抗体工程制药PPT课件
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制药工程专业导论01概述课件页数:67
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制药工程专业导论01.概述页数:67
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生物技术制药第四章抗体制药(ppt)
一、抗原与动物免疫
• （2）稳定的杂交瘤的获得
• 因免疫动物品系和骨髓瘤细胞在种系发生上距离
越远，产生的杂交瘤越不稳定，故一般采用与骨 髓瘤供体同一品系的动物进行免疫。目前常用的 骨髓瘤细胞系多来自BALB/c小鼠和Lou大鼠，因 此免疫动物也多采用相应的品系，最常用的也是 BALB/c小鼠。
• 选择动物时应考虑到动物品系的免疫应答基因
生物技术制药第四章抗体制药 (ppt)
（优选）生物技术制药第四章 抗体制药
第一节 概述
• 1890年：Behring和北里柴三郎等发现了白喉抗毒素，并
建立了血清疗法，开抗体制药之先河。
• 1937年：Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、
甲种（）球蛋白、乙种（ ）球蛋白和丙种（ ）球 蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
一、抗原与动物免疫
• （3）免疫方法：体内免疫法和体外免疫法
• 体外免疫法：用于不能采用体内免疫法的情况下，
如制备人源性单克隆抗体，或者抗原的免疫原性 极弱且能引起免疫抑制时使用。
• 体外免疫法所需要的抗原量少，一般只需几个g，
免疫期短，仅4~5天，干扰因素少，已成功制备 出针对多种抗原的单克隆抗体，但融合后产生的 杂交瘤细胞株不够稳定。其基本方法是用4~8周 龄BALB/c小鼠的脾脏制成单个细胞悬液，再加 入 37适℃当下抗培原养使4~其5天浓，度再达分0.离5~脾5 脏g细/m胞l，，在进5%行C细O胞2、 融合。
• 20世纪60年代初期：抗原决定簇，精制单价血清。 • 1975年：Köhler和Milstein等，单克隆抗体，其具有高度
特异性、均一性，以及来源稳定可大量生产等特点。
• 1984年：人-鼠嵌合抗体 • 1984年至今：单克隆抗体的鼠源性及分子过大的问题得
《抗体工程制药》PPT课件
4
3、抗原（antigen，Ag）
一类能刺激机体免疫系统使之产生特异性免疫 应答，并能与相应免疫应答产物(抗体)在体内 外发生特异性结合的物ห้องสมุดไป่ตู้。
抗原的基本特性有两种，一是诱导免疫应答的能力， 也就是免疫原性，二是与免疫应答的产物发生反应， 也就是反应原性。
2021/3/26
5
抗原的分类
完全抗原（complete antigen） 简称抗原。是一类既有免疫原性，又有反应性 性的物质。如大多数蛋白质、细菌、病毒、细 菌外毒素等都是完全抗原。
2021/3/26
16
动物抗血清的优缺点
从动物血清提取抗体主要克服了人血浆来源有 限造成的制约。
然而，动物来源产品均存在潜在的危险，如过 敏和传播感染性病原体等。
多抗体异性不高，易发生交叉反应。
2021/3/26
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解决单抗特异性不高的理想方法是针对单一 表位的特异性抗体-单克隆抗体。
2021/3/26
即能与相应抗原特异性结合的具有免疫功能的 球蛋白。
2021/3/26
3
2、免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig ）
具有抗体活性或化学结构上与抗体相似的球蛋 白。
因结构不同可分为IgG、IgA、IgM、IgD和IgE 5种。
免疫球蛋白是结构及化学的概念，而抗体是生物学及功能的概念。
2021/3/26
18
2、单克隆抗体（monoclonal antibody， mAb ）
2021/3/26
19
单克隆抗体的概念
如果能选出一个浆细胞进行培养，就可得到由单细胞 经分裂增殖而形成细胞群，即单克隆。单克隆细胞将 合成针对一种抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体 （mAb）。
抗体制药ppt课件
RPMI1640培养液
成分 含量 RPMI1640粉 10.4g HEPES 2.4g L-谷氨酰胺 0.3g 青霉素、链霉素 各10万U 水 1000ml pH=7.4，过滤、除菌
第二节 单克隆抗体 ——筛选阳性克隆与克隆化
1、筛选 • 免疫酶技术、免疫荧光技术、放射免疫技术 2、克隆化：是指单个细胞通过无性繁殖而获 得细胞集团的整个培养过程。 • 有限稀释法：HT培养液/饲养细胞 • 软琼脂法：0.5%琼脂糖凝胶/易成功
抗体制药
第一节 概述
•
1890年Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒
素，建立了血清疗法，开创了抗体制药。
•
1937年Tiselius用电泳法将血清蛋白分离为
白蛋白，α、β、γ球蛋白，并证明抗体活性
主要存在于γ球蛋白组分。
第一节 概述
•
抗体（antibody,Ab）是指能与相应抗原 特异性结合具有免疫功能的球蛋白。 抗体的产生：机体免疫系统受抗原刺激 后，B淋巴细胞被活化增殖、分化为浆 细胞，由浆细胞合成和分泌的球蛋白。 即B细胞→浆细胞→球蛋白
第二节 单克隆抗体 ——杂交瘤细胞与抗体性状的鉴定 1、染色体分析：是鉴定的客观指标，了解分 泌抗体的能力。数目多、集中（稳定高效 价） 2、McAb的Ig类和亚类鉴定：用羊或兔抗Ig不 同类或亚类抗体，进行免疫扩散或ELISA鉴 定。 3、亲和力测定 4、特异性、纯度、识别抗的大量制备
•
针对一个抗原决定簇、单一B细胞克隆产生、 结构和特异性完全相同、高纯度。
抗 原 小鼠/大鼠 脾 脏
淋巴细胞 骨髓瘤细胞
多 克 隆
B淋巴细胞 单克隆
第二节 单克隆抗体——抗原与动物免疫
1、制备抗原→动物免疫
《抗体工程制药》课件
新型抗体药物的出现
随着抗体工程技术的发展，新型抗体药物不断涌现，如双特异性抗 体、抗体融合蛋白等。
抗体药物的生产技术的发展
随着生物技术的不断发展，抗体药物的生产技术也不断改进，如细 胞培养技术的优化、基因工程技术的应用等。
抗体工程制药的未来研究方向
新型抗体的研究与开发
研究新型抗体的结构和功能，开发具有新作用机制的抗体药物。
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一种利用噬菌体展示肽库筛选特异 性抗体的技术。
该技术将外源基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，使外 源基因编码的肽段在噬菌体外壳上展示，然后通过筛
选噬菌体展示肽库来获得特异性抗体。
噬菌体展示技术具有筛选效率高、特异性强等优点， 为抗体药物的研究和开发提供了新的工具。
蛋白质工程技术
蛋白质工程技术是通过改变蛋白 质的氨基酸序列和结构来改变其
功能的一种技术。
在抗体工程制药中，蛋白质工程 技术可用于优化抗体分子的结构 和功能，提高抗体的亲和力和稳
定性，降低免疫原性。
蛋白质工程技术为抗体药物的研 发提供了强有力的手段，有助于 推动抗体工程制药领域的发展。
03 抗体药物的药效学研究
CHAPTER
抗体药物的生产技术研究
优化抗体药物的生产工艺，降低生产成本，提高产量和质量。
抗体药物的免疫原性研究
研究抗体药物的免疫原性机制，寻找降低免疫原性的新方法。
谢谢
THANKS
抗体药物的药效学研究进展
1 2 3
新型抗体药物的开发
随着抗体工程技术的发展，越来越多的新型抗体 药物被开发出来，如人源化抗体、单域抗体、双 特异性抗体等。
抗体药物的疗效和安全性
随着临床试验的深入开展，抗体药物的疗效和安 全性得到进一步验证，为抗体药物的应用提供了 更可靠的依据。
随着抗体工程技术的发展，新型抗体药物不断涌现，如双特异性抗 体、抗体融合蛋白等。
抗体药物的生产技术的发展
随着生物技术的不断发展，抗体药物的生产技术也不断改进，如细 胞培养技术的优化、基因工程技术的应用等。
抗体工程制药的未来研究方向
新型抗体的研究与开发
研究新型抗体的结构和功能，开发具有新作用机制的抗体药物。
噬菌体展示技术
噬菌体展示技术是一种利用噬菌体展示肽库筛选特异 性抗体的技术。
该技术将外源基因插入噬菌体外壳蛋白基因中，使外 源基因编码的肽段在噬菌体外壳上展示，然后通过筛
选噬菌体展示肽库来获得特异性抗体。
噬菌体展示技术具有筛选效率高、特异性强等优点， 为抗体药物的研究和开发提供了新的工具。
蛋白质工程技术
蛋白质工程技术是通过改变蛋白 质的氨基酸序列和结构来改变其
功能的一种技术。
在抗体工程制药中，蛋白质工程 技术可用于优化抗体分子的结构 和功能，提高抗体的亲和力和稳
定性，降低免疫原性。
蛋白质工程技术为抗体药物的研 发提供了强有力的手段，有助于 推动抗体工程制药领域的发展。
03 抗体药物的药效学研究
CHAPTER
抗体药物的生产技术研究
优化抗体药物的生产工艺，降低生产成本，提高产量和质量。
抗体药物的免疫原性研究
研究抗体药物的免疫原性机制，寻找降低免疫原性的新方法。
谢谢
THANKS
抗体药物的药效学研究进展
1 2 3
新型抗体药物的开发
随着抗体工程技术的发展，越来越多的新型抗体 药物被开发出来，如人源化抗体、单域抗体、双 特异性抗体等。
抗体药物的疗效和安全性
随着临床试验的深入开展，抗体药物的疗效和安 全性得到进一步验证，为抗体药物的应用提供了 更可靠的依据。
抗体工程制药课件
v 轻链和重链中靠近N-端氨基酸序列 变化较大的区域
v 重链和轻链的V区分别称为VH和VL v 分别占重链和轻链的1/4和1/2 v VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和
排列顺序高度可变，称为高变区 （HVR）或互补决定区（CDR）， 共同组成Ig的抗原结合部位 v 在V区中CDR之外的区域氨基酸组 成和序列相对不变，称为骨架区 （FR）
v 二级结构由反向平行的两个
-片层（-sheet）组成，两 个-片中心的两个Cys由一个链内二硫 Nhomakorabea垂直连接，形
成“-桶状（-barrel）”
结构，这种折叠方式称为 “免疫球蛋白折叠 （immuno- globulin folding）”
10
› 铰链区（hinge region）
v 位于CH1与CH2之间 v 含有丰富的Pro v 易伸展、弯曲，能改变两个
结合抗原的Y形臂之间的距 离，有利于两臂同时结合两 个不同的抗原表位 v 易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶 等水解，产生不同的水解片 段
11
12
13
19.1.3抗体制备发展历程
（1）多克隆抗体
➢1890年，Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素 ➢1937年， Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲 种（α）球蛋白、乙种（ β ）球蛋白、丙种（ γ ）球蛋白，并 证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
阳性克隆
28
› 杂交瘤细胞的筛选 —— 筛选阳性克隆
v 筛选要求：微量、快速、特异、敏感、简便，可一次 性检测大批标本
v 常用方法：免疫分析法，如ELISA
将抗原固定在微孔板上，细 胞培养上清培育一定时间后，用 酶标的抗鼠二抗，通过酶促反应 底物颜色变化，了解是否含有针 对该抗原的抗体存在。
v 重链和轻链的V区分别称为VH和VL v 分别占重链和轻链的1/4和1/2 v VH和VL各有3个区域的氨基酸组成和
排列顺序高度可变，称为高变区 （HVR）或互补决定区（CDR）， 共同组成Ig的抗原结合部位 v 在V区中CDR之外的区域氨基酸组 成和序列相对不变，称为骨架区 （FR）
v 二级结构由反向平行的两个
-片层（-sheet）组成，两 个-片中心的两个Cys由一个链内二硫 Nhomakorabea垂直连接，形
成“-桶状（-barrel）”
结构，这种折叠方式称为 “免疫球蛋白折叠 （immuno- globulin folding）”
10
› 铰链区（hinge region）
v 位于CH1与CH2之间 v 含有丰富的Pro v 易伸展、弯曲，能改变两个
结合抗原的Y形臂之间的距 离，有利于两臂同时结合两 个不同的抗原表位 v 易被木瓜蛋白酶、胃蛋白酶 等水解，产生不同的水解片 段
11
12
13
19.1.3抗体制备发展历程
（1）多克隆抗体
➢1890年，Behring和北里柴三郎发现白喉抗毒素 ➢1937年， Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、甲 种（α）球蛋白、乙种（ β ）球蛋白、丙种（ γ ）球蛋白，并 证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分。
阳性克隆
28
› 杂交瘤细胞的筛选 —— 筛选阳性克隆
v 筛选要求：微量、快速、特异、敏感、简便，可一次 性检测大批标本
v 常用方法：免疫分析法，如ELISA
将抗原固定在微孔板上，细 胞培养上清培育一定时间后，用 酶标的抗鼠二抗，通过酶促反应 底物颜色变化，了解是否含有针 对该抗原的抗体存在。
抗体工程制药PPT课件
抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再 刺激后， IgＧ将取代IgM
动物血清中产生抗体的时间示意图
抗体研究的发展阶段：
①以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表,用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体。
②以1975年Milstein & Kohler创建杂交瘤技
术制备单克隆抗体(McAb)为代表。 ③以1994年Winter,创建了噬菌体抗体库
4.免疫方法: 体外免疫法；体内免疫法
体内免疫法 ---- 颗粒性抗原(如细菌、细胞)
的免疫原性强,可不加佐剂,可溶性抗原则按每 只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混 合后注入腹腔内.
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）: 由矿物油（如降脂烷或
第七章 抗体工程制药
一.概述
抗体(工程)制药—生物技术制药领 域的重要组成部分
抗 原(antigen,Ag)
---是指那些能够刺激和/或诱导机体免疫 系统发生免疫应答、产生抗体和/或致敏 （效应）淋巴细胞，同时又能与免疫应 答产物在体内外特异性结合，发生免疫 反应的物质。
如：病原微生物、免疫血清、药物、疫苗 对机体来说，抗原相当于一个国家已知
二. 单克隆抗体的制备
McAb（Monoclonal antibody，单克隆抗体）：
将在体外不能长期传代的抗体产生细胞（如 Balb/C小鼠的免疫脾细胞）与在体外能迅速增殖并带 有抗药标记的骨髓瘤细胞（如小鼠的NS-1或SP2/0）在 聚乙二醇（PEG）作用下融合，然后利用抗药性标记 和经稀释法选出单个产生抗体的杂交瘤细胞，再用血 清学方法证实其与抗原结合的特异性和亲和力。这样 的杂交瘤细胞能长期（第二代抗体）。
第六章抗体工程制药-PPT精品文档
胃蛋白酶水解片段
作用于铰链区二硫键所连接的
两条重链的近C-端，水解后可 获得一个F(ab')2片段和一些小片 段pFc' F(ab')2片段由两个Fab及铰链区 组成，是双价抗体片段，可同 时结合两个抗原表位，可发生 凝集反应和沉淀反应 F(ab')2片段保留了结合相应抗 原的生物学活性，又避免了Fc 片段免疫原性可能引起的副作 用，广泛用作生物制品
杂交瘤技术制备出 McAb. 在临床上主要用于诊断和
治疗。
木瓜蛋白酶水解片段
水解部位是Ig铰链区二硫键连接的两
条重链在近N-端，可将Ig裂解为两个 完全相同的Fab片段和一个Fc片段 Fab片段即抗原结合片段（fragment antigen binding），由一条完整的 轻链和重链的VH和CH1结构域组成，为 单价抗体片段，可与抗体结合，但不 凝集 Fc片段即可结晶片段（fragment cry-stallizable），相当于IgG的 CH2和CH3结构域，无抗原结合活性， 是Ig与效应分子或细胞相互作用的部 位
第十九章抗体药物制备工艺
19.1 概述
19.2 鼠源单克隆抗体的制备
19.3 基因工程抗体
19.1 概 述
19.1.1 抗体与抗原
抗体（antibody，Ab）： 指能与相应抗原 特异性结合的具有免疫功能的球蛋白。
免疫球蛋白（immunoglobulin，Ig）:具有 抗体活性或化学结构与抗体相似的球蛋白
恒定区（constant region，C区）
靠近C-端氨基酸序列相对稳定的区
域
重链和轻链的C区分别称为CH和CL 分别占重链和轻链的3/4和1/2 不同型Ig的CL长度基本一致，但不
抗体工程制药PPT课件
特点：基本上消除了单克隆抗体的鼠源性（免疫原性），相 对分子质量为完整抗体分子的1/3-1/80，原来鼠源性单克隆抗 体的诸多生物学活性已消失，如激活补体、促进吞噬功能 （免疫调理）、抗体依赖细胞介导的细胞毒作用等，只保留 同抗原特异性结合的活性，即仅应用其导向作用，制备导向 药物用于肿瘤治疗
13.11.2020
抗体制药
13.11.2020
1
一、概述
13.11.2020
2
1890年Behring和北里柴三郎等人发现白喉抗毒素， 建立血清疗法，开创了抗体制药
1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、 甲种（α）球蛋白、乙种（β）球蛋白和丙种(γ）球 蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分
13.11.2020
16
动物体内诱生法优点：操作简便，比较经济，所得单 克隆抗体量较多且效价较高，可有效地保存杂交瘤细 胞株和分离已经污染杂菌的杂交瘤细胞株
动物体内诱生法缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多 种杂蛋白，给纯化带来难度
13.11.2020
17
五、单克隆抗体的纯化
根据Ig的类别和亚类的不同，选择不同的纯化方法 根据用途不同选择不同的纯化方法，如用于体外诊断
13.11.2020
5
单克隆抗体：由单一的B淋巴细胞克隆产生的针对一 个抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体
单克隆抗体具有高度特异性、均一性，有稳定来源可 大量生产等特点
单克隆抗体在临床实践中用于疾病的诊断和治疗
13.11.2020
6
基因工程抗体：1984年报道人-鼠嵌合抗体，相继制备出改形 抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等诸多类型
体外免疫法在制备人源性单克隆抗体，或者抗原的免疫原 性极弱且能引起免疫抑制时使用。优点是所需抗原量少， 一般只需几个微克，免疫期短，仅4-5d，干扰因素少，已 成功制备出针对多种抗原的单克隆抗体，但融合后产生的 杂交瘤细胞株不够稳定
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抗体制药
13.11.2020
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一、概述
13.11.2020
2
1890年Behring和北里柴三郎等人发现白喉抗毒素， 建立血清疗法，开创了抗体制药
1937年Tiselius等人用电泳法将血清蛋白分为白蛋白、 甲种（α）球蛋白、乙种（β）球蛋白和丙种(γ）球 蛋白，并证明抗体活性主要存在于丙种球蛋白组分
13.11.2020
16
动物体内诱生法优点：操作简便，比较经济，所得单 克隆抗体量较多且效价较高，可有效地保存杂交瘤细 胞株和分离已经污染杂菌的杂交瘤细胞株
动物体内诱生法缺点：小鼠腹水中混有来自小鼠的多 种杂蛋白，给纯化带来难度
13.11.2020
17
五、单克隆抗体的纯化
根据Ig的类别和亚类的不同，选择不同的纯化方法 根据用途不同选择不同的纯化方法，如用于体外诊断
13.11.2020
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单克隆抗体：由单一的B淋巴细胞克隆产生的针对一 个抗原决定簇的抗体，称为单克隆抗体
单克隆抗体具有高度特异性、均一性，有稳定来源可 大量生产等特点
单克隆抗体在临床实践中用于疾病的诊断和治疗
13.11.2020
6
基因工程抗体：1984年报道人-鼠嵌合抗体，相继制备出改形 抗体、单链抗体、单域抗体、最小识别单位等诸多类型
体外免疫法在制备人源性单克隆抗体，或者抗原的免疫原 性极弱且能引起免疫抑制时使用。优点是所需抗原量少， 一般只需几个微克，免疫期短，仅4-5d，干扰因素少，已 成功制备出针对多种抗原的单克隆抗体，但融合后产生的 杂交瘤细胞株不够稳定
《抗体工程制药》课件
抗体库筛选 技术
利用大规模的抗体 资源库，筛选出具 有特定功能和特异 性的抗体。
亚细胞注射 技术
通过将抗体基因导 入目标细胞内，使 细胞产生和分泌抗 体。
应不 同的临床需求。
四、抗体工程的应用举例
人源化抗体
将动物源性抗体人源化，减少免疫反应，提高 治疗效果。
包括治疗效果的改进、副作用的控制和制药过程的优化。
3
未来展望
抗体工程制药有望成为未来医药领域的主要研究方向和治疗手段。
六、总结
抗体工程制药在疾病治疗和健康保护方面发挥着重要作用，具有广阔的发展前景。 未来，抗体工程制药将继续为人类的健康事业做出重要的贡献。
二、抗体的结构
抗体是一种具有高度多样性的免疫蛋白分子，由两个重链和两个轻链组成。 抗体的变可区域决定了其能够与各种抗原结合的特异性。 抗体与抗原的结合原理是通过抗原的特定位点与抗体的变可区域形成互相匹配的空间结构。
三、抗体工程的基本原理
基因重组技术
通过重新组合DNA 分子的序列，实现 对抗体分子结构的 改变和优化。
《抗体工程制药》PPT课 件
本课件将介绍抗体工程制药的概述、抗体的结构、抗体工程的基本原理、应 用举例、前景与挑战，以及总结。
一、概述
抗体工程制药是指利用生物工程技术，通过对抗体分子结构的改变和优化，研发出具有更好治疗效果和 药物特性的抗体药物。 抗体工程制药已经成为现代医药领域的重要发展方向，为疾病的治疗和健康的保护提供了重要的手段。
家禽源抗体
利用家禽产生的抗体，拓展抗体资源库，满足 临床需求。
孪生抗体
通过将两种不同的抗体结合在一起，实现对多 种疾病的治疗。
可溶可变区域抗体
通过改变抗体可变区域的溶解性，增强其生物 利用度和稳定性。
抗体工程药物ppt课件
20
• 放射免疫显像优点：
–①在体内确切肿瘤定位作用，准确性 达90%，灵敏度达100%。
–②在体内可检出0.5cm大小的病灶，并 可检出肺脑的转移灶。
–③小分子抗体易到达肿瘤部位，可显 著提高N/NT值。
–④抗体在肿瘤部位可保留6-9日。
–⑤能观擦抗体在血中的半衰期和可能 出现的不良反应。
21
建立预定位技术需解决3个问题：
（2）诊断血清的制备步骤
①制备细菌抗原 ②免疫动物和制备抗体血清
12
13
14
2、免疫标记技术用的抗体类试剂
1) 荧光抗体诊断试剂
（1）荧光抗体的制备 （2）免疫荧光测定方法
2) 免疫酶抗体诊断试剂
（1）免疫酶染色法用抗体诊断试剂 （2）酶免疫测定用抗体诊断试剂
3) 放射免疫用抗体诊断试剂
15
酶免疫测定用抗体诊断试剂
• 第一代抗体药物
–动物多价抗血清。 –主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动
免疫治疗。 –具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较
强的人体免疫反应限制了这类药物的应用， 因而逐渐被抗生素类药物所代替。
• 第二代抗体药物 • 第三代抗体药物
3
• 1890年白喉抗毒素，多克隆抗体
4
一、抗体药物的发展历程
2、抗癌药物偶联的抗体药物 常用的抗癌药物
• 氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、 丝裂霉素（MMC）等。
• 以人血浆白蛋白作为中间载体，可 明显提高每分子抗体所携带的MTX量， 使体外细胞毒性体高二倍。
24
3、毒素偶联的抗体药物
1）免疫毒素及其换代制品 在导向药物中，毒素和抗体的交联物称
为免疫毒素。
8
基因工程抗体优点
• 放射免疫显像优点：
–①在体内确切肿瘤定位作用，准确性 达90%，灵敏度达100%。
–②在体内可检出0.5cm大小的病灶，并 可检出肺脑的转移灶。
–③小分子抗体易到达肿瘤部位，可显 著提高N/NT值。
–④抗体在肿瘤部位可保留6-9日。
–⑤能观擦抗体在血中的半衰期和可能 出现的不良反应。
21
建立预定位技术需解决3个问题：
（2）诊断血清的制备步骤
①制备细菌抗原 ②免疫动物和制备抗体血清
12
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2、免疫标记技术用的抗体类试剂
1) 荧光抗体诊断试剂
（1）荧光抗体的制备 （2）免疫荧光测定方法
2) 免疫酶抗体诊断试剂
（1）免疫酶染色法用抗体诊断试剂 （2）酶免疫测定用抗体诊断试剂
3) 放射免疫用抗体诊断试剂
15
酶免疫测定用抗体诊断试剂
• 第一代抗体药物
–动物多价抗血清。 –主要用于一些细菌感染性疾病的早期被动
免疫治疗。 –具有一定的疗效，但异源性蛋白引起的较
强的人体免疫反应限制了这类药物的应用， 因而逐渐被抗生素类药物所代替。
• 第二代抗体药物 • 第三代抗体药物
3
• 1890年白喉抗毒素，多克隆抗体
4
一、抗体药物的发展历程
2、抗癌药物偶联的抗体药物 常用的抗癌药物
• 氨甲喋呤（MTX）、阿霉素（ADM）、 丝裂霉素（MMC）等。
• 以人血浆白蛋白作为中间载体，可 明显提高每分子抗体所携带的MTX量， 使体外细胞毒性体高二倍。
24
3、毒素偶联的抗体药物
1）免疫毒素及其换代制品 在导向药物中，毒素和抗体的交联物称
为免疫毒素。
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基因工程抗体优点
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(1×108)
(2~3×107)
Conventional antiserum is the mixture of all antibodies produced by B cells from spleen. Each hybridoma line can produce pure single antibody, called mon oclonal antibody.
弗氏完全佐剂（Freund’s complete adjuvant,FCA）: 由矿物油（如降脂烷或
液体石蜡等）、乳化剂和灭活的分枝杆菌组成 的乳化佐剂。
弗氏不完全佐剂不含分枝杆菌
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17
免疫佐剂（adjuvant )
（1）定义：先于抗原或同时与抗原混合注射机体
可增强抗原的免疫原性的物质。
2003.4.7.
8
• 多克隆抗体:
31 24
一种抗原具有多个抗原决定簇,每个
抗原决定簇都能刺激一个B细胞产生一种
抗体。这样所获得的免疫血清是多种抗
体的混和物。
• 单克隆抗体(Monoclonal antibody
McAb):
由一个抗原决定簇刺激的、单一的B
细胞和骨髓瘤细胞融合增殖后所产生的、
2003高.4.7.度均一的抗体。
与局部的免疫反应;
免疫球蛋白
• IgD在血清中含量很低;
• IgE在血清含量最少。 2003.4.7.
IgG
IgM IgA
IgD
Ig6 E
抗原刺激的第一至三周，IgM生成；抗原再 刺激后， IgＧ将取代IgM
动物血清中产生抗体的时间示意图
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抗体研究的发展阶段：
①以1890年Behring发现白喉抗毒素为代表,用 抗原免疫动物来获得多克隆抗体。
2003.4.7.
5
免疫球蛋白(immunoglobulin,Ig)分子量范
围从150,000到950,000道尔顿。分五类：
• IgG在血清中含量最高，达75~80%,是抗感染
的主要抗体;
• IgM是五类免疫球蛋白中分子量最大的，为
五聚体,是对一个抗原作出反应时产生的
第一个抗体；
• IgA在黏膜表面、乳腺、泪腺形成，主要参
x
31 24
12 34
Antiseum
A mi2x0tu0r3e.4o.f7a. ll Ab
Monoclonal antibodies
Pure single Ab
If a single B cell was picked up and cultured, then it will prod uce only one kind of antibody.
BIfAEuBfatteccBhrecilBmleislmcl ecfulalnsnpiezrndaootdwitouisntchu,ertsmvhioeyvneemllyowomoeunlasle,eintkhstipehnledefuecosnufelactdunorctneiebt.alolimdnysi,gBwhthcbeicelhlscbpuirnltodudrsuetcoinigd antsdssppereoccdiiffuiicccaeannattinibgtoiebdnoi.edsy. 10
②以1975年Milstein & Kohler创建杂交瘤技
术制备单克隆抗体(McAb)为代表。 ③以1994年Winter,创建了噬菌体抗体库
(repertoire of antibodies displayed on phages)技术,以基因工程方法制备抗体为代 表。在此基础上发展成抗体工程。
二. 单克隆抗体的制备
McAb（Monoclonal antibody，单克隆抗 体）：
将在体外不能长期传代的抗体产生细胞（如 Balb/C小鼠的免疫脾细胞）与在体外能迅速增殖并带 有抗药标记的骨髓瘤细胞（如小鼠的NS-1或SP2/0） 在聚乙二醇（PEG）作用下融合，然后利用抗药性标 记和经稀释法选出单个产生抗体的杂交瘤细胞，再用 血清学方法证实其与抗原结合的特异性和亲和力。这 样的杂交瘤细胞能长期传代同时分泌针对单一抗原上 200单3.4一.7. 抗原表位的抗体，称为McAb（第二代抗体）。 11
二.单克隆抗体的制备
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单
克
隆
抗
体
制
备
过
程
图
解
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单 克 隆 抗 体 制 备 过 程 图 解
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一.抗原与动物免疫
1.抗原选2.免疫动物 — 小鼠(Balb/C,鼠龄6-8周)或 大鼠 (Lou);
（2）应用 ①弱免疫原性物质；
②免疫原剂量不足。
（3）佐剂种类
1)油性乳剂—弗氏佐剂（Freund adjuvant）
2)无机化合物
3)微生物及其产物
4)脂质体
520)0细3.4.7胞. 因子
18
二.细胞融合与杂交瘤细胞的选择性培养
1.细胞融合的基本方法(PEG促融)
脾细胞 骨髓瘤细胞(“永久”细胞)
抗体工程制药
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1
一.概述
抗体(工程)制药—生物技术制药领 域的重要组成部分
2003.4.7.
2
2003.4.7.
3
抗体：能与相应抗原特异性结合的具有
免疫功能的球蛋白。
免疫球蛋白的结构
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4
抗体的产生过程：
机体免疫系统受抗原
物质刺激后，B淋巴 细胞被激活，增殖和
分化为浆细胞，由浆 细胞合成和分泌的球 蛋白。
9
多克隆抗体和单克隆抗体
Antigen 3 1 2 4 Immunization
12 3
Adapted from Milstein (1980) Scientific American, Oct. p.58
1 3
2 4
m m
m m
Spleen cells
B cell
1
+ Myeloma
4
23 4
Cell fusion
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3.常用的骨髓瘤细胞系— SP2/0，P3.653细 胞，都是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转移酶 (HGPRT)的缺乏株。
4.免疫方法: 体外免疫法；体内免疫法
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体内免疫法 ---- 颗粒性抗原(如细菌、细胞)
的免疫原性强,可不加佐剂,可溶性抗原则按每 只小鼠10-100ug抗原与弗氏完全佐剂等量混 合后注入腹腔内.