光电比色法公开课 -陈莉(2020年12月10日公开课)

样品测定与计算。
真题回顾 问题1：为什么要显色？
2017年4月浙江生物选考
Байду номын сангаас
颜色的深浅反映了什么？
32．（一）（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_假__丝__酵__母__
进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸
盐，与_对__氨__基__苯__磺__酸__发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光
测定：在626nm处测定OD值。 葡萄糖 浓度 mg/mL
0 0.01 0.02 0.03 0.04 0.05 0.06
问题3：在最大吸收波长下测定样品的光密度值 后，如何确定样品中的待测物质的含量？
学生活动2：制作标准曲线
蒽酮比色法：
加样：取1ml待测液体， 加入4ml蒽酮硫酸溶液，
显色：沸水浴10min， 取出并迅速冷却至室温， 在暗处放置10～30min ，
光线透过量越 少 。
大，
2、比色杯的光程L越大，光密度值越 大 。
量一量： 实验用的比色杯的光程
问题3：在最大吸收波长下测定样品的光密度值 后，如何确定样品中的待测物质的含量？
蒽酮比色法实验步骤：
加样：取1ml待测液体，加入4ml蒽酮硫酸溶液，
显色：沸水浴10min，
取出并迅速冷却至室温，
在暗处放置10～30min ，
测定奶茶中的糖含量，能不能 直接测量？
样品溶液必须清澈透明，加热后不应 有蛋白质沉淀，如样品溶液色泽较深， 可用活性炭脱色。
稀释 如何确定稀释的倍数？
学生活动3： 测定500mL雪碧中的糖含量
3人一组：一人测量、一人辅助 一人记录和处理数据
操作注意事项：
1、反应液中有浓硫酸，操作人
员穿好白大褂，操作人员和辅
2017年11月浙江生物选考
测定食品中的糖含量
32．（一）（3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄 糖含量的步骤如下：第一步，标准曲线的制作。用蒸馏水配置 __一__系__列__浓__度__的__葡__萄__糖__标__准__溶__液_ ， 与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以_葡__萄__糖___浓__度__与__光__密__度__值__关__系__ 的标准曲线。第二 步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是 _排__除__酒__原__有__颜__色__的__干__扰__ 。第三步，
观察一下试管内的颜色。 这种颜色应该选用多少nm的光波进行测定
学生活动1：认识仪器设备
认识比色计
打开仪器电源开关， 给大家1分钟的时 间来熟悉一下仪器。
单色器 比色杯
光程
认识比色杯
哪一面是光线穿过的面？ 拿比色杯时拿哪一面？
糙 面光
面
想一想、说一说：
1、杯中颜色越深，光线吸收量（光密度值）越
光电比色法
真题回顾 总结：利用光电比色法测定样品中的
某种物质含量时需要哪些步骤？
2017年4月浙江生物选考 32．（一）（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_假__丝__酵__母__ 进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸 盐，与_对__氨__基__苯__磺__酸__发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光 程为1cm 的___比__色__杯____，在550nm 光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的 __标__准__曲__线___比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。
显色：沸水浴10min， 取出并迅速冷却至室温， 在暗处放置10～30min ，
测定：在626nm处测定OD值。
学生活动3： 测定500mL雪碧中的糖含量
4.5g/块
《中国居民膳食指南》建议每天糖分摄入不超过50克，最好控制在25克以下。
作业1：找资料，糖分摄入过多，对身体有什么影响， 为什么会有这样的影响？
真题回顾
2017年4月浙江生物选考 32．（一）（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_假__丝__酵__母__ 进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸 盐，与_对__氨__基__苯__磺__酸__发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光 程为1cm 的___比__色__杯____，在550nm 光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的 __标__准__曲__线___比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。
2017年11月浙江生物选考 32．（一）（3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄 糖含量的步骤如下：第一步，标准曲线的制作。用蒸馏水配置 __一__系__列__浓__度__的__葡__萄__糖__标__准__溶__液_ ， 与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以_葡__萄__糖___浓__度__与__光__密__度__值__关__系__ 的标准曲线。第二 步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是 _排__除__酒__原__有__颜__色__的__干__扰__ 。第三步， 样品测定与计算。
2017年11月浙江生物选考 32．（一）（3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄 糖含量的步骤如下：第一步，标准曲线的制作。用蒸馏水配置 __一__系__列__浓__度__的__葡__萄__糖__标__准__溶__液_ ， 与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以_葡__萄__糖___浓__度__与__光__密__度__值__关__系__ 的标准曲线。第二 步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是 _排__除__酒__原__有__颜__色__的__干__扰__ 。第三步， 样品测定与计算。
助人员都须戴好手套。
2、4个测量样品在外面全部加
完放入后比色计，一起测量，1
4
号位放空白对照。
3
3、请用移液枪将在比色杯中加
样3mL，吸完迅速转移。
2
4、测完以后考虑到安全性，显
1
色样品不用处理，留在机器内
5、先完成活动3中的第一小问，
求出平均值后举手示意。
平行重复
蒽酮比色法实验步骤：
加样：取1ml稀释了4000倍的雪碧溶液， 加入4ml蒽酮硫酸溶液，
作业2：
板书设计
样品测定与计算。
问题2：为什么要选择 550nm？ 为什么要选择 一个吸收量最大的波长？
2017年4月浙江生物选考 32．（一）（2）泡菜腌制过程中，会产生有机酸、醇类和亚硝酸盐，其中醇类是由_假__丝__酵__母__ 进行厌氧呼吸产生。亚硝酸盐对人体有害，为测定泡菜中亚硝酸盐含量，从泡菜中提取要硝酸 盐，与_对__氨__基__苯__磺__酸__发生重氮化反应，再与N-1-萘基乙二胺偶联，形成紫红色产物。然后用光 程为1cm 的___比__色__杯____，在550nm 光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的 __标__准__曲__线___比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。
程为1cm 的___比__色__杯____，在550nm 光波下测定光密度值，与由一直浓度梯度亚硝酸钠制作的
__标__准__曲__线___比对，计算样品中亚硝酸盐的含量。
2017年11月浙江生物选考
32．（一）（3）已知葡萄糖与蒽酮试剂反应能产生颜色，采用光电比色法测定红曲酒中的葡萄 糖含量的步骤如下：第一步，标准曲线的制作。用蒸馏水配置 __一__系__列__浓__度__的__葡__萄__糖__标__准__溶__液_ ， 与蒽酮试剂反应后，用比色计测定，并制作以_葡__萄__糖___浓__度__与__光__密__度__值__关__系__ 的标准曲线。第二 步，样品处理。将待测酒样品通过活性炭脱色，其目的是 _排__除__酒__原__有__颜__色__的__干__扰__ 。第三步，
测定：在626nm处测定OD值。
食品中含有多种糖类，食品中的总糖通常是指具 有还原性的糖(葡萄糖、果糖、乳糖、麦芽糖等)和 在测定条件下能水解为还原性单糖的蔗糖的总量。 反应液中硫酸的含量高达60％以上，在此酸度条 件下，于沸水浴中加热，样品中的二糖、淀粉等 会发生水解，再与蒽酮发生显色反应。因此测定 结果是样品溶液中单糖、二糖和淀粉等的总量。