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抑菌试验1 定义抑菌试验,用于测定抗菌药物体外抑制细菌生长效力的试验称为抑菌试验抑菌活性的研究实验方案。
实验方法1. 纸片法(抑菌圈法)将测定菌株接种到培养基中,置37度条件下培养6-24小时,取出备用。
再用无菌吸管吸取上述培养液0.1ml,再用三角刮刀将菌液涂匀。
待培养基表面稍干后,用无菌小镊子分别取出所需的药敏纸片均匀地贴在培养基的表面,轻轻压平,各纸片间应有一定距离,并分别做上标记。
将培养皿置37度恒温箱内培养18-24小时后,测量各种药敏纸片抑菌圈直径的大小。
2. 挖孔法(1)在平板上打孔,然后将药液滴入孔内,用经酒精灯灭菌的接种环挑取适量细菌培养物,以划线方式将细菌涂布到平皿培养基上。
具体方式:用灭菌接种环取适量细菌分别在平皿边缘相对四点涂菌,以每点开始划线涂菌至平皿的1/2,依次划线,自至细菌均匀密布于平皿(将测定菌株接种到培养皿中,置37度条件下培养18-24小时,用灭菌的棉拭子将带将细菌混悬液涂布于平皿培养基表面。
要求涂布均匀)。
(2)以无菌操作将灭菌的不锈钢小管,(外径4mm,孔径与孔距均为3mm,管的两端要光滑,也可用玻璃管和瓷管),放置在培养基上打孔,将孔中的培养基用针头挑出,并以火焰封底,使培养基能充分的与平皿融合(3)加样时,按不同药液加样,用无菌滴管将样品加至满而不溢为止。
3. 牛津杯法(1)双碟的制备方法:将灭菌培养基溶化后取15ml倒入灭菌平皿内。
吸取待测菌株的菌液1-5ml与100ml冷至45度的培养基混匀,然后分别每一平皿加入5ml。
并均匀摊布在具有底层培养基的平皿内。
(2)待培养基凝固后,在每碟中均匀立放小钢管(及牛津杯)4个,用陶瓦盖覆盖。
(3)将下列实验药液分别加入小钢管中,置37度培养18-24小时,量取抑菌圈大小,判定抗菌药物抑菌作用的强弱。
乳酸菌的抑菌实验1产抑菌活性物质乳酸菌的初筛采用纸片法。
将培养好的大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌培养液OD 600分别调整到0.17、0.19、0.10,各取100μL 接种于LB 固体培养基,涂布均匀,固定1h。
乳酸菌抑菌鉴定研究乳酸菌是一类在发酵食品中常见的细菌，它们以乳酸为代谢产物进行糖的发酵，具有很高的抑菌活性，能够抑制一些致病菌的生长。
乳酸菌的抑菌活性与其菌种的多样性、代谢产物的组成和浓度有关，而这些又受到发酵条件的影响。
因此，对乳酸菌抑菌鉴定进行研究，可以为乳酸菌应用于食品工业等领域提供科学依据。
1.乳酸菌菌种多样性的研究乳酸菌存在于不同的食品发酵过程中，通过对各种食品样品进行分离培养，可以得到不同的乳酸菌菌株。
首先，需要对这些乳酸菌菌株进行形态学、生理生化及基因序列等方面的鉴定和分类，并构建乳酸菌菌株的系统发育树。
2.乳酸菌抑菌活性的测定乳酸菌的抑菌活性是评价其抑菌能力的重要指标。
可以利用不同的方法来测定乳酸菌对不同的致病菌的抑菌效果，如纸片扩散法、孔隙扩散法等。
同时，也可以比较不同菌株之间的抑菌活性差异，并找出具有较强抑菌活性的优良乳酸菌菌株。
3.乳酸菌代谢产物的鉴定乳酸菌通过发酵作用产生一系列代谢产物，如乳酸、醋酸、乙酸、乙醇等。
这些代谢产物对于乳酸菌的抑菌能力起到重要作用。
可以通过色谱-质谱等技术手段，对乳酸菌代谢产物进行分离鉴定，并量化其浓度，以了解乳酸菌抑菌活性的机制。
4.发酵条件对乳酸菌抑菌活性的影响乳酸菌的生长发酵条件对其抑菌活性产生重要影响。
如生长温度、pH 值、发酵时间等。
可以通过调整这些条件，研究其对乳酸菌生长和抑菌活性的影响，找出最佳的发酵条件，以提高乳酸菌的抑菌活性。
通过以上的乳酸菌抑菌鉴定研究，可以得出在不同发酵条件下具有较强抑菌活性的乳酸菌菌株，并进一步深入了解其抑菌机制，为乳酸菌在食品工业等领域的应用提供科学依据。
在未来的研究中，还可以进一步探索乳酸菌菌株与致病菌之间的相互作用，以及开发新型乳酸菌发酵产品，提高其抑菌效果。
抑菌活性实验方案薄层层析(TLC)是一种广泛应用于氨基酸、多肽、核苷酸、脂肪类、糖脂和生物碱等多种物质的分离和鉴定的层析方法。
(1) 初始发酵培养基的筛选在250 mL三角瓶装100 mL基础培养，将种子培养基以6%接种量接入各种基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养5d，测定不同培养基下发酵液对供试病原菌的抑制率，确定最佳基础培养基。
(2) 发酵时间的确定将活化的种子培养基以6%接种量接入筛选出的基础培养基中，细菌37℃160r/min培养1d，放线菌28℃、170 r/min培养不同时间段，测定每个时间段发酵液上清液对供试病原菌的抑制率，确定最佳发酵时间。
(3) 发酵初始pH值的初步确定将优化后碳氮源的基础培养基的pH分别调成3、5、7、9、11，然后再按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同pH培养基发酵液无菌滤液对供试病原菌的抑制率，确定初始pH范围。
(4) 发酵温度的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按 6 %接种种子培养基，分别在20 ℃、24 ℃、28 ℃、32 ℃、36 ℃，170 r/min培养一定时间后，测定不同温度下发酵所得发酵液对供试病原菌的抑制率，确定发酵温度范围。
(5) 发酵接种量的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，分别按2 %、4 %、6 %、8 %、10 % 接种种子培养基，在28 ℃、170 r/min培养一定时间后，测定不同接种量对发酵液抑菌活性的影响，确定发酵接种量范围。
(6) 发酵转速的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，按6 %接种种子培养基，28 ℃、以100r/min、130 r/min、160 r/min、190 r/min、210 r/min培养一定时间后，测定不同发酵转速对发酵液抑菌活性的影响。
(7) 发酵装液量的初步确定以优化后碳氮源的基础培养基为发酵培养基，在250 mL锥形瓶中装入50 mL、75mL、100 mL、125 mL、150 mL，按6 %接种种子培养基，28 ℃、170 r/min 培养一定时间后，测定不同发酵装液量对发酵液抑菌活性的影响。
摘要:本文综述了植物内生菌次级代谢产物的抗菌、杀虫等活性，以便寻找到植物源新的具有农药活性的先导化合物。
关键词：内生菌；次级代谢产物；抗菌活性；杀虫活性植物内生真菌(Plant endophytic fungi)是指生活在健康植物组织内部但不引起植物体病害的真菌。
这类真菌资源十分丰富，它们可能产生在微生物一宿主关系中发挥作用的生理活性物质，其次生代谢产物在生物制药、农业生产、工业发酵等领域越来越受到人们的关注。
目前，微生物源生物化学农药的研究和开发在我国十分活跃，但微生物资源及其应用潜力尚没有得到充分的发挥，而植物内生真菌即是这样一类有待开发的新兴微生物资源，本文对植物内生菌次级代谢产物的生物活性进行总结，为进一步研究内生菌的生物活性提供依据。
1 抗菌活性的内生真菌代谢产物1.1生物碱类IFB-Lactam-1 (1)是来自白菜内生真菌Trichoderma sp.的1个大环内酰胺生物碱，其可以很好地抑制柿子炭疽病[1]。
6-isoprenylindole-3-carboxylic acid (2)是从黄花蒿（Artemisiaannua）内生真菌Colletotrichum sp.分离的吲哚生物碱。
生物活性测试，在浓度200 µg/mL时，其对Gaeumannomyces graminis var. tritici、Rhizoctonia cerealis、Helminthosporiumsativum有抑制作用[2]。
内生真菌E99401的发酵液中产生的cerulenin (3)，在5 μg/disk时对C.glabrata、Candida albicans、C. krusei、C. parapsilosis、Microsporum canis、Cryptococcus neoformans、Mucor miehe、Nematospora coryli、Rhizomucor pusillus、Paecilomyces variotii的抑菌圈分别为17、16、14、28、40、30、40、42、36、38 mm，而对应的阳性对照制霉菌素在20 μg/disk 时，抑菌圈在10-20 mm[3]。
1株植物乳杆菌的抑菌作用及其生物学特性的研究洪伟;薛正莲【摘要】植物乳杆菌（ Lactobacillus plantarum）是乳酸杆菌中的一种，常存在于发酵的蔬菜和果汁中。
植物乳杆菌作为人体肠道的益生菌群，具有维持肠道菌群平衡、提高机体免疫力和促进营养物质吸收等多种作用。
研究从市售腌渍蔬菜中分离筛选获得一株植物乳杆菌，以9种菌作为指示菌，采用牛津杯琼脂扩散法检测筛选菌株的抑菌谱大小。
结果表明，该菌株能较强的抑制大肠杆菌、柠檬色葡萄球菌、藤黄微球菌和枯草芽孢杆菌等指示菌。
此外，研究了菌株对温度的稳定性，pH值的耐受性及其酶的敏感性等生物学特性，结果显示该株植物乳杆菌菌株具有良好的热稳定性，酸碱稳定性，并且对3种蛋白酶具有很好的敏感性。
这为今后深入研究与开发植物乳杆菌奠定了基础。
%Lactobacillus plantarum is one kind of lactobacillus often found in fermented vegtable and fruits .It can maintain the balance of bacteria in gastrointestinal tract , enhance body′s immune system and promote nutrient absorption .The L.plantarum was obtained from commercial pickles .The oxford cup agar well diffusion method was used to detect the diameter of bacteriostatic circle , and the re-sults showed that and L.plantarum could produce broad-spectrum antimicrobial substance , which had strongly restraining effect on Escherichia coli, Staphylococcus citreus, Micrococcus luteus and Bacillus subtilis.The biological characteristics of L.plantarum included the effects of heat, pH, enzymes.The results indicated that it had good heat stability and remained activity after incubation at a wide pH.It was sensitive to someproteases , such as proteinase K , pepsinum and trypsinase .This study would make a foundation for further developing the plant lactobacillus .【期刊名称】《生物学杂志》【年(卷),期】2014(000)006【总页数】4页(P51-54)【关键词】植物乳杆菌;指示菌;抑菌性;生物学特性【作者】洪伟;薛正莲【作者单位】安徽工程大学生物与化学工程学院微生物发酵安徽省工程技术研究中心，芜湖241000; 芜湖职业技术学院生物工程学院，芜湖241003;安徽工程大学生物与化学工程学院微生物发酵安徽省工程技术研究中心，芜湖241000【正文语种】中文【中图分类】Q939.1;TS201.3乳酸菌是益生菌的重要内容，主要包括乳球菌、明串珠菌、片球菌、乳杆菌和肉食杆菌等[1]。
