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粪便中大肠菌群总数
摘要：
一、大肠菌群总数的定义
二、大肠菌群总数的检测方法
1.平板计数法
2.免疫磁珠法
三、大肠菌群总数与健康关系
1.与肠道菌群平衡的关系
2.与粪便卫生质量的关系
四、大肠菌群总数的参考值
正文：
大肠菌群总数是指在一定条件下，粪便中所含大肠菌群的数目。
它是一个重要的卫生指标，用于评估人体肠道中菌群平衡状态，以及粪便的卫生质量。
大肠菌群总数的检测方法主要有平板计数法和免疫磁珠法。
平板计数法是测定大肠菌群总数的最常用方法。
它通过将粪便样品均匀涂布在含有抗生素的培养基上，然后在特定条件下培养一定时间后，对菌落进行计数。
免疫磁珠法是一种快速、灵敏的检测方法。
它通过抗体与目标菌结合，然后用磁珠捕获结合的细菌，最后通过计数磁珠的数量来推算大肠菌群总数。
大肠菌群总数与健康关系密切。
正常情况下，肠道内存在大量微生物，形成一个稳定的菌群平衡。
大肠菌群总数的变化可能影响肠道菌群的平衡，进而影响人体健康。
此外，大肠菌群总数还可以反映粪便的卫生质量。
若大肠菌群
总数过高，可能表明粪便中存在较多的致病菌，对人体健康造成潜在威胁。
根据不同国家和地区，大肠菌群总数的参考值可能有所不同。
一般情况下，大肠菌群总数应该小于10^8 CFU/g粪便。
作业指导书 页码：第 1页，共11页 文件编号：JLQX-03-022 版次：2022版，第0次修订 文件名称：水中总大肠菌群的测定 发布日期：2022 年1 月1 日水中总大肠菌群的测定1、方法依据水质 水中总大肠菌群的测定 多管发酵法2、合用范围总大肠菌群是指那些能在37℃48h之内发酵乳糖产酸气的、需氧及碱性厌氧的革兰式阴性的无芽胞杆菌。
主要包括有埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、肠杆菌属、克雷伯氏菌属等菌属的细菌。
总大肠菌群的检验方法中，多管发酵法可合用于各种水样（包括底泥），但操作较繁，需要时间较长；滤膜法主要是用于杂质较少的水样，操作简单快速。
如果是使用滤膜法，则总大肠菌群可重新定义为：所有能在含乳糖的远腾氏培养基上，于37℃24h之内生长出带有金属光泽暗色菌落的、需氧的和兼性厌氧革兰氏阴性无芽胞杆菌。
粪便中存在有大量的大肠菌群细菌，在水体中存活的时间和对氯的反抗力等于常道致病菌，如沙门氏菌、志贺氏菌等相似，因此将总大肠菌群作为水体受粪便污染的指示菌是合适的。
但在某些水质条件下，大肠菌群细菌在水中能自行繁殖，这是不利之处。
作业指导书 页码：第2页，共11页 文件编号：JLQX-03-022 版次：2022版，第0次修订 文件名称：水中总大肠菌群的测定 发布日期：2022 年1 月1 日3、测定原理3.1水中总大肠菌群的测定多管发酵是根据大肠菌群细菌能发酵乳糖、产酸产气以及具备革兰氏染色阴性、无芽孢、呈杆状等有关特性，通过三个步骤进行检验，以求得水样中的总大肠菌群数。
多管发酵法是以最可能数简称MPN来表示实验结果的。
实际上它是根据统计学理论，估计水体中的大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
如果从理论上考虑，并且进行大量的重复检定，可以发现这种估计有大于实际数字的倾向。
无非只决于那些既显示阳性有显示阴性的稀释度试管重复数目增加，这种差异便会减少，对于细菌含量的估计值，大部份取决于那些即显示阳性又显示阴性的稀释度。
水质总大肠菌群的测定多管发酵法方法学报告起始日期：2018年月日结束日期：2018年月日一、实验目的掌握水中总大肠菌群的测定方法及原理。
二、依据标准文献GB/T 5750.12-2006生活饮用水标准检验方法微生物指标 2 多管发酵法三、适用范围生活饮用水及水源水总大肠菌群的测定。
四、方法原理总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的,在37℃生长时能使乳糖发酵,在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽孢杆菌。
多管发酵法的原理是根据统计学理论，通过三个步骤进行检验求得水样中的总大肠菌群数，估计水体中大肠杆菌密度和卫生质量的一种方法。
试验结果以最可能数，简称MPN 表示。
计算出数量/L。
（most probable number）五、仪器设备(1)立式压力蒸气灭菌器型号：YXQ-LS-50SII 容积：50升(2)恒温培养箱，超净工作台。
(3)酒精灯、镍铬丝接种棒。
(4)培养皿（直径100mm）、试管（5×150mm），吸管（1、5、10mL）、烧杯(5)（200、500、2000mL）、锥形瓶（250、1000mL）、采样瓶。
六、试剂材料培养基：乳糖蛋白胨培养液、伊红美蓝培养基，营养琼脂。
七、实验步骤 1. 试验准备乳糖蛋白胨培养液：按瓶上标志配制好液体培养基后，取10支20毫升试管，5支30毫升试管，内置小导管。
5支30毫升试管加入10 mL 2倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，10管加入10 mL 单倍浓度的乳糖蛋白胨培养液，试管加硅胶塞。
伊红美蓝培养基：按瓶上标志配制好300 mL 液体培养基后，倒入锥形瓶500mL 中，加硅胶塞。
营养琼脂：按瓶上标志配制好200mL 液体培养基后，倒入锥形瓶500mL 中，加硅胶塞。
取采样瓶多个，接种棒，培养皿35对，密封包装。
以上物品材料于 121℃高压灭菌器中灭菌 30min 备用。
2. 样品测定取500mL 锥形瓶内的营养琼脂液体培养基，倒入约20mL 灭菌好的培养皿中，超净工作台不同位置各放1对，共10对，操作间不同位置各各放1对，共10对。
地下水总大肠菌群的测定方法
地下水中总大肠菌群的测定是非常重要的，因为它可以反映出
水质的卫生状况。
以下是一些常用的测定方法：
1. 膜过滤法，这是一种常用的测定方法，通过将地下水样品通
过0.45微米的膜过滤器，然后将膜放置在含有大肠菌群特异培养基
的琼脂平板上进行培养。
培养后，通过计数形成的菌落来确定水样
中大肠菌群的数量。
2. 荧光素基因定量PCR法，这是一种分子生物学方法，通过提
取地下水中的DNA，使用荧光素基因特异引物进行PCR扩增，然后
使用荧光素探针进行定量检测。
这种方法可以快速准确地测定大肠
菌群的数量。
3. 色素培养基法，使用含有某种特定底物的琼脂平板进行培养，通过大肠菌群对底物的特异反应产生的颜色变化来测定其数量。
4. 流式细胞术，这是一种高通量的测定方法，通过将水样中的
微生物染色标记，然后通过流式细胞仪进行快速准确地测定大肠菌
群的数量。
总的来说，测定地下水中总大肠菌群的方法有多种，可以从不同的角度对水质进行评估。
在实际应用中，可以根据实际情况选择合适的方法进行测定。
大肠菌群的测定实验报告
《大肠菌群的测定实验报告》
实验目的：通过实验测定大肠菌群的数量，了解其在肠道中的分布情况，并探讨其与健康的关系。
实验方法：我们采集了一组健康人群的粪便样本，并使用培养基和平板计数法对大肠菌群进行测定。
首先，我们将粪便样本均匀涂抹在培养基上，然后将培养皿放入恒温箱中进行培养。
培养后，我们对培养皿上的菌落进行计数，并根据计数结果得出大肠菌群的数量。
实验结果：经过实验测定，我们发现健康人群的大肠菌群数量在正常范围内，平均值约为10^8 CFU/g。
同时，我们还发现不同个体之间的大肠菌群数量存在一定的差异，但总体上呈现出稳定的分布情况。
实验分析：大肠菌群在肠道中起着重要的作用，它能够帮助人体消化食物、产生维生素等。
同时，大肠菌群的数量与肠道健康密切相关，过多或过少都可能导致肠道问题。
因此，通过测定大肠菌群的数量，可以帮助我们了解肠道健康状况，及时采取相应的调节措施。
结论：通过本次实验测定，我们得出了健康人群大肠菌群数量的正常范围，并认识到了大肠菌群在肠道健康中的重要作用。
希望通过这一实验结果，能够为人们提供更多关于肠道健康的参考信息，促进人们更加关注和重视肠道健康。
1适用范围本标准适用于天然水和生活水中总大肠菌群的测定。
2方法概要总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37C 生长时能使乳糖发酵，在 24h 内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。
总大肠菌群数系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
本标准参照GB 5750-85制订。
3试剂和材料 3.1乳糖蛋白胨培养液：外购商品培养基或按下列方法自行配制。
3.1.1 组分蛋白胨 10.0g 牛肉膏 3.0g乳糖 氯化钠1.6 %溴甲酚紫乙醇溶液蒸馏水3.1.2 配制将蛋白胨、牛肉膏、乳糖及氯化钠置于 节pH为7.2〜7.4，再加入1ml 1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒管的试管中，置于高 压蒸汽灭菌器中，以 115C 灭菌20分钟，贮存于冷暗处备用。
3.2 三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液: 按上述乳糖蛋白胨培养液（ 3.1 ）各组分的称量增加三倍配制。
3.3 品红亚硫酸钠培养基（供多吕发酵法用） :外购商品培养基或按卜列万法自行配制。
3.3.1组分蛋白胨 10.0g乳糖10.0g磷酸氢二钾3.5g琼脂10〜30g蒸馏水1000ml无水亚硫酸钠5g 左右 5.0g 5.0g 1.0ml 1000ml1000ml 蒸馏水中加热溶解，用 1mol/L 的NaOH 或HCI 调332 贮备培养基的配制先将琼脂加至900ml蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾和蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，用1mol/L的NaOH或HCI调节pH为7.2〜7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置于高压蒸汽灭菌器中，以115C灭菌20分钟，贮存于冷暗处备用。
3.3.3平皿培养基的配制将上法制备的贮备培养基加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中。
再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解后，置于沸水浴中煮沸10分钟以灭菌。
大肠菌群数的测定方法宝子，今天咱们来唠唠大肠菌群数咋测定的哈。
最常用的一种方法就是多管发酵法。
这就像是一场微生物的小比赛呢。
咱先得把样品采集好，比如说水啊或者食品之类的。
然后把样品放到乳糖胆盐发酵管里头。
这就像是给大肠菌群准备了一个特别的小屋子，要是有大肠菌群在，它们就会在这个小屋子里开始“搞事情”，发酵乳糖产酸产气。
你就可以看到小管子里有气泡啦，这时候就像是它们在跟你说“嗨，我们在这儿呢”。
要是在乳糖胆盐发酵管里有反应了，咱就得把这些有反应的培养液再接种到伊红美蓝琼脂平板上。
这个平板可神奇啦，大肠菌群在上面会长出有自己特色的菌落呢。
就像它们在这个新的舞台上展示自己独特的模样。
这些菌落可能是紫黑色的，还有金属光泽，就像一群穿着闪亮衣服的小演员。
通过数这些有特色的菌落，就能大概知道大肠菌群的数量啦。
还有一种方法叫滤膜法。
这个就像是用一个小筛子来筛出大肠菌群。
先把样品通过滤膜过滤，大肠菌群就被留在滤膜上啦。
然后把滤膜放到特定的培养基上培养。
那些大肠菌群就会在滤膜上慢慢长大，形成小点点一样的菌落。
咱们再数这些小点点，就能知道大肠菌群的数量咯。
不过呢，在做这些测定的时候呀，一定要注意卫生和操作规范哦。
就像咱们做饭得按照菜谱来一样，测定大肠菌群数也得按照严格的步骤。
不然的话，就可能得出错误的结果呢。
比如说，要是不小心把别的细菌也带进去了，那就像是一场混乱的聚会，根本分不清谁是谁啦。
总之呢，测定大肠菌群数虽然有点小复杂，但是只要按照方法来，就能够准确地知道样品里大肠菌群的情况啦。
这对保障咱们的健康可重要了呢，不管是喝的水还是吃的食物，知道大肠菌群的数量就能知道它们是不是安全的，就像给咱们的健康上了一道保险。
总大肠菌群
在饮用水的微生物安全监测中，普遍采用正常的肠道细菌作为粪便污染指标，而不是直接测定肠道致病菌。
总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的，在37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革氏阴性无芽胞杆菌。
总大肠菌群系指每升水样中所含有的总大肠菌群的数目。
总大肠菌群可用多管发酵法或滤膜法检验。
一多管发酵法
1应用范围
1.1本法适用于饮用水、水源水，特别是浑浊度含量高的水质中总大肠菌群的测定。
1.2水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在。
2原理
根据总大肠菌群应具有的生物特性，
产气，能在选择性培养基上产生典型菌落。
3仪器
3.1显微镜
3.2革兰氏染色用有关器材。
3.3高压蒸汽灭菌器。
3.4干热灭菌箱。
3.5恒温箱。
3.6冰箱。
3.7放大镜。
3.8试管、平皿（直径
4培养基
4.1乳糖蛋白胨培养液
4.1.1成分
蛋白胨10g
牛肉膏3g
乳糖5g
氯化钠5g
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液
蒸馏水1000ml
4.1.2制法
将蛋白胨、牛肉膏、
1.6%溴甲酚紫乙醇溶液，
灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
4.2三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液
按上述乳糖蛋白胨培养液浓缩三倍配制。
4.3品红亚硫酸钠培养基（供多管发酵法用）4.3.1成分
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾3.5g
琼脂15~30g
蒸馏水1000ml
无水亚硫酸钠5g左右
5%碱性品红乙醇溶液
4.3.2储备培养基的制备如革兰氏阴性无芽胞杆菌，
9cm）、刻度吸管等，置于干热灭菌箱中
1ml
1000ml蒸馏水中加热溶解，
充分混匀，分装于装有倒管的试管中，在37℃24h内能发酵乳糖并产酸160℃灭菌2h
调整pH为7.2~7.4，再加入1ml置高压蒸汽灭菌器中，以115℃乳糖及氯化钠置于
20ml
先将琼脂加至900蒸馏水中，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH值为7.2~7.4，趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌中以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
4.3.3平皿培养基的配制
将上法制备的储备培养基加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量的5%碱性品红乙醇溶液，置于灭菌空试管中。
再按比例称取所需的无水亚硫酸钠置于另一个灭菌空试管内，加灭菌水少许使其溶解后，置于沸水浴中煮沸10min以灭菌。
用灭菌吸管吸取已灭菌的严硫酸钠溶液，滴加于碱性品红乙醇溶液内至深红色褪成淡粉红色为止。
将此亚硫酸钠与碱性品红的混合液全部加入已融化的储备培养基内，并充分混匀（防止产生气泡），立即将此种培养基适量倾入于已灭菌的空平皿内，待其冷却凝固后置冰箱内备用。
此种已制成的培养基于冰箱内保存不宜超过二周，如培养基已由淡红色变成深红色，则不能再用。
4.4伊红美蓝培养基
4.4.1成分
蛋白胨10g
乳糖10g
磷酸氢二钾2g
琼脂20~30g
蒸馏水1000ml
2%伊红水溶液20ml
0.5 %美蓝水溶液13ml
4.4.2储备培养基的制备
先将琼脂加至900ml蒸馏水，加热溶解，然后加入磷酸氢二钾及蛋白胨，混匀使之溶解，再以蒸馏水补足至1000ml，调整PH为7.2~7.4。
趁热用脱脂棉或绒布过滤，再加入乳糖，混匀后定量分装于烧瓶内，置高压蒸汽灭菌器内以115℃灭菌20min，贮存于冷暗处备用。
4.4.3平皿培养基的制备
将上法制备的储备培养基加热融化，根据烧瓶内培养基的容量，用灭菌吸管按比例吸取一定量已灭菌的2%伊红水溶液及一定量已灭菌的0.5%美蓝水溶液，加入已融化的储备琼脂内，充分混匀（防止产生气泡）立即将此种培养基适量倾入于已灭菌和空平皿内，待其冷却凝固后置冰箱内备用。
5步骤
5.1生活饮用水
5.1.1初发酵试验：在2个各装有已灭菌50ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（
瓶中（内有倒管）内，以无菌操作各加入水样100ml；在10支装有已灭菌
胨培养液的试管中（内有倒管），以无菌操作各加入水样10ml，混匀后置于
24h。
5.1.2平板分离：经培养24h后，将产酸产气及只产酸的发酵管，分别接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基上，再置于37℃恒温箱内培养
18~24h，挑选符合下列特征的菌落，取菌落的一小部分进行涂片、革兰氏试验、镜检。
品红亚硫酸钠培养基上的菌落：
紫红色，具有金属光泽的菌落。
深红色，不带或略带金属光泽的菌落。
淡红色，中心色较深的菌落。
伊红美蓝培养基上的菌落：
深紫黑色，具有金属光泽的菌落。
紫黑色，不带或略带金属光泽的菌落。
淡紫红色，中心色较深的菌落。
并
4.2）的大试管或烧5ml三倍浓缩乳糖蛋白37℃恒温箱内培养
5.1.3复发酵试验：上述涂片镜检的菌落如为革兰氏阴性无芽胞杆菌，则挑取该菌落的另一部分再接种于普通浓度乳糖蛋白胨培养液中（内有倒管），每管可接种分离自
同一初发酵管的最典型的菌落1~3个，然后置于37℃恒温箱中培养24h，有产酸产气者（不论倒管内气体多少皆作为产气论），即证实有总大肠菌群存在。
5.1.4根据证实有总大肠菌群存在的阳性管（瓶）数查表1，报告每升水样中的总大肠菌群数。
表1总大肠菌群数检数表
（接种水样总量300ml—100ml 2份，10ml 10份）
100ml水量的阳性012
管（瓶）数
10ml水量的阳性管数
每升水样中每升水样中每升水样中
总大肠菌群数总大肠菌群数总大肠菌群数0＜3411
1
23818
371327
4111838
5142452
6183070
223692
7
82743120
93151161
103660230
4069＞230
5.2水源水
5.2.1将水样作1：10稀释。
5.2.2于各装有5ml三倍浓缩乳糖蛋白胨培养液（4.2）的5个试管中（内有倒管），各加入水样；于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液（4.1）的5个试管中（内有倒管），各加入1ml水样，于各装有10ml乳糖蛋白胨培养液（4.1）的5个试管中（内有倒管），各加入1ml1：10稀释水样。
共计15管，三个稀释度。
以后的检验步骤同上述生活饮用水的检验方法。
5.2.3根据证实有总大肠菌群存在的阳性管数查表2报告每升水样中的总大肠菌群数。
表2总大肠菌群检数表
（接种水样总量55.5ml，其中5份10ml水样，5份1ml水样，5份0.1ml 水样）10ml。
