4株对虾肠道益生菌的筛选及鉴定

水产动物益生菌的筛选及应用韩卓然;孙敬锋【期刊名称】《水产科学》【年(卷),期】2016(035)001【总页数】6页(P93-98)【关键词】水产动物;益生菌;筛选;应用【作者】韩卓然;孙敬锋【作者单位】天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384;天津农学院水产学院,天津市水产生态及养殖重点实验室,天津300384【正文语种】中文【中图分类】S917.4随着水产养殖业的发展和养殖强度的增加，水产动物病害爆发频繁。

传统的抗生素药物虽然对治疗疾病有积极效用，但长期使用会产生巨大的负面效应：病原菌产生耐药性，效力下降[1]；药物残留干扰水产动物肠道内有益微生物菌群的生长和繁殖，影响水产动物的健康；残留在水体中的抗生素破坏养殖生态环境，水产品质量下降。

近年来，我国水产品因药物残留而出口受阻的事件屡见不鲜，给我国水产业造成巨大损失。

1974年Parker[2]首创益生菌一词，最早提出益生菌有利于肠道微生态平衡。

目前普遍认为，益生菌的作用主要是改善动物新陈代谢、提高营养物质吸收利用率和免疫力、减少环境污染等[3]。

益生菌因具有无毒、无残留、无抗药性、无污染等特点，逐渐被广泛应用。

益生菌菌群与病原菌竞争黏膜附着位点和营养方式，降低病原菌活性，阻止病原菌黏附，使养殖动物获得稳定适宜的微生物环境[4]。

1.1.1 竞争黏附位点益生菌黏附定殖于宿主体内是发挥作用的前提。

益生菌进入机体后，最先发挥的作用就是与病原菌竞争附着位点[5]。

有研究表明，黏附力强的植物乳酸菌ST-Ⅲ(Lactobacillus plantarum CGMCC)与致病菌共同作用于肠细胞时，通过竞争性占位效应形成生物膜，抑制致病菌的黏附和侵入，保护了细胞膜的完整性，使宿主细胞免受损伤[6]。

益生菌和病原菌的黏附机制相似，益生菌分泌一种以蛋白为主要成分的黏附素，介导其黏附至肠黏膜上皮细胞，所以益生菌易于与病原菌竞争附着位点。

《四种有机酸对凡纳滨对虾生长、免疫和肠道菌群的影响》一、引言凡纳滨对虾作为一种重要的水产养殖品种，其生长、免疫和肠道菌群的研究对于提高养殖效益和保障食品安全具有重要意义。

近年来，有机酸作为一种新型的饲料添加剂，在动物营养学和养殖业中得到了广泛的应用。

本文旨在探讨四种有机酸（如苹果酸、柠檬酸、乳酸和乙酸）对凡纳滨对虾的生长、免疫和肠道菌群的影响。

二、材料与方法1. 实验材料实验所用凡纳滨对虾购自当地水产市场，健康无病。

四种有机酸分别为苹果酸、柠檬酸、乳酸和乙酸，均购自国内知名化学试剂公司。

2. 实验方法将凡纳滨对虾随机分为四组，每组设置三个平行组。

分别在饲料中添加不同浓度的四种有机酸，对照组不添加任何添加剂。

实验周期为60天，期间记录对虾的生长情况、免疫指标和肠道菌群变化。

三、实验结果1. 对虾生长情况实验结果显示，添加四种有机酸的实验组对虾生长速度均有所提高，其中以乳酸组最为显著。

与对照组相比，各实验组对虾的体长和体重均有所增加，且差异具有统计学意义（P<0.05）。

2. 对虾免疫指标通过检测各实验组对虾的血清免疫指标，发现添加有机酸的实验组对虾的免疫球蛋白（IgM）含量显著提高，说明有机酸可以增强对虾的免疫能力。

此外，四种有机酸对凡纳滨对虾的抗病能力也有一定程度的提高。

3. 对虾肠道菌群通过对各实验组对虾肠道菌群的分析，发现添加有机酸的实验组对虾肠道中的有益菌群数量增加，有害菌群数量减少。

其中，乳酸组和苹果酸组的效果最为明显。

四、讨论本文研究表明，四种有机酸对凡纳滨对虾的生长、免疫和肠道菌群均具有积极影响。

这可能与有机酸能够提供能量、调节肠道pH值、促进有益菌群生长等作用有关。

此外，有机酸还能提高对虾的抗病能力，降低养殖过程中的疾病发生率，从而提高养殖效益。

在四种有机酸中，乳酸的效果最为显著。

这可能与乳酸能够降低肠道pH值，抑制有害菌群生长有关。

因此，在实际养殖过程中，可以考虑在饲料中适量添加乳酸等有机酸，以提高凡纳滨对虾的生长性能和免疫力。

对虾益生菌筛选及应用
一、益生菌的种类：（1）净化水质和修复养殖水体；（2）抗菌、抗病毒；（3）
调节免疫力；（4）促进消化酶活性，提高饲料转化率（5）促生长。

二、筛选条件：（1）体外实验判断菌株对致病菌是否有拮抗作用；(2)研究侯
选菌在相关宿主消化道定殖(cololliz,dion)的可能性：(3)人工感染试验：以确定侯选菌能提高宿主的抗病力。

三、菌种：在水产动物饲料目前添加的益生菌菌种主要有酵母菌和以凝固芽
孢杆菌、枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆苗为主的芽孢杆菌属以及能够调节水产动物肠道功能的乳酸杆菌属等，而乳酸杆菌是应用最多的益生菌添加剂，弧菌属．假单气胞属、芽抱杆菌属等益生菌在水产养殖上的应用多集中于育苗上。

目前报道的对虾益生菌有：（1）杆菌类坚强芽孢杆菌、蜡状芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、美人鱼发光杆菌等；（2）弧菌：产钠弧菌、溶藻弧菌等；（3）假单胞菌属：橙色假交替单胞菌、嗜盐单胞菌、中间气单胞菌等。

四、益生菌鉴定方法：（1）16S rRNA基因鉴定（2）Biolog微生物自动鉴定
系统（3）气相色谱鉴定细菌脂肪酸（4）ATB微生物自动鉴定与药敏分析五、益生菌筛选常用培养基：
2216E 海水琼脂培养基：
pH 7.6—7.8
海水营养培养基：
对虾抑菌筛选鉴定及应用流程图。

南美白对虾4种病原体可视化快速检测试剂盒（生物芯片法）的研发作者：宋居易刘昱辰张苏楠江高伟杨华卫来源：《江苏农业学报》2020年第03期摘要：利用反向點杂交技术，研制灵敏度较高的南美白对虾4种病原体检测试剂盒，其检测指标包括致对虾急性肝胰腺坏死病副溶血弧菌（VpAHPND）、对虾白斑综合征病毒（WSSV）、对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒（IHHNV）、对虾肝肠胞虫（EHP），用重组质粒分别对其进行了最低检测限测试，并与现有推荐方法进行比较。

本研究研发的检测试剂盒对4种病原体的最低检测限为1 μl 10～100 拷贝。

特异性检测结果表明，4种病原体彼此不产生交叉反应，特异性良好，与各病原体推荐检测方法的结果相比，阳性符合率完全一致。

本研究研发的检测试剂盒具有操作方便，灵敏度高，特异性好，检测时间短，设备要求简单等特点，适合应用于南美白对虾VpAHPND、WSSV、IHHNV、EHP的检测、筛查工作中。

关键词：南美白对虾;病原体;生物芯片法;反向点杂交技术中图分类号：S945.4文献标识码：A文章编号：1000-4440（2020）03-0656-10Development of a rapid visualization detection kit （biochip method） for four pathogens in Penaeus vannameiSONG Ju-yi1，LIU Yu-chen2，ZHANG Su-nan2，JIANG Gao-wei2，YANG Hua-wei2（1.Jiangsu Institute of Agriculture Sciences for Region along the Yangtze River， Rugao 226541， China;2.Jiangsu Huntarray Biological Technology Co.， Ltd.， Nantong 226400，China）Abstract：The reverse hybridization technique was used to develop the rapid visualization detection kit （biochip method） for four pathogens in Penaeus vannamei. The detection indices included acute hepatopancreatic necrosis disease-causing Vibrio parahaemolyticus （VpAHPND），white spot syndrome virus （WSSV）， infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus （IHHNV）， Enterocytozoon hepatopenaei （EHP）. The recombinant plasmid was used to test the minimum detection limit， and the results based on kits were compared with those based on the common methods. The minimum detection limit of four pathogens based on this detection kit was 10-100 copies per microliter. In addition， the results of specificity tests showed that there was no cross-reaction among four pathogens. Compared with the results of the recommended detection methods，the positive coincidence rate was completely consistent. The detection kit introduced in this study has the characteristics of easy operation， high sensitivity， good specificity， short detection time and simple equipment. It is suitable for the screening and detection of VpAHPND， WSSV， IHHNV and EHP in Penaeus vannamei.Key words：Penaeus vannamei;pathogen;biochip method;reverse hybridization technique南美白对虾是重要的经济虾品种，具有较大的经济效益和社会效益[1-3]。

对虾养殖中，益生菌到底是液体状好，还是粉末状好？前言：目前，益生菌因其提高水产养殖效率的有效性，而成为一种流行的做法。

养殖户利用微生物解决水污染问题，处理有机残留物，改善虾的健康。

但是，当今市场上微生物种类繁多，成分各不相同，养殖户需要了解如何为虾选择合适的益生菌。

而益生菌现在分为液体和粉末两种，不少人不知道如何使用它，它的用途是否相同。

通过这篇文章，笔者将展示液体益生菌和粉状益生菌之间的特点，以及这两种益生菌之间的有效性，到底是哪一种更有效。

一、益生菌对养虾的好处。

在对虾养殖中，常用有益微生物（又称有益菌），有：芽孢杆菌、硝化杆菌、亚硝化单胞菌等益生菌，益生菌将还能处理氨氮、亚盐等有毒气体。

而微生物生物处理方法主要分为两大类：1、好氧法：该方法适用于好氧微生物，这些微生物需要充足的氧气才能繁殖和生长，有机物的分解将依靠这些微生物进行氧化过程。

2、厌氧法：该方法适用于厌氧微生物，可在不需要溶解氧的环境中工作。

其处理能力还与初级物质含量、悬浮液、有机物含量等良好因素有关。

影响它们反应速率的因素是水中的溶解氧量、pH值、营养物质、温度和其他微量元素。

二、液体状益生菌和粉末状益生菌的区别。

1、粉状益生菌：该类益生菌的细胞被抑制，所以，使用之前必须进行活化，这类益生菌的孵化方法和使用也不同，一般在活化时需要大量氧气。

2、液体状益生菌：可以说水是一种活的微生物，所以它们被外泼进水里后会很快发挥作用，在池中吸收物质的能力会比粉末形式好很多，活化之后的储存时间会更长。

活化是它们一般不需要氧气，该类益生菌虽然成本高，但只需1次孵化，养殖户就可以用完整菌株，品质更好。

芽孢杆菌是池塘中必不可少的微生物，因为它们可以在水中快速产生酶。

此外，液态益生菌还有一个优势就是可以扩培。

比如：从EM1扩培出EM2，从EM2可以扩培出EM5，而且EM菌可以用大蒜或香蕉酿造，这样使用的剂量就少了，成本也低了很多。

三、养殖应该选择液体益生菌还是粉状益生菌？1、益生菌的选择将取决于使用目的，您可以根据具体的目的做出最合理的选择。

食品中益生菌的筛选与鉴定随着人们对健康的关注不断增加，益生菌在食品行业中的应用越来越受到重视。

益生菌是一类有益于宿主健康的微生物，可以通过改善肠道菌群平衡，增强免疫力，促进食物消化吸收等方式对人体产生积极的作用。

食品中益生菌的筛选与鉴定，对于开发出高质量的益生菌产品具有重要意义。

首先，在食品中筛选出适合的益生菌菌株是关键。

一般来说，益生菌菌株在筛选过程中需要具备以下特点：首先，耐酸耐胆盐能力强，因为要经过胃酸和胆盐的作用才能到达肠道，具备良好的存活性才能发挥益生菌的作用；其次，具有较强的附着能力，能够粘附在肠道粘膜上，因为只有附着在肠道上才能产生作用；再次，对益生菌菌株不会引起人体过敏或不良反应，安全性是非常重要的。

通常通过体外实验，如对益生菌菌株的胃酸和胆盐耐受性的测试，以及对细胞附着能力和粘附相关基因的表达研究等方式进行筛选。

其次，对益生菌的鉴定是继筛选之后的重要步骤。

益生菌的鉴定是通过分子生物学技术来完成的。

其中，常用的方法包括16S rRNA基因测序、多重PCR、荧光原位杂交等。

16S rRNA基因测序是最常用的方法，可以通过测序分析得到菌株的种属、亚种信息，比较菌株之间的差异；多重PCR技术可以对菌株的代谢基因进行检测，进一步证明其真实性和功能特点；荧光原位杂交是通过标记的DNA探针与目标DNA序列结合来确定益生菌的存在与丰度。

这些鉴定方法可以准确地确定益生菌的种属和属下分类，从而对其功能和特性进行研究。

除了筛选和鉴定，益生菌在食品中的应用也需要注意其他因素。

首先，益生菌的保活性是一个关键问题。

在食品中，益生菌菌株需要具备较长的保质期，在食品加工、储存和运输过程中能够维持较高的存活率。

对于一些较为脆弱的菌株，可以采用微胶囊保护和冷冻保存等方式来增强其稳定性。

其次，在食品中的适宜数量也是需要考虑的。

益生菌的数量不能过少，以免无法发挥其益生作用；同时也不能过多，避免对人体产生不良反应。

最后，对于食品中的益生菌产品，需要进行一定的质量监控。

养殖益生菌检测方法引言随着人们对健康饮食的重视以及益生菌在人体健康中的作用逐渐被确认，益生菌的使用逐渐扩展至养殖业。

益生菌可以帮助改善动物的肠道健康，提高饲料利用率，增强免疫力，减少疾病发生率，提高养殖业的经济效益。

然而，为了确保益生菌产品的质量和功效，养殖业需要进行益生菌的检测。

本文将介绍养殖益生菌检测的方法。

养殖益生菌检测方法1. 细菌培养法细菌培养法是最常用的养殖益生菌检测方法之一。

该方法通过将样品中的细菌进行培养，然后通过观察菌落的形态、颜色、大小以及进行纯化和鉴定，确定是否存在益生菌。

该方法需要一定的培养基和培养条件，以及细菌鉴定的专业知识和仪器设备。

2. PCR法PCR法是一种通过扩增目标序列的核酸技术，可以快速检测出样品中的益生菌。

该方法基于DNA的特异性扩增原理，通过设计引物，使目标序列在PCR反应中被扩增出来。

PCR法具有高度的灵敏度和特异性，可以快速检测出少量的益生菌，适用于大批量样品检测。

3. 实时荧光定量PCR法实时荧光定量PCR法是PCR法的改进版，可以定量检测样品中的益生菌。

该方法通过加入一定浓度的荧光探针，在PCR反应过程中实时监测荧光信号的增加情况来定量分析目标物质的含量。

实时荧光定量PCR法不仅具备PCR法的高度灵敏度和特异性，而且可以准确测量益生菌的数量。

4. 高通量测序法高通量测序法是一种近年来发展起来的新技术，可以同时分析样品中的多个益生菌种类和数量。

该方法通过将样品中的DNA进行测序，然后通过比对已知益生菌的基因组数据库，确定样品中的益生菌种类和数量。

高通量测序法具有高通量、高度灵敏、高精度的特点，但是价格相对较高。

结论养殖益生菌的检测方法多种多样，不同的方法适用于不同的检测需求。

细菌培养法可以对益生菌进行纯化和鉴定，适用于小规模的样品检测。

PCR法和实时荧光定量PCR法具有高度的灵敏度和特异性，适用于大批量样品的快速检测和定量分析。

高通量测序法可以同时分析样品中的多个益生菌种类和数量，适用于大规模的研究和调查。

《饲料中添加几种益生菌和益生元（酵母细胞壁）对凡纳滨对虾生长及免疫的影响》一、引言随着水产养殖业的快速发展，饲料营养和健康管理成为保障凡纳滨对虾健康生长的重要环节。

益生菌和益生元作为新兴的饲料添加剂，对改善水产动物肠道健康、增强免疫力等方面具有显著效果。

本文将探讨在凡纳滨对虾饲料中添加几种益生菌和益生元（酵母细胞壁）对其生长及免疫的影响。

二、材料与方法1. 实验材料（1）凡纳滨对虾：选取健康、规格一致的凡纳滨对虾作为实验对象。

（2）饲料：设计四种不同配方的饲料，分别添加不同种类和剂量的益生菌和益生元（酵母细胞壁）。

2. 实验方法（1）分组与饲养：将凡纳滨对虾随机分为四组，每组饲养在相同的环境条件下，分别投喂四种不同配方的饲料。

（2）观察与记录：记录各组对虾的生长情况、摄食量、肠道健康状况等指标，并进行免疫相关指标的检测。

（3）数据分析：采用统计软件对实验数据进行处理和分析，比较各组之间的差异。

三、实验结果1. 生长情况实验结果显示，添加益生菌和益生元的饲料对凡纳滨对虾的生长具有显著促进作用。

与对照组相比，实验组对虾的体重、体长等生长指标均有明显提高。

其中，添加特定种类和剂量益生菌的饲料效果更佳。

2. 肠道健康通过观察和检测，实验组对虾的肠道健康状况明显优于对照组。

添加益生菌和益生元的饲料能够改善肠道微生态环境，降低肠道疾病的发生率。

其中，酵母细胞壁对改善肠道健康具有显著效果。

3. 免疫能力实验结果表明，添加益生菌和益生元的饲料能够提高凡纳滨对虾的免疫能力。

实验组对虾的血清免疫球蛋白含量、吞噬细胞活性等免疫指标均有明显提高。

其中，酵母细胞壁在增强免疫方面具有重要作用。

四、讨论本实验结果表明，在凡纳滨对虾饲料中添加益生菌和益生元（酵母细胞壁）能够显著改善其生长、肠道健康和免疫能力。

这主要是因为益生菌和益生元能够调节肠道微生态环境，促进有益菌群的生长，抑制有害菌群的繁殖，从而改善肠道健康。

同时，益生菌和益生元还能够刺激免疫系统的发育和功能，提高对虾的免疫能力。

益生菌作用机制及筛选方法研究进展摘要简述益生菌制剂的发展历程、作用机制、筛选方法，分析存在的问题和今后的发展方向，以为水产健康养殖提供参考。

AbstractDeveloping history，mechanism of action and selection methods were summarized in the paper.The existing deficiency and the developing direction were proposed so as to provide references for health aquaculture.Keywordsprobiotics；mechanism of action；selection methods近年来，我国水产品出口因抗生素等药物残留问题屡受挫折，经济损失巨大。

2006年，我国水产品又接连在港台和大陆等国内市场遭遇抗生素和孔雀石绿残留影响，给水产品质量安全蒙上阴影。

这些药物残留主要来自水产病害控制中使用的抗生素及饲料中添加的药物，而水产病害随着养殖密度的不断提高和集约化养殖的发展越来越严重，与此相应，滥用水产药物的现象十分普遍，导致水产品中药物残留严重。

抗生素残留是阻碍水产品出口创汇和引起国内消费者担心水产品质量安全的主要因素，从而导致欧盟发布全面对中国动物源性产品的进口禁令，损失6亿多美元。

2006年在销往台湾的大闸蟹中检出可疑致癌物硝基呋喃类代谢物，同年，在多宝鱼中也检出上述残留物，还查出环丙沙星、氯霉素、红霉素等禁用抗生素残留，从而引发国内消费者对水产品质量安全的信任危机。

毫无疑问，影响水产品质量安全的抗生素残留已严重阻碍水产业的持续健康发展，成为行业亟待解决的重大关键问题。

益生菌制剂又称微生态制剂、生态制品、活菌制剂，是指一类通过添加到食品或饲料中能够起到调节肠道微生态菌群结构，从而对人或动物产生有利影响的微生物。

《四种寡糖对凡纳滨对虾生长、免疫及肠道菌群的影响》一、引言凡纳滨对虾作为一种重要的水产养殖品种，其生长、免疫及肠道菌群的研究对于提高养殖效率、保障食品安全具有重要意义。

寡糖作为一种生物活性物质，具有调节生物体内多种生理功能的作用。

本文旨在探讨四种不同寡糖对凡纳滨对虾的生长、免疫及肠道菌群的影响，以期为实际养殖提供理论依据。

二、材料与方法1. 试验材料本试验选用四种不同种类的寡糖，分别为低聚果糖、低聚半乳糖、低聚木糖和壳寡糖。

试验用凡纳滨对虾购自当地水产市场，体格健壮、无病无伤。

2. 试验方法将凡纳滨对虾随机分为四组，每组分别饲喂含有不同种类寡糖的饲料。

试验周期为60天，期间记录各组对虾的生长情况、免疫指标及肠道菌群变化。

三、结果与分析1. 对生长的影响试验结果表明，饲喂含有四种不同寡糖的饲料均能显著促进凡纳滨对虾的生长。

其中，低聚果糖组和低聚半乳糖组对虾的增重率、特定生长率等指标均高于其他两组。

这可能与这两种寡糖能提供丰富的能量和营养物质有关。

2. 对免疫的影响四种寡糖均能提高凡纳滨对虾的免疫力。

其中，壳寡糖组对虾的血细胞数量、吞噬细胞活性等免疫指标均有显著提高，表明壳寡糖在增强免疫方面具有较好效果。

这可能与壳寡糖具有较好的生物相容性和免疫调节作用有关。

3. 对肠道菌群的影响四种寡糖均能显著影响凡纳滨对虾肠道菌群的结构和数量。

其中，低聚果糖和低聚半乳糖能增加肠道内有益菌的数量，降低有害菌的比例；而低聚木糖和壳寡糖则能调节肠道菌群的平衡，维持肠道微生态的稳定性。

这可能与不同种类寡糖的化学结构和生物活性有关。

四、讨论本文研究了四种不同寡糖对凡纳滨对虾生长、免疫及肠道菌群的影响，结果表明四种寡糖均具有显著的促进作用。

其中，低聚果糖和低聚半乳糖在促进生长方面效果较好，而壳寡糖在增强免疫方面具有较好效果。

此外，四种寡糖还能调节肠道菌群，维持肠道微生态的平衡。

这些结果为实际养殖过程中如何选择合适的饲料添加剂提供了理论依据。

对虾肠道益生菌的筛选与免疫物质活性评价指标的建立的开题报告一、题目对虾肠道益生菌的筛选与免疫物质活性评价指标的建立。

二、背景虾类养殖业是我国海水养殖业中的一个重要行业，但其种养过程中常常面临虾病的威胁，而抗生素的滥用又会严重污染水体环境和虾体，导致虾养殖业的可持续发展受到威胁。

因此，寻找生物替代品，如益生菌，是解决虾养殖业免疫问题的有效途径之一。

益生菌为一类有益于宿主健康的微生物，在虾肠道中通过增加消化道菌群稳定性，提高抗病能力等方式增强虾体免疫力，防范虾病的发生。

但在虾肠道中有许多微生物，如何筛选出具有潜在益生作用的微生物，成为目前研究的热点问题之一。

本课题旨在建立对虾肠道益生菌筛选和免疫物质活性评价指标的方法，为寻找高效益的虾肠道益生菌提供科学的理论和实践基础。

三、研究内容和方法本课题拟分成筛选和评价两部分进行研究。

筛选部分：采样对虾肠道，分离其微生物。

对微生物菌株的菌落特征、形态特征、代谢特征等进行鉴定，其中能够生长在虾肠道中并有潜在益生作用的微生物将被筛选出来。

评价部分：选择筛选出来的微生物菌株加入到对虾肠道模拟消化液中，在体外模拟模拟胃液和模拟肠液中检测其对免疫物质活性的影响。

检测指标包括：抗氧化能力、清除自由基能力、抗菌能力、免疫调节能力等。

四、预期成果建立对虾肠道益生菌的筛选和评价指标体系，探索虾肠道益生菌对免疫物质活性影响的机制，寻找高效益的虾肠道益生菌，为虾类养殖业的可持续发展提供依据。

五、研究意义1. 促进虾类养殖业健康可持续发展；2. 探讨虾肠道益生菌与宿主免疫系统的相互作用机制，为开发虾病防治药物提供理论支持；3. 建立虾肠道益生菌筛选和评价指标机制，为益生菌在虾肠道中的应用提供科学的理论和实践基础。

六、参考文献1. 王强, 赵文文, 张恩鑫. 微生物学实验技术[M]. 科学出版社, 2017.2. 尚翔, 谢万鹏. 益生菌的筛选及应用背景分析[J]. 粮食与饲料科技, 2015, 18(4):44-46.3. 向辉, 郭洪波, 张松涛. 免疫生物学[M]. 科学出版社, 2018.。

对虾养殖环境中乳酸菌的筛选及其发酵工艺的研究作者：陈蕾蕾邓淑怡刘唤明邓楚津来源：《安徽农业科学》2019年第01期摘要[目的]对虾养殖环境中乳酸菌进行筛选并对其发酵工艺进行研究。

[方法]首先利用含碳酸钙的MRS固体培养基从虾养殖环境中的海水和底泥中筛选出有溶钙圈的菌株M5;接着根据16SrDNA基因序列系统发育树分析对菌株M5进行鉴定，最后在单因子实验的基础上，通过正交试验对发酵工艺进行优化。

[结果]初步鉴定菌株M5为粪肠球菌，该菌株的最佳发酵工艺为：甘蔗糖蜜浓度为5%，蛋白胨浓度为0.75%，硫酸铵0.5%，磷酸氢二钾的浓度为0.5%，发酵温度为30℃，发酵时间为48h。

在以上工艺下，发酵液中乳酸菌的活菌数高达4.97×108CFU/mL。

[结论]本研究对对虾养殖所用乳酸菌的发酵生产具有一定的参考价值。

关键词对虾养殖环境;乳酸菌;筛选;发酵工艺中图分类号S968.22文献标识码A文章编号0517-6611（2019）01-0087-03doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2019.01.027开放科学（资源服务）标识码（OSID）：在水产养殖中，抗生素由于具有高效、快速和廉价等优点而被广泛使用。

在对虾的养殖中，常用的抗生素有恩诺沙星、土霉素、头孢、呋喃烯酮酸等。

研究表明，传统的抗生素等抗菌化学药物的大量使用甚至滥用不仅扰乱了对虾肠道正常的菌群，引起耐药菌株的产生，而且造成环境中药物的残留，最终威胁着人类的健康和安全，这些问题已引起了人们广泛的关注与焦虑[3]，因此，尋找抗生素类化学药物的替代品成为对虾养殖业可持续发展的关键和热点[4]。

乳酸菌可代替抗生素在水质改良、治疗水产动物疾病以及水产动物免疫等方面的应用[5]。

有研究表明采用乳酸菌拌料投喂凡纳滨对虾6周后，对虾的免疫力增强，成活率以及弧菌的抵抗力均增强[6];乳酸菌可以抑制对虾养殖过程中副溶血性弧菌的生长[7];张玲等[8]研究结果表明，通过口服与浸浴的方式对中国明对虾和日本囊对虾施用乳酸菌，能有效调节肠道微生物菌群组成，改善养殖水质，提高对虾的成活率，提高对白斑综合症和副溶血弧菌病的抗病力。