两株水貂阿留申全基因重组核酸疫苗的免疫效果初步评估

水貂阿留申病诊断技术的进展李俚; 胡哲; 孙金辉; 关东嵩; 方孟颀; 王晓钧; 路义鑫【期刊名称】《《中国兽医杂志》》【年(卷),期】2018(054)011【总页数】3页(P58-60)【作者】李俚; 胡哲; 孙金辉; 关东嵩; 方孟颀; 王晓钧; 路义鑫【作者单位】东北农业大学动物医学学院黑龙江哈尔滨150030; 哈尔滨海关黑龙江哈尔滨150028; 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室黑龙江哈尔滨150069; 大庆海关黑龙江大庆163311【正文语种】中文【中图分类】S858.92水貂阿留申病(AMD)是由水貂阿留申病毒(AMDV)引起的一种能够引起自身免疫紊乱的慢性进行性传染病。

引起该病的病毒可感染各个年龄段的水貂,依据感染毒株类型的不同,病症呈多样性。

对新生仔貂而言,AMDV 引起的死亡率几乎可达到100%;而对于成年水貂,该病通常引起水貂的持续感染,并表现为终生病毒血症、高蛋白血症、动脉血管炎和由病毒-抗体复合体诱导的肾小球肾炎及肝炎等。

临床上还没有能够防治AMD 的有效疫苗和药物,因此目前防控该病的手段主要为水貂新引入前的检疫、场址的彻底消毒,以及感染貂群中病畜的扑杀。

大多数情况下,水貂感染AMD 后没有典型的临床症状,确诊主要依赖于实验室的检测。

本文对近年来国内外AMD 的主要诊断方法及特点进行综述,以期为新水貂引入前的检疫、环境消毒效果的评价及感染貂场AMD 的防控提供方法依据。

1 AMDV 的血清学检测方法1.1 碘凝集试验(IAT) IAT 是1962 年由Henson等[1]最先用于鉴别AMD 的血清学方法。

因该方法成本低廉、操作简单,所以很容易被推广。

但水貂感染AMDV后产生的丙种球蛋白水平通常需要1个月的时间才能被检测到,因此IAT 不适用于AMD初期感染的检测。

另外,IAT 为非特异性试验,对能够产生高丙种球蛋白血症的其他慢性疾病,如结核病和肾病等同样可以发生反应,所以单纯使用该法无法达到根除AMD 的目的,目前IAT 已很少被规模化的水貂养殖场采用。

2019.05作者简介:赵斌(1990-),男,汉,山东省诸城市人,助教,硕士研究生,研究方向:微生物与免疫。

水貂肺炎二联苗制备及免疫效果评价赵斌1张敏敏2苏子涵1孙凯1藏萃妮1孙璐瑶1(1,潍坊工商职业学院262200;2,山东省诸城市畜牧兽医管理局262200)摘要:目前水貂肺炎主要以铜绿假单胞菌、克雷伯氏菌为主,常于水貂换毛期时暴发性流行,且多呈混合感染。

本文针对水貂肺炎面临的突出问题,根据国内外肺炎疫苗的研究进展与市面疫苗对水貂的保护情况,探索克雷伯荚膜多糖作为佐剂及其与铜绿假单胞菌制备二联苗对水貂保护。

通过免疫小鼠产生抗体水平与特异性分泌细胞评价结果表明,荚膜多糖对铜绿假单胞菌抗原具有良好佐剂效用,但效果低于氢氧化铝佐剂。

荚膜多糖是肺炎克雷伯良好抗原,能产生较高抗体。

铜绿假单胞菌菌体疫苗与铜绿假单胞菌上清液疫苗抗体水平无显著差异。

关键词:Balb/c 小鼠;铜绿假单胞菌;荚膜多糖;免疫效果评价水貂出血性肺炎[1]是由铜绿假单胞菌(Pseu⁃domonasaeruginosa,PA)又称绿脓杆菌引起的急性传染病,多发生于夏季炎热潮湿季节,以出血性肺炎为主要特征,发病急,死亡快,常呈地方性暴发性流行,给养貂业造成较大经济损失。

肺炎克雷伯氏菌[2](KlebsIella Peneumoniae)属肠杆菌科菌属克雷伯氏菌种,典型的条件致病菌,在自然界、人和动物体内广泛存在。

当水貂换毛抵抗力下降或本菌大量增殖时,会引起水貂发病甚至暴发性流行。

肺炎克雷伯氏菌引起的感染已上升到仅次于铜绿假单胞菌,居革兰氏阴性菌感染的第2位,且两者常呈混合感染。

近些年来,由于水貂养殖规模的提高,在山东文登和威海、诸城养殖场发生了大量水貂混合感染肺炎病例。

养殖户对抗生素乱用,菌株耐药性不断增强。

致使该病危害程度逐年加深,目前该病已成为危害水貂养殖的主要传染病之一[3]。

国内外针对水貂肺炎疫苗研发主要从铜绿假单胞菌出发,往往忽略克雷伯引起的肺炎。

0引言水貂阿留申病(Aleutian disease of mink,AD)是由水貂阿留申病细小病毒(Aleutian mink disease parvovi-rus,ADV)引发的水貂的一种慢性消耗性疾病。

1946年，G ·Hartsough 在“阿留申貂”中首次观察到该病。

1956年，Hartsough 和Gorham 确定该病为阿留申病病毒所致[1]。

AD 一直是危害世界养貂业健康发展的一大隐患。

到目前为止唯一可行的防治方法就是通过多基金项目：科技部科研院所社会公益研究专项“野生动物重要传染病生态学发生，监测和控制技术”（2005DIB4J048）。

第一作者简介：徐磊，男，1983年出生，山东日照人，在读研究生，研究方向：水貂阿留申病毒分子生物学。

通信地址：130122吉林省长春市净月旅游开发区柳莺西路388号，中国农业科学院特产研究所，Tel ：*************，E-mail ：****************。

通讯作者：闫喜军，男，1970年出生，吉林省大安市人，研究员，博士，研究方向：野生经济动物传染病学。

通信地址：130122吉林省长春市净月旅游开发区柳莺西路388号，中国农业科学院特产研究所，Tel ：*************，E-mail ：*******************。

收稿日期：2009-10-20，修回日期：2010-01-04。

水貂阿留申病毒VP2基因的原核表达及初步应用徐磊，闫喜军，张蕾，柴秀丽，赵建军，张海玲，高晗，白雪（中国农业科学院特产研究所，长春130122）摘要：将水貂阿留申病毒ADV-G 株VP2基因中主要抗原表位区的2个片段，分别克隆至原核表达载体pET-28a(+)的多克隆位点中，鉴定后得到重组质粒pET-VP2a 和pET-VP2b ，将重组质粒转化到宿主菌BL21中，用IPTG 分别以不同浓度，不同诱导时间进行诱导表达，采集样品做SDS-PAGE 、Western-blot 分析，并以此蛋白作为包被抗原进行ELISA 检测。

动物医学进展,２０１９,４０(６):７８Ｇ８２P r o g r e s s i nV e t e r i n a r y Me d i c i n e 水貂阿留申病诊断技术研究进展㊀收稿日期:２０１８Ｇ０６Ｇ０７㊀基金项目:中国农业科学院农业科技创新工程项目(２０１８)㊀作者简介:韦㊀韬(１９９３－),男,甘肃庆阳人,硕士研究生,主要从事兽医学研究.∗通讯作者韦㊀韬,吴艳虹,丛㊀丽,赵永强,马瑞芳,邵西群∗(中国农业科学院特产研究所,吉林长春１３０１１２)㊀㊀摘㊀要:水貂阿留申病是水貂养殖业的重要疫病,目前无疫苗预防,主要通过发展诊断技术,淘汰感染貂防控该病.论文总结了在貂场应用的基因与抗体检测技术,基因检测具有高灵敏度和特异性,能够检测到动物带毒感染,不同类型的基因检测技术对变异性强的阿留申病毒检测各有所长;抗体检测是水貂阿留申病的主要检测方式,研究者不断创新和改进原有技术,趋向对阿留申病的规模化精准检测,但单一的抗体检测方法淘汰感染貂具有局限性.论文通过对两类检测技术分析,建议采用基因与抗体的联合检测方法,从感染貂群中区分耐受貂或抗性貂,期望为国内高感染率貂场的检测和选种提供参考.㊀㊀关键词:水貂阿留申病;阿留申病毒;诊断中图分类号:S ８５２．６５文献标识码:A文章编号:１００７Ｇ５０３８(２０１９)０６Ｇ００７８Ｇ０５㊀㊀水貂阿留申病(A l e u t i a n m i n kd i s e a s e ,AM D )是由水貂阿留申病毒(A l e u t i a n m i n kd i s e a s ev i r u s,AM D V )侵害免疫细胞引起的免疫抑制性传染病.在成年水貂中病毒持续慢性感染,引起浆细胞弥漫性增生,血清中γ球蛋白显著增高,在体内因AM ＧD V 与其抗体形成有感染性的病毒Ｇ抗体复合物.抗体不能中和病毒,引发抗体依赖性病毒感染增强效应(a n t i b o d y d e p e n d e n te n h a n c e m e n t ,A DE ),免疫复合物随血液循环沉积于血管内皮导致Ⅲ型迟发型超敏反应,造成血管炎㊁肾小球肾炎等症状,引起病貂免疫系统紊乱.而在３月龄内的幼貂,病毒侵入肺泡Ⅱ型细胞快速增殖,造成高致死性的间质性肺炎,用AM D V 的抗体被动免疫或肺炎耐过的幼貂发展为与成年貂相同的慢性感染症状[１Ｇ２].成年水貂阿留申病表现为进行性消瘦㊁贫血㊁嗜水和繁殖能力低等慢性消耗性症状,因此该病成为水貂养殖业的危害最为严重的疫病.水貂感染AM D V 后发展的类型受到自身的基因型与免疫力㊁AM D V 的毒力以及养殖环境等因素的影响.AM D V 感染非阿留申基因水貂主要发展成３种类型[３]:病毒持续感染,水貂表现出渐进性发病,发展为典型阿留申病;病毒短暂感染,水貂表现出暂时的病毒血症,随后病毒在体内被清除,可筛选为AM D V 抗性貂;病毒非渐进性感染,病毒在水貂体内自限性复制,在体内持续隐性存在,无明显阿留申病症状,可筛选为AM D V 耐受貂.由于水貂阿留申病是免疫加强的病理性疫病,目前试制的水貂阿留申病疫苗只能产生部分免疫保护[４],至今仍未研发出有效的疫苗和药物进行预防和治疗,因此水貂阿留申病的诊断技术是防控水貂阿留申病的关键.AM D V 属于细小病毒科㊁阿留申病毒属[５],是能自我复制的单股负链D N A 病毒,病毒基因组的转录本可编码结构蛋白V P １和V P ２,非结构蛋白N S １㊁N S ２和N S ３.其中V P ２为AM D V 的主要结构组分蛋白㊁抗原免疫蛋白;N S １是最大的非结构蛋白,主要参与病毒D N A 的复制和病毒基因的表达调控.本文主要围绕病毒基因㊁抗原特征阐述水貂阿留申病主要诊断技术,并展望水貂阿留申病诊断技术的发展趋势.１㊀AM D V 基因检测１．１㊀传统P C R 检测１９４６年首次发现水貂阿留申病,随后分离㊁纯化到AM D V ,确认其病原为细小病毒科成员[５].２０世纪８０年代完成对AM D V ＧG 株的全基因组测序.随着分子生物学发展,P C R 技术的发明,AM D VP C R 被应用于检测和流行病学调查中.邵西群等分别用P C R 和对流免疫电泳(c o u n t e r i mm u n o Ｇe Ｇl e c t r o ph o r e s i s ,C I E P )检测不同感染率貂群,发现P C R 与C I E P 结果不匹配,说明病毒感染先于抗体产生.在高感染率貂场不宜仅靠C I E P 来淘汰抗体阳性水貂,应将P C R 和C I E P 联合检测判断水貂感染状态,筛选出水貂阿留申病毒感染康复貂,可有效地降低貂场损失[３].P C R有着较高的敏感度,然而传统P C R检测操作繁琐,需要依靠实验室等问题,难以用于大规模检测.国内外学者通过P C R扩增测序,先后从灰狐㊁北极狐和乌苏里貉身上发现阿留申病毒新种[６Ｇ７].对臭鼬阿留申病毒开展分子流行病学调查,发现臭鼬阿留申病毒不同于AM D V,为阿留申病毒属内新种;比较属内阿留申病毒基因序列发现,N S１同源性小于８５％(５９．１％~８０．４％),V P２同源性小于９５％(７２．６％~９１．２％),表明V P２的保守性高于N S１[８].在小熊猫中检测到阿留申病毒,对其N S１测序并与AM D V的N S１氨基酸序列比较发现同源性约为７５％.根据国际病毒分类学委员会(I n t e r n a t i o n a l C o mm i t t e e o nT a x o n o m y o fV i r u s e s,I C T V)推荐细小病毒科病毒属内病毒种的划分以N S１氨基酸序列同源性小于８５％为标准[５],因而确定感染小熊猫的是一个新种阿留申病毒,并命名为小熊猫阿留申病毒[９].阿留申病毒新种不断的被发现,扩展了对阿留申病毒种内种间多样性及其危害的认识,对于水貂阿留申病的防控有重要意义.因此,针对N S１和V P２设计P C R引物,有着不同的意义.V P２序列具有较高的保守性,针对V P２设计保守序列,能够覆盖阿留申病毒属内毒株,有效检测不同动物源的阿留申病毒新种.N S１序列变异性较大,通过对N S１设计引物,开展流行病学调查有利于区分毒株,对于暴发疫情的国家,N S１序列测定可以作为有效的追踪工具[１０],并且N S１序列是划分细小病毒科属内病毒种的重要依据.１．２㊀实时荧光定量P C R检测P r i e t oA等首次应用实时荧光定量P C R(r e a lＧt i m eP C R)对环境中的样本进行检测,包括粪便㊁泥土㊁鞋套㊁抓捕手套等,阳性率高达９３．９％.随后P r i e t oA对水貂随处环境进行了分类,基于N S１基因序列设计引物,对貂场环境中的样品进行r e a lＧt i m eP C R检测,发现样品与水貂距离越近,病毒含量越高.P r i e t oA认为水貂阿留申病净化失败原因之一是环境中存在病毒污染[１１Ｇ１２].张瑞等在国内首次建立S Y B R G r e e nⅠr e a lＧt i m eP C R方法检测AM D V,具有良好的特异性和敏感性.李艳伍等首次建立T a q M a nr e a lＧt i m eP C R方法检测AM D V,该方法可检测病毒量低至４７．７c o p i e s/μL,敏感性是传统P C R的１００倍[１３].r e a lＧt i m eP C R技术具有高灵敏度,能检测环境中病毒含量较低的样品,也能监测细胞培养中病毒感染量,分析病毒感染动态[１４].１．３㊀直接P C R检测用抗干扰性强的O m n iK l e n t a qＧL A D N A聚合酶建立直接P C R技术,检测水貂组织和血液样品中的AM D V.直接P C R技术无需对血液或组织进行D N A提取,可节约时间㊁降低成本㊁避免样本提取过程中所带来的D N A丢失㊁交叉污染等问题.将直接P C R与传统P C R相比,结果表明无论在血液还是组织中,直接P C R效果均优于传统P C R检测[１５].１．４㊀环介导等温扩增检测根据V P２基因设计了一套环介导等温扩增(l o o pＧm e d i a t e d i s o t h e r m a l a m p l i f i c a t i o n,L AM P)引物,在６５ħ下等温扩增３０m i n出现结果,４５m i n后扩增达到最大值.田国宁等根据V P２基因设计了５套引物,筛选出最优的反应条件和引物,灵敏度试验表明L AM P是普通P C R的１０倍[１３].L AM P有着高敏感性和特异性,操作方便,依靠恒温水浴锅或保温杯即可完成反应,在反应体系中加入S Y B R G r e e n I达到可视化效果,反应产物阴性呈橘黄色,阳性为绿色,是一项有望应用于现场的检测技术.综上所述,已应用于阿留申病毒的不同类型基因检测技术,适用于各自检测需求.P C R类检测具有高敏感性㊁特异性等优点,能够用于病毒感染早期诊断,并可检测多种样品;r e a lＧt i m eP C R可定量检测病毒,有效分析细胞培养中病毒感染情况,在指导防控AM D V的传播中发挥重要作用.动物阿留申病毒具有较高的遗传多样性,不断有阿留申病毒新种被发现,阿留申病毒属内保守区引物的设计,是检测动物阿留申病毒的关键.通过P C R扩增高变区序列进行比对,可区分不同阿留申病毒株,开展流行病学调查,对水貂阿留申病的防控具有重要意义.目前国内外基因检测主要发展趋势为建立现场易用,操作简便,无需实验仪器的快速批量基因检测技术,通过添加显色剂,使得结果易判,即快速检测技术(p o i n t e do f c a r e t e s t i n g,P O C T)[１６].２㊀血清学抗体检测２．１㊀碘凝集试验将碘凝集试验(I A T)用于水貂阿留申病的诊断中,感染AM D V且发病的水貂血清中γ球蛋白含量大于２１％(０．２g/L),碘液与其形成褐色的絮状沉淀[１７].I A T操作简单,反应快速,成本低廉,并且能够避免淘汰一些不发病的水貂阿留申病毒耐受貂,被广泛应用于现场检测中.I A T无法区别其他引起血清γ球蛋白含量增加的疫病,缺乏对水貂阿留申病的特异性,但在养殖场中应用,能够快速检测出动物是否患有慢性疫病,通过I A T筛选淘汰后的貂群９７韦㊀韬等:水貂阿留申病诊断技术研究进展平均产仔数和成活数明显提高.２．２㊀对流免疫电泳对流免疫电泳(C I E P)属于抗原抗体沉淀反应,在电场作用下,带负电荷的抗原从阴极向阳极移动;带弱负电荷的抗体在反渗作用下从阳极向阴极移动.抗原抗体在电场作用下相向运动,在琼脂糖凝胶中出现明显的白色沉淀线.C I E P重复性好㊁特异性高,操作简单,被广泛用于检测AM D V抗体,已被多国海关作为进出口检测的标准,并且C I E P用AM D V抗原能够检测其他阿留申病毒种感染产生的抗体[５].但C I E P在抗体处于未产生期或者低浓度的情况下,容易漏检水貂阿留申病阳性貂.调查发现,AM D V抗体存在一定的消长规律,一定比例C I E P检测阳性的水貂转为阴性,阴性水貂转为阳性的现象,群体抗体检测的阳性率在１２月份最高,确定此时期为C I E P检测的最佳时机[１８].用C I E P和P C R联合检测,通过组织病理学检测评价水貂阿留申病造成组织损伤的严重程度,结果发现水貂阿留申病阳性貂中存在一定数量的水貂阿留申病毒耐受貂(C E I P阳性,P C R阴性,γ球蛋白含量低,组织损伤程度降低)[１９].邵西群同样发现水貂阿留申病毒感染貂群存在一定比例抗性貂[３].由此可见,C I E P 检测抗体特异性高,重复性好,可有效控制貂群AM D V的感染率;但是仅靠单一的C I E P检测淘汰抗体阳性貂,将清除掉感染AM D V而无病症的耐受貂㊁抗性貂,削弱群体的抗病性.２．３㊀胶体金试纸条１９７１年胶体金层析技术首次引入到免疫学中,随后在临床诊断方面被广泛应用.２０１０年初步建立了AM D V抗体的胶体金试纸条检测方法,结果显示其敏感性高于C I E P[１３,２２].王振军等[２０]完善了水貂阿留申病检测胶体金试纸条制备工艺,采用少量全血稀释即可进行检测.试纸条使用简单,结果易判,已有商品化产品,在貂群抽样快速检测中发挥重要作用.２．４㊀斑点酶联免疫试验斑点酶联免疫试验(d o ti mm u n eＧe n z y m ea sＧs a y,D I A)是１９９２年首先提出一种应用于水貂阿留申病的诊断新技术.其原理与双抗体夹心E L I S A 相同,用硝酸纤维素膜替换聚苯乙烯反应板,将血清中AM D V抗体吸附在硝酸纤维素膜上,用昆虫表达系统表达重组病毒(V P１ＧV P２)为抗原,生物素化的AM D V特异性抗体与碱性磷酸酶标记的链霉亲和素为二抗进行检测.用针刺脚垫采血(０．５μL~１．０μL),转移到硝酸纤维素膜纸片上,１个４ˑ９c m２纸片可负载２００个血样,用笔在纸片上做好标记,以信件形式邮寄发往实验室完成质控反应,阳性结果以蓝色斑点显示在膜上,以图像形式返回用户.该技术采血量小,采样方便快捷,缩短采样时间,能有效控制采血造成的交叉污染和病毒散播[２１].国内建立了V P２㊁N S１以及V P２ＧN S１融合基因等不同蛋白为包被抗原的D I A,具有较高的灵敏度和特异性[２２].D I A检测技术在实验室严格质控下完成反应,可全自动化操作,规模化检测样品,在俄罗斯已成熟应用于貂场检测.２．５㊀酶联免疫吸附试验１９８２年W r i g h tPF等首次将酶联免疫吸附试验(e n z y m eＧl i n k e di mm u n o s o r b e n ta s s a y,E L I S A)应用在AM D V抗体检测中,W r i g h tPF用全病毒包被抗原,建立了间接E L I S A并与C I E P比较,发现E L I S A存在较高的假阴性,限制了应用.随后以昆虫杆状病毒表达系统表达重组V P２蛋白病毒颗粒作为包被抗原,建立了间接E L I S A,重组V P２ＧE L I S A与C I E P比较,具有较高的一致性[１３,２２].将V P２ＧE L I S A和AM D VＧG株为包被抗原的E L I S A 分别于C I E P比较,V P２ＧE L I S A敏感性,特异性分别为９９．７％和９８．３％,而AM D VＧGＧE L I S A为５４．３％和９３．２％,表明V P２ＧE L I S A优于全病毒E L I S A[２３].筛选出V P２(３８９a aＧ３９８a a,４５９a aＧ４７３a a)线性抗原表位并制备成单克隆抗体,与其他细小病毒科氨基酸序列比对,发现这些线性短肽在AM D V 中均高度保守.单抗的制备大大丰富了以单抗为基础的E L I S A㊁胶体金试纸条等检测手段,为水貂阿留申病免疫学检测奠定了基础[２４Ｇ２５].C h e n X 等[２６Ｇ２７]分别建立了V P２不同区段(３３２a aＧ４５２a a,４１５a aＧ４３３a a)线性抗原短肽E L I S A,具有良好的敏感性和特异性,并用原核表达系统表达短肽抗原,可降低检测成本.E L I S A敏感性㊁特异性不断被提高,广泛应用于检测AM D V抗体.D a mＧT u x e n R等[２２]建立了全自动化的E L I S A,每天可检３８,０００个样本,极大节省人工,适合大量样本检测,已被丹麦哥本哈根诊断中心采用.以AM D VＧV P２重组蛋白为包被抗原,建立了自动化E L I S A,与C I E P比较,敏感性,特异性分别为９６．２％和９８．４％[２８].由于原有的净化策略失败率较高,造成严重的经济损失,现欧美洲多个国家已改变原来的策略,通过筛选水貂阿留申病毒耐受貂,来降低水貂阿留申病所造成的影响.用E L I S A对AM D V抗体进行定量,筛选低滴度抗体０８动物医学进展㊀２０１９年㊀第４０卷㊀第６期(总第３１２期)的水貂阿留申病毒耐受貂[２９].用D B S(d r i e db l o o d s p o t s a m p l e s,D B S)V P２ＧE L I S A检测AM D V抗体,详细说明水貂阿留申病对水貂繁殖能力的影响,认为应该明确区分抗体水平标准,以O D４５０n m大于０．８３(血浆蛋白与γ球蛋白比值小于５)作为判断水貂阿留申病貂的标准[３０].针对AM D V产生的N S１和V P２抗体检测有着不同的意义,V P２为AM D V 的结构蛋白,具有较强保守性.针对V P２属内保守抗原区检测,可检测出属内新毒种;N S１为病毒早期的复制蛋白,针对N S１蛋白的检测,能够判断病毒是否在机体内复制.E L I S A能够定量AM D V抗体滴度,根据抗体滴度与γ球蛋白含量的对应关系,设定阈值,可准确推断水貂感染水貂阿留申病的状态,筛选水貂阿留申病毒耐受貂和抗性貂.综上所述,血清学抗体检测技术的发展日新月异,不断在原有技术上改进以及创新新型检测技术,为防控水貂阿留申病创造了有力条件,其趋势主要围绕着五个方面:采样方便,降低成本,可全自动化操作,能够定量抗体和γ球蛋白含量以及适合集中式大规模检测或者现场简便式检测.３㊀展望随着分子生物学和免疫学快速发展,AM D V的检测技术也日新月异.针对AM D V的基因㊁抗体检测技术可能的发展趋势如下:在采样方面,采样方便快捷,所需采血量少,降低对貂的损伤以及避免采血过程中的病毒传播和交叉污染;在现场检测方面,现场检测朝着P O C T发展,现场适合,操作方便,快速获得结果;在实验室检测方面,筛选保守引物㊁抗原表位,加强对阿留申病毒新种的发现㊁诊断;在群体检测方面,朝着规模化,自动化方向发展,降低人工的同时减少人为误差,提高实验的准确性.对于貂场来说,不同感染率的貂场所需检测技术不同.低感染率貂场可采取基因和抗体联合检测方法,淘汰阳性水貂,并可对貂场环境进行检测㊁消毒,从而建立无水貂阿留申病貂场;高感染率貂场,可改变原有的净化策略,通过基因和抗体联合检测水貂阿留申病,通过定量抗体滴度,根据抗体滴度与γ球蛋白含量的对应关系,准确把握水貂感染AM D V后临床发展类型,筛选水貂阿留申病毒耐受貂㊁抗性貂,提高貂群整体抗病性,减少水貂阿留申病和净化貂场所带来的经济损失.参考文献:[１]㊀B l o o m M E,B e s tS M,H a y e sSF,e t a l．I d e n t i f i c a t i o no fA l e uＧt i a nm i n kd i s e a s e p 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a n s e nP,H a g b e r g EE,C h r i e lM,e t a l．G l o b a l p h y l o g eＧn e t i c a n a l y s i so fc o n t e m p o r a r y a l e u t i a n m i n kd i s e a s ev i r u s e s(AM D V s)[J]．V i r o l J,２０１７,１４(１):２３１．[１１]㊀P r i e t oA,D i a zＧC a oJ M,F e r n a n d e zＧA n t o n i oR,e t a l．A p p l i c aＧt i o no f r e a lＧt i m e P C Rt o d e t e c tA l e u t i a nm i n kd i s e a s e v i r u s o ne n v i r o n m e n t a lf a r ms o u r c e s[J]．V e t M i c r o b i o l,２０１４,１７３(３Ｇ４):３５５Ｇ３５９．[１２]㊀P r i e t oA,F e r n a n d e zＧA n t o n i oR,D i a zＧC a oJ M,e t a l．D i s t r i b uＧt i o no fA l e u t i a nm i n kd i s e a s e v i r u s c o n t a m i n a t i o n i n t h e e n v iＧr o n m e n t o f i n f e c t e dm i n k f a r m s[J]．V e tM i c r o b i o l,２０１７,２０４:５９Ｇ６３．[１３]㊀庄金秋,梅建国,王玉茂,等．水貂阿留申病毒最新检测方法研究进展[J]．现代畜牧兽医,２０１７,(１１):５３Ｇ５８．[１４]㊀Q i uJ,C h e n g F,B u r g e rLR,e t a l．T h e t r a n s c r i p t i o n p r o f i l eo fA l e u t i a nm i n kd i s e a s e v i r u s i nC R F Kc e l 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e n t t y p e so f t e c h n i q u e s p l a y d i s t i n c t r o l e s i nd e t e c t i n g A l e u t i a n m i n k d i s e a s e v i r u sw i t hs t r o n g v a r i a b i l i t y．T h e a n t i b o d y d e t e c t i o n m e t h o d i s t h em a j o r t e s t i n g o fA l e u t i a n m i n k d i s e a s e,a n d i th a sb e e nc o n t i n u o u s l y i n n o v a t e da n d i m p r o v e db y r e s e a r c h e r s,w i t ht h e t e n d e n c y o f l a r g eＧs c a l e a c c u r a t e d e t e c t i o no f t h eA l e u t i a nd i s e a s e．S o m e s t u d i e s h a v e s h o w n t h a t s i n g l e a n t i b o d y t e s t i n g i s n o t e n o u g h t od e t e c tm i n k i n f e c t e dw i t hA l e u t i a nm i n kd i s e a s ev i r u s．T h e r e f o r e,b y a n a l y z i n g t w ok i n d so f d eＧt e c t i o n t e c h n o l o g i e s,t h i s p a p e r s u g g e s t s t h a t c o m b i n a t i o no f a m d o p a r v o v i r a l g e n e a n d a n t i b o d y t e s t i n g c a n b eu s e d t os c r e e nt h em i n k sw h i c ht o l e r a t eo r r e s i s t t h eA l e u t i a n m i n kd i s e a s ev i r u s i n f e c t i o n,h o p i n g t o p r o v i d e r e f e r e n c e f o r d e t e c t i o na n d s e l e c t i o no f d o m e s t i cm i n ks t o c kw i t hh i g h p r e v a l e n t r a t e．K e y w o r d s:A l e u t i a nm i n kd i s e a s e;A l e u t i a nm i n kd i s e a s e v i r u s;d i a g n o s i s２８动物医学进展㊀２０１９年㊀第４０卷㊀第６期(总第３１２期)。

46 ·2024.4试验研究0 引言水貂阿留申病（A M D ）是由水貂阿留申病毒（AMDV ）引起的一种慢性消耗性传染病。

AMD 在全世界水貂养殖场普遍存在，无净化AMD 的水貂养殖场，感染率可达95%以上。

调查发现，感染AMDV 水貂产仔率在50%～65%，均产仔数平均是3.7只，严重者平均产仔数为1只以下。

没有感染AMDV 水貂产仔率在90%～95%。

另外，发现国内自有的水貂品种，种貂收稿日期：2024-01-26基金项目：水貂阿留申病毒流行病学调查（43218027）；水貂阿留申病诊断试剂盒的建立作者简介：张旭（1998-），男，汉族，天津人，硕士，研究方向：畜牧学与动物医学。

*通信作者简介：张彦龙（1968-），男，汉族，吉林公主岭人，博士，副教授，研究方向：特种动物疾病流行病学及生物制品研制。

张旭，吴晓艳，曹章，等．阿留申病毒阳性水貂选种简易方法的建立与效果评估[J]．现代畜牧科技，2024，107（4）：46-48．　doi ：10.19369/ki.2095-9737.2024.04.012．　ZHANG Xu ，WU Xiaoyan ，CAO Zhang ，et al ．Establishment and Effect Evaluation of a Simple Method for Selecting Aleutian Virus-positive Mink[J]．Modern Animal Husbandry Science & Technology ，2024，107（4）：46-48．阿留申病毒阳性水貂选种简易方法的建立与效果评估张旭1，吴晓艳1，曹章1，于天浩1，赵静1，蒋欣芫1，孙见2，3，张彦龙1，2*（1. 东北林业大学野生动物与自然保护地学院，黑龙江 哈尔滨 150006； 2. 威海海洋职业学院，山东 荣成 264315；3. 河北农业大学，河北 保定 071000）摘要：通过从阿留申病毒阳性水貂筛选具有抵抗力的水貂，达到抗病毒育种的目的。