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#### 一、实验目的1. 掌握ABO血型鉴定的基本原理和方法。
2. 通过实验操作，学会使用玻片法进行血型鉴定。
3. 了解血型鉴定在临床医学、输血等领域的应用价值。
#### 二、实验原理人类的ABO血型系统由A、B、O三个基因决定，分别产生A、B、O三种抗原。
根据红细胞膜上抗原的种类和血清中抗体的种类，将血型分为A型、B型、AB型、O型四种。
在本实验中，利用玻片法观察红细胞与标准血清之间的凝集反应，从而判断受试者的血型。
#### 三、实验材料1. 受试者血液样本2. A型标准血清3. B型标准血清4. 载玻片5. 滴管6. 生理盐水7. 75%乙醇8. 消毒棉签9. 抗A和抗B血清#### 四、实验步骤1. 准备工作：将载玻片擦干净，用75%乙醇消毒，放置在实验台上。
2. 滴加血清：在载玻片两端分别滴一滴A型标准血清和B型标准血清。
3. 制备红细胞悬液：用消毒棉签在受试者指尖或耳垂处取血，加入含1ml生理盐水的小试管内，混匀，制成约5%的红细胞悬液。
4. 滴加红细胞悬液：用滴管吸取红细胞悬液，分别各滴一滴于玻片两端的血清上，注意勿使滴管与血清相接触。
5. 混合：用竹签两头分别混合，搅匀。
6. 观察结果：10～30分钟后观察结果，观察有无凝集现象。
7. 记录结果：记录凝集现象，并根据结果判断受试者的血型。
#### 五、实验结果与分析1. 实验结果：- 若加入A型标准血清时出现凝集，而加入B型标准血清时无凝集，则受试者为A型血。
- 若加入B型标准血清时出现凝集，而加入A型标准血清时无凝集，则受试者为B型血。
- 若加入A型、B型标准血清时均出现凝集，则受试者为AB型血。
- 若加入A型、B型标准血清时均无凝集，则受试者为O型血。
2. 实验分析：- 通过观察红细胞与标准血清之间的凝集反应，可以判断受试者的血型。
- 实验过程中，需要注意操作规范，避免污染和误差。
#### 六、实验结论本实验成功利用玻片法对受试者的血型进行了鉴定，验证了ABO血型鉴定原理的正确性。
一、实验目的1. 了解血清的基本概念和组成；2. 掌握血清鉴别实验的原理和方法；3. 通过实验操作，提高对血清成分的鉴别能力。
二、实验原理血清是血液中去除红细胞和白细胞后剩余的液体部分，主要由血浆和少量细胞碎片组成。
血清中含有多种蛋白质、电解质、营养物质、激素等成分。
本实验通过观察血清的颜色、透明度、凝固性、酸碱度等特性，以及进行血清蛋白定性实验和定量实验，对血清进行鉴别。
三、实验材料1. 实验动物：家兔、小白鼠；2. 实验器材：注射器、试管、试管架、滴管、酒精灯、镊子、剪刀、显微镜、离心机等；3. 实验试剂：生理盐水、10%氢氧化钠溶液、5%醋酸溶液、酚酞指示剂、双缩脲试剂、标准蛋白质溶液等。
四、实验方法1. 观察血清的基本特性：（1）颜色：取少量血清置于试管中，与生理盐水比较，观察血清颜色；（2）透明度：观察血清的透明度，与生理盐水比较；（3）凝固性：将血清滴入试管中，用酒精灯加热至50℃，观察血清是否凝固；（4）酸碱度：取少量血清置于试管中，加入酚酞指示剂，观察颜色变化。
2. 血清蛋白定性实验：（1）双缩脲实验：取少量血清置于试管中，加入双缩脲试剂，观察颜色变化；（2）硫酸铵盐析实验：取少量血清置于试管中，加入硫酸铵溶液，观察沉淀情况。
3. 血清蛋白定量实验：（1）紫外分光光度法：取少量血清置于试管中，用紫外分光光度计测定其在特定波长下的吸光度值；（2）凯氏定氮法：取少量血清置于试管中，用凯氏定氮法测定其中的氮含量。
五、实验结果与分析1. 观察血清的基本特性：（1）颜色：家兔血清呈淡黄色，小白鼠血清呈淡红色；（2）透明度：家兔血清和小白鼠血清均较透明；（3）凝固性：家兔血清加热后凝固，小白鼠血清加热后不凝固；（4）酸碱度：家兔血清和小白鼠血清均呈碱性。
2. 血清蛋白定性实验：（1）双缩脲实验：家兔血清和小白鼠血清均呈紫色；（2）硫酸铵盐析实验：家兔血清和小白鼠血清均产生白色沉淀。
3. 血清蛋白定量实验：（1）紫外分光光度法：家兔血清和小白鼠血清吸光度值相近；（2）凯氏定氮法：家兔血清和小白鼠血清氮含量相近。
一．兔编号，先耳静脉采1mL血作为健康血清；
二．2mL分四点皮下注射，2点在后背，2点在大腿处；
三．每周注射1次，连续3周；
四．第四次开始耳缘静脉注射，1周/次，3次
五．五第六次注射10天后开始采血，检测抗体效价；
六．若末次效价仍不高，可再加免疫一次后10天采血；
七．采血前一天晚上停食，只能饮用少量水；
八．采用心脏采血，采血放入灭菌培养皿中，血浆在室温下放置2h，移入4℃冰箱摆成鞋面放置过夜。
吸血清，6000rpm/10min/4℃，弃残血，上清即为抗血清。
（首次用完全佐剂，第二次用不完全佐剂，耳缘静脉注射直接用稀释病毒）
（首次完全佐剂（V）：病毒（V）=1:1）
（不完全佐剂（V）：病毒（V）=1:1）
兔免疫：500～1000μg
小鼠免疫：10～100μg
山羊或绵羊免疫：250～500μg
C=9.54mg/ml
J=20.258mg/ml
用样品Buffer稀释
C1：稀释10倍，100μl+900μl=1ml
C2：稀释20倍，50μl+950μl=1ml
J1：稀释20倍，50μl+950μl=1ml
J2：稀释40倍，25μl+975μl=1ml
Kana用量：
0.5g/100斤人
0.02g/4斤兔。
红细胞配置记录红细胞配置记录是临床实验室日常工作中不可或缺的一环。
红细胞悬液的正确配置对于临床输血治疗具有重要意义。
本文将对红细胞配置的基本概念、流程与方法、注意事项以及临床应用进行详细阐述。
一、红细胞配置基本概念红细胞配置指的是将新鲜全血经过离心、洗涤等步骤，制备成红细胞悬液的过程。
红细胞悬液可以分为洗涤红细胞、冰冻红细胞、细胞碎片去除红细胞等不同类型。
根据患者的实际需求，选择合适类型的红细胞悬液进行配置。
二、红细胞配置流程与方法1.选择红细胞悬液：根据患者病情、年龄、体重等因素，选择合适品牌、型号的红细胞悬液。
同时，了解红细胞悬液的保存条件，确保其在有效期内使用。
2.配制红细胞悬液：严格遵循厂家提供的说明书，进行红细胞悬液的配制。
注意事项包括：确保操作环境的清洁、无菌；遵循正确的操作步骤，避免过多人为误差；配制过程中避免剧烈震荡，以免破坏红细胞结构。
3.质量控制：在红细胞悬液配制完成后，进行质量检查，包括外观、比重、pH值、渗透压等。
确保红细胞悬液质量达标，以保障患者安全。
4.储存与运输：红细胞悬液应在2-8℃储存，并在规定时间内使用。
在运输过程中，注意保温措施，避免温度过高或过低影响红细胞质量。
三、红细胞配置注意事项1.严格无菌操作，防止交叉感染。
2.遵循医嘱，根据患者需求选择合适类型的红细胞悬液。
3.配制过程中，遵循操作规程，避免剧烈震荡，确保红细胞悬液质量。
4.定期对红细胞悬液进行质量检查，确保其符合临床使用要求。
四、临床应用与实践红细胞配置在临床输血治疗中具有重要意义。
正确的红细胞悬液配置可以有效提高患者救治成功率，降低输血不良反应发生率。
因此，临床医护人员应熟练掌握红细胞配置知识，确保患者安全。
五、总结与展望红细胞配置是临床实验室重要工作之一。
随着医学科技的发展，红细胞配置技术将越来越成熟，为临床输血治疗提供更加安全、有效的红细胞悬液。
1. 熟悉血清分离的基本原理和方法。
2. 掌握血清分离实验的操作技能。
3. 了解血清分离在临床医学中的应用。
二、实验原理血清是血液中的液体部分，主要由水、电解质、蛋白质、激素、营养物质等组成。
血清分离实验是将血液中的液体部分与有形成分分离的过程，通常采用离心法进行。
离心法是利用离心机产生的离心力，使血液中的有形成分沉淀，从而分离出血清。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：抗凝剂（如EDTA）、生理盐水、试管、移液器、离心机等。
2. 仪器：离心机、显微镜、培养皿、烧杯等。
四、实验步骤1. 取血液样本：将血液样本加入抗凝剂，充分混匀。
2. 离心：将混匀后的血液样本置于离心管中，以3000r/min的转速离心10分钟。
3. 观察分层：离心完成后，可见血液样本分为三层，上层为血清，中层为有形成分，下层为红细胞。
4. 分离血清：用移液器将上层血清小心移至新的试管中，注意避免将中层有形成分和下层红细胞带入血清。
5. 检查血清：将分离出的血清置于显微镜下观察，确认无红细胞等有形成分。
6. 记录结果：记录分离出的血清量，并计算血清中蛋白质、电解质等指标。
五、实验结果与分析1. 血清分离效果：实验过程中，成功分离出上层血清，无红细胞等有形成分，分离效果良好。
2. 血清量：分离出的血清量为2.5ml，符合实验预期。
3. 血清成分：经检测，分离出的血清中蛋白质含量为60g/L，电解质含量正常。
1. 血清分离实验是临床医学中常用的实验方法，对于疾病的诊断、治疗和预后评估具有重要意义。
2. 实验过程中，应严格按照操作步骤进行，避免因操作不当导致分离效果不佳。
3. 离心速度和离心时间对血清分离效果有较大影响，应根据实验需求选择合适的离心条件。
七、实验结论本次实验成功分离出血液中的血清，验证了血清分离实验的基本原理和方法。
实验过程中，操作规范，分离效果良好，为临床医学提供了可靠的实验数据。
动物血清提取方法步骤一、概述动物血清是一种含有丰富抗体的血液制品，广泛应用于生命科学研究和临床诊断。
动物血清的提取是一项关键的步骤，本文将介绍常用的动物血清提取方法步骤。
二、动物选择在动物血清提取之前，首先需要选择合适的动物作为供体。
常用的动物包括小鼠、大鼠、兔子、猪等，选择动物时要考虑其体型、生长周期和抗原来源等因素。
三、采集血液1. 麻醉动物：使用合适的麻醉方法，如静脉注射麻醉剂，使动物处于无痛苦状态。
2. 采集血液：选择合适的采血部位，如尾静脉、颈静脉或心脏穿刺等，使用无菌注射器或血液采集管采集血液。
3. 血液处理：采集的血液需放置在离心管中，静置15-20分钟，待血液凝固后进行离心分离。
四、血清分离1. 离心：将血液离心分离，以分离血浆和红细胞。
离心条件根据不同的动物和采集血量而定，通常为3000-4000rpm，离心10-15分钟。
2. 分离：将离心后的血浆转移至新的离心管中，避免红细胞残留。
3. 过滤：使用0.22μm的无菌滤膜过滤血浆，以去除细菌和微粒。
五、血清保存1. 分装：将过滤后的血浆分装至无菌离心管中，每管约2-5ml，并标明样品编号和保存日期。
2. 冷冻：将血清离心管置于零下20摄氏度的冷冻柜中，避免多次冻融，以保持血清的稳定性。
3. 避光：血清离心管应存放在避光的条件下，避免阳光直射，以防止光敏物质的降解。
六、血清质量控制1. 血清理化指标检测：通过检测血清的总蛋白含量、纯度、pH值等指标，评估血清的质量。
2. 病原微生物检测：使用无菌技术对血清进行病原微生物检测，确保血清的无菌性。
3. 抗体效价检测：使用适当的抗原对血清进行效价检测，评估血清的抗体水平和活性。
七、应用领域动物血清作为一种重要的实验试剂，广泛应用于免疫学研究、细胞培养、药物研发等领域。
根据实验需求，血清可以用于细胞培养的补充物、抗体的制备和免疫组化等实验。
八、总结动物血清提取是获得高质量血清的关键步骤。
西安医学院教案（专业课程）课程名称临床免疫学与检验班级检本1008 专业，层次检验，本科教师武永红专业技术职务讲师授课方式（大，小班，实习）实验学时9学时授课题目（章，节）抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定基本教材或主要参考书王兰兰，许化溪主编.临床免疫学检验.第5版：人民卫生出版社，2012 刘辉．临床免疫学与检验实验指导第3版：人民卫生出版社，2009 曹励民．免疫学检验实验指导．自编教材，2011教学目的：1.掌握：细菌接种培养的操作能力，加强细菌性抗原免疫动物的实验操作能力，肥达氏反应的模拟操作及间接血凝实验测定细菌性抗体的效价，2.熟悉：临床用于诊断细菌或病毒感染的凝集反应测定效价试验的原理。
教学内容：1.细菌培养与免疫原的制备2.“O”和抗“H”血清的制备3.试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价4.间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价教学方法：启发式教学；讲授重点内容。
教具：板书示教教学重点、难点：1. 间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价教研室审阅意见（教研室主任签名）年月日教学内容教学手段时间分配抗“O”和抗“H”血清的制备及效价测定（一）细菌培养与免疫原的制备（二）“O”和抗“H”血清的制备（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价（四）间接血凝试验测抗“O”和“H”血清效价（一）细菌培养与免疫原的制备伤寒沙门菌标准菌株干粉→生理盐水溶解→接种肉汤培养基→接种普通平板→生理盐水菌液（100℃水浴制备O抗原，甲醛处理制备H抗原）（二）“O”和抗“H”血清的制备Ag伤寒沙门菌O和H抗原→分别免疫两组家兔→抗O血清和抗H血清O/H抗原的免疫程序：日序（天）免疫剂量（ml）免疫途径1 1 皮内五点注射8 1.5 耳静脉注射15 1.5 耳静脉注射22 1.5 耳静脉注射放血方法：颈动脉采血试血方法：试管凝集试验（三）试管凝集试验测抗“O”和“H”血清效价试管凝集试验的原理：在试管内，用已知颗粒性抗原作为诊断试剂，与一系列倍比稀释的待检血清混合反应，在一定条件下，出现肉眼可见的凝集现象。
新生儿溶血病检测卡标准操作程序（SOP）一、准备工作（一）微柱凝胶试剂卡的准备：观察外观，如有干胶、杂质、气泡不可使用，之后将卡放置室温（18－25℃）平衡，再用专用离心机离心5分钟。
(二)试剂的制备：6%牛血清白蛋白（盐水稀释）（三）标本采集：采集被检对象静脉血，将该同一人血液分别制备成红细胞标本和血清标本。
（四）红细胞标本的制备：用红细胞稀释液配制红细胞悬液，红细胞最终浓度为0.8%－1％。
（五）血清标本的制备：将被检者静脉血采入含兔脑粉或其它促凝剂的试管中，10分钟后离心，取上清；或者将被检者静脉血采入无抗凝剂试管中，4℃放置12小时，或37℃放置2小时后离心，2000rpm，10分钟，取上清。
该上清不得有絮状物或沉淀。
（六）放散试验：1、充分洗涤红细胞至少三次，取同体积洗涤后的压积血和6%牛血清白蛋白混匀，置于56℃孵育10分钟，期间不断摇动，离心1000rpm，2－3分钟，取上清。
即放散液。
2、充分洗涤红细胞至少三次，用博讯公司生产的酸性放散试剂盒做室温放散。
参见酸性放散试剂盒使用说明书。
二、实验步骤1、取新生儿的红细胞0.8%－1％悬液50ul分别加入卡1中的1－6孔中。
2、使用专用离心机离心5分钟，900rpm 2分钟，1500 rpm 3分钟。
3、取出，判读结果。
4、第二卡1－3孔分别加入50ul新生儿血清，4－6孔分别加入50ul新生儿红细胞放散液。
5、将A型红细胞悬液50ul分别加入1号、4号；将B型红细胞悬液50ul分别加入2号、5号；将O型红细胞悬液50ul分别加入3号6号孔中。
6、37℃孵育15分钟。
7、取出，使用专用离心机离心5分钟（900rpm2分钟，1500 rpm3分钟），取出，判读结果。
结果判定阳性结果：红细胞凝集块位于凝胶表面或凝胶中。
表明被检者血清中含有对应其抗原的抗体或血细胞被致敏。
阴性结果：红细胞完全沉降到凝胶底部，在凝胶管底部形成红细胞扣。
表明血清中无相应抗原免疫的抗体或血细胞没有被致敏。
实验报告实验名称多克隆抗体的制备一（抗血清制备）实验日期院系专业班级姓名学号一、实验目的了解免疫的原理，掌握免疫方法和抗血清的制备技术。
二、实验器材试剂：酒精棉球、NDV灭活油乳剂疫苗、麻醉剂器材：兔笼、注射器、剃毛剪、手术刀、止血钳、手术剪（组织剪、眼科剪）、动脉夹、眼科剪、动脉导管、纱布、棉线、细线、培养箱、冰箱、结扎细线、离心机、温箱三、实验原理1.机体的特异性免疫反应是指机体受抗原物质刺激后产体液免疫和细胞免疫的过程。
一种抗原能否引发抗体反应，一方面取决于抗原分子表面有无特异性的化学结构——抗原决定簇，另一方面取决于机体有无相应的免疫活性细胞。
2.将具有免疫原性的物质注入健康动物体内后，抗原可刺激机体相应B细胞增殖、分化形成浆细胞并分泌特异性抗体。
抗原进入机体经过一定的潜伏期，抗体效价逐步上升，达到高峰后，能维持一短暂的时期，以后又逐渐下降，但当第二次接触相同的抗原时，抗体的上升较前次为快，高峰时的效价也比前次为高。
抗体持续的时间也较长，此也称为再次反应。
待动物血清中存在大量抗体时，采集动物血液，分离析出血清，便得到所需的抗血清（免疫血清或抗体）。
3.由于抗原性物质通常具有多个抗原决定簇，可以刺激机体产生多种抗体形成细胞克隆，合成和分泌各种抗原决定簇的抗体，免疫血清中实际上是含有多种抗体的混合物，所以这种免疫法获得的免疫血清又称为多克隆抗体。
4.多克隆抗体的制备是一个复杂的过程，为了获得特异性强，效价高的抗血清，除了抗原的因素外，还需注意动物品系的选择、抗原注射的浓度、剂量、次数、间隔时间及注射途径等。
对于免疫原性较弱的可溶性抗原（如蛋白质类抗原）要加入佐剂，以增强免疫性。
3. 放37度温箱温浴，是为了让血液内纤维蛋白原收缩，降低血清和红细胞的粘连，从而使使血清更容易与红细胞分离，不易产生溶血现象。
4. 在4℃冰箱内放置使血清析出，低温有利于稳定抗体等蛋白质的结构，防止其变性而丧失功能。
免疫学实验指导生命科学与工程学院生物工程、生物技术、动物医学专业用玉萍[分组]：4人/组，实验用动物、器材以每组需要量设计[班级] 2006生物工程、生物技术 [学生人数]：65人/58人。
分16组/15组[时间] 2008年3月—2008年7月两周一次4学时。
目录实验一、免疫学实验动物的一般操作实验二、实验动物免疫器官、免疫细胞观察实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法实验四、淋巴细胞分离与E玫瑰花环形成试验实验五、IgG的分离和纯化实验六、玻片凝集试验(ABO血型鉴定)实验七、环状沉淀试验实验八、琼脂扩散试验（单向）实验九、巨噬细胞吞噬功能试验实验十、白细胞吞噬试验实验一、免疫学实验动物的一般操作[实验原理]实验动物的基本操作是免疫学实验的基础,抗原对动物机体的免疫效果，通过实验动物进行验证，因此必须掌握实验动物的一般操作技术。
[目的要求]1、实验材料的准备（棉球、注射器的准备与消毒）（演示）2、了解免疫学实验常用动物的生物学特性、用途及其健康要求。
[自学]3、学习实验动物的编号、抓取、固定和几种不同的注射途径方法。
4、练习对小白鼠给药的几种不同途径的注射方法。
5、练习小白鼠的取血方法。
6、学习血涂片的制作及染色；观察动物血液中有形成分的形态结构特点。
[实验动物]小白鼠，2只/组，共需18 ~ 20只。
[试剂]⑴ 3%来儿或3%石炭酸 100~150 ml/组；⑵无菌生理盐水100~150ml/组；磷酸盐缓冲液20~50ml/组（带滴管、染色用）。
⑶ 3 ~ 5% 苦味酸20~50ml/组（带滴管,编号用）；⑷ 5%品红20ml~50ml/组（带滴管，编号用）；⑸瑞特氏（wright‘s）染色液50ml/组（带滴管，染色用）；*抗凝剂一支[器材]⑴ 1ml注射器及针头2支/组；⑵碘酒棉球、酒精棉球、无菌干棉球各适量；⑶手术剪刀2把/组；镊子2把/组；载玻片、盖玻片各6片/组；⑷毛细吸管2支、50—100ml烧杯1个/组⑸显微镜6台/组[6] 鼠笼1个/组[操作步骤]1、练习小白鼠抓取、编号、皮下注射、皮注射、腹腔注射的方法。
