组织切片制作方法

组织病理切片制作流程(完整版)

组织病理切片是一种常规病理学检查方法，用来对病理组织进行形态学观察和病理诊断。制作一张优质的组织病理切片需要严格按照一定的流程进行。

组织标本采集

组织标本的采集是组织病理学检查的第一步。组织标本的质量直接影响到切片的质量。因此，采集前需要确保标本来源正确，并与患者信息相符。对于手术标本，需要注意保护血管、神经、肌肉等结构，避免对组织结构造成不必要的损害。对于活检标本，需要选择有代表性的组织，避免损伤重要结构和血管。

组织处理

组织标本采集后，需要进行组织处理。对于手术标本，可以直接收取。对于活检标本，需要迅速固定，避免组织发生变性和坏死。常用的固定剂包括10%中性缓冲福尔马林、乙醇、甲醛等，选择固定剂需要根据样本的性质和检测需要来确定。

样本包裹

固定后的组织标本需要进行包裹以便于切片操作。包裹材料通常选择的是聚苯乙烯、增韧剂聚苯乙烯等塑料材料，包裹材料必须能够完全包裹组织标本，并保证固定。

切片制备

组织标本包裹后，需要进行切片制备。切片机是用于切割病理标本的设备，其切割面的厚度一般在4-6μm之间。在切片制备中，需要根据标本要求来选择显微镜下的切面。切片后，标本必须尽快贴在玻片上进行染色。

组织染色

组织染色是组织病理学检测的重要环节。目前常用的染色包括常规的苏木素-伊红染色和免疫组化染色等。苏木素-伊红染色是一种常规染色方法，可以显示出组织的基本结构和染色体。免疫组化染色可以显示出特定的蛋白质和胚间充质细胞等。

组织标签和包装

染色后的组织切片需要进行标签和包装。标签需要包含姓名、性别、年龄和检测日期等基本信息。组织切片还需要包装防止刮损和振动。

结果解释 组织病理切片制备完成后，需要进行结果解释。结果解释需要根据不同的病理学检测目的进行，一般是通过显微镜进行观察和诊断。有时候，还需要通过综合分析临床病史和症状等信息来确定诊断结论。

徒手切片法：

徒手切片法是指手持刀片将新鲜的或固定的实验材料切成薄片的制作方法。徒手切片法是指不需要专门的仪器设备，试样也不需要特殊的化学试剂处理，而直接将新鲜的或固定的材料(一般为木质化程度较低的植物)切成薄片的方法。

基本信息：

徒手切片前，应先准备好一个盛有清水的培养皿。在切片时，用左手的拇指与食指、中指夹住实验材料，大拇指应低于食指2～3mm，以免被刀片割破。材料要伸出食指外约2～3mm，左手拿材料要松紧适度，右手平稳地拿住刀片并与材料成垂直。然后，在材料的切面上均匀地滴上清水，以保持材料湿润。将刀口向内对着材料，并使刀片与材料切口基本上保持平行，再用右手的臂力（不要用手的腕力）向自身方向拉切。此时，左手的食指一侧应抵住刀片的下面，使刀片始终平整。连续地切下数片后，将刀片放在培养皿的水中稍一晃动，切片即漂浮于水中。当切到一定数量后，可在培养皿内挑选透明的薄片用低倍镜观察检查。好的切片应该是薄且比较透明、组织结构完整，否则要重新进行切片。

对经检查符合要求的切片，如果只作临时观察，可封藏在水中进行观察。若要更清楚地显示其组织和细胞结构，可选择一些切片进一步通过固定、染色、脱水、透明及封藏等步骤，做成永久玻片标本。

徒手切片技巧

如果不想切斜，要注意两点，一个是左手拿的露出来那截要短，

尽量只能连续切2刀的样子(一般是可以切4，5刀的），一个是切口一定要水平，同时右手的刀片也要水平，拉刀的时候保持在一个平面上（拉快点容易做到）。这是根和茎的切法，不过每次的量会有所减少。对于叶，有三种切法，一个是直接切；一个是卷成管状，当茎来切；还有就是用三层刀片夹起来。其中，第一种适合于裸子植物那种针叶，方法要领和上面说的差不多；第二种适合于比较软的叶片，要领是要卷的细，中间的洞不要太大（大了容易斜）；第三种适用于比较坚韧，硬的叶片，绝对要放在载玻片之类的地方，要用划的，凌空切会很不顺，容易切不断。还有一种特殊的方法是切成小块的先，再夹到萝卜里面（事先挖个洞或切条槽），再一起切，这个适用于全部，根茎叶，软的硬的均可（就是那种针叶不太好用它，我都切不好）。所以克服柔软就是要注意，想办法使它变厚变硬（对叶：卷，夹，或者垫玻璃；对根茎，夹，或者用左手捏紧一点，捏上面一点，使它不会晃）。至于弯曲，我觉得不用太在意，要么舍弃掉这一段，要么用手压紧，关键只是上面要平。还有，如果切含有楞或者有叶脉的部分，一定要从这些地方开始切，先切硬的部分（朝向刀口）。平时切两到三层差不多，一层的细胞会破损，有空洞；这样也比较适合染色。

组织切片制作步骤

1．取材组织取材的方法是制作切片的一个重要程序，根据教学、科研及外检的具体要求取自人体（外科手术切除标本、活检标本、尸检标本）或动物，并确定取材的部位和方法。取材者需要掌握解剖学、组织学、病理学的基本理论知识，还要掌握实际操作技术，每个组织器官的取材都有一定的部位和方法，不能任意切取组织作为制片材料，不然，无法达到教学、科研和临床诊断的目的，具体要求如下：

(1)材料新鲜：取材组织愈新鲜愈好，人体组织一般在离体后，动物组织在处死后迅速固定，以保证原有的形态学结构。

(2)组织块的大小：所取组织块较理想的体积为50px×50px×7.5px，以使固定液能迅速而均匀地渗入组织内部，但根据制片材料和目的不同，组织块的较理想体积也不同，如制作病理外检、科研切片，其组织块可以薄取0.1～5px即可，这样可以缩短固定脱水透明的时间，若制作教学切片厚取0.3 ～12.5px，这样可以同一蜡块制作出较多的教学切片。

(3)勿挤压组织块: 切取组织块用的刀剪要锋利，切割时不可来回锉动。夹取组织时切勿过紧，以免因挤压而使组织、细胞变形。

(4)规范取材部位: 要准确地按解剖部位取材，病理标本取材按照各病变部位、性质的不同，根据要求规范化取材。

(5)选好组织块的切面:根据各器官的组织结构，决定其切面的走向。纵切或横切往往是显示组织形态结构的关键，如长管状器官以横切为好。

(6)保持材料的清洁:组织块上如有血液、污物、粘液、食物、粪便等，可用水冲洗干净后再放入固定液中。

(7)保持组织的原有形态:新鲜组织固定后，或多或少会产生收缩现象，有时甚至完全变形。为此可将组织展平，以尽可能维持原形。

2．固定

(1)小块组织固定法：这是最常用的方法，从人体或动物体取下的小块组织，须立即置入液态固定剂中进行固定，通常，标本与固定液的比例为1:4～20，但组织块不宜过大过厚，否则固定液不能迅速渗透。故取组织块的大小一般为50px×50px×7.5px。

1 / 9

常规组织切片技术

一.(A1型题)10%福尔马林固定组织的原理A

A使蛋白质发生凝固.

B使蛋白质发生交联.

C沉淀核蛋白.

D使蛋白质沉淀.

E凝固脂肪

二.(X型题)标本取材的注意事项ABCDE

A选择恰当的取材部位

B避免组织受挤压变形

C大小适当

D根据组织.器官的不同选择正确的切面方向

E正确记录并做好组织块标记

三(A1型题)病理标本应及时固定,常用的固定液是D

A 95%酒精

B丙酮

C戊二醛

D 10%xx

E A-F液(乙醇.甲醛液)

四(X型题)常规组织切片的质量标准是ABCDE

A切片完整

2 / 9

B薄厚均匀,厚度4-6微米

C无皱褶.无刀痕

D切片无污染

E捞片位置适当.美观

五(A2型题)送检标本中如鼻咽.淋巴结等组织常需要做免疫组化检查,应选用的固定液是CA 10%福尔马林

B 95%酒精

C中性甲醛缓冲液

D Zenker固定液

E丙酮

六(A3型题)临床送检组织的处理包括取材.固定.脱水.透明.浸蜡与包埋

1送检组织保存时固定液体积与组织体积比为E

A 2倍

B 4倍

C 6倍

D 8倍

E 10倍

2脱水用酒精浓度应从低到高,脱水的作用D

A将组织进一步固定

B减少组织的硬度

C去除细胞内沉淀物

3 / 9

D置换组织内的水分

E去除细胞内未结合的固定剂

3组织石蜡切片最常用的透明剂是E

A酒精

B丙酮

C异丙醇

D正丁醇

E二甲苯

七(A4型题)在常规组织切片过程中经常会碰到各种问题

1制作好的石蜡组织块放一段时间后,组织发生凹陷,原因是D

A没有用蜡封组织块

B制作蜡快时透明时间过长

C浸蜡时间短

D脱水时间不够

E组织块过大

2组织脱水后透明时间过长切片时会出现A

A切片易碎成粉面

B切片与切片刀粘附

C切片薄厚不均或间歇出片

D不能成连续切片

E切片打卷

4 / 9

3能形成连续切片,但切片上有纵裂或纵向划痕原因是B