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Multidrug-resistant Escherichia coli producing AmpC enzyme genotypes study and drug resistance analysis Abstract: Objective: Explore the region more resistant drug Escherichia coli (Escherichia coli, E.c oli) production plasmid AmpC beta-lactamase (AmpC enzyme) status and genotype distribution, yield analysis AmpC enzyme Escherichia coli antibiotic resistance to commonly used the characteristics for clinical rational use of antibiotics and prevent resistance genes to spread to provide the theory basis. Methods: Screening test early：screening test：Under the Clinical Laboratory Standards Agency (Clinical labora-tory Standards Insitute, CLSI) disk diffusion method recommended (kerby-Bauer, disk diffusion method) detected 71 Escherichia coli cefoxitin resistance, ie, the inhibition zone≤ 18mm suspicious of AmpC enzyme-positive strains.2.cefoxitin three-dimensional extract test：According to cefoxitinthree-dimensional extract test,whether by extracts of Escherichia coli beta-lactamase hydrolysis of cefoxitin (FOX) to determine whether AmpC enzymes to detect produced AmpC enzymes strains. Kerby-Bauer disk diffusion method : 71strains of Escherichia coli antibiotic susceptibility test to 10 antibiotics were performed by Kerby-Bauer disk diffusion method with the standard of NCCLS. A TCC25922 was used for quality control.The experiment method points:On a flat plate LB doing (37 ℃ incubation 24 hours) for the preparation of bacteria into and 0.5McIntosh standard pipe turbidity the same bacterium fluid, and the bacterium fluid in the uniform coating sterilization Mueller-Hinton culture medium surface, dry for several minutes, by sterile tweezers will drug susceptibility were flat piece of paper stick in the M-H culture medium surface, the distance between each piece of paper > 24 mm, pieces of > 15 mm from the flat. Will the culture dish with a piece of paper in 37 ℃incubation after 24 hours, with mm feet measurement bacteriostatic annulus diameters (bacteriostatic annulus to the edge of the naked eye can't see bacteria obvious growth limit),According to the size of the bacteriostatic annulus diameters reflect the bacteria on the determination of the drug test sensitive degree .Results: 2006 NCCLS standard to judge, and each test all use escherichia coli bacteria strains of the standard quality A TCC is 25922. 4.PCR technology:AmpC gene detection of three-dimensional test positive strains.References to specific design 6 primers, using common plasmid small mention kit extraction escherichia coli plasmid DNA for polymerase chain reaction (PCR) template .Each specimen use to design good respectively six primer amplification, positive amplification fragment length were 520 bp, 462 bp, 405 bp, 346 bp, 302 bp, 190 bp .PCR products were agarose gel electrophoresis, UV detector observations.5. Gene sequencing:Plasmid AmpC enzyme gene amplification-positive strains, respectively, to take the PCR amplification products the nucleic quantitative instrumentmeasured the DNA concentration> 300ug/ml, and sent to Shanghai Sangon biotechnology companies were sequenced. Results: 1. 11 strains harboring AmpC were screened, and 8(11.27%) strains were found by cefoxitin three-dimensional extract test. 2.Antimicrobial susceptibility test results:71 Escherichia coli susceptibility results show the whole sensitive to imipenem, amikacin, cefoxitin, aztreonam, cefepime, sensitive rate is higher are more than 59.15%, lower cephalosporincefotaxime, streptomycin, gentamicin, ciprofloxacin, levofloxacin. Multi-drug resistant strains, 24 (33.80%) and 35 double-resistant strains dominated (33.80%), including the mode of multi-drug resistance phenotype of GEN + CTX + LEV (16 strains, 22.54%)-based. Resistant strains producing AmpC enzyme and non-producing AmpC strain rate: AmpC producing strains of a variety of commonly used antibiotics resistance rates significantly higher than non-AmpC producing strains (χ 2 test, P <0.05).4.PCR detected by plasmid AmpC enzyme gene situation: three-dimensional experimental 8-positive strains for PCR amplification, two positive, sequencing results showed that the two are DHA-1 type.Conclusions: 1. In the region of clinical isolates of Escherichia coli producing ESBLs situation is more serious, the AmpC enzyme is relatively small, and the phenomenon of multiple drug resistance has emerged. 2 in the region of the Escherichia coli plasmid-mediated AmpCenzyme genotypes of DHA-1, resistant strains producing AmpC enzyme was significantly higher than non-AmpC producing strains. (3) in the region of Escherichia coli detected the two suspected SSBLs, the genotype combination of both DHA-1 AmpC and CTX-M type of ESBLs.Key words: Escherichia coli; AmpC gene; multi-drug resistant前言大肠埃希菌为革兰氏阴性杆菌，属于肠杆菌科，是寄居于人和动物肠道中的正常菌群之一。
大肠埃希氏菌对喹诺酮类药物的耐药现状及防治喹诺酮类药物（Quinolones，Qs）是一类合成广谱抗菌药，自20世纪60年代萘啶酸被运用于临床医学以后，同时喹诺酮类药物的耐药问题便接踵而至，这使得喹诺酮类药物成为开发最活跃，更新换代最迅速的药物。
由于其具有抗菌谱广，抗菌活性强，与常用抗菌药物无交叉耐药，已成为临床治疗感染性疾病的主要药物之一。
然而，随着喹诺酮类药物在人医和兽医临床的广泛、长期、大量盲目滥用，使得其耐药性近年呈蔓延增长趋势，耐药程度越来越重，耐药菌株越来越多。
其中，大场杆菌对喹诺酮类药物的耐药性问题是当前国内外研究的热点。
本文综述了大肠杆菌对氟喹诺酮类药物耐药现状及特点，并分析了其耐药机制，简要综述了减缓耐药性的一些防治策略。
标签：大肠杆菌；喹诺酮类药物；基因传递；耐药机制1 大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药现状和特点针对大肠杆菌对喹诺酮类药物耐药趋势日益严重的情况下，人们进行了大量的调查及科研工作，并取得了一定成果，同时也揭示了大肠杆菌的严重耐药所产生的不良后果。
1.1 耐药现状喹诺酮类药物在国内90年代被广泛使用，由于喹诺酮类药物容易产生耐药且作用机制相似，所以不同喹诺酮类药物之间可能存在交叉耐药。
有关大肠杆菌对喹诺酮类药物的耐药调查和研究在国外开展得比较早。
美国德克萨斯州休斯顿本.托比综合医院从1999～2004年从1700例患者中分离出21000株大肠杆菌，其中对氟喹诺酮类药物不敏感大肠杆菌从1999的6%增加2004年的25% [1]。
捷克斯洛伐克Zemkova M，Kotlarova J [2]等人做了一项关于尿路感染的大肠杆菌耐喹诺酮类药物的实验，从2001年到2006年从尿路感染的住院患者和门诊患者中收集了11856株大肠杆菌并且测试了他们对喹诺酮类药物的敏感性，结果显示：住院患者中的耐药大肠杆菌比例从2001年的2%增加到2006年的10%，门诊患者耐药大肠杆菌比例从1%增加到11%。
大肠埃希菌感染特点及抗菌药物敏感性分析摘要】目的对我院大肠埃希菌的感染的情况及大肠埃希菌感染的特点进行分析，以期为临床抗感染治疗提供依据。
方法对我院2012年1月至2012年8月年临床送检的各类标本中分离出的大肠埃希菌进行药物敏感性分析。
结果检出173株大肠埃希菌，其中产ESBLs菌102株，药敏监测结果对美罗培南、亚胺培南、哌拉西林/他唑巴坦、阿米卡星敏感率高于50%。
结论在大肠埃希菌感染或高度怀疑感染由大肠埃希菌引起时，选择对ESBLs稳定高的抗生素。
【关键词】大肠埃希茵超广谱β-内酰胺酶（ESBLs）耐药大肠埃希菌是临床常见的致病菌，耐药率高，是革兰阴性杆菌中产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)的代表菌种。
近年来，临床分离的大肠埃希菌迅速增加，且多为多重耐药性菌株，给临床抗感染治疗造成困难。
现对我院大肠埃希菌的感染的情况及大肠埃希菌感染的特点进行分析，以期为临床抗感染治疗提供依据。
1 材料与方法1.1菌株来源：我院2012年1月1日-2012年8月31日本院临床送检的各类标本中分离出的大肠埃希菌。
1.2方法：采用法国生物梅里埃公司的VITEK2全自动微生物分析系统对细菌及药物敏感性进行检测。
2 结果2012年1月1日-2012年8月31日我院送检的各类标本中共分离革兰阴性菌494株，其中大肠埃希菌173株（23.6%），检出率最高。
其余依次为沙门菌甲型副伤寒血清型91株（12.4%），肺炎克雷伯菌57株（7.77%），鲍曼不动杆菌35（4.78%）。
173株大肠埃希菌中产ESBLs菌102株，检出率为59%。
细菌对常用抗菌药物敏感率比较见下表。
173株大肠埃希菌抗常见抗菌药物敏感率比较抗生素名称实验株数敏感率（%）中介率（%）耐药率（%）氨苄西林 173 3.59 0.59 95.8阿莫西林/克拉维酸钾 173 49.3 25.9 24.6哌拉西林/他唑巴坦 11 81.8 0 18.1阿米卡星 17 3 91.6 0 8.33庆大霉素 173 22.6 0.59 76.7氨曲南 173 28.1 0 71.8头孢曲松 173 28.1 0 71.8头孢他啶 173 27.9 0.59 71.4头孢吡肟 173 27.3 0 72.6头孢唑林 173 25.1 2.39 72.4环丙沙星 173 27.3 0.59 72左氧氟沙星 173 30.3 3.03 66.6亚胺培南 173 100 0 0美罗培南 173 100 0 0复方新诺明 173 21.4 0 78.6四环素 173 10.8 0 89.23 讨论大肠埃希菌是肠道中重要的正常菌群，婴儿出生后数小时就进入肠道，并终生伴随。
昆明地区产ESBLs肠杆菌科细菌对喹诺酮类质粒介导的耐药机制研究喹诺酮类药物(Quinolones)是一类人工合成的广谱、强效抗菌药物,是目前临床应用最广泛的抗菌药物。
肠杆菌科细菌(Enterobacteriaceae bacteria)是临床最常见的分离菌,其中又以大肠埃希菌和肺炎克雷伯菌为主,近年来肠杆菌科细菌对喹诺酮类的耐药性越来越严重,常常导致临床治疗延迟或失败。
之前的观点认为肠杆菌科的喹诺酮耐药是由染色体介导的,包括细胞膜通透性改变、主动外排系统和靶基因的改变三种途径。
后来研究发现了质粒介导的喹诺酮类耐药(plasmid-mediated quinolone resistance,PMQR)途径,这很好的解释了耐药基因水平转移的问题。
质粒介导的喹诺酮类的耐药基因,包括qnr基因家族和aac(6’)-Ib-cr基因等,常与超广谱β-内酰胺酶(extended-spectrum β-lactamases.ESBLs)协同传播,且这些基因的分布有地域性差异,研究本地区质粒介导喹诺酮类耐药机制研究对临床的经验性用药和制定适宜的院感控制措施显得尤为重要。
本文的主要研究工作是昆明地区产超广谱β-内酰胺酶的肠杆菌科大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌质粒介导的喹诺酮类耐药的机制,包括以下三个方面:(1)检测PMQR的流行基因2015年5月—2016年7月从云南省第一人民医院不同科室、不同年龄段病人,不同感染部位分离出的50株喹诺酮类耐药的产ESBLs的肠杆菌科细菌,其中包括26株大肠埃希氏菌和24株肺炎克雷伯菌。
设计特异的质粒耐药基因引物,对实验菌株提取基因组后,利用PCR技术检测不同菌株质粒耐药基因的携带情况,结果发现在大肠埃希氏菌和肺炎克雷伯菌中流行的耐药基因有所差异,大肠埃希氏菌最流行的是qnrB基因,检出率高达88.4%,其次是aac(6’)-Ib-cr基因,检出率为61.5%,qnrD和qnrS基因都只检测到了一例。
尿道感染大肠埃希菌对喹诺酮耐药性及相关因素分析张昭勇;张吉才;杜毅【摘要】Objective To investigate the drug resistance and risk factors of Escherichia coli isolated from urinary tract infection (UTI) to quinolone. Methods Drug resistance of 705 strains of Escherichia coli isolated from 749 urine specimens of UTI from 2010 to 2011 in our hospital were detected and divided into the resistance group and the sensitive group according to sensitiveness to quinolone, and the risk factors of the quinolone resistance strains were analyzed. Results In 705 strains isolates E. coli, there were 474 strains (67. 2% ) of quinolone resistance in the resistance group, 231 strains (32. 8% ) of quinolone sensitiveness in the sensitive group and there was no carbapenem resistant strain. The differences in resistance rates of amoxicillin/clavulanic acid, cefotaxime, ceftazidime, aztreonam, piperacillin, amikacin, bactrim, gentamicin and cefepime of the two groups were statistically significant (P<0. 05) . Logistic regression analysis showed that the proportion of female patients, drug use of tert-cephalosporins and quinolones, urinary drainage and bacterium producing extended spectrum β lactamases (ESBLS) were independent risk factors of quinolone resistance E. coli. The differences in hospital stay and cost of the two groups were statistically significant (P<0. 05). Conclusion The detection rate of quinolone resistance escherichia coli isolated from UIT is high. The emergence of resistant strains is related to antibiotic application, invasive handling and bacterial variation. To strengthen theindependent risk factors regulation can effectively prevent and control spread of infection.%目的探讨尿道感染(urinary tract infection,UIT)大肠埃希菌对喹诺酮耐药性及其相关因素.方法对我院2010-2011年749例UIT尿液标本中分离的705株大肠埃希菌的耐药性进行检测,以对喹诺酮敏感与否分为耐药株组和敏感株组,分析耐药株感染的相关因素.结果 705株大肠埃希菌中对喹诺酮耐药474株(67.2％)(耐药株组),敏感231株(32.8％)(敏感株组),未见碳青霉烯耐药株.耐药株组对阿莫西林/克拉维酸、头孢噻肟、头孢他啶、氨曲南、哌拉西林、阿米卡星、复方新诺明、庆大霉素、头孢吡肟的耐药率与敏感组比较差异有统计学意义(P ＜0.05).Logistic回归分析显示女性患者、三代头孢及喹诺酮类药物使用、尿路引流和细菌产生超广谱β-内酰胺酶(ESBLS)是喹诺酮耐药株出现的独立危险因素.两组在住院时间和住院费用方面比较差异亦有统计学意义(P＜0.05).结论 UIT大肠埃希菌中喹诺酮耐药株的检出率高,耐药株的出现与抗生素应用及侵入性操作、细菌变异等有关,加强对危险因素的控制有助于预防和控制感染.【期刊名称】《临床误诊误治》【年(卷),期】2013(026)001【总页数】4页(P90-93)【关键词】尿道感染;大肠杆菌;喹诺酮耐药;危险因素【作者】张昭勇;张吉才;杜毅【作者单位】442000湖北十堰,湖北医药学院附属太和医院检验部【正文语种】中文【中图分类】R378.21大肠埃希菌是尿道感染(urinary tract infection，UIT)最常见的病原菌，对其经验治疗通常选用复方新诺明、青霉素类药物如阿莫西林或氨苄西林。
大肠埃希菌临床分离菌株喹诺酮类抗生素耐药机制研究目的探讨我院临床分离的大肠埃希菌株耐药基因的分布及其在耐药中的作用机制。
方法选择我院临床分离的大肠埃希菌菌株，采用纸片扩散法进行喹诺酮类药物药敏试验，筛选耐药菌株并测定环丙沙星MIC，对喹诺酮耐药菌株进行qnrA、qnrB、aac-（6’）-Ib-cr、GyrA及ParC检测，并进行基因扩增测序。
结果84株临床分离的大肠埃希菌菌株中有24株对喹诺酮类药物耐药，耐药率为28.4%。
其中对2种药物耐药4株，对3种药物耐药6株，对5种药物耐药14株。
耐药菌株MIC值为对照菌株148～596倍，24株耐药菌中检出qnrA质粒基因12株、qnrB质粒基因4株、aac-（6’）-Ib-cr基因4株、GyrA基因喹诺酮决定区突变11株、ParC基因决定区突变4株。
结论我院存在大肠埃希菌喹诺酮耐药菌株，且耐药菌株耐药机制复杂，耐药基因的产生及酶类耐药突变是主要原因，临床要加强对耐药菌株的检测。
标签：大肠埃希菌；喹诺酮；抗生素；耐药基因大肠杆菌是临床常见的致病菌，大肠埃希菌是其中最常见的菌属，伴随近年来抗菌药物的临床应用及抗生素的不断发展，大肠埃希菌的耐药菌株不断出现，且耐药性不断提高，耐药机制日趋复杂，如细菌酶类耐药突变、耐药基因的突变表达等，近年来质粒耐药机制相关的质粒基因如qnrA、qnrB等成为研究热点[1，2]，质粒具有可转移性，其不仅能够导致耐药菌株对抗生药的耐药，而且能够引起耐药性在不同菌株之间的传递，导致菌株广泛耐药，严重影响临床治疗效果，目前临床已经分离出多个耐药基因，本研究就qnrA、qnrB、aac-（6’）-Ib-c等耐药基因在耐药性大肠埃希菌的表达及其作用机制进行研究，为大肠埃希菌耐药菌株的检测提供参考。
1 材料与方法1.1 菌株来源选择我院2010年1月～2012年6月临床分离的非重复84株大肠埃希菌菌株，分离菌株均经VITEK2-compact 微生物鉴定系统鉴定到种，质控菌株为大肠埃希菌ATCC 25922菌株，结合实验菌株为大肠埃希菌J53 AzR菌株。
大肠埃希菌的临床分布及其耐药性分析大肠埃希菌是一种常见的肠道细菌，通常存在于人和动物的肠道中。
大肠埃希菌也是许多医院感染和社区感染的主要病原菌之一。
由于其广泛存在和对抗生素的耐药性，大肠埃希菌感染已成为临床治疗的严重问题。
本文将对大肠埃希菌的临床分布及其耐药性进行分析，以期为相关研究和临床治疗提供参考。
一、大肠埃希菌的临床分布大肠埃希菌感染可发生在各个年龄段的患者，包括婴儿、儿童、成人和老年人。
在医院内，大肠埃希菌感染常见于各种手术后、尿路感染、呼吸道感染、血液感染等情况下。
社区中也存在大肠埃希菌感染，主要是由于不洁食物、水源或者人际传播所致。
抗生素的过度使用也是导致大肠埃希菌感染的重要因素之一。
大肠埃希菌感染的临床表现多样，包括腹泻、腹痛、发热、尿频、尿急等症状。
严重感染可导致败血症、脓毒症、尿路感染、胃肠道感染等临床疾病。
近年来，大肠埃希菌对抗生素的耐药性日益严重，包括对β-内酰胺类抗生素、氨基糖苷类抗生素、喹诺酮类抗生素、磺胺类抗生素等的耐药性不断增加。
特别是产大肠埃希菌产ESBL的菌株，其对β-内酰胺类抗生素的耐药性已经成为临床治疗的重要挑战。
大肠埃希菌对卡那霉素、利福平等重要的抗生素也呈现出不同程度的耐药性。
临床上发现一些大肠埃希菌对多种抗生素呈多重耐药甚至全耐药现象，导致医生在治疗大肠埃希菌感染时选择的抗生素变得非常有限。
针对大肠埃希菌的耐药性问题，临床上已经出现了一些多重耐药的大肠埃希菌感染病例，给抗生素治疗带来了很大困难。
预防和控制大肠埃希菌感染以及加强抗生素的合理使用显得尤为重要。
对于有高危因素的患者，如免疫功能低下、长期使用抗生素等，应密切监测大肠埃希菌感染的发生，并采用有效的感染控制措施。
改善抗生素使用模式，减少不必要的抗生素使用，避免滥用抗生素，有助于减少大肠埃希菌对抗生素的耐药性发展。
大肠埃希菌感染在临床中的分布广泛，对抗生素的耐药性不断增加，严重影响了临床治疗的效果。
·临床药学·喹诺酮类抗菌药物的药理作用和临床合理应用探析马改大DOI ：10.11655/zgywylc2019.08.065作者单位：033000山西省吕梁市人民医院药学部喹诺酮类抗生素是一种人工合成的广谱、低毒高效杀菌类药物，临床用药效果好，多用于泌尿生殖系统感染、消化呼吸系统感染、皮肤软组织感染和性传播类疾病等，有效杀灭革兰阳性菌、革兰阴性菌、结核分枝杆菌、支原体衣原体等；药物半衰期长、体内分布广泛，且与其他抗菌药物无明显交叉耐药性［1］。
临床喹诺酮类药物具有效果显著、价格低廉等优势，使得该类药物广泛应用于临床。
该类药物虽抗菌效果显著，临床仍存在用药后不良反应，且存在药物滥用、误用等不合理情况。
为探究喹诺酮类药物临床药理作用和合理应用情况，笔者随机抽取我院应用喹诺酮类药物治疗的患者共100例纳入研究并分析临床治疗和用药情况，现报告如下。
1资料与方法选择2015年8月至2018年3月我院就诊的治疗处方中含有喹诺酮类抗菌药物的患者共100例。
100例中泌尿科处方35例，妇产科处方33例，呼吸科处方32例；处方类别包括口服类53例，注射类47例；100例中洛美沙星27例，氧氟沙星21例，莫西沙星20例，环丙沙星16例，左氧氟沙星12例，加替沙星4例。
对100张处方进行回顾性总结和分析，依据患者疾病情况、临床用药效果分析喹诺酮类抗菌药物的抗菌效果，并通过临床现有应用情况分析合理使用方式。
2结果2.1患者用药不良反应情况分析：临床喹诺酮类药物的不良反应主要包括血液系统毒性1例、中枢神经系统毒性2例、肝肾毒性4例和胃肠道反应6例；不良反应总发生率13%。
2.2喹诺酮类药物不合理使用情况分析：临床用药中存在3例重复使用，占3%，原因分析：患者同时应用注射用头孢曲松和左氧氟沙星，两药物药效相似，影响临床疗效；用法不合理3例，占3%，原因分析：喹诺酮类抗菌药存在频繁用药、过度使用情况，患者用药量过量，对疾病康复不利；与金属离子合用1例，原因分析：喹诺酮类抗菌药物可与金属离子形成鳌合物，若再与金属离子类药物共同使用可产生不溶性物质，导致患者药物吸收力降低，影响用药效果；与碘胺类合用2例，占2%，原因分析：喹诺酮类药物与碘胺类药物合用不利于患者疾病康复，有引发患者发生阻塞性疾病的危险性；与抗酸类合用2例，占2%，原因分析：喹诺酮类药物和抗酸类药物合用可引起患者对喹诺酮类药物吸收性降低、影响药物自身吸收情况，不利于药效发挥。
