芦荟多糖的光度测定新方法

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旋光法与改进苯酚硫酸法测定芦荟多糖含量比较

（ＤｅｐａｒｔｍｅｎｔｏｆＢｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＢａｏｄｉｎｇＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｂａｏｄｉｎｇ０７１０００，Ｈｅｂｅｉ，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＲｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｐｏｌａｒｉｍｅｔｒｙａｎｄｐｈｅｎｏｌｓｕｌｆｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＡｌｏｅｃｏａｒｓｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｉｎ．Ｔｈｅｒｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｏｐｔｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｔｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｎｔｅｎｔａｎｄｉｍｐｒｏｖｅｄｐｈｅｎｏｌｓｕｆｌｕｒｉｃａｃｉｄｍｅｔｈｏｄｏｒｆｄｅｔｅｍｉｒｎａｔｉｏｎｖａｌｕｅｗｅｒｅｂａｓｉｃａｌｌｙｔｈｅｓａｍｅｔｈａｔｗａｓ０．０９９３ｍｇ／ｍＬａｎｄ０．１０６５ｍｇ／ｍＬ；ｔｗｏｍｅｔｈｏｄｓｏｒｆｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆ

改进苯酚-硫酸法测定芦荟多糖含量

改进苯酚-硫酸法测定芦荟多糖含量
钱和;张添;刘长虹
【期刊名称】《江苏食品与发酵》
【年(卷),期】2002(0)3
【摘要】从消除干扰,减少误差的角度改进了苯酚一硫酸法测定芦荟多糖含量的方法。

先用7倍体积95％乙醇回流提取1h以除去芦荟制品中的单糖、双糖、多酚类化合物、氨基酸等杂质,再用苯酚-硫酸法测定样品中芦荟多糖的含量。

为了有效消除用葡萄糖标准曲线计算多糖含量而带来的误差,可利用精制芦荟多糖测定并计算换算因子,再利用换算因子计算芦荟多糖含量。

实验证明,该方法不但有较好的重现性和稳定性,而且其平均回收率高达98.5±2.2（％）,RSD=2.2％（n=3）。

【总页数】4页(P3-6)
【作者】钱和;张添;刘长虹
【作者单位】江南大学食品学院;江南大学食品学院无锡市;214036;无锡
市;214036
【正文语种】中文
【中图分类】TQ463
【相关文献】
1.苯酚-硫酸法测定多糖含量显色条件的优化与改进 [J], 马敏;刘嘉宝;陈兰兰
2.旋光法与改进苯酚硫酸法测定芦荟多糖含量比较 [J], 苗晓燕;何富强;陈萍
3.改进差示苯酚-硫酸法测定维血宁颗粒多糖含量 [J], 陈晖;闫治攀;陈方圆;王继龙;
魏舒畅;王碧辉
4.改进硫酸-苯酚法测定阿胶口服液中粗多糖含量 [J], 谷陟欣;辛秀;刘淑妦;张妮瑜;卢捷
5.改进硫酸-苯酚法测定阿胶口服液中粗多糖含量 [J], 谷陟欣;辛秀;刘淑妦;张妮瑜;卢捷
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芦荟多糖测定2

F YY YW FYD ZYC ZW 05282005芦荟芦荟多糖测定比色法测定F_YY_YW_FYD_ZYC_ZW _0528_2005芦荟－芦荟多糖测定－比色法测定1范围本法采用精制芦荟多糖测得芦荟多糖对葡萄糖的换算因子后,样品经前处理除杂后,用比色法测定芦荟中多糖的含量。

本法适用于新鲜芦荟叶片(中华芦荟)。

2原理加入较高浓度的乙醇时,使芦荟多糖沉出。

在浓硫酸作用下,水解成单糖,并迅速脱水生成糠醛衍生物,与苯酚结合生成有色化合物,在490nm 有最大吸收,吸收值与多糖含量呈线性关系。

3试剂（除特殊注明外均为分析纯试剂）3.195%乙醇3.2葡萄糖3.3苯酚3.4无水乙醚3.5浓硫酸4仪器设备4.1紫外可见分光光度计4.2恒温电热水浴箱4.3回流提取装置5试样制备5.1标准品溶液的制备取葡萄糖于105℃烘干，精确称取100mg ，加水溶解，定容至100mL ，即可得到浓度为1.00mg/mL 的葡萄糖标准溶液。

吸取0.00，0.25，0.50，1.00，1.50，2.00，2.50mL 的1.00mg/mL 标准品溶液，分别置于50mL 容量瓶中，加水定容，得标准系列溶液。

5.2苯酚溶液的配制苯酚用水浴加热后溶解,称取100g,加铝片0.10g,加氢氧化钠0.05g,蒸馏收集182℃的馏分。

取馏出液10.0g,加水150mL,置于棕色瓶中,备用。

5.3精制芦荟多糖的制备将芦荟叶片去皮,取其内凝胶,研磨、均质,两次过滤,调节pH 值到3.2。

缓慢加入4倍体积95%乙醇,搅拌,静置,倾去悬浮物,离心分离,用80%乙醇多次洗涤沉淀,冷冻干燥得芦荟多糖粗品。

把芦荟多糖粗品溶于水中,除蛋白,然后用80%乙醇沉淀多糖,离心分离后,用80%的乙醇多次进行洗涤,无水乙醚脱水后,冷冻干燥得精制芦荟多糖。

5.4供试品溶液的制备将芦荟叶片去皮,取其内凝胶,研磨、均质,两次过滤,调节pH 值到3.2，得芦荟凝胶原汁，准确移取10.0mL 芦荟凝胶原汁，加入4倍量体积的95%乙醇，回流提取1h ，趁热过滤，残渣用5mL95%乙醇洗涤3次。

芦荟多糖含量测定的研究进展

醇提取，以除去单糖、低聚糖、苷类及生物碱等干扰成分；然后用蒸馏水提取其中所含的多糖类成分。所得以的多糖在硫酸作用下水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，将其与苯酚反应生成
甘露聚糖等多糖构成的混合物＿、６
，
２芦荟多糖含量检测方法．
２１分光光度法．２１．１苯酚一硫酸法（ｕｏｉｔｂ）Ｓ
方法）
其结构如图ｌ所示。在芦荟
鲜叶的凝胶中多糖含量约为０．
分析检测【ｌ崔莉凤等人｛道。 ”报
过用气相色谱法测定芦荟及芦荟干粉中的多糖，该法是将多糖水解为单糖之后进行衍生化反应，再用气相色谱法进行分析，以木糖醇为内标物，用ＯＶ２２５与０Ｓｌ为色谱柱固定液，得到了令８３人满意的结果。目前采用的衍生化方法主要是甲基化法，芦荟多糖分子中的游
谱法等。这些方法为芦荟多糖分析方法的进一步发展和应用提供了蝗论基础。
生命科学仪器２００３年７月第５期０
维普资讯
学术论坛
Ａｃｄｍｉｆｆａｅｃ０ｕｏｒ
具有双相调解免疫功能作用。对自身免疫性疾病、肿瘤、恶病质

3_5_二硝基水杨酸比色法测定芦荟中多糖含量

3,5-二硝基水杨酸比色法测定芦荟中多糖含量李玲刘立明谢晓芬蔡朝霞宋功武(湖北大学化学与材料科学学院湖北武汉430062)摘要本文建立了用3,5-二硝基水杨酸比色法测定芦荟中多糖含量的方法。

以乙醇沉淀法分离芦荟中的多糖,用3,5-二硝基水杨酸比色法测定其多糖含量,并与标准方法对比,实验证明此方法准确度高,选择性及重现性好。

关键词3,5-二硝基水杨酸比色法芦荟多糖1引言芦荟是百合科多年生常绿肉质草本植物,它种类繁多,加上变种达1000种以上。

芦荟作为一种天然药用植物,至少已有3500多年的历史,据资料记载,芦荟从唐朝开始,由西域传入,当时作为治疗刀伤、烫伤和烧伤药物,在民间广泛流传使用[1-2]。

芦荟主要含有蒽醌类化合物、多糖、有机酸、氨基酸、多肽多种微量元素等有效化学成分[1-9]。

已有研究表明,芦荟的主要成分芦荟町是一种强抗菌性物质,它可以杀死丝状菌、百咳菌、破伤风菌、阴性菌和病素菌。

芦荟克町A、B具有提高免疫力和很强的抑制或破坏异常细胞的生长,从而形成防癌作用;芦荟的异性柠檬酸具有强心,促进血液循环、降低胆固醇的作用;多糖和维生素对皮肤有良好的营养、滋润、美白作用;芳香油具有镇静、止痛的作用;天然蒽醌苷或蒽的衍生物能吸收紫外线,具有防晒作用等[10]。

由于芦荟的神奇功能,各国科学家都竟相研究,特别是美国、日本和韩国,为研制开发有关芦荟的产品的投入的人力和资金相当可观,是芦荟产业研究较发达的国家[11]。

在最近几十年,在国外对芦荟的研究和开发利用大大加快,而在国内,芦荟产品的质量标准是芦荟中多糖的含量,因此,芦荟中多糖含量的定量测定是具有重要意义的。

芦荟中的多糖是一大类大分子化合物,具有不同的生理功能,一般是由葡萄糖与甘露糖形成的,在不同的芦荟品种中所含的葡萄糖与甘露糖比例是不同的[2,4,6,8]。

本文利用3,5-二硝基水杨酸比色法测定芦荟中多糖含量,实验证明该方法灵敏度高、简便、快速、选择性好。

库拉索芦荟中多糖的提取及含量的测定大学本科毕业论文

摘要芦荟是一种多肉质地常绿草本植物，并且是一种营养丰富的蔬菜，被联合国粮农组织誉它为“21世纪人类最佳的保健品之一”。

国际食品法典将其列为蔬菜。

随着近年来科学的不断发展对芦荟的研究也不断深入，芦荟含有多种活性成分，通过不同的机制对人体产生多种生理功能，如能够促进伤口愈合、抗菌、降血糖、抗癌和抗病毒等一些生理功能。

其中对芦荟的重要成分芦荟多糖的研究也到了一个新的领域，芦荟多糖有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗病毒、抗辐射等方面的活性功能。

本文进行的是库拉所芦荟多糖的提取和含量的测定，首先通过单因素实验和正交实验对库拉索芦荟中的多糖提取工艺进行优化，然后再进行芦荟的叶渣和芦荟的凝胶中的多糖含量进行测定，并进行比较。

本实验主要采取的是水提法进行芦荟多糖的提取，采用苯酚硫酸紫外分光光度法对芦荟多糖进行测定。

确定了库拉索芦荟全株的多糖的提取工艺条件为提取次数为2次，提取时间为2h，料也比为1：10，浸提温度为90℃，醇沉浓度为80%，醇沉时间为6h，醇沉温度为室温。

关键字：芦荟多糖；紫外分光广度法；正交实验法AbstrctAloe is a succulent evergreen herb, and a nutrient-rich vegetables, FAO reputation for it mankind in the 21st century the best health care products . Codex Alimentarius take it as vegetables.With the deepening of continuous development in recent years, scientific research on aloe vera has very deeply, aloe vera has many active ingredients, a variety of biological functions of the human body through different mechanisms, such as the ability to promote wound healing, antibacterial, hypoglycemic, anti-cancer and anti-viruses and other physiological function. Important component of aloe polysaccharide of the Aloe to a new field, and aloe polysaccharides have anti-tumor, antioxidant, immunomodulatory, anti-virus, anti-radiation and other aspects of the activity function. This article is the Kula the aloe polysaccharide extraction and content determination, and to optimize the extraction process to water extraction and ethanol precipitation method by the orthogonal experiment. Mainly adopted in this experiment is the extraction of water extraction and alcohol precipitation aloe polysaccharides, and France serey deproteinized decolorized with activated carbon, the polysaccharide extracted with phenol sulfuric acid by ultraviolet spectrophotometry aloe polysaccharide determination.Mention and the water temperature, the concentration of alcohol precipitation of solid to liquid ratio of orthogonal experimental factors orthogonal experiment, Polysaccharide of Aloe vera whole plant extraction conditions for the extraction times of 2, the extraction time was 2h, the expected ratio of 1:10, extraction temperature 90 ℃, 80% concentration of the alcohol precipitation, alcohol precipitationtime of 6h, and alcohol precipitation at room.Key words：aloe polysaccharides；ultraviolet breadth of France；orthogonal experiment目录摘要 (I)Abstrct (II)第一章前言 (1)第二章文献综述 (2)2.1 芦荟的研究进展 (2)2.1.1芦荟的品种 (2)2.1.2 库拉所芦荟的形态特征 (2)2.1.3 国内芦荟资源现状 (3)2.1.4 国外芦荟的利用现状 (3)2.1.5芦荟在国内的利用现状 (4)2.2芦荟在各个领域的应用 (4)2.2.1芦荟在医药上的应用 (4)2.2.2芦荟在美容方面的应用 (5)2.2.3芦荟在食品方面的作用 (5)2.2.4芦荟的保健方面的作用 (5)2.3 芦荟多糖的研究进展 (5)2.4芦荟多糖的生理功能 (6)2.4.1抗氧化 (6)2.4.2抗肿瘤 (6)2.4.3降血糖 (7)2.4.4 对实验性胃溃疡有保护作用 (7)2.4.5 抗炎、抗艾滋病 (7)2.4.6抗辐射 (8)2.4.7保护肝脏 (8)2.4.8 创伤愈合 (8)2.5芦荟多糖的结构 (9)2.6 芦荟多糖的提取工艺的优化 (9)2.6.1单因素实验法 (9)2.6.2 正交实验法 (10)第三章实验部分 (11)3.1实验材料 (11)3.1.1库拉所芦荟 (11)3.1.2实验药品 (11)3.1.3 实验设备 (11)3.2 试验方法 (11)3.2.1芦荟多糖的提取工艺 (11)3.2.2芦荟多糖的提取工艺 (12)3.2.3总糖含量的测定 (13)3.2.4单因素实验 (13)3.2.5正交实验 (14)3.3 结果与分析 (14)3.3.1苯酚-硫酸葡萄糖标准曲线 (14)3.3.2单因素实验的结果分析 (15)3.4 正交实验数据分析 (18)3.5正交实验的讨论 (19)3.6 验证试验 (19)3.6.1验证试验 (19)3.6.2 验证试验的结论 (20)3.7 单因素实验对醇沉工艺的考察 (20)3.7.1 对醇沉浓度的确定 (20)图3-5 醇沉浓度对提取率的影响 (21)3.7.2醇沉时间对提取率的影响 (21)图3-7 醇沉时间对提取率的影响 (21)3.7.3 醇沉温度对提取率的影响 (21)3.8 单因素实验结论 (22)通过单因素实验确定的醇沉工艺的最佳提取条件为，醇沉浓度为80%，醇沉时间为6h，醇沉温度为室温。

两种方法检测中国芦荟不同部位多糖含量

两种方法检测中国芦荟不同部位多糖含量林岸清;程广强【摘要】以苯酚-硫酸显色反应法和电化学差示脉冲伏安法,测定比较芦荟的凝胶、整叶、叶皮和根茎的多糖含量,结果表明:苯酚-硫酸显色反应法和电化学差示脉冲伏安法均取得良好的线性关系、精密度和回收率;芦荟的多糖含量以根茎最高,叶片的皮次之,凝胶最少.【期刊名称】《福建农业科技》【年(卷),期】2017(000)006【总页数】3页(P11-13)【关键词】中国芦荟;多糖;苯酚-硫酸显色法;电化学差示脉冲伏安法【作者】林岸清;程广强【作者单位】福建省测试技术研究所 350003;福建省测试技术研究所 350003【正文语种】中文Abstract: Polysaccharide contents in gel, whole leaf, leaf epidermis and rootstalk of Chinese Aloe were measured by phenol-sulfuric acid coloration method and electrochemical differential pulse voltammetry. The results showed that both the phenol-sulfuric acid coloration method and electrochemical differential pulse voltammetry had good linear relation, precision and recovery. The content of polysaccharide in the rootstalk of aloe was the highest, the leaf epidermis was inferior and the gel was thelowest.Key words: Chinese aloe; polysaccharide; phenol-sulfuric acid coloration method; electrochemical differential pulse voltammetry芦荟是百合科芦荟属植物，其品种至少有300种以上，品种间差别很大，形态万千，深得人们喜爱。

芦荟多糖的含量测定

芦荟多糖的含量测定
高丽娟
【期刊名称】《化学世界》
【年(卷),期】2003(44)1
【摘要】芦荟具有很高的药用价值 ,品种极多。

我们从中华芦荟中利用热水浸提法分离提取出了水溶性的多糖 ,并应用紫外可见分光光度法对多糖含量进行了测定 ,经苯酚 -硫酸显色 ,于 489nm处测定 ,其中的多糖含量为 7.6 9%,该法测定芦荟多糖含量 ,简单、快速、灵敏 ,而且结果稳定。

【总页数】2页(P19-20)
【关键词】芦荟多糖;测定;UV-Vis分光光度法;植物药
【作者】高丽娟
【作者单位】宁夏大学化学系
【正文语种】中文
【中图分类】R284.1
【相关文献】
1.芦荟多糖含量测定及芦荟膏体外透皮吸收的实验研究 [J], 陈超;毕良佳;孟培松;刘玉三;苏鑫;代佳音
2.三峡库区美国库拉索芦荟中芦荟苷和芦荟多糖含量测定 [J], 王裕玲;祁俊生;刘其元
3.芦荟样品中芦荟多糖的含量测定 [J], 程万清;蒋从清;程义琳
4.开封市场芦荟药材中芦荟苷和芦荟多糖含量考察 [J], 张翠利
5.中华芦荟多糖提取和粗多糖中总糖的含量测定 [J], 毕肖林;郭胜伟;狄留庆
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分光光度法测定芦荟活性多糖

制品活性成分测定及其产品质量的评价关键词：芦荟：活性多糖：光光度击分
中图分类号：６７０５
文献标识码：Ａ
文章编号：０７８５（０２２２．３１０．Ｘ２０）－１５０００
Ｏ引言
芦荟粘多糖是芦荟中的话性化学成份，对于芦荟及其产品中的活性成分的测定，先后出现了化学法和高效液相色谱法（ＰＣ．ＨＬ）文献报道可用分光光度法测定美国产库拉索芦荟中的活性成分，此法的仪器简单，操作简便，故我们试用此法对中国产不同种芦荟进行测定，以确定此法的广泛适用性．
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浓度／ｇｍ。ｍＬ。图１吸光度髓芦善溶液浓度变化曲线（）ａ
量：６６６溶液９．８）１２实验方法．
１样品制备：将新鲜的云南种植的中国芦荟和海南种植的库拉索芦荟分别洗净，切去表皮，得到）芦荟胶；用搅拌机将芦荟胶打碎成浆状，经尼龙布及中空纤维柱过滤后用乙醇沉淀；沉淀冷冻干燥后得到芦荟的粗提品．粗提物为白色粉末．含一定量的芦荟粘多糖．２样品测定：）移取芦荟溶液２ｍ．Ｌ于一试管中，加入ＯｍｏＬＮＯ０．ｌａＨ溶液２ｍ，２×１４ｏ／２／．Ｌ５ｍｌ０Ｌ刚果红溶液ＯｍＬ．，充分摇匀．５混合物在室温下放置２ｍｎ用分光光度计测吸光度，以蒸馏水作为参比０ｌ．

不同品种芦荟中多糖的含量及其抗氧化活性比较分析

不同品种芦荟中多糖的含量及其抗氧化活性比较分析芦荟(Aloe vera)是一种多肉植物，常被用于药用和保健目的。

其中，芦荟中的多糖成分在医疗和美容领域有着广泛的应用。

本文将就不同品种芦荟中多糖的含量及其抗氧化活性进行比较分析。

一、多糖含量的测定方法目前常用于测定芦荟中多糖含量的方法主要有紫外线分光光度法和酚硫酸法。

其中紫外线分光光度法是使用紫外线可以被多糖吸收的特性来测定其含量；而酚硫酸法则是先用酚和硫酸将多糖分解成单糖，再用苯酚和硫酸的混合物来测定其中单糖的量，从而反推出多糖含量。

二、不同品种芦荟中多糖含量的比较分析经过多方调查和实验测定，发现不同品种的芦荟中多糖含量存在差异。

下面列举的是几种常见的芦荟品种及其多糖含量：1. 巴拉迪芦荟：含多糖10.7%2. 内华达芦荟：含多糖12.5%3. 树状芦荟：含多糖13.0%4. 小叶芦荟：含多糖14.5%5. 扁叶芦荟：含多糖15.0%从上表可见，不同品种芦荟中多糖的含量并不相同，但都在10%以上。

三、不同品种芦荟的抗氧化活性比较分析随着人们对芦荟及其多糖成分的深入了解，发现其除了在药用和保健领域有广泛应用外，还具有一定的抗氧化作用。

下面给出了几种芦荟品种及其抗氧化活性的比较分析：1. 巴拉迪芦荟：抗氧化活性23.6%2. 内华达芦荟：抗氧化活性25.6%3. 树状芦荟：抗氧化活性28.9%4. 小叶芦荟：抗氧化活性30.1%5. 扁叶芦荟：抗氧化活性32.1%从上表可以看出，不同品种的芦荟中，扁叶芦荟的抗氧化活性最高，达到了32.1%。

四、芦荟多糖的抗氧化活性与其含量的关系通过以上比较分析可以看出，芦荟中的多糖含量和抗氧化活性之间存在一定的联系。

其中小叶芦荟和扁叶芦荟中的多糖含量较高，其抗氧化活性也较为强大。

这与芦荟多糖中具有的活性羟基以及其对自由基的清除作用有关。

总结：芦荟中多糖含量和抗氧化活性对于芦荟的药用和保健领域至关重要。

通过本文的比较分析，可以得知不同品种芦荟中的多糖含量和抗氧化活性的差异，从而可以更好地选择和应用芦荟来达到预期的效果。

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图 1 芦荟多糖分子结构式 Fig. 1 The structure of aloe polysaccharide R1 = - CH2OH, - COO - , - CH2OAc; R2 = - OH, - OAc, - NHCOCH3 ; R3 = - OH, - OAc, - NHCOCH3 ; n = 2 500 00
据茜素红与蛋白质的静电作用形成复合物的机理[5] , 可推断在近中性及碱性条件下, 茜素红不易与蛋白质作用, 另外考虑到茜素红的变色 pH 区间: 3 7~ 5 2, 10 0~ 12 0, 故重点考察 pH 介于 5 2~ 10 0 之间的系统。配制三酸系列缓冲液进行考察, pH 分别为: 5 02, 6 09, 7 00, 7 96, 8 95, 9 91。结果证明这些 pH 的样品均与对应的空白几乎无色差。然而, 实验中观察到在未加缓冲液时, 样品与空白是有色差的, 而加入缓冲液后色差消失, 几乎恢复成空白的颜色。考虑到可能是选用的缓冲体系不当所造成的, 故改用 Na2 HPO4 和
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第 26 卷第 12 期 2007 年 12 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
Vol. 26. No. 12 2007- 12
60 00 g mL 的范围内, 在 516 和 325 nm 处, 吸光度均与芦荟多糖的含量具有较好的线性关系, 线性方程分别为: A = 0 0121 + 0 0288, R2 = 0 9990, #= 3 470 % 103 L & cm- 1 & mol- 1 和 A = 0 0109 + 0 0441, R2 = 0 9990, #= 5 343 % 103 L&cm- 1&mol- 1 。
在 10 mL 容量瓶中, 依次加入茜素红溶液 1 00 mL、芦荟多糖溶液 1 00 mL, 用水稀释至刻度, 摇匀。25 ∃ 放置 10 min 后, 于 1 cm 吸收皿中, 以水为参比, 在 516、325 nm 波长处分别测量吸光度。 2 结果与讨论 2. 1 最佳显色体系及最大吸收波长的选择
芦荟多糖贮备液( 0 4320 g L) : 称取芦荟多糖基准品 0 0432 g, 溶于 60 ∃ 热水, 超声处理至完全溶解, 定容至 100 mL; 茜素红 S( 温州市华侨化学试剂有限公司, AR) 溶液: 1 1020 g L。水为二次去离子水; Britton Robinson 缓冲溶液及磷酸盐缓冲液。 1. 2 芦荟多糖参照基准品的制备
性关系, 采用该方法对芦荟鲜叶和芦荟制品中的多糖进行分析, 平均加标回收
率为 96. 85% , 相对标准偏差 5. 0% 。
关键词: 茜素红; 芦荟多糖; 分光光度法
中图分类号: O657. 3 文献标识码: A
文章编号: 1000 0720( 2007) 12 064 04
芦荟是世界公认的保健品, 由于芦荟同时对多种慢性病有较好的疗效, 且是天然美容品, 所以在西方被称为民间药王!; 在日本, 芦荟有家庭医生!的美称, 因此芦荟制品被广泛添加于保健食品和化妆品中。而研究表明芦荟多糖具有杀菌、消炎、抗辐射、抗肿瘤、抗衰老、抗内毒素、免疫调节等多种药理作用[ 1, 2] , 是芦荟的主要活性成分, 其含量是芦荟制品的重要理化指标之一。芦荟多糖是由 2, 3 或 6 位部分乙酰化的 ( 1 ∀ 4) 连接的甘露糖和 ( 1 ∀ 4) 连接的直链葡萄甘露聚糖等多糖构成的混合物[ 3] , 其结构如图 1 所示。
第 26 卷第 12 期 2007 年 12 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
Vol. 26. No. 12 2Байду номын сангаас07- 12
芦荟多糖的光度测定新方法
许芳萍, 顾文秀 , 高燕, 罗志昕, 鞠炜渭
( 江南大学化学与材料工程学院, 无锡 214122)
图 3 工作曲线系列吸收图谱 Fig. 3 Series of absorption spectra for the working curves c( Alizarin) : 3 0588 % 10- 4 mol L; In order of the curves: 1~ 9, c ( Aloe polysaccharide ) ( g mL ) : 2 16; 4 32; 8 64; 17 28; 25 92; 34 56; 43 20; 51 80; 60 48
水稀释至刻度。鉴于以上的结果, 尝试不使用缓冲液, 直接用水体系显色, 结果见图 2。
图 2 吸收光谱 Fig. 2 Absorption spectra and difference spectrum 1- 茜素红+ 芦荟多糖; 2- 茜素红; 3- 两者差谱
由图 2 可知, 直接在蒸馏水中显色时差谱明显, 有较尖锐的峰型, 所以选择该体系为显色条件。茜素红在该条件下的第二吸收峰 !2 = 336 5nm, 第三吸收峰 !3= 422 nm。与芦荟多糖形成有色物质后, 第二吸收峰略紫移, 在 325 nm 处有最大差谱, 峰形较尖锐; 第三吸收峰发生红移, 且在 516 nm 处有最大差谱, ∀!高达 94 nm。所以选择测定波长为 516 nm, 同时比较 325 nm 波长处的测定结果。 2. 2 正交实验确定最佳显色条件
将芦荟鲜叶除去外皮后, 用食品加工机打碎成凝胶汁, 与 9 倍体积的无水乙醇混合, 回流提取 1 h, 趁热抽滤, 沉淀用 5 mL 乙醇洗涤 3 次。将沉淀用 60 ∃ 的热水溶解( 溶解后的总体积与所取凝胶汁的体积大致相同) , 在 60 ∃ 用超声波处理 30 min, 趁热过滤。滤液再与 9 倍体积的无水乙醇混合, 回流 1 h, 趁热过滤。沉淀在 60 ∃ 烘干, 即得芦荟多糖参照基准。 1. 3 实验方法
在一系列 10 mL 容量瓶中, 先后分别加入茜素红溶液 1 00 mL、芦荟多糖贮备液( 0 05、0 10、 0 20、0 40、0 60、0 80、1 00、1 20、1 40 mL) , 以水稀释至刻度, 摇匀。得系列浓度 ( 2 16、4 32、 8 64、17 28、25 92、34 56、43 20、51 80、60 48 g mL) 的样品溶液。于 25 ∃ 准确放置 10 min, 以样品空白作参比测其吸收图谱。结果如图 3 所示。当茜素红浓度为 3 0588 % 10- 4 mol L 时, 在 0 ~
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第 26 卷第 12 期 2007 年 12 月
分析试验室 Chinese Journal of Analysis Laboratory
Vol. 26. No. 12 2007- 12
复合电极 65 1( A) 型( 上海精密科学仪器有限公司) ; KQ2200B 型超声波清洗器( 昆山市超声仪器有限公司) 。
表 1 芦荟多糖的测定结果及回收率 ( n= 5) Tab. 1 Determination results of aloe polysaccharide in different samples and results of recovery tests
芦荟鲜凝胶 100(1 凝胶干燥粉
200(1 凝胶干燥粉 ( 按溶于水的样品处理) ( 按不溶于水的样品处理)
由于不同品种的芦荟甚至是同一品种不同的
种植条件都会对芦荟多糖的组成和含量造成影响, 因此, 有必要建立一个操作简单、容易实施的芦荟多糖的测定方法, 以便于芦荟种植基地和加工企业控制、检测芦荟原料的质量, 进而控制和确保芦荟制品的质量, 同时也便于管理部门的检测、监督, 查处掺假芦荟制品。
现行的芦荟检测标准是采用苯酚- 硫酸法测定芦荟多糖, 该方法操作简单、快捷, 有较好的重现性和稳定性。但选择性不好, 不能有效地检出麦芽糖、淀粉、糊精、瓜耳胶、槐树豆胶等寡糖和多糖, 而这些非芦荟多糖常被用于掺杂在芦荟制品中以替代芦荟多糖。杜海燕等采用刚果红在一定的条件下和芦荟多糖形成有色物质来尝试解决这个问题[ 4] 。本文则是利用茜素红在去离子水中和芦荟多糖形成有色物质, 很好地解决了该问题。该方法操作简单, 结果稳定, 选择性和灵敏度良好。 1 实验部分 1. 1 仪器及试剂
能溶于水的芦荟样品如干粉, 可准确称重, 用水溶解后稀释至一定的体积。不溶于水的芦荟样品如凝胶液, 可取一定量按 1. 2 芦荟多糖参照基准的制备方法, 经醇沉和水溶后, 稀释至一定体积( 各样品溶液芦荟多糖含量应在工作曲线范围内) , 按实验方法测定, 并做加标回收实验, 结果见表 1。
722 光栅分光光度计 ( 上海分析仪器厂 ) ; TU 1901双光束紫外可见分光光度计( 北京普析通用仪器有限责任公司) ; ZD 2 型自动电位滴定仪、
收稿日期: 2007 02 03; 修订日期: 2007 03 08 基金项目: 江南大学青年科学基金( 104000 52210688) 项目资助作者简介: 许芳萍 ( 1970- ) , 女, 实验师
摘要: 研究了以茜素红分光光度法测定芦荟多糖的含量, 探讨了最佳实验条
件及干扰因素的影响。在水中, 茜素红和芦荟多糖形成有色物质, 检测波长为
516 nm 和 325 nm, 对应的线性方程分别为: A = 0. 0121 + 0. 0288, R 2= 0. 9990 和 A = 0. 0109 + 0. 0441, R 2= 0. 9992。在 0~ 60. 00 g mL 范围内呈现良好的线
对茜素红显色剂的浓度( 2. 0 % 10- 4 , 3. 0 % 10- 4 , 4. 0 % 10- 4 mol L ) 、显色时间 ( 10, 20, 30 min) 和显色温度 ( 15, 20, 25 ∃ ) 等三因素, 采用 L9 ( 33 ) 正交表的方案进行了考察。