子都布满黑色沉淀，这样的标本 一般都丢弃不用。若标本珍贵，也可采用特殊方法褪 色后重新染色。
三、实验用品
1、材料 人或其他动物的染色体制片 2、试剂（所有试剂均应为AR级） （1）50%硝酸银溶液：5g硝酸银溶解在10mL蒸馏水 中，过滤（不过滤亦可），保存在用铝箔包裹的玻 璃容器内，可稳定的保存1年。 （ 2 ）明胶显影液：称取 2g 明胶（ gelatin ）粉末溶解 于 99mL 蒸馏水中，加 1mL 甲醛（ formylic acid ）。 （ 3 ） 0.067mol/L 磷酸缓冲溶液（ pH6.8 ）和 Giemsa 原液的配制同“染色体标本制作及其组型实验相 同”。 （4）2% Giemsa磷酸缓冲溶液
实验方法
（ 1 ）在培养皿中底部放一用蒸馏水润湿的滤纸，上 放两根竹签，置水浴内保温至60℃~65℃。 （2）载玻片标本细胞面朝上平放其上，加2滴明胶显 影液和 4 滴 50%硝酸银溶液，覆以盖玻片，直到载 玻片标本呈现金褐色为止，一般为3~4分钟。 （ 3 ）移除擦镜纸或盖玻片，并用蒸馏水快速漂洗数 秒，晾干。 （4）显微镜观察，分析。

银染色原理
银染色是一种常用的组织学技术，可用于观察细胞和组织中的细胞核和细胞质等部分。

银染色原理是基于银离子和还原剂之间的化学反应，将银离子还原为金属银形成黑色的颗粒，从而实现对样品中目标部分的染色。

银染色的过程包括三个步骤：（1）固定样品，使其硬化；（2）将样品浸泡在银离子溶液中，使银离子与样品中的目标部分结合；（3）将样品浸入还原剂溶液中，使银离子被还原成金属银。

银染色的优点在于其染色效果明显，能够清晰地显示细胞核和细胞质等细胞部分。

但是，银染色也存在一些缺点，如染色效果依赖于操作技术和试剂质量，容易产生伪影和背景等。

- 1 -。

佳染 色结 果 的要求 下 ， 色 时 间的 长 短取 决 于 温 度 染 的高 低 。在较 高 的温度 下 （ 定 范 围 内 较短 时 间 一 ，
的染 色 即可达 到理想 染 色效果 ； 较低 的温 度下 ， 而 获 得相 对满 意 的染 色 结 果 需 要 比较 长 的 时 间 Ⅲ 。有 ５ Ｊ 报道 ４ ℃条 件 下 可过 夜 ， 常规 室 温下 染 色 ３ ５ 而 ０～ ０
才 能滴 加新 鲜配 制 的胶 银 溶 液 ， 次 操 作则 达 到 理 依
想 效果 。
再 者 ， 续处 理 也 是 影 响 Ａ Ｎ Ｒ 染 色 结 果 的 后 ｇＯ ｓ 因素 。掌握 以上 两点染 出阳性切 片 的 目的基 本可 以 达 到 ， 于 本 试 验 结 果 一 般 是 用 来 做 定 量 研 究 由 的 Ｊ需要 在 镜 下 观 察 计 数 并 做 统 计 学 处 理 ， 时 ， 有
１滨 州 医学 院形 态学 实验 室
【 关键词 】 核仁组成 区嗜银 蛋 白； 染色
【 中图分 类号】 Ｒ ６ 【 ３１ 文献标识码 】 Ｂ 【 文章编号 】 １０ －５ ０ ２ １ ）３０ １－２ ０ １ １ （０ ０ ０ －２７０ ９
核仁 组成 区 嗜银 蛋 白 （ ｒｙｏ ｈｌ ｕｌｏ ｒｏ— ａｇ ｒｐ ｉｃｎ ｃ ｌ ｒ ｉ ｅａ ｇｎｚｒ ｅｉ ｓ ｒｔｉｓ Ａ Ｎ Ｒ） 色 是 病 理 形 态 学 ａ ｉ ｇｏ ｏ ｎ ， ｇ Ｏ 染 ｅｒ ｎ ｐ ｅ
计量 研究 的一 种方 法 ｊ也是 用 于 良恶 性 肿 瘤 辅 助 ， 诊断 的一 种 技 术 ｌ ］ ２ 。此 方 法 步 骤 虽 然 简 单 ， 用 所 试 剂 也不 繁 杂 ， 做 出满 意 的 实 验 结 果 并 不 容 易 。 但 笔者 屡次 的实 验操 作使 得对 这一 方法 及结 果 有一 定

我们实验室用的银染方法1.50%甲醇浸泡15分钟(置于摇摆床上,以下省略,本步骤两次,每15分钟更换一次)2.10%甲醇浸泡10分钟3.水漂洗3次,每次数秒4.2μM DTT溶液浸泡20分钟5.0.1%硝酸银溶液浸泡20分钟6.水漂洗3次,每次不超过15秒(每次约150ML)7.显色液漂洗3次,每次不超过15秒(每次约100ML)8.显色液浸泡显色至看到目的蛋白带(约200ML)9.10G柠檬酸定影显色液:15G无水碳酸钠溶于500ml水,用前加入250μL福尔马林搅拌均匀水用双蒸水就可以,纯度越高越好,其他试剂用分析纯,据书上说甲醇用化学纯的比分析纯更灵敏此方法出自冷泉港蛋白质技术指南(实际上是其蛋白质技术会议的总结)灵敏度稍低于分子克隆上老方法,但是非常方便,也比其他方法快速,只需要1.5小时,我染出来的胶非常漂亮,有需要的话可以上传给大家看看一般来说，高背景是由于杂质产生的，银染的水质很重要，最好要用去离子水或双蒸水，装胶的器皿也一定要洗得很干净。

固定、银染之后均需充分的漂洗。

其实银染就是银镜反应，可能是你的样品浓度高，所以白了，浓度更高还会变成一条能反光的带。

固定时间不需加长，我有时来不及还减少固定时间，银染关键是器皿和溶液干净，显色前胶一定要漂干净大板本来效果就差点，浓度越大，条带形状越差，这也很正常，银染薄点的胶效果要好些，因为染的是表面的蛋白1.取下凝胶,蒸馏水冼胶30秒.2. 0.1% 硝酸银染色10分钟.3. 弃去染色液,蒸馏水洗胶1分钟.4.显色液显色15秒,换用新的显色液,显清条带为止.显色液配方: 10克氢氧化钠+0.2克碳酸钠+2m甲醛溶液,定溶到500ml.这个染色方法挺好的,我用过.注意染色时间不能长.材料没什么要求，玻璃会更好一点，但不好搞到，我们是见到什么大小合适就用什么。

液体的量一般是胶体积的5倍，比如13×13×0.1cm的胶，用一百ml一定够，80也行。