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管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策摘要:目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。
方法按操作步骤逐步分析，并提出合理的解决方案。
结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。
结论可以提高测定结果的准确性。
Abstract: OBJECTIVE To improve the veracity of antibiotics titer evaluation by cylinder-plate method. METHOD According to the process of test, analyze the test and offer a proper measure to avoid influencing factors. RESULTS Reduce the errors caused by environmental and artificial factors. CONCLUSION This can improve the veracity of test results.Key words: cylinder-plate method; antibiotics; titer; bacterial inhibition ring管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。
但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。
根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。
1. 实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。
可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。
小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。
管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策摘要：目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。
按操作步骤逐步，并提出合理的解决方案。
结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。
结论可以提高测定结果的准确性。
管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。
但是整个试验过程中结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。
根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。
1、实验器材的预备1.1实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。
可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判定双碟底面平整程度。
小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。
假如小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。
1.2实验器材的清洗抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。
由于清洗方面的原因，它们还是轻易残留上次试验中的抗生素或者被清洗用的杀菌剂污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。
因此，在清洗时要尤为注重多用流水冲洗。
160℃干热灭菌2h后备用。
2、配制试验所需的样品、标准品、缓冲液与培养基2.1样品与标准品溶液的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。
供试品应放于干燥器内至少30min方可称取。
称量最好为一次取样称量，动作迅速，不得反复称取，取样后立即将称量瓶瓶盖盖好，以免吸水。
标准品的称量最好用1/100，000克的分析天平，样品称量不得低于1/10，000克的分析天平。
天平中的干燥剂应保持经常注重更换。
称量结束后，加入超声波处理后的磷酸缓冲液，定容至刻度，过滤并稀释。
稀释时，都应采用容量瓶，每一步稀释取样量不得少于2mL。
管碟法（牛津杯法）的注意事项
(1)对于一般的抗生素测定来说,大多数情况下都需要把牛津杯加满,但作者在实际测定中发现,若加满牛津杯,培养24 h后牛津杯内仍有将近一半的残留溶液。
(2)管碟法测定Nisin 效价时,控制检测平板中菌悬液的浓度非常重要,过浓则抑菌作用不明显,过低则菌体生长稀疏,抑菌圈不明显或者不规则,难以准确测量
(3)过高的琼脂质量浓度(2 g/ dL 以上)冷却至50 ℃以下倒平板时,很快就会凝固,不便于制备菌层;而琼脂质量浓度太低时(低于1 g/ dL) ,培养基不容易凝固, ,产生的抑菌圈亦不太规则.
(4) 抗菌肽在牛津杯中的球形扩散过程中上层培养基越薄,越有利于抗菌肽的横向扩散,以及培养基越薄指示菌数相对更少一些故而抑菌圈大。
（5）加注的培养基如果温度太低，就容易结块不能均匀铺开，应为60-80o C.加注培养基底层之后，不应该立即给双碟加盖，以避免形成水蒸气。
（6）可以事先把配制好的培养基分装在具塞试管内，每管5mL，湿热灭菌后放在50o C水浴锅内保温。
试验中，再分别加入菌液混匀，配制成带菌琼脂，继续保温5min使培养基温度回升，倒在底层培养基上，迅速转动双碟使培养基均匀铺开。
（7）放置小钢管时，注意管与管之间、管与双碟边缘不能太靠近。
（8）滴加时离钢管口距离不要太高，一旦滴管中出现气泡或者残留，就重新吸取抗生素溶液进行滴加，滴管口应避免太细。
滴加时若有溅出，可用滤纸片轻轻吸去。
滴加后，液面应与小钢管口齐平，液面反光显黑色。
（8）双碟放入培养箱内，要与箱壁保持一定的距离，双碟叠放不能超过3个。
（10）测量抑菌圈直径时，不易取去小钢管或把双碟翻转过来测量抑菌圈直径。
抗生素微生物检定管碟法在中国药典中的应用及操作要点录入时间:2010-11-18 10:29:10 来源：青岛海博抗生素微生物检定法可分为：（1）稀释法；（2）比浊法；（3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。
管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
原理：利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，依据量反应平行线原理并采用交叉实验设计方法，在相同实验条件下通过比较标准品（已知效价）和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈（直径或面积）大小，来测定供试品效价的一种方法。
管碟法的操作步骤：1、预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16～17.5mm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15～18mm。
2、试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。
3、双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟放入35～37℃培养箱中，待用。
4、供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。
5、菌层的制备：注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。
6、滴加抗生素溶液：注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。
7、双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层为宜。
◇药品检验◇浅谈抗生素微生物检定———管碟法操作注意要点任董春(安徽金蟾生化股份有限公司中心化验室,淮北 235000) 抗生素管碟测定法是利用抗生素在摊布特定实验菌的固体培养基内呈球面形扩散,形成含一定浓度抗生素球形区,抑制了实验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
根据抗生素在一定浓度范围内,对数剂量与抑菌圈直径(面积)呈线性关系,比较标准品与供试品两者对接种的实验菌产生抑菌圈的大小,计算出供试品的效价。
本文根据实践工作经验,对抗生素效价检定操作过程中应注意的要点作一总结简述。
1 称量1.1 标准品与供试品的称量最好一次称取,不得将已取出的标准品或供试品倒回原容器内,标准品称量不可少于20mg ,一般为50mg 以下。
取样后立即将称量瓶或适宜的容器及被称物盖好,以免吸水。
1.2 吸湿性较强的样品,在称量前1～2h ,更换天平内干燥剂。
1.3 称量样品的容器重量最大不超过10g 。
称量标准品与供试品应用同一天平及砝码。
称量前被称的样品应放在干燥器内至少30min ,从冰箱取出的样品必须先在室温放置,使其温度与室温平衡后,才可称量。
2 稀释2.1 粉末状或结晶的供试品,第一步稀释应用容量瓶以消除体积上的误差。
稀释至5×102～1×103U ・L -1的溶液,以后的逐步稀释,也要用容量瓶稀释,并不超过3步。
2.2 每次吸取溶液用密刻度玻璃吸管,量取溶液前要用被量液流洗吸管2～3次。
吸取溶液后,用滤纸将外壁多余液体擦去,然后再从起始刻度开始放溶液。
注意放溶液时,吸管不要倾斜。
2.3 稀释供试品与标准品用的缓冲液,应用同一瓶内的缓冲液,以免因p H 或浓度不同而影响抑菌圈的生长与圆整。
2.4 与标准品所用的溶剂量及溶解时间等应尽量一致。
稀释时每次加液至容量瓶近刻度前,稍放置片刻,待瓶壁的液体完全流下,再准确补加至刻度。
2.5 用于稀释的刻度吸管和容量瓶,必须经过标定。
3 双碟的制备3.1 用水平仪检查效价测定操作台面是否水平,设法调整使其达到水平。
管碟法测定抗生素效价中的影响因素分析及对策(1)关键字:管碟法；抗生素；效价；抑菌圈摘要:目的提高管碟法测定抗生素效价的准确性。
方法按操作步骤逐步分析，并提出合理的解决方案。
结果减少外界因素与人为因素给试验带来的误差。
结论可以提高测定结果的准确性。
Abstract: OBJECTIVE To improve the veracity of antibiotics titer evaluation by cylinder-plate method. METHOD According to the process of test, analyze the test and offer a proper measure to avoid influencing factors. RESULTS Reduce the errors caused by environmental and artificial factors. CONCLUSION This can improve the veracity of test results.Key words: cylinder-plate method; antibiotics; titer; bacterial inhibition ring管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。
但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。
根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。
1. 实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。
可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。
抗生素微生物检定管碟法抗生素微生物检定管碟法抗生素微生物检定法可分为：（1）稀释法；（2）比浊法；（3）琼脂扩散法（管碟法和打孔法）。
各国药典通常采用后两种方法测定抗生素的效价。
管碟法：利用抗生素在摊布特定试验菌的固体培养基内成球面形扩散，形成含一定浓度抗生素球形区，抑制了试验菌的繁殖而呈现出透明的抑菌圈。
此法系根据抗生素在一定浓度范围内，对数剂量与抑菌圈直径（面积）呈直线关系而设计，通过检测抗生素对微生物的抑制作用，比较标准品与供试品产生抑菌圈的大小，计算出供试品的效价。
原理：利用抗生素在固体培养基中的平面扩散作用，依据量反应平行线原理并采用交叉实验设计方法，在相同实验条件下通过比较标准品（已知效价）和供试品两者对所接种试验菌产生的抑菌圈（直径或面积）大小，来测定供试品效价的一种方法。
管碟法的操作步骤：1、预试验：确定最佳的试验条件：调整试验菌的浓度、使用量、抗生素终浓度、培养基等，使抑菌圈的大小符合规定：一剂量法中心点的抑菌圈直径应在16～17.5mm，二剂量法高剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在18～22mm，三剂量法中间剂量浓度标准品溶液所致的抑菌圈直径在15～18mm。
2、试验准备：双碟、钢管、毛细滴管、吸管的清洗及灭菌；容量瓶、定量吸管的清洗；培养基、缓冲液的准备、半无菌间的紫外消毒等。
3、双碟的制备：每只双碟加底层培养基约20ml，待培养基凝固后，将双碟放入35～37℃培养箱中，待用。
4、供试品、标准品溶液的制备：估计供试品的效价，根据试验要求设计供试品、标准品溶液稀释步骤，平行制备供试品、标准品相关剂量的溶液。
5、菌层的制备：注意菌层培养基温度；根据预试验确定加入菌层培养基的菌液量，注意制备菌层的速度和平整度。
6、滴加抗生素溶液：注意标准品、供试品高、低剂量溶液滴加顺序，保证滴加速度和加量的均匀一致。
7、双碟的培养：根据培养温度的要求在培养箱中进行培养，培养箱中水平碟放的双碟数以不超过三层为宜。
管碟法测定抗生素效价结果的影响因素分析
黄镜娟
【期刊名称】《现代医药卫生》
【年(卷),期】2006(022)018
【摘要】管碟法是测定抗生素效价的方法之一，是国内外常用的方法，我国药典
微生物检定法也一直采用管碟法，该方法是生物测定中准确度、灵敏度较高的方法。
管碟法的基本原理．是以扩散为基础的量反应平行线法，由于该实验方法操作步骤多。
过程长，影响实验结果的因素较多，需要从各个环节加以严格控制，以确保实验结果的准确可靠，下面将管碟法的影响因素及控制方法分述如下：
【总页数】2页(P2853-2854)
【作者】黄镜娟
【作者单位】北海市人民医院,广西,北海,536000
【正文语种】中文
【中图分类】R9
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3.管碟法测定抗生素效价的影响因素及控制方法 [J], 陈家凤
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5.管碟法测定抗生素效价影响因素与控制方法的研究进展 [J], 任仲丽;张秀花;王静;李秀菊;刘博
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管碟法抗生素效价测量实验抗生素的生物检定是以抗生素对微生物的抗菌效力作为效价的衡量标准，具有与应用原理相一致、用量少和灵敏度高等优点。
管碟法是琼脂扩散法中的一种，已被各国药典广泛采用，作为法定的抗生素生物检定方法。
当抗生素在菌层培养基中扩散时，会形成抗生素浓度由高到低的自然梯度，即扩散中心浓度高而边缘浓度低。
因此，当抗生素浓度达到或高于mic（最低抑制浓度）时，试验菌就被抑制而不能繁殖，从而呈现透明的抑菌圈。
根据扩散定律的推导，抗生素总量的对数值与抑菌圈直径的平方成线性关系。
实验简介在管碟法抗生素效价测量实验中需要注意的影响因素分析及对策如下:管碟法是国内外常用的抗生素微生物检定法[1]，利用管碟法测定抗生素效价，具有准确、直观、重复性好等优点，因而被广泛采用。
但是整个试验过程中影响结果的因素很多，任何一个环节操作不当或者忽略就会造成很大误差，导致整组试验失败。
根据实际操作中的积累经验，对管碟法中影响试验结果的因素进行如下分析及提出解决的方法。
实验器材的准备1.1 实验器材的选择试验应该选择底面平整的玻璃双碟，避免底面的凹凸影响琼脂层的厚度。
可将双碟放置在水平台上，下垫一层白纸，加入3mL水，再滴加蓝墨水，根据蓝色是否深浅一致来判断双碟底面平整程度。
小钢管则应该选择加工精细的同一批产品，这样才能保证管壁厚薄与重量均匀一致，使得小钢管在培养基中下陷相同的深度，抗生素溶液扩散均匀有可比性。
如果小钢管两端不够平，就应予剔除，否则会使抗生素溶液漏出，破坏均匀扩散现象。
1.2 实验器材的清洗抗生素试验中，玻璃双碟、小钢管往往会连续使用。
由于清洗方面的原因，它们还是容易残留上次试验中的抗生素(庆大霉素、争光霉素、链霉素等)或者被清洗用的杀菌剂(如新洁而灭、洗洁精、去污粉等)污染，以至于在下次试验中造成抑菌圈不正常的现象。
因此，在清洗时要尤为注意多用流水冲洗。
160℃干热灭菌2h后备用。
配制试验所需的样品及药品2.1 样品与标准品溶液的配制标准品与样品从冰箱取出后，使与室温平衡。
