中性粒细胞碱性磷酸酶染色在血液病诊断中的应用

白细胞增多的不同疾病患者NAP积分的检测与意义陈金花;陈敦雁【摘要】目的探讨白细胞增高的疾病患者的中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)积分的变化及其临床意义.方法采用Kaplow偶氮偶联法对140例外周白细胞增高患者的EDTA抗凝血,其中包括32例感染性疾病患者、34例手术后患者、25例肿瘤患者(使用集落刺激因子后)、24例妊娠妇女以及25例危重患者,对他们进行中性粒细胞碱性磷酸酶染色,并显微镜镜检计算其积分.另外,选择25例健康体检者作为对照组.结果中性粒细胞碱性磷酸酶染色在感染性疾病患者、手术后患者、肿瘤患者、妊娠妇女积分均高于正常,而在危重患者积分却低于正常.结论在不同疾病患者中性粒细胞碱性磷酸酶积分是不同的,可以将其作为病情观察及疗效的判断指标.【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2010(021)010【总页数】3页(P89-91)【关键词】中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)积分;白细胞增多;集落刺激因子【作者】陈金花;陈敦雁【作者单位】福建省立医院检验科,福建福州,350001;福建省立医院检验科,福建福州,350001【正文语种】中文【中图分类】R557+.1中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)是一种细胞内水解酶,主要存在于成熟中性粒细胞中,是粒细胞功能的标志酶之一[1],测定其活力的高低对于某些疾病的诊断、鉴别诊断和疗效观察有重要价值。

笔者对我院白细胞大于15×109/L患者的血液标本做了NAP染色,现将结果报道如下：1.1 研究对象 2006年 10月至 2006年 12月在我院测得其白细胞大于15×109/L 的患者 140例,其中包括感染性疾病 32例、手术后患者 34例、接受集落刺激因子(CSF)治疗的肿瘤患者 25例、妊娠妇女 24例、危重病人 25例。

另外,随机选取25例健康体检者作为对照。

上述两组,男 90例,女 75例 ,年龄 7-78岁 ,平均 32.5岁。

综述：碱性磷酸酶在临床诊断与治疗中的应用作者：陆双妙 201540007医学检验技术15级17班1组碱性磷酸酶在临床诊断与治疗中的应用陆双妙广西医科大学15级17班1组（广西南宁）前言：碱性磷酸酶（ALP或AKP）是广泛分布于人体肝脏、骨骼、肠、肾和胎盘等组织经肝脏向胆外排出的一种酶。

随着对其研究的深入发展，涉及的内容和应用范围越来越广泛。

本文综合概述了碱性磷酸酶主要在临床检验方面的应用。

摘要：碱性磷酸酶按分布部位的不同可分为骨碱性磷酸酶、血清碱性磷酸酶以及中性粒细胞碱性磷酸酶等，本文分别探讨及阐述了它们各自在临床诊断中的应用和价值。

关键词：碱性磷酸酶1.骨碱性磷酸酶在临床诊断中的应用①检测骨碱性磷酸酶含量对小儿佝偻病的早期诊断价值佝偻病是婴幼儿的常见病，也是我国重点防治的儿科疾病之一。

佝偻病是由于维生素D 摄入不足或吸收障碍导致机体内钙、磷代谢紊乱，继而使骨发育障碍。

佝偻病如果不及时发现并治疗，可能造成骨骼的畸形，对患儿生理和心理造成损害，严重的佝偻病还会对患儿的神经、肌肉等系统或组织造成损害，故早期对婴幼儿进行佝偻病的筛查十分重要。

佝偻病早期缺乏特异性症状，患儿常常出现易激惹、夜惊、多汗等，且目前临床上对于、佝偻病的早期筛查尚无较为有效的指标，而对于<2岁，尤其是<1岁的婴幼儿，其血生化、X 线的表现均不明显，故临床上早期诊断婴幼儿佝偻病的困难很大①。

虽然我国佝偻病的发病率近年来逐年下降，但仍然很高②。

佝偻病如果不及时治疗，很容易造成畸形，严重者甚至会损伤神经系统，故对佝偻病进行早期、有效的筛查十分重要。

BALP是由成骨细胞合成的一种生物酶，其含量与成骨细胞的活性成正比，佝偻病患儿在临床症状未出现之前，骨钙化受阻就已经发生，当骨钙化不足时，成骨细胞活性增强，BALP含量也随之升高。

通过研究，898.IC 得出的结果显示，观察组患儿血清中BALP含量显著高于对照组(P<0．05)，而观察组BALP≥200 U／L的阳性检出率高达91．5％，显著高于对照组的21．0％(P<O．05)，这说明在未出现明显临床症状时，成骨细胞已经开始活跃，验证了上述的观点，说明BALP对于骨钙化不足较为敏感。

中性粒细胞碱性磷酸酶积分参考值
中性粒细胞碱性磷酸酶积分是需要了解，因为偏高或者偏低，都可能是一些疾病的征兆表现，通常阳性率10-40%，积分值
40-80，了解NAP阳性率及积分，可以帮助有效地诊断和辨别一
些疾病。

1、中性粒细胞碱性磷酸酶积分正常值范围是5O~12O分，其临床化验意义1.有助于慢性粒细胞白血病与感染或类白血病反
应的诊断与鉴别诊断。

2.有助于骨髓增生性疾病的鉴别诊断。

2、碱性磷酸酶主要存在于成熟阶段的中性粒细胞，其他细
胞均呈阴性反应。

阳性反应为在胞质中出现灰色到棕黑色颗粒，反应强度分为5级，即-、+、2+、3+、4+。

反应结果以阳性反应细胞的百分率和积分值来表示。

血涂片经染色反应后，在油镜下，
连续观察100个成熟中性粒细胞，记录其阳性反应细胞所占的百分率即为阳性率；并对所有阳性反应细胞逐个按其反应强度作出+~4+的分级，将各级所占的百分率乘以级数，然后相加，即为积分值。

3、参考值：阳性率10-40%，积分值40-80。

中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是中性粒细胞的标志酶，主要存在于成熟中性粒细胞内，是其胞质特殊颗粒释放的一种在碱性条件（pH9.3～9.6）能催化各种醇和酚的单磷酸酯水解的非特异性水解酶。

NAP 活力可反映成熟粒细胞的成熟程度和功能，随着细胞的成熟，酶的活性也逐渐增强。

4、当中性粒细胞活化后，NAP阳性率及积分升高在病理情况下，NAP活性的变化常有助于某些疾病的诊断和鉴别诊断。

临床医学检验技师初级（师）临床血液学（急性髓细胞白血病及其实验诊断、慢性白血病）模拟试卷1(题后含答案及解析) 题型有：1. A2型题 2. A3型题 3. A3型题 4. A1型题 5. B1型题 6. B1型题1．男，22岁，头昏乏力，鼻黏膜及牙周出血1周。

检验：Hb 85 g／L，WBC 42×109／L，PLT23×109／L，外周血片中有幼稚细胞；骨髓检查示增生极度活跃，原始细胞占50％，早幼粒细胞占21％，POX染色强阳性，NAP染色阴性，NSE染色部分呈阳性且不被NaF抑制。

确诊为急性非淋巴细胞白血病，FAB分型为A．M1型白血病B．M2型白血病C．M3型白血病D．M4型白血病E．M5型白血病正确答案：B解析：M2a型骨髓原始粒细胞30％～90％(非红系细胞)，单核细胞＜20％，早幼粒以下阶段＞10％；血象以原始粒细胞及早幼粒细胞为主。

此型白血病细胞的特征是形态变异及核质发育不平衡。

POX、AS—D—NCE染色均呈阳性反应，AS—D—NAE可呈阳性反应，但强度较弱，且不被氟化钠抑制。

本病例原始细胞占50％，与M1的＞90％不符。

知识模块：急性髓细胞白血病及其实验诊断男，19岁，发热、牙龈出血10天，实验室检查：Hb 75 g／L，WBC 2．0×109／L，细胞分类示：中性粒细胞70％，淋巴细胞25％，单核细胞5％，PLT 23×109／L，骨髓检查显示增生明显活跃，原始细胞占35％，早幼粒细胞占16％。

2．本病最可能的诊断是A．MDSB．AAC．急性白血病D．类白血病反应E．CML正确答案：C解析：按白血病分化程度分类，急性白血病是骨髓中某一系列原始细胞(或原始加幼稚细胞)高于30％。

知识模块：急性髓细胞白血病及其实验诊断3．骨髓、血象增生极度活跃，原始细胞40％，原始细胞化学染色结果：POX(+)、NAP积分5分，NBE(一)。

最可能的诊断是A．急性粒细胞白血病B．慢性粒细胞白血病C．急性单核细胞白血病D．急性淋巴细胞白血病E．急性巨核细胞白血病正确答案：A解析：粒细胞化学染色POX至少有3％原始粒细胞阳性，NAP活性明显降低，甚至消失，NBE(一)。

中性粒细胞碱性磷酸酶染色液（NAP）预期用途：供骨髓细胞图片及血液细胞图片染色检查检验原理：本染色方法为偶氮偶联法，在PH9.2-9.8的碱性环境下，细胞中的碱性磷酸酶能将底物磷酸萘酚AS-BI水解，生成α-萘酚，再以稳定的重氮盐与萘酚偶联生成不溶性有色偶氮染料沉淀，定位于细胞浆中主要组成成分：储存条件：本试剂盒应储存于2℃-8℃低温环境。

样本要求：新鲜骨髓细胞涂片及血液细胞涂片（切勿使用抗凝血）检验方法：一、工作液配制（一）、浸染工作液配制（一份浸染工作量是43ml,至少可同时放置8-10张涂片）1、重氮盐溶液的准备：B液1ml与C液1ml彻底混匀，静置2分钟；2、染缸（自备染液缸）内加入蒸馏水40ml；3、将重氮盐溶液倒入染缸内，混匀4、再加D液1ml入染缸内，轻轻混匀（二）滴染工作液配制（一份滴染工作液是2.15ml）使用器材：一次性塑料试管、微量移液器，一次性吸嘴，滴管。

操作：取B液50μl,C液50μL混匀，静置2分钟，再加蒸馏水2ml，D液50μl,混匀，二、染色步骤1、干燥涂片，滴加A液固定剂（用前恢复室温，并充分摇匀）固定约30-60秒，蒸馏水冲洗，甩干；2、滴加或浸入工作液15分钟，蒸馏水冲洗2-3分钟，甩干3、E液(使用前务必摇匀！)复染1-2分钟，蒸馏水冲洗，干后镜检4、计算积分：反应结果以积分值报告，油镜下计数100个中性杆状核、分叶核粒细胞，分别记录其分级情况，所有阳性细胞积分相加即为积分。

如：参考范围：阳性反应主要见于成熟中性粒细胞（杆状及分叶核粒细胞）中，健康成人一般的中性粒细胞碱性磷酸酶积分值为13-130，但各个实验室条件各异，实验室应有自己的参考值。

检验结果的解释NAP阳性颗粒为蓝色检验方法的局限性仅限于形态学染色观察使用注意事项1、5Tests只限滴染使用2、使用前应恢复室温，用前请摇匀试剂；B,C液请充分混匀，所用容器必须洁净，工作液颜色为金黄色3、应采用新鲜涂片作NAP染色,放置过久则酶的活性会降低；使用抗凝血涂片染色阳性结果不稳定4、工作液配制以后应在十分钟以内使用5、需用感染发热病人或正常人外周血涂片作为阳性对照6、每次试剂使用后，请迅速盖好密封保存，以免挥发及影响效果7、本品应由专业人士使用及进行结果的判读7、使用前应详细阅读使用说明书及产品包装标识，在有效期内使用，并做好个人卫生防护8、生产批号、效期见外包装9、用后应按医院或环保部门要求处置废弃物。

中性粒细胞碱性磷酸酶活性在各血液病诊断中的价值和意义作者：姜方毅来源：《中外医疗》2018年第31期[摘要] 目的探讨中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）活性在各血液病诊断中的价值和意义。

方法方便选取130例该院于2015年1月—2017年1月所收治的血液病患者及37名健康人静脉血制备血涂片，利用Kaplow偶氮偶联法行NAP细胞化学染色，并利用显微镜油镜对100个成熟中性粒细胞进行观察，记录观察结果。

结果对照组不同性别的NAP阳性率（34.78%vs28.57%）及NAP积分[（46.89±23.82）分vs（48.03±22.34）分]比较差异无统计学意义（χ2=0.241，P>0.05；t=0.236，P>0.05）；研究组患者当中，ALL、LR、AA、CLL、MM 及PV疾病患者的NAP积分较对照组明显更高（t=9.712，P0.05）。

结论 NAP活性可有效辅助诊断各血液疾病，并对不同疾病进行鉴别，具较高临床应用价值。

[关键词] 中性粒细胞；碱性磷酸酶活性；血液病[中图分类号] R5 [文献标识码] A [文章编号] 1674-0742（2018）11（a）-0185-03[Abstract] Objective To investigate the value and significance of neutrophil alkaline phosphatase （NAP） activity in the diagnosis of various hematological diseases. Methods A total of 130 patients with blood diseases admitted to the hospital from January 2015 to January 2017 and 37 healthy individuals were convenient enrolled in venous blood to prepare blood smears. NAP cytochemical staining was performed using Kaplow azo coupling method. 100 mature neutrophils were observed with a microscope oil mirror and the observations were recorded. Results There was no significant difference in NAP positive rate （34.78% vs 28.57%） and NAP score [（46.89±23.82）points vs （48.03±22.34）points] in the control group （χ2=0.241， P>0.05； t=0.236， P>0.05）； among the study group， the NAP scores of ALL， LR， AA， CLL， MM and PV patients were significantly higher than those of the control group （t=9.712， P0.05）. Conclusion NAP activity can effectively assist in the diagnosis of various blood diseases， and identify different diseases，which has high clinical application value.[Key words] Neutrophils； Alkaline phosphatase activity； Blood diseases堿性磷酸酶多见于成熟的中性粒细胞、网状细胞及吞噬细胞当中，其他细胞中的碱性磷酸酶含量较少，即使进行检测，检测结果也多为阴性[1]。

快速改良法NAP染色法在新生儿急性呼吸窘迫综合征诊断及病情评估中的价值张金彪;刘玉欣;张玉枝;胡海涛;刘刚;王峰;李涓【摘要】目的观察快速改良法中性粒细胞碱性磷酸酶(NAP)染色在新生儿急性呼吸窘迫综合征诊断及病情评估中的价值.方法选取2014年2月～2015年4月河北省沧州中西医结合医院儿科诊治的57例新生儿急性呼吸窘迫综合征患儿为研究对象,设为观察组.根据观察组患儿的严重程度分为轻、中、重度三组.选择同期的健康新生儿55例作为对照组.采用快速改良NAP染色方法,比较各组新生儿NAP阳性率和阳性积分的差异.结果观察组患儿NAP阳性率及NAP积分均明显高于对照组[(55.7±15.8)％比(24.3±11.2)％;(147.8±81.1)比(42.5±15.3)分],差异有统计学意义(P＜0.05);观察组患儿中,中度组与重度组NAP阳性率及NAP积分均明显高于轻度组[(48.2±12.6)％、(67.1±18.6)％比(37.4±11.3)％;(120.4±50.8)、(181.6±93.2)比(70.3±22.4)分],差异有统计学意义(P＜0.05);重度组NAP阳性率及NAP积分明显高于中度组[(67.1±18.6)％比(48.2±12.6)％;(181.6±93.2)比(120.4±50.8)分],差异有统计学意义(P＜0.05).结论快速改良NAP染色有助于新生儿急性呼吸窘迫综合征的诊断及其严重程度的判断.【期刊名称】《中国医药导报》【年(卷),期】2016(013)001【总页数】4页(P137-140)【关键词】中性粒细胞碱性磷酸酶;快速改良;新生儿急性呼吸窘迫综合征【作者】张金彪;刘玉欣;张玉枝;胡海涛;刘刚;王峰;李涓【作者单位】河北省沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001;河北省沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001;河北省沧州市人民医院检验科,河北沧州061001;河北省沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001;河北省沧州中西医结合医院神经外科,河北沧州061001;河北省沧州中西医结合医院骨科,河北沧州061001;河北省沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001【正文语种】中文【中图分类】R563.8中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）是存在于成熟中性粒细胞胞浆中的一种酶，中性粒细胞数量的检测在临床已常规化，并有其重要的临床鉴别诊断价值。

中性粒细胞碱性磷酸酶（NAP）染色一、正常血细胞的染色反应1．NAP主要存在于中性成熟粒细胞（包括中性杆状核粒细胞和分叶核粒细胞），故呈阳性反应，其他细胞基本呈阴性。

2．成熟中性细胞碱性磷酸酶积分值的计算：在油镜下，计数100个成熟中性粒细胞（包括中性分叶核粒细胞和中性杆状核粒细胞），分别记录其分级情况（-）、（+）、（++）、（+++）、（++++），全部阳性反应的细胞之和即为阳性率，将所有的阳性反应细胞均以“+”级表示后，计算其总积分值。

二、参考值NAP的积分值为35～70分。

三、临床意义】临床上NAP染色应用较广泛，但由于每个观察者的记分标准有所不同，易受主观的因素影响，因此参考值变化较大。

所以，如NAP积分明显增高或明显减低者，其临床意义较大，同时要排除生理性影响。

1、生理性变化（1）年龄变化：新生儿NAP活性增加，以后下降。

儿童各年龄大致相似，成人较儿童活性减低，老年期更低。

（2）应激状态下的变化：紧张、恐怖、激烈运动等NAP活性可增加。

（3）月经周期中的变化：经前期增高，行经后降低，经后期恢复。

（4）妊娠期的变化：妊娠2～3个月的NAP积分值轻度增高，以后逐月增高，分娩时达高峰，产后则恢复正常。

2、病理性变化（1）NAP积分增加：见于细菌性感染、再生障碍性贫血、某些骨髓增殖性疾病（如慢性中性粒细胞白血病、骨髓纤维化、真性红细胞增多症、原发性血小板增多症）、慢性粒细胞白血病（加速期、急变期）、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、恶性淋巴瘤、骨髓转移癌、肾上腺糖皮质激素及雄激素治疗后等。

（2）NAP积分下降：慢性粒细胞白血病（慢性期）、阵发性睡眠性血红蛋白尿、骨髓增生异常综合征、恶性组织细胞病等。

3、疾病的鉴别（1）类白血病反应与慢性粒细胞性白血病：前者明显增加，后者明显下降且常为零分。

（2）慢性粒细胞白血病（慢性期）与慢性中性粒细胞白血病：前者明显下降，后者明显增加（常在300分以上）。