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335例乙型肝炎患者血清HBV-DNA定量与乙肝病毒标志物的相关性分析

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335例乙型肝炎患者血清HBV-DNA定量与乙肝病毒标志物的相关性分析

陈凤萍;沈云峰;吴瑶;张洪波

【摘 要】Objective: To study the association between HBV-DNA level and

HBV markers in hepatitis B patients. Methods: A total of 335 hepatitis B

patients were recruited in this study. Serum HBV-DNA level was quantified

by fluorescence quantitative polymerase chain reaction (FQ-PCR)and

serum HBV markers were detected by enzyme-linked immunosorbent

assay (ELISA) separately. The association between HBV-DNA level and HBV

markers was primarily investigated by statistical analysis. Results: The HBV-DNA positivity and level were significantly higher in

HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+) patients than those in other groups(P 〈 0.

01); The HBV-DNA positivity and level were significantly lower in HBsAg

(+), HBeAb (+), HBcAb (+) pa- tients than those in

HBsAg(+),HBeAg(+),HBcAb(+) patients(P 〈 0. 01), but the differences were

no statistical significance between HBsAg(+ ) ,HBeAb (+) ,HBcAb (+)

patients and HBsAg (+), HBcAb (+) patients (P 〉 0. 05) ; HBV-DNA

positivity was significantly higher in HbeAg (+) patients than in HbeAg(-)

patients (P 〈0.01 ). Conclusion: Combining quantitative detection of HBV-DNA with HBV markers, in order to provide a reliable basis for judging the

hepatitis B infection, virus replication, infectious intensity and the effect of

antiviral observations.%目的：探讨乙型肝炎患者血清HBV-DNA定量与乙肝病毒标志物的关系。方法：对335例乙型肝炎患者分别用实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）检测血清HBV-DNA含量,酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清乙肝病毒标志物,并对结果进行统计学分析。结果：大三阳组HBV-DNA阳性率及含量显著高于其他组（P〈0.01）;小三阳组HBV-DNA阳性率及含量显著低于大三阳组（P〈0.01）,但与HBsAg、HBcAb阳性组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;HBeAg阳性组HBV-DNA阳性率显著高于HBeAg阴性组（P〈0.01）。结论：只有将HBV-DNA定量检测和乙肝病毒标志物有机的结合,才能为乙型肝炎的临床感染、病毒复制、传染性强弱以及抗病毒药物的疗效观察提供可靠的判断依据。

【期刊名称】《江汉大学学报（自然科学版）》

【年(卷),期】2012(040)005

【总页数】3页(P93-95)

【关键词】HBV-DNA;实时荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）;乙肝病毒标志物

【作 者】陈凤萍;沈云峰;吴瑶;张洪波

【作者单位】江汉大学附属医院检验科,湖北武汉430015;江汉大学附属医院检验科,湖北武汉430015;江汉大学附属医院检验科,湖北武汉430015;江汉大学附属医院检验科,湖北武汉430015

【正文语种】中 文

【中图分类】R512.620.4

乙型肝炎是一种严重危害人类健康的传染病，它是我国慢性肝炎、肝硬化和原发性肝癌发生的主要病因。乙肝病毒（HBV）感染后，因其发病的病理生理机制尚未阐明，临床症状及表现十分复杂，病情迁延可有多种不同的血清学标志物模式。近年来，能反映乙型肝炎患者体内乙肝病毒水平变化的实时荧光定量聚合酶链反应

（FQPCR）的应用为临床提供了更有力的诊治手段。本研究采用 FQ－PCR方法检测 HBV－DNA含量，ELISA法检测乙肝病毒标志物，旨在探讨HBVDNA含量与各种乙肝病毒标志物之间的关系，为乙型肝炎的临床感染、病毒复制、传染性强弱以及抗病毒药物的疗效观察提供可靠的判断依据。

1 材料与方法

1.1 临床标本

335例血清标本来自2010年7月－2011年7月在江汉大学附属医院住院及门诊乙型肝炎患者，排除酒精肝、脂肪肝及合并有HCV、HAV、HEV等其他肝炎病毒感染者。收集患者空腹外周血，然后分离血清，乙肝病毒标志物当天检测。分离血清后取200 μL血清标本置－20℃保存待检，再定期由专人在临床基因扩增实验室操作检测 HBV－DNA。

1.2 检测方法

HBV－DNA定量检测采用FQ－PCR法，仪器为上海宏石医疗科技有限公司生产的SLAN荧光定量PCR检测仪，试剂为上海克隆生物高技术有限公司提供的乙型肝炎病毒核酸扩增荧光定量检测试剂盒。乙肝病毒标志物检测采用ELISA法，仪器是上海科华生物工程股份有限公司生产的ST－360全自动酶标仪，试剂由上海科华生物工程股份有限公司提供。所有试验均严格按照试剂盒说明书操作。

1.3 统计学分析

采用χ2检验比较各组间的HBV－DNA阳性率，采用t检验比较组间的病毒含量。

2 结果

2.1 HBV－DNA定量与乙肝病毒标志物阳性率

研究结果显示大三阳组，HBV－DNA阳性率显著高于其他两组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；小三阳组，HBV－DNA阳性率显著低于大三阳组，但与HBsAg、HBcAb阳性组比较差异无统计学意义（P ＞ 0.05）， 见表 1。

表1 HBV－DNA定量与乙肝病毒标志物阳性检测结果比较注：①组与②组比较：a：P ＜ 0.01，c：P ＜ 0.01；②组与③组比较：b：P>0.05，d：P>0.05；①组与③组比较：e：P ＜ 0.01，f：P ＜ 0.01。组别①HBsAg HBeAg HBcAb（大三阳）②HBsAg HBeAb HBcAb（小三阳）③HBsAg HBcAb④HBeAb

HBcAb⑤HBsAg HBeAb合 计例数4023844112335阳性例数391072001167阳性率/%97.5abe 45.0abe 45.5abe 0.050.049.9平均含量/（IU·mL-1）3.79×107 cdf 4.66×105 cdf 2.96×106 cdf 0.001.16×105—

2.2 HBV－DNA含量与乙肝病毒标志物

血清乙肝病毒标志物阳性不同模式的患者中，存在不同程度的病毒复制。研究结果显示大三阳组，HBV－DNA含量显著高于其他两组，差异具有统计学意义（P＜0.01）；小三阳组，HBVDNA含量显著低于大三阳组，但与HBsAg、HB-cAb阳性组比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

2.3 HBeAg阳性组与阴性组比较

HBeAg阳性组HBV－DNA阳性率显著高于HBeAg阴性组，差异具有统计学意义（P＜0.01），见表2。

表2 HBeAg阳性组与阴性组HBV－DNA阳性率HBeAg阳性阴性合计HBV-DNA阳性例数39128167阴性例数1167168阳性率/%97.543.449.9

3 讨论

ELISA法检测乙肝病毒标志物是临床诊断乙肝病毒感染的传统方法，它反映的是人体对乙肝病毒的免疫反应状态，也是目前诊断乙型肝炎最常用的方法；FQ－PCR方法检测HBV－DNA含量能更直接和特异地反映乙型肝炎患者体内病毒水平的变化。乙型肝炎患者其血清病毒标志物呈多种模式，本研究中以大三阳、小三阳和HBsAg、HBcAb 阳性占大多数（96.1%）， 这与文献［1］报道一致。研究表明，血清乙肝病毒标志物的不同模式中，血清HBV－DNA检出率也不同。表1结果显示，大三阳组HBV－DNA阳性率为97.5%，病毒平均含量 3.79×107IU／mL，

其 HBV－DNA 阳性率及含量显著高于其他组（P＜0.01），表明大三阳患者体内乙肝病毒复制活跃，传染性强。研究中有1例大三阳患者体内HBV－DNA检测为阴性，分析其原因可能有：①由于治疗药物使HBV－DNA复制受抑制；②与扩增引物对应的乙肝病毒DNA序列发生变异；③患者体内乙肝病毒可能整合到肝细胞中，故血液中检测不出来；④试剂等敏感性较差，HBV－DNA检测存在一定的局限性。在小三阳组中，HBV－DNA阳性率为45.0%， 病毒平均含量 4.66×105IU／mL， HBVDNA阳性率及含量显著低于大三阳组（P＜0.01）。虽然大部分小三阳患者HBV－DNA处在低病毒水平，仍有少部分患者血清HBV－DNA含量较高，表明虽然血清中出现了HBeAb，但病毒并未停止复制，只是复制缓解或部分患者出现病毒基因变异［2］，仍具有较强的传染性。临床上HBeAb阳性的大部分患者肝硬化进展可能与低水平病毒复制有关［3］。 在 HBsAg、 HBcAb 阳性组中，

HBV－DNA阳性率为 45.5%， 平均含量 2.96×106IU／mL， 其HBV－DNA阳性率及含量与小三阳阳性组比较差异无统计学意义 （P＞0.05）。另外血清HBeAb、HBcAb阳性和HBsAg、HBeAb阳性的乙肝病毒标志物模式都属于常见类型，但本研究中分别因无阳性病例和例数太少而未进行统计学分析，今后可以增加例数进一步分析。

HBeAg与乙肝病毒的复制密切相关。表2中HBeAg阳性组血清HBV－DNA阳性率显著高于HBeAg阴性组，两者差异有统计学意义 （P＜0.01），表明HBeAg阳性患者体内病毒复制活跃，传染性强。由于HBeAg是乙肝病毒基因组前C或C区段的mRNA表达，当其基因组发生突变时，HBeAg表达可以减弱甚至于消失，但仍存在病毒复制。在乙肝患者治疗期间，病毒的清除首先表现为e

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乙肝病毒性肝炎患者两对半临床医学检验分析

乙肝病毒性肝炎患者两对半临床医学检验分析

乙肝病毒性肝炎患者两对半临床医学检验分析

本次病例涉及4名乙肝病毒性肝炎患者，其中两对半，即AB和CD属于夫妻关系，EF为同事关系。其在临床医学检验方面的表现如下所述。

一、临床表现

病例中乙肝病毒性肝炎患者的临床表现比较一致，主要表现为乏力、纳差、食欲不佳、黄疸、腹胀等。这些表现从病情初期到中期都会出现，严重的病例会出现肝硬化和肝癌等并发症。这些表现是通过临床检查和患者的自我感觉获取的。

二、实验室检测

1. 乙肝标志物检测

通过对患者血清进行检测，发现其HBV-DNA、HBsAg、HBeAg、HBcAb、HBeAb皆为阳性，符合乙型肝炎病毒标志物的检测结果。

2. 乙肝系列抗体检测

患者血清HBsAb、HBcIgM、HBcIgG、HBeAb包括血清HBsAb、HBcIgM、HBcIgG、HBeAb等指标均为阳性结果。到达病情稳定期时，血清HBsAb可以持续高水平阳性。

3. 肝功能指标检测

患者ALT、AST、γ-GT、ALB及总胆红素等指标均有不同程度的升高。

4. 单核细胞维生素B12结合蛋白检测

由于患者常常存在不同程度的腹胀和腹痛等症状，且对维生素B12的吸收能力下降，因此对单核细胞维生素B12结合蛋白进行检测，可以更好地反映患者的营养状况和肝功能。

5. 内衣补体C4检测

患者血清C4的水平普遍偏低，从而证实了乙肝患者在免疫方面存在一定的缺陷。

三、治疗方案

由于乙肝病毒性肝炎是一种病情逐渐发展的疾病，加上并发症严重，因此对于这类患者来说，早期发现和治疗显得尤为重要。以下为常用的治疗方案：

1. 抗病毒药物治疗 对于乙肝病毒性肝炎患者来说，抗病毒药物治疗是一种比较有效的治疗方法。同时，由于不同的患者病情不同，需要根据每个人的实际病情采用不同的药物。

血清乙肝标志物定量检测的应用心得(1)

血清乙肝标志物定量检测的应用心得(1)

血清乙肝标志物定量检测的应用心得(1)

【摘要】目的探讨血清乙肝标志物定量分析在临床中的应用。方法对临床标本定性用；定量用酶免分析仪检测。结

乙肝是目前世界上主要的传染病之一，而血清乙肝标志物的临床检测始于20世纪80年代中期，对乙肝疾病的诊断，病情监测，疗效观察起到了一定的积极作用，但随着临床医学和检验医学的发展，定性检测已远远不能满足临床和患者的需求，乙肝二对半定量检测已势在必行，可以大大弥补酶

1

定量检测中HbsAg灵敏度可达/ml,而酶标检测HbsAg灵敏度可达2ng/ml,也就是说血清中HbsAg达到2ng/ml酶标才会呈现阳性。而定量检测却能及早检出HbsAg，确证HbsAg感染，几乎能与presi同时检出，在病情检测中大大缩短了急性乙肝HbsAg检测的“窗口期”；而定性检测早期往往HbsAg呈阴性。如病毒发生变异后，表达量较低，常规ELISA检测不出抗原，而定量具有极高的灵敏度，可发现并极有可能检测出HbsAg和HbsAb,血清中HbsAg含量与病人对HbsAg细胞免病成反比关系，而肝功能改变则与此种细胞免疫成正比。 定量检测可发现低浓度的HbsAg携带者.特别是一些群体,如医护工作者、病人家属等，由于长期密切接触，但又非直接经血液传播感染成急性乙肝，而是长期少量感染，并刺激机体产生一定的免疫力，可能呈低浓度感染，特别应当引起人们的重视和密切关注并采取措施防止发展成乙肝患者或慢

2

疾病的发生、发展、疗效、预后是一个动态的变化过程。定性检测只能给临床提供阴性或阳性结果，不能动态观察；而定量检测乙肝两对半各标志物的浓度变化可以对乙肝的病程、治疗、预后起一个全过程动态检测作用，能够为医生对病情的诊断、治疗提供合理的解释依据，指导治疗。

定量分析HBsAg和HBsAb的浓度变化，可以预见急性乙肝是否处于恢复期。如果HBsAg

浓度降低，HBsAb的浓度逐渐升高，可说明病情正在往恢复期发展。反之,HBsAg浓度处于较高水平或上升趋势，而HBsAb一直处于较低水平，则病情发展成急性乙肝或慢性携带者；在急性乙肝中，血清HbsAg的定量检测是最好的预后指标。如果两个血清样本间隔3周浓度降低少于一半的话，证明这个患者有能力清除HBV，因此就能恢复健康。在一般情况下，发病开始后抗原降解的半衰期约为9d，如果缺少这 样一个浓度的衰减过程，就预示着发展成HbsAg的携带状态，通常则易发展为慢性乙

乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义

乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义

乙型肝炎病毒血清标志物的临床意义

目的 阐述血清标本的乙型肝炎病毒(HBV)标志物的临床意义,指导临床工作者对乙型肝炎的正确诊治。方法 结合自己工作经验并参考相关文献,阐述检测血清标本的HBV标志物方法和临床参考值的意义。结果 血清标本的HBV标志物的检测可以作为快速诊断乙肝的简便方法,为临床所应用。结论 正确认识乙型肝炎病毒血清标志物对临床医生有十分重要的指导意义。

标签： 乙型肝炎病毒 标志物 临床意义

肝炎病毒感染机体后,血液中可产生一种或多种抗原抗体系统。检测病人血清中的这些病原标志物,对病毒性肝炎的分型、临床诊断、传染性的判定、发病机理的研究和流行病学调查具有重大意义。本文就乙型肝炎病毒(HBV)血清标志物的检测及临床意义阐述如下。

HBV至少有3个抗原抗体系统:表面抗原抗体系统(HbsAg,HBsAb)、e系统(HbeAg,HBeAb)和核心抗原抗体系统(HbcAg,HBcAb)。目前HbcAg在一般化验室中尚难直接检测到,临床上常用的指标如下。

(1)HbsAg和HbsAb:HBsAg是HBV感染后第1个出现的血清指标,HbsAg阳性表明有HBV急性感染或持续感染。持续6个月以上阳性为慢性感染。HbsAg在血液中以下列3种形式存在：①Dane颗粒(HBV完整病毒)外壳是HbcAg,内心为HbeAg;②小球形颗粒(HbsAg本身)是Dane颗粒装配后过剩外壳;③管状颗粒可裂解而成为数个小球形颗粒。HbsAg是HBV感染后最早和最常见的指标,它一般多在感染后4～6周(转氨酶或黄疸升高前2～4周)出现,至恢复期消失(感染后5～7个月)。如转为慢性肝炎或携带者,可持续数年或终生。但是:①HbsAg阳性表示有过感染或正在感染,并不说明现在HBV是否复制;②HbsAg滴度与肝脏病变类型无关,也不指示预后好坏;③HbsAg滴度与病情变化无肯定一致的关系,也不应将HbcAg滴度升降作为判定病情好坏和药物疗效的指标。HbsAg>100mg/L时,多同时伴有HBeAg(+)。<5μg/L的低质量浓度时,可能是病毒感染的恢复期或处于低复制或不复制状态状况,在“健康”人群中有2%～3%,在HBsAg(+)人群中占23%～24%。因此,单测HbsAg意义是有限的,应综合其它HBV指标进行分析才有意义。HbsAg消失后出现HbsAb,这被认为是唯一的一种保护性抗体。当人体感染HBV后产生了特异性免疫应答,或接种了HBV疫苗,或注射了高价乙肝免疫球蛋白时,会出现抗HBs阳性。HbsAb是保护性抗体。也有人认为,高浓度抗HBs一般为IgM抗体,没有保护性,仍有可能HBV再次感染。最近有人在人群中普查发现低滴度HbcAb并不能抵抗HBV感染。李贵玲等[1]研究发现,280例HBV-DNA阳性病例中,抗-HBs、抗-HBs/抗-HBc、抗-HBs/抗-HBc/抗-HBe阳性者分别为1例、1例和2例,而且有3例为HBsAg和抗-HBs同时阳性,说明抗-HBs的出现并不能排除对乙型肝炎的诊断。

HBV血清免疫标志物与HBV-DNA定量检测的相关性分析

HBV血清免疫标志物与HBV-DNA定量检测的相关性分析

HBV血清免疫标志物与HBV－DNA定量检测的相关性分析

摘要】目的 通过对血清中的乙型肝炎病毒核酸（HBV-DNA）与乙型肝炎病毒血清免疫标志(HBV-M)的检测，分析二者的关系及临床意义。方法 采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)及酶联免疫吸附测定法(ELISA法)对426例疑似乙型肝炎患者分别检测血清HBV-DNA含量、HBV免疫标志物。结果 HBsAg(+) HBeAg(+)

HBcAb(+)组（大三阳组）病毒阳性率为99.1%，平均拷贝数为2.54×106，为最高。HBs Ag(+) HBe Ab(+)HBcAb(+)组（小三阳组）病毒阳性率为23.1%，平均拷贝数为8.53×103。其它组也有一定的HBV-DNA阳性率和含量。从8组血清学模式来看，HBeAg(+)与HBV-DNA含量关系最为密切，具有一定的正相关性。结论 各种乙肝两对半组合模式临床意义不同，HBV-DNA的检测是反映病毒有无复制的精确指标，因此两者联合检测不仅可以提高检出率，避免漏诊，同时也为临床对HBV感染、复制、传染性判定以及抗病毒治疗提供可靠的判定依据。

【关键词】 HBV-DNA 乙肝免疫标志物 荧光定量PCR 酶联免疫吸附法

【中图分类号】R512.6+2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）22-0074-02

乙型肝炎是我国目前主要传染病之一，可引起急性、慢性迁移性活动性肝炎及肝癌，对人类健康危害极大。我国是乙型肝炎的高发区，有资料显示，乙肝病毒(HBV)感染人群高达10% [1] 。乙型肝炎病毒(HBV)是一种严重危害人类健康的世界性传染病。我国是HBV高流行区，50％～70％的人受过感染，HBV表面抗原

(HBsAg)携带者为5％～10％ [2]，肝炎患者已达2000多万人，其中60％为慢性肝炎患者，HBV又与肝硬化以及原发性肝癌有密切关系。血清免疫标志物检测HBV-DNA定量检测是当前检测乙型肝炎的主要方法，而血清标志物是检测血清中的抗原抗体，是诊断乙肝常规方法，其检测结果反映了人体对HBV的免疫状态，HBV-DNA是直接反映HBV病毒复制的指标，为是否具有传染性的判断、疗效的观察提供了确切的依据。今对426例疑似乙肝患者分别采用荧光定量PCR (FQ-PCR)和酶联免疫吸附法检测HBV-DNA和HBV-M，并对结果进行统计学处理，探讨HBV-DNA与HBV-M的关系，现报道如下。