下载文档原格式
第2课时实验操作及实验结果[学习目标] 1.学会培养基的制备方法。
2.掌握大肠杆菌的纯化方法。
3.了解菌种保藏所用的方法。
知识点一制备牛肉膏蛋白胨固体培养基知识梳理1.操作步骤2．倒平板(1)在火焰旁右手拿锥形瓶，左手□01拔出棉塞。
(2)右手拿锥形瓶，使锥形瓶的瓶口迅速通过□02火焰。
(3)左手将培养皿打开一条缝隙，右手将培养基(约10～20 mL)倒入培养皿，左手立刻盖上□03皿盖。
(4)待平板冷却凝固后，将平板□04倒过来放置，使皿盖在下、皿底在上。
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。
你用什么办法来估计培养基的温度？提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。
2．为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？提示：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
典题分析题型一培养基的制备过程分析[例1]下列关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是()A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯C．待培养基冷却至50 ℃左右时倒平板D．待平板冷却凝固后将平板倒过来放置解题分析制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的步骤是计算、称量、溶化、灭菌、倒平板，其顺序不能颠倒，A错误；牛肉膏比较黏稠，所以称好后需将称量纸一同放入烧杯中加热，当牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸，B 正确；待培养基冷却至50 ℃左右，开始倒平板，C正确；平板冷却凝固后倒置，D正确。
[答案] A知识拓展(1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃左右时才能倒平板，温度过高会烫手，温度过低培养基又会凝固。
(2)整个操作在酒精灯火焰旁进行，避免周围环境中微生物的污染。
(3)平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
(4)倒平板时不要将培养基溅在皿盖与皿底之间，否则此培养基不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
高中生物浙科版选修一知识点归纳选修一生物技术实践知识点总结第一部分微生物的利用一、微生物实验室培养的基本操作程序1、器具的灭菌：P20-21，灭菌前，试管加棉花塞或塑料盖、三角瓶用封口膜或6层纱布封口……最后各种用品均需用牛皮纸或报纸包好，用高压蒸汽灭菌法（121C，1kg/cm2压力）灭菌15min。
值得注意的是，实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。
灭菌后，通常将实验用具放入60～80℃的烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。
在进行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到超净台上。
在超净台工作之前，应先打开超净台的紫外灯和过滤风，工作时关闭紫外灯。
塞子制作的好坏是控制污染发生的关键。
2、培养基的配制：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质。
①培养基种类尺度培养基类型固体培养基液体培养基合成培养基天然培养基鉴别培养基配制特点加入琼脂不加入琼脂由已知成分配制而成由天然身分派制而成添加某种唆使剂或化学药剂主要应用菌种分离,鉴定,计数、保存菌种的扩大培养菌种的鉴别菌种的分离按物理性质分按化学组身分按用途分②微生物培养的培养基：LB培养基。
配制培养基时需考虑营养物质的配比外，还需要考虑微生物生长对pH、氧气、渗透压等的要求。
“细菌喜荤，霉菌喜素”，通常细菌培养基要用卵白胨和酵母提取物来配制，还要加入一定量的氯化钠，以维持一定的渗透压；霉菌培养基一般用无机物配制或添加蔗糖的豆芽汁即可。
此外．细菌通常要求在中性偏碱的环境中生长，霉菌要求在中性偏酸的环境中生长。
选择培养基添加（或短少）某种化学身分3、培养基的灭菌：通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。
但假如培养基中有葡萄糖，为防止葡萄糖分解碳化，要用500g/cm压力（90C以上）灭菌30min。
有些不能加热灭菌的化合物，如尿素（加热会分解）等，只能用G6玻璃砂漏斗过滤，但玻璃砂漏斗使用前也要在121℃下用纸包好灭菌。
专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养理一理判一判1.所有的培养基中都要加入琼脂。
(×)2．微生物在液体培养基表面生长可形成菌落。
(×)3．培养不同微生物的培养基成分完全一样。
(×)4．培养纯净培养物的关键是防止杂菌污染。
(√)5．相对于消毒，灭菌对微生物的杀灭更彻底。
(√)6．无菌操作的对象只要是没有生物活性的材料(如培养基、接种环等)都可采用高压蒸汽灭菌法进行灭菌。
(×)7．培养基最常用的灭菌方法是高压蒸汽灭菌。
(√)8．倒平板后，待平板冷凝之后需将其倒置。
(√)9．若皿盖和皿底之间溅上培养基，这个培养基不可再用。
(√)10．采取平板划线接种法时，每一次划线前都要挑取菌种。
(×)11．对微生物进行计数时最好采用稀释涂布平板法。
(√)12．需要一个不接种的培养基放在相同条件下培养以检验培养基的灭菌是否合格。
(√)悟一悟1.牛肉膏提供的主要营养是碳源、氮源、磷酸盐和维生素，蛋白胨提供的主要营养是碳源、氮源和维生素。
2．溶化后如需调整pH，应先调节pH，再灭菌。
3．培养基灭菌后要冷却到50 ℃左右时开始倒平板，其原因是琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃会烫手，低于50 ℃时，若不及时操作，琼脂会凝固。
4．倒平板时，要使锥形瓶的瓶口通过火焰。
通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
5．平板冷凝后，要将平板倒置。
因为平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，既可以防止皿盖上的水珠落入培养基，又可避免培养基中的水分过快地蒸发。
6．在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，那么这个平板不能用来培养微生物，因为空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生。
感悟体会：练一练1.[2019·江苏高考题]下列关于微生物实验操作的叙述，错误的是( )A．培养微生物的试剂和器具都要进行高压蒸汽灭菌B．接种前后，接种环都要在酒精灯火焰上进行灼烧C．接种后的培养皿要倒置，以防培养污染D．菌种分离和菌落计数都可以使用固体培养基解析：接种室、接种箱等常用紫外线消毒法处理，接种环等常用灼烧灭菌法处理，吸管、培养皿等常用干热灭菌法处理，培养基及多种器材用高压蒸汽灭菌法处理，A项错误；为了防止杂菌污染，每次接种前后，接种环都要进行灼烧灭菌，B项正确；接种后，培养皿需要倒置，以防皿盖上水珠落入培养基造成污染，C项正确；分离菌种可以用平板划线法和稀释涂布平板法，后者还可以用于微生物的计数，所用培养基为固体培养基，D项正确。
专题二微生物的培养与应用课题一微生物的实验室培养·培养基：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制出供其生长繁殖的营养基质，是进行微生物培养的物质基础。
·培养基按照物理性质可分为液体培养基半固体培养基和固体培养基。
在液体培养基中加入凝固剂琼脂（是从红藻中提取的一种多糖，在配制培养基中用作凝固剂）后，制成琼脂固体培养基。
微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
根据菌落的特征可以判断是哪一种菌。
液体培养基应用于工业或生活生产，固体培养基应用于微生物的分离和鉴定，半固体培养基则常用于观察微生物的运动及菌种保藏等。
·按照成分培养基可分为人工合成培养基和天然培养基。
合成培养基是用成分已知的化学物质配制而成，其中成分的种类比例明确，常用于微生物的分离鉴定。
天然培养基是用化学成分不明的天然物质配制而成，常用于实际工业生产。
·按照培养基的用途，可将培养基分为选择培养基和鉴定培养基。
选择培养基是指在培养基中加入某种化学物质，以抑制不需要的微生物生长，促进所需要的微生物的生长。
鉴别培养基是根据微生物的特点，在培养基中加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴别不同类别的微生物。
·培养基的化学成分包括水、无机盐、碳源、氮源、生长因子等。
·碳源：能为微生物的代谢提供碳元素的物质。
如CO2、NaHCO3等无机碳源；糖类、石油、花生粉饼等有机碳源。
异养微生物只能利用有机碳源。
单质碳不能作为碳源。
·氮源：能为微生物的代谢提供氮元素的物质。
如N2、NH3、NO3-、NH4+（无机氮源）蛋白质、氨基酸、尿素、牛肉膏、蛋白胨（有机氮源）等。
只有固氮微生物才能利用N2。
·培养基还要满足微生物生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
例如，培养乳酸杆菌时需要在培养基中添加维生素，培养霉菌时须将培养基的pH调至酸性，培养细菌是需要将pH调至中性或微碱性，培养厌氧型微生物是则需要提供无氧的条件·无菌技术·获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵，要注意以下几个方面：①对实验操作的空间、操作者的衣着和手，进行清洁和消毒。
1、培养基的类型及其应用注意：（1）选择培养基：①特点：培养基中加入有利某种微生物生长繁殖所需的营养物质，以抑制或阻止不需要的微生物的生长，促进所需要的微生物的生长；②用途：选择出用于培养、分离出特定的微生物 (如培养酵母菌和霉菌，可在培养基中加入青霉素；培养金黄色葡萄球菌，可在培养基中加入高浓度食盐) （2）鉴别培养基：①特点：根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指示剂或者化学药品；②用途：鉴别不同种类的微生物，如可用伊红—美蓝培养基鉴别饮用水或乳制品中是否有大肠杆菌(若有，菌落呈深紫色，并带有金属光泽)2、培养基的营养成分：水、无机盐、碳源、氮源。
还要满足微生物生长对PH、特殊营养物质以及氧气的要求。
3、无菌技术——（微生物接种技术的核心）获得纯净培养物的关键是：防止杂菌污染。
（1）消毒指使用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）。
分为煮沸消毒法，巴氏消毒法（不耐高温的液体，如牛奶。
原因：可以杀死牛奶中的微生物，并且使牛奶的营养成分不被破坏。
）化学药剂消毒法（如酒精、氯气、石碳酸等），紫外线消毒法（原理：破坏DNA的结构）。
（2）灭菌是指使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。
分为灼烧灭菌法（接种环、接种针等金属工具、试管口）、干热灭菌法（吸管、培养皿等玻璃器皿、金属用具，所用器械是干热灭菌箱）、高压蒸汽灭菌（培养基、无菌水等，所用器械是高压蒸汽灭菌锅）（3）防止杂菌污染的操作：在酒精灯火焰旁拔出锥形瓶瓶盖；在酒精灯火焰旁打开培养皿一条缝；打开的锥形瓶的瓶口通过火焰；平板冷却凝固后倒置。
4、制作牛肉膏蛋白胨固体培养基：计算—称量—溶化—灭菌—倒平板（1）各营养成分都有且有一定的比例。
牛肉膏提供碳源、氮源和生长因子等；蛋白胨提供碳源、氮源和生长因子等；琼脂作为凝固剂。
（2）要将平板倒置的原因：防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
5、纯化大肠杆菌（1）纯化方法：微生物接种的方法，最常用的是平板划线法和稀释涂布平板法。
高三一轮限时规范训练选修1第1讲微生物的培养和利用(时间：45分钟)A级基础演练1．(经典题)平板划线法和稀释涂布平板法是纯化微生物的两种常用方法，下列描述正确的是( )。
A．都要将菌液进行一系列的梯度稀释B．平板划线法是将不同稀释度的菌液通过接种环在固体培养基表面连续划线的操作C．稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液倒入液体培养基进行培养D．都会在培养基表面形成单个的菌落解析平板划线法不需要进行梯度稀释，稀释涂布平板法是将不同稀释度的菌液滴加到固体培养基的表面。
平板划线法和稀释涂布平板法都能在培养基表面形成单个菌落。
答案 D2．(2012·合肥四校质检)下列有关培养基和菌种鉴定的叙述不正确的是( )。
A．植物组织培养常用的是固体培养基B．可利用固体培养基上菌落的特征来判断和鉴别细菌的类型C．利用刚果红培养基上是否形成透明圈来筛选纤维素分解菌D．在无氮培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌解析在只含有尿素作为氮源的培养基中加入酚红指示剂鉴定尿素分解菌。
答案 D3．下列是关于“检测土壤中细菌总数”实验操作的叙述，其中错误的是( )。
A．用蒸馏水配制牛肉膏蛋白胨培养基，经高温、高压灭菌后倒平板B．取104、105、106倍的土壤稀释液和无菌水各0.1 mL，分别涂布于各组平板上C．将实验组和对照组平板倒置，37 ℃恒温培养24～48 hD．确定对照组无菌后，选择菌落数在300以上的实验组平板进行计数解析在细菌计数时，为保证实验结果的准确性，一般选择菌落数在30～300的平板进行计数，求出平均数，再根据对应的稀释度计算出样品中的细菌数。
答案 D4．用稀释涂布平板法测定同一土壤样品中的细菌数，在对应稀释倍数为106的培养基中，得到以下几种统计结果，正确的是( )。
A．涂布了一个平板，统计的菌落数是230B．涂布了两个平板，统计的菌落数是215和260，取平均值238C．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是21、212和256，取平均值163D．涂布了三个平板，统计的菌落数分别是210、240和250，取平均值233解析在设计实验时，一定要涂布至少3个平板作为重复组，才能增强实验的说服力与准确性，所以A、B不正确。
生物选修一常考知识点梳理生物选修一常考知识点梳理一、传统发酵技术1.果酒制作：1)原理：酵母菌的无氧呼吸反应式：C6H12O6 2C2H5OH+2CO2+能量。
2)菌种来源：附着在葡萄皮上的野生酵母菌或人工培养的酵母菌。
3)条件：18-25℃，密封，每隔一段时间放气(CO2)4)检测：在酸性条件下，重铬酸钾与酒精反应呈灰绿色。
2、果醋制作：1)原理：醋酸菌的有氧呼吸。
O2，糖源充足时，将糖分解成醋酸O2充足，缺少糖源时，将乙醇变为乙醛，再变为醋酸。
C2H5OH+O2CH3COOH+H2O2)条件：30-35℃，适时通入无菌空气。
3、腐乳制作：1)菌种：青霉、酵母、曲霉、毛霉等，主要是毛霉(都是真菌)。
2)原理：毛霉产生的蛋白酶将豆腐中的蛋白质分解成小分子的肽和aa;脂肪酶将脂肪水解为甘油和脂肪酸。
3)条件：15-18℃，保持一定的湿度。
4)菌种来源：空气中的毛霉孢子或优良毛霉菌种直接接种。
5)加盐腌制时要逐层加盐，随层数加高而增加盐量，盐能抑制微生物的生长，避免豆腐块腐败变质。
4、泡菜制作：1)原理：乳酸菌的无氧呼吸，反应式：C6H12O62C3H6O3+能量2)制作过程：①将清水与盐按质量比4：1配制成盐水，将盐水煮沸冷却。
煮沸是为了杀灭杂菌，冷却之后使用是为了保证乳酸菌等微生物的生命活动不受影响。
②将新鲜蔬菜放入盐水中后，盖好坛盖。
向坛盖边沿的水槽中注满水，以保证乳酸菌发酵的无氧环境。
3)亚硝酸盐含量的测定：①方法：比色法;②原理：在盐酸酸化条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸发生重氮化反应后，与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合形成玫瑰红色染料。
二、微生物的培养与应用1、培养基的种类：按物理性质分为固体培养基和液体培养基，按化学成分分为合成培养基和天然培养基，按用途分为选择培养基和鉴别培养基。
2、培养基的成分一般都含有水、碳源、氮源、无机盐P143、微生物在固体培养基表面生长，可以形成肉眼可见的菌落。
选修一微生物的培养和利用（一）微生物实验基础知识微生物所需要的营养物质营养成分主要种类作用碳源CO2、NaHCO3糖类、脂肪酸等①构成微生物的细胞物质和一些代谢产物②异养微生物的主要能源物质氮源N2、NH3、铵盐、硝酸盐尿素、牛肉膏和蛋白胨构成微生物的细胞物质和一些代谢产物生长因子维生素、氨基酸、嘌呤碱和嘧啶碱等补充微生物生物必需的微量有机物其他水无机盐培养基的种类及用途划分依据种类用途物理性质固体培养基微生物的分类和鉴定半固体培养基观察微生物的运动、保存菌种液体培养基工业生产化学成分天然培养基工业生产合成培养基微生物的分类和鉴定用途选择培养基分离菌种鉴别培养基鉴别不同种类的微生物（如饮用水中大肠杆菌的鉴定）实验室条件下的无菌技术方法应用范围灭菌高压蒸气灭菌培养基、培养皿、移液管等高温灼烧接种环、玻璃刮刀等接种器具紫外或熏蒸灭菌接种室、接种箱、超净工作台过滤法消毒酒精、次氯酸钠等化学试剂实验材料（如外植体）、工作台和器具、培养空间高温煮沸某些实验的器具获得微生物纯种的方法之一—平板划线法1）用接种环蘸菌液后在含有固体培养基的培养皿平板上划线，则在划线的过程中菌液逐渐减少，菌体数量也逐渐减少，菌间的距离增大。
在培养10-20小时后，划线末处可观察到由一个菌产生的单菌落；如果再挑取它们后，接种至含有固体培养基的试管斜面上，在斜面上划线，则每个斜面的菌群就是由一个菌产生的后代（或纯种）。
2）利用选择培养基进行分离3）液体稀释涂布法微生物相关实验大肠杆菌的培养和分离【实验原理】【材料用具】略【实验步骤】注意：使用过的培养基及其培养物必须经过灭菌处理后才能丢弃。
【思考题】⑴ 本实验所涉及的器材及操作需要无菌。
培养基的灭菌方法是___________________,接种环的灭菌方法是_____________，接种操作要在超净工作台酒精灯火焰旁边进行。
⑵ 倒平板操作时，待固体培养基冷却至____________℃时，在酒精灯火焰旁，将融化的固体培养基倒在____________里，立即置于_________位置上，轻轻晃动，使培养基铺满平皿底部。
⑶ 在固体培养基的平板上连续划线时，接种环蘸取菌液__________次。
划线后将培养皿_____________放于_____________℃的_____________中培养。
⑷ 液体培养基常用于菌种的活化和扩大培养，和大肠杆菌固体培养基相比，配制液体培养基时，不需要加入_________。
在无菌条件下，用接种环把大肠杆菌接种于液体培养基中，置于__________上，在__________℃条件下________培养，一定时间后可观察到菌液由__________变___________。
【解析】⑴ 高压蒸汽灭菌火焰灼烧灭菌⑵ 60 培养皿水平⑶ 一倒置 37 恒温培养箱⑷ 琼脂摇床 37 振荡澄清浑浊【练习题】1. 本实验中配置培养基加入的琼脂是为了A．提供碳源 B．提供氮源C．使培养基成凝胶状 D．给细菌提供生长因子2．固体培养基配置完成并经过高温消毒后，要趁热倒平板，原因是A．趁热倒平板可以对培养皿进行消毒和灭菌B．培养基冷却后会凝固，不能再均匀倒平板C．保证培养基中的营养成分不会流失D．为微生物的培养提供适宜的温度条件3．下列关于大肠杆菌的表述，不正确的是A．细胞中有复杂的膜结构的细胞器B．在有氧条件下进行有氧呼吸，无氧条件下进行无氧呼吸C．除了拟核外，在细胞质中还有许多小的环状DNA分子D．常作为基因工程目的基因的受体菌4．若要较好地观察到单个细菌增殖后代的菌落，在本实验操作中最好的接种方法是A．用接种环在培养基表面轻点若干点迹B．用接种环在培养基表面轻划一条或几条S线C．将接种环插入培养基浅层后轻轻移出D．将接种环在培养基表面反复涂抹数次5．⑴ 在大肠杆菌培养过程中，除考虑营养条件外，还要考虑______、______和渗透压等条件。
由于该细菌具有体积小、结构简单、变异类型容易选择、______、______等优点，因此常作为遗传学研究的实验材料。
⑵ 在微生物培养操作过程中，为防止杂菌污染，需对培养基和培养皿进行________（消毒、灭菌）；操作者的双手需要进行清洗和______；静止空气中的细菌可用紫外线杀灭，其原因是紫外线能使蛋白质变性，还能__________。
⑶ 若用稀释涂布平板法计数大肠杆菌活菌的个数，要想使所得估计值更接近实际值，除应严格操作、多次重复外，还应保证待测样品稀释的_______。
⑷ 通常，对获得的纯菌种还可以依据菌落的形状、大小等菌落特征对细菌进行初步的____________。
⑸ 培养大肠杆菌时，在接种前需要检测培养基是否被污染。
对于固体培养基应采用的检测方法是_________。
⑹ 若用大肠杆菌进行实验，使用过的培养基及其培养物必须经过_______处理后才能丢弃，以防止培养物的扩散。
【练习题解析】1.C2.B3.A4.B5.⑴温度，酸碱度，易培养，生活周期短；⑵灭菌，消毒，损伤DNA的结构。
⑶比例合适⑷鉴定（或分类）；⑸将未接种的培养基在适宜的温度下放置适宜的时间，观察培养基上是否有菌落产生。
⑹灭菌。
分离以尿素为氮源的微生物【实验原理】⑴利用选择培养基筛选尿素分解菌选择培养基：将允许特定种类的微生物生长，同时抑制或阻止其他种类微生物生长的培养基叫选择培养基。
不同微生物利用氮源种类不同。
脲或称尿素，是蛋白质降解的产物。
人和其他哺乳动物的尿中都含有尿素，大量的尿素存在对环境造成污染。
有一些细菌含有脲酶，通过降解尿素作为其生长的氮源。
这类细菌对于自然界中的氮素循环具有重要的意义。
酚红作为酸碱指示剂被添加到了培养基中，其变色范围是pH6.4～8.2，在酸性情况下呈黄色，碱性情况下呈红色。
以尿素为氮源的微生物培养一段时间后，由于细菌产生的脲酶向周围扩散，将培养基中的尿使培养基的pH由原来的中性变为碱性，于是培养基中的酚红由黄色变成素分解，产生的NH3红色，圆形红色区域愈大，表明这种菌利用尿素的能力愈强。
用液体稀释涂布法测定菌体数量，分离菌种【土样的获得】在有哺乳动物排泄物的地方取得【实验步骤】【问题思考】⑴ 因为尿素在高温条件下容易分解，所以本实验中，采用了_________方法除去尿素溶液中的微生物。
⑵ 本实验中利用_________的 _________培养基，采用了_____________进行分离和记数尿素分解菌。
⑶ 预测本实验的结果是：LB全营养固体培养基上的菌落_______；尿素固体培养基上的菌落________，一定时间内，菌落周围出现________区域。
用浓度为10-4和土壤10-5土壤稀释液接种，更容易形成单菌落的是________________。
【解析】⑴ 过滤⑵ 不含其他氮源选择液体稀释涂布法⑶多而杂少而纯红色区域 10-5土壤稀释液【练习题】1．若要分离土壤中的尿素分解菌，对于采集和处理土壤样品，下列表述不正确的是A．最好选择在肥沃湿润、动物排泄物多的土壤中取样B．采集的土样需经高温灭菌后，才可以用于制取土壤稀释液C．制备土壤稀释液时，要用无菌水D．用于制备土壤稀释液的各种器具要经过灭菌2．下列表述正确的是A．只有细菌可以分解尿素B．在尿素作为唯一氮源的培养基上，只有一种微生物可以生长C．土壤中尿素分解菌的存在有利于植物的N素营养D．若要分离出土壤中能独力固氮的微生物，可用尿素培养基3．工作人员为了解某种细菌的发酵进程，连续取样检测培养液中的细菌数目。
已知开始时细菌的数量约为2×104个／mL。
工作人员在培养的不同时间进行4次连续取样，分别进行如下稀释处理，再分别取第一次取样稀释103倍、第二次取样稀释105倍、第三次取样稀释106倍、第四次取样稀释106倍的菌液1mL，接种于装有已灭菌的培养基的①、②、③、④号培养皿中培养48小时，检查其菌落数目。
菌液 9mL水 9mL水9mL水9mL水9mL水9mL水图1 对不同时间取样的菌液分别进行稀释(数据表示稀释倍数)图2 对不同时间取样的稀释菌液进行培养得到如下结果：①、②、③、④培养皿中的菌落数分别是19个、25个、46个、47个。
请根据以上资料回答下列问题：⑴ 接种细菌培养液于平板上的方法为__________。
四次取样测得的培养液中实际的菌体数分别是每毫升________、_______、_______、_________个。
⑵ 用该种方法测得的细菌数量是＿＿＿＿＿＿（活或死）菌的数目，原因是_________________。
【练习题解析】1.B2.C3.⑴ 液体涂布法1.9×104、2.5×106、4.6×107、4.7×107⑵活，活菌能够通过繁殖形成菌落观察土壤中能水解纤维素的微生物【实验原理】植物的细胞壁主要由纤维素、木质素和半纤维素组成。
在枯树或草炭土中有许多能利用和分解这些物质作为能量和物质来源的微生物。
他们可以将土壤中的枯枝落叶分解，并用于纤维素酶的生产。
已经发现并用于生产纤维素酶的菌种有绿色木霉、变异青霉、黑曲霉和根霉。
纤维素酶是一类酶的总称，不是单一的一种酶，共同作用把纤维素分解为葡萄糖。
【土样的选择】草炭土或枯树周边的土样【实验步骤】【练习题】1．有关土壤中的纤维素分解菌，下列表述不正确的是A．在生态系统中属于分解者，包括真菌和细菌等B．可以人工培养纤维素分解菌，以获得纤维素酶C．人的消化道内有纤维素分解菌共生D．在自然界的物质循环中起到重要的作用2．有关观察纤维素分解菌分解作用的实验，下列表述正确的是A．土壤样品起到了选择培养基的作用，只允许纤维素分解菌生长B．用无菌水调整土壤湿度，以排除水中其他营养元素影响实验结果C．可以用其他含有纤维素的物质代替卷烟纸进行该实验D．本实验能分离出纯度很高的纤维素分解菌3．蓝色牛仔裤是深受人们洗爱的休闲或工作服装，常用极粗的棉布制成。
为了外观和舒适，过去在加工过程中常用“石洗”的方法，就是把成捆的布料和浮石放在一架大机器中翻滚。
现在用一定量的纤维素酶洗布料，同时放入蓝靛染料，当达到所希望的柔软度，立即冲洗掉纤维素酶，被称为“生物石洗”。
请根据上述资料，回答下列问题：⑴ 自然界中纤维素的来源是______________________________________。
它是___________________的主要结构成分。
⑵ 纤维素酶增加棉布布料柔软度的原因是_____________________，该酶还可用于植物细胞工程中。
具体应用是_____________________________________。
⑶ 某研究性学习小组同学，为了从土壤中筛选纤维素分解菌，利用下列材料和用具进行了实验，请你完善下列实验步骤。
