AYL-S7-326 葡萄球菌属检验标准操作规程3.0

微生物检验实验室微球菌属检验标准操作规程1.概述微球菌属包括藤黄微球菌、玫瑰色微球菌、里拉微球菌、西宫微球菌、卡氏微球菌、活跃微球菌和易变微球菌等9个菌种。

藤黄微球菌是微球菌属中的代表种。

2.标本类型血液、尿液、痰、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3.鉴定3.1形态与染色：革兰阳性球菌，菌体比葡萄球菌大，单个、成双、四联排列或立体包裹状不规则团块。

3.2 培养特性：藤黄微球菌在血琼脂平板上菌落小于葡萄球菌，呈圆形、突起、光滑、不透明、黄色菌落；在营养琼脂上菌落呈黄色。

3.3 生化反应：触酶、氧化酶试验阳性，胆汁七叶苷、精氨酸双水解酶、枸橼酸盐和硝酸盐还原试验均为阴性。

3.4 鉴别要点3.4.1 革兰阳性球菌，菌体较大，菌落呈黄色，触酶试验阳性。

3.4.2 微球菌属各菌种间的鉴别：见表5-323.4.3 与葡萄球菌的鉴别：见表5-33表5-32 微球菌属各菌种的生物学特性生化藤黄里拉易变玫瑰活跃卡氏西宫不动盐生反应微球菌微球菌微球菌色微球菌微球菌微球菌微球菌微球菌微球菌色素黄乳白黄粉红红浅橙桔黄乳白无葡萄糖O/F - - + + -+ V - +甘油- - - - - + - - + 胆汁七叶苷- - - - + + - - -精氨酸- - - - - - - + -硝酸盐- - + + - - V - - 37℃中生长+ + + + - + + + +65g/L氯化钠+ + + + - + - + + 枸橼- - + - - - - - -酸盐动力- - - - + - - - - 注：“+”为90%以上菌株阳性，“-”为90%以上菌株阴性，“V”为11%~89%菌株阳性。

表5-33 微球菌属与葡萄球菌的鉴别方法微球菌葡萄球菌葡萄糖O/F氧化发酵氧化酶试验+ -杆菌肽试验+ - 呋喃唑酮抑制试验- + 注：“+”为90%以上菌株阳性，“-”为90%以上菌株阴性，“V”为11%~89%菌株阳性。

4.操作步骤4.1涂片染色观察菌落特征，在血平板上挑取可以菌落，涂片染色镜检。

金黄色葡萄球菌实验标准操作程序岗位名称检验员执行人员检验员技能要求掌握实验技能监控人员检验员监控频率实验过程检验方法对照试验作业条件在无菌室内操作作业步骤1、超净工作台与无菌室紫外灯照射半小时，通风半小时后进入无菌室操作；2、样品用75%酒精喷洒后放入传递窗，在无菌室操作台按顺序摆放后再用75%酒精均匀喷洒；3、操作前手用75%酒精消毒，剪样前用酒精棉球擦拭样品表面；4、固体和半固体样品：称取25g样品，放入225ml生理盐水的无菌均质袋中，用拍击式均质器拍打1-2min，制成1:10的样品匀液。

5、液体样品：用微量移液器吸取25ml样品置盛有225ml生理盐水的无菌锥形瓶中（瓶内置适量的无菌玻璃珠），充分混匀，制成1:10的样品匀液。

6、用1mL微量移液器吸取1:10的样品匀液1mL，沿管壁缓缓注入含有9ml 灭菌生理盐水试管内（吸管或吸头尖端不要触及稀释液面），振荡试管混匀或换用1支1mL无菌吸管反复吹打使混匀，做成1:100的稀释液。

7、按上述操作依次做10倍递增稀释液，每递增稀释一次，换用1支1ml灭菌枪头。

8、第一方法根据食品卫生标准要求或对检样污染情况的估计，选择2-3个适宜的连续稀释度的样品匀液（液体样品可以选择原液），每个稀释度分别吸取1mL样品匀液以0.3mL、0.3mL、0.4m接种量分别加入3块Baird-Parker琼脂平板，然后用无菌L棒涂布整个平板，注意不要触及平板边缘。

使用前，如Baird-Parker平板表面有水珠，可放在25 ℃～50 ℃的培养箱里干燥，直到平板表面的水珠消失。

9、在通常情况下，涂布后，将平板静置10 min，如样液不易吸收，可将平板放在培养箱36 ℃±1℃培养1 h；等样品匀液吸收后翻转平皿，倒置于培养箱，36 ℃±1 ℃培养，45 h～48 h。

10、典型菌落计数和确认10.1 金黄色葡萄球菌在Baird-Parker 平板上，菌落直径为2 mm～3 mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围为一混浊带，在其外层有一透明圈。

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文件发放范围：微生物组文件年度审核审核者:审核者：审核者：审核者：日期：日期：日期：日期：沙门菌属检验标准操作规程1．概述沙门菌属是一类分布广泛、血清型较多、抗原复杂的肠道病原菌,分为6个亚属、2200种以上的血清型。

伤寒沙门菌属亚属I，多价O抗血清D群,是临床上最为重要的沙门菌。

2。

标本类型粪便、血液等标本。

3。

鉴定3.1 形态与染色革兰阴性杆菌，菌体细长。

有周鞭毛。

3.2 培养特性在麦康凯琼脂平板上35℃培养18～24小时，形成无色、透明的菌落.SS琼脂平板上呈无色、透明菌落,但大部分菌落中央呈黑色（产H2S）。

3.3 生化反应氧化酶试验阴性,发酵葡萄糖，不发酵乳糖,三糖铁琼脂（TSI）为K/A，动力、赖氨酸脱羧酶和硝酸盐还原试验阳性，大多数菌株H2S试验阳性,IMViC—+—-或-+-+。

3。

4 鉴别要点3。

4。

1 本菌属特征选择SS平板上无色透明、半透明或中心黑色的菌落，TSI为K/A，H2S 阳性或阴性，动力试验阳性，，IMViC—+—-或—+—+，氧化酶、脲酶试验阴性。

符合上述特征者，可通过血清凝集试验作出诊断。

3。

4.2 与志贺菌属的鉴别少数伤寒沙门菌在TSI上H2S阴性，动力不明显，易与志贺菌属相混淆，可用血清凝集试验相鉴别。

葡萄球菌的检验方法【中图分类号】R446 【文献标识码】B 【文章编号】1672-5085(2009)17-0228-01葡萄糖菌属的细菌广泛分布于自然界，空气、水、土壤、物品、人和动物体表及与外界相通的腔道中皆有存在，葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，可将其分为金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌等多种。

金黄色葡萄溏球菌是临床常的致病菌，能产生多种毒素和酶，引起皮肤粘膜、多种组织器官的化脓炎症等疾病，污染食品后可产生肠毒素，引起葡萄球菌肠毒素中毒。

1 检验程序金黄色葡萄球菌检验程序。

2 培养基及试剂胰酪胨大豆肉汤；7.5％氯化钠肉汤；血琼脂平板；Baird-parker琼脂平板；肉浸液肉汤；灭菌生理盐水；免血浆；3.8％枸橼酸钠溶液1份加兔全血4份，混合静置，血细胞下沉，即可得到血浆进行试验。

3 检验步骤3.1增菌培养法3.1.1检样处理称取25g固体样品，吸取25ml液体样品，加入225ml来菌生理盐水，固体样品研磨或置均质器中制成混悬液。

1）增菌及分离培养：吸取5ml上述混悬液，接种于7.5％氯化钠肉汤或胰酷胨大豆肉汤50ml培养基内，置30℃±1℃温箱培养24h，转种血平板和Baird-parker平板，36℃±1℃培养24h，挑取金黄色葡萄球菌可疑菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。

2）形态：本菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，致病性葡萄球菌体罗小，直径约为0.5～1μm。

3）在肉汤中呈混浊生长，在胰酪胨大豆肉汤内有时液体澄清，菌量多时呈混浊生长，血平板上菌落呈金黄色，也有时为白色，大而突起、圆形、不透明、表面光滑，周围有溶血圈。

在Baird-parker平板上为圆形、光滑凸起、湿润、直径为2～3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，地为一混浊带，在其外层有一透明圈。

用接种针接触菌落似有奶油树胶的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落,但无混浊带及透明圈。

葡萄球菌鉴定试剂盒检测标准操作规范1. 目的规范葡萄球菌鉴定试剂盒检测标准操作规程。

2. 检验程序的原理ID 32 STAPH 鉴定试条是由32个试验杯所组成，其中有26个含干燥的生化底物。

试条经接种、孵育24小时后。

用A TBTM ExpressionTM 仪或miniAPI仪或人工判读结果。

鉴定结果借助于相应的鉴定软件得到。

3. 性能特征无4. 样本要求ID 32 STAPH 试条不能直接用于临床或其它标本（例如血样、脓样、拭子等等）。

被鉴定的微生物，必须首先根据标准的微生物技术在适当的培养基上进行分离。

5. 患者准备参见《标本采集程序》。

6. 容器和添加剂类型参见《标本采集程序》。

7. 所需的仪器和试剂7.1 API 悬浮液培养基，2mL（产品号：70 070）如果使用ATB 接种器则用3m1（产品号：70640）7.2 试剂：VPA+VPB （产品号：70 572）NIT1+NIT2（产品号：70 442）FB（产品号：70 562）7.3 矿物油（产品号：70 100）7.4 比浊计（产品号：99 234）或A TB 比浊仪或麦氏标准浊度管（产品号：70 900），使用0.5 麦氏7.5 ATB 电子加样枪或A TB 接种器和Tip 头（产品号：15 710）7.6 ATB Expression 仪或miniAPI 仪和/或apiwebTM鉴软件(Ref. 40 011)8. 环境和安全控制参见《质量管理》。

9. 校准程序无10. 程序性步骤10.1 选取菌落从血琼脂、甘露醇盐琼脂或Baird Parker琼脂培养基上选取菌落。

10.2 试条的准备10.2.1 从包装袋中取出鉴定试条。

10.2.2 弃去干燥剂。

10.2.3 盖上试条盖子。

10.2.4 在鉴定试条的长端记录菌株的编号（不要记录在盖子上，因为操作过程中很容易将盖子错放到其它试条上）。

10.3 接种物的制备10.3.1 按本说明书中“警告和注意事项”一节中的要求打开一支2ml API ®悬浮培养基安瓿（如用ATBTM 接种器使用3ml 悬浮培养基），或使用任何无添加剂的无菌的蒸馏水管。

1 •概述葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。

金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。

2.标本类型血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。

3.鉴定3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。

3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的［溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。

在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。

表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。

3.3生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。

3.4 鉴别要点3.4.1本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。

金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。

3.4.2与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖0/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。

3.4.3与链球菌属的鉴别葡萄球菌属0/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖0/F试验为氧化型，触酶试验阴性。

3.4.4凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。

表1凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验半乳糖菌名凝固酶触酶溶血硝酸盐海藻糖苷酶金黄色葡萄球菌金黄色亚种+ + + + + - 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+ - + - - - 施氏葡萄球菌聚集亚种+ + + + - ND 中间葡萄球菌+ + d + + + 海豚葡萄球菌+ + + + - ND S.lutrae + + + + + + 猪葡萄球菌 d + - + + -注：“ + ”为90%以上菌株为阳性，“为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND 为无资料。