当前位置：文档之家 › 荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究

荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究

  • 格式：doc
  • 大小：77.50 KB
  • 文档页数：11

下载文档原格式

  / 11

合集下载

荷移反应_紫外分光光度法测定尿酸_柴宜民

荷移反应_紫外分光光度法测定尿酸_柴宜民

Fig. 1 Absorption spectra
1. uric aci d ; 2. tet racyan oet hlene ; 3. complex in w ater s ol ution.
Fig. 2 Effect of solvents
3. 2. 4 四氰乙烯用量 结果表明 , 当四氰乙烯用量在 2. 0 ～ 3. 0 mL 时 , 配合物的吸光度值最大且相对稳 定 。 本文选择四氰乙烯用量为 3. 0 mL 。 3. 3 配合物的组成 用摩尔比法与等摩尔连续变化法分别测定了配合物的组成 。 结果表明 , 尿酸与四氰乙烯的配合比为 1∶ 2。 3. 4 工作曲线及灵敏度 分别取不同量的尿酸标准溶液 , 按实验方法测量其吸光度值 A , 绘制工作曲线 。 表明尿酸浓度在 5. 7 × 10 - 6 ～ 5. 7 × 10 - 6 m ol L - 1 范围内符合比耳定律 。 线性方程为 A =0. 0449c +0. 0121 , 相关系数 R 2 = 0. 999 , 表观摩尔吸光系数 ε =6. 24 × 104 L m ol - 1 cm - 1 。 3. 5 干扰试验 在最佳条件下 , 考察了其他物质对尿酸测定的干扰 。 结果表明 : 10 倍的 D树胶醛糖 、 DLα 氨基丙酸 、 麦芽糖 、L赖氨酸 ; 100 倍的肌肝 、Fe 3. 6 反应机理的探讨 尿酸分子中的咪唑环和嘧啶环上氮原子含有孤对电子 , 可作为电子给予体 , 而四氰乙烯是一个良好的 Π电子接受体 , 在水溶液中可形成稳定的 1∶ 2配合物 , 在波长 395 nm 处具有较强的配合物特征吸收峰 , 其 形成过程可表示如下 :
2 实验部分
2. 1 主要仪器与试剂 WFZ26A 紫外可见分光光度计(天津市光学仪器厂); KQ3200 超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。 尿酸(99 %, Sigm a 公司), 标准溶液用 0. 1 mol / L 的 NaOH 助溶 , 再用水配成 1. 14 ×10 m ol / L ; 四氰 -3 乙烯(98 %, A Johnson M at they Co mpany)配成 1. 01 × 10 mo l /L 乙醇溶液 。 其它试剂均为分析纯 , 实验 用水为二次去离子水 。 2. 2 实验方法 于 10 mL 具塞比色管中 , 加入一定量 1. 14 ×10 mol / L 的尿酸溶液 , 然后加入 3. 0 m L 1. 01 ×10 mol / L 的四氰乙烯溶液 , 用水定容至刻度 , 摇匀 , 室温下放置 10 min 后 , 用 1 cm 的比色皿 , 以试剂空白为 参比 , 在波长 395 nm 处测定吸光度 A 。

可见分光光度法测定复方硫酸锌口服溶液中盐酸赖氨酸的含量

可见分光光度法测定复方硫酸锌口服溶液中盐酸赖氨酸的含量

可见分光光度法测定复方硫酸锌口服溶液中盐酸赖氨酸的含量彭贤东;龙凤;李林
【期刊名称】《西部医学》
【年(卷),期】2009(21)5
【摘要】目的建立以可见分光先度法测定复方硫酸锌口服溶液中盐酸赖氨酸含量的方法 .方法采用可见分光光度法,在565 nm波长处测定其吸光度,并计算含量.结果盐酸赖氨酸检测浓度的线性范围为3.2～9.6 ǖg/ml(r=0.9999),平均回收率为99.76%(RSD=0.37%,n=9).结论本方法操作简便、快速,结果准确,可用于该制剂的含量测定.
【总页数】2页(P836-837)
【作者】彭贤东;龙凤;李林
【作者单位】南充市中心医院药剂科,四川,南充,637000;南充市中心医院药剂科,四川,南充,637000;南充市中心医院药剂科,四川,南充,637000
【正文语种】中文
【中图分类】R723.2
【相关文献】
1.紫外分光光度法测定维吾尔药复方艾皮提蒙合剂中总黄酮含量 [J], 热孜亚·吾甫尔;艾尼瓦尔·塔力甫;买迪娜木·米吉提;热甫哈提·赛买提
2.HPLC法测定小儿复方赖氨酸颗粒中盐酸赖氨酸的含量 [J], 李荣玮;黄晓燕;潘震宇
3.HPLC法测定复方制剂中盐酸赖氨酸的含量 [J], 陈玲玲
4.紫外分光光度法测定复方痛风颗粒剂中总酚的含量 [J], 唐勇琛; 李拥军; 张亚洲
5.高效液相色谱法测定复方赖氨酸颗粒中盐酸赖氨酸含量 [J], 童颖;李苗;宋敏因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸

胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸

文章编号:1674-9146(2016)03-0108-03赖氨酸,化学结构式为H 2NCH 2CH 2CH 2CH 2CH(NH 2)COOH ,是构成蛋白质的基本单位,是组成人体蛋白质的21种氨基酸之一。

赖氨酸是白色或近白色自由流动的结晶性粉末,几乎无臭,263~264℃熔化并分解。

赖氨酸的作用包括建立肌肉组织,从创伤或受伤恢复,并帮助更有效吸收钙。

它还有助于身体产生抗体,酶和激素。

赖氨酸补充剂也用于治疗疱疹病毒爆发。

谷物及饲料通常用赖氨酸含量的高低作为食物蛋白生理价值的一个指标[1-2]。

目前检测赖氨酸含量的方法主要有染料结合法、毛细管电泳法、气质联用法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[3-5]。

染料结合法灵敏度较高,可检测到微量蛋白,操作简便、快迅,试剂配制简单,重复性好,但干扰因素多,误差大,颜色会转移。

紫外分光光度法灵敏、快速、不消耗样品,但是核酸类物质有影响。

高效液相色谱法稳定、准确、良好,但耗费时间长。

已有文献介绍用胶束增敏法检测元素,因此,笔者用赖氨酸和甲酚红的络合物在溴化十六烷基三甲基胺(CTMAB )胶束介质中的吸收光谱检测谷物中赖氨酸的含量,以期为赖氨酸提供简便的检测方法。

1实验部分1.1实验试剂及仪器实验所使用的试剂均为分析纯,实验用水为二次蒸馏水。

所用仪器包括UV-2800荧光光谱仪,HH-S 型恒温水浴锅和Water Proof pH 计。

1.2实验方法1.2.1工作曲线绘制及回收率和精密度测试准确配制浓度为10μg/mL 赖氨酸溶液,物质的量浓度为1.0×10-4mol/L 的甲酚红溶液和物质的量浓度为0.1mol/L 的CTMAB 溶液待用。

然后用移液管分别移取不同体积(0.2mL ,0.4mL ,0.6mL ,0.8mL ,1.0mL ,1.2mL ,1.4mL )的待用赖氨酸溶液于10mL 的比色管中,并依次编号;在各比色管中依次加入1mL 的甲酚红溶液和1mL 的CTMAB溶液,用二次蒸馏水稀释至刻度;在75℃恒温水浴中保温10min ,流水冷却至室温;以相应的空白试剂为参比,用紫外可见分光光度计分别测定各溶液在583nm 处的吸光度。

上麦中赖氨酸含量快速测定法的研究

上麦中赖氨酸含量快速测定法的研究

蛋 白质 中的 氨 基 酸 具 有 一 个 游 离 的 ￡ 一ＮＨ２ 它 与 茚 三 酮 起 颜 色 反 应 呈 兰 紫 色 ， 色 的 深 浅 在 一 ， 颜
定 范 围 内与 赖 氨 酸 的含 量 成 线 性 关 系 ． 亮 氨 酸 与 赖 氨 酸 的碳 原 子 数 目是 相 同 的 ， 且 仅 有 一 个 氨 基 （ —ＮＨ２ ， 当 于 蛋 白质 中赖 氨 酸 而 ａ ）相
维普资讯
２０ ０ ２年 １ １月 第 ４期
松辽学刊（ 自然 科 学 版 ） Ｓ ｎ ｌ ｏＪ ｕ ｎ ｌ Ｎａｕ ａ Ｓ ｉｎ ｅＥ ｉｏ ） ｏ ｇｉ ｏ ｒ ａ （ ｔｒｌ ｃ ｃ ｄｔ ｎ ａ ｅ ｉ
Ｎ ４ Ｑ．
ＮＯＶ．
小 麦 中赖 氨 酸 含 量 快 速 测 定 法 的 研 究
５ 蒸 馏 水 ， 室 温 下 置 于康 氏振 荡 器上 振 荡 ２ ｎ， 后 过 滤 ， １ｍ１ 液 于 带 塞 试 管 中 ， ２． ０ ｍ１ 在 ５ ｍｉ 然 取 滤 按 １
方法进行测定 ． ２ ３ 结 果计 算 ．
样 中 氨 含 （） 嚣 童 品 赖 酸 量％ 丛 堡 誊 ＝
残基上的 ￡ 一ＮＨ２ 因此 可 以用 亮 氨 酸 器 与 试 剂
１ １ 仪 器 ．
７ １型 分 光 光 度 计 ， 析 天 平 （ 分 之 一 ） 恒 温 水 浴 ， 氏振 荡 器 ， 塞 试 管 ， 塞 三 角 瓶 ， 斗 ， ２ 分 万 ， 康 具 具 漏
Ｘ 液 释 数 １ ×０ 样 稀 倍 ０ １ ０
由于 亮 氨 酸 与 赖 氨 酸 的 分 子 量 不 相 同 ， 用 亮 氨 酸 标 准 曲 线 计 算 赖 氨 酸 时 ， 要 乘 以 校 正 系 数 故 需 １ １ １ ， 时 还 应 从 最 后 的计 算 结 果 中 减 去 游离 的 氨 基 酸 含 量 ． ．５ ５ 同

赖氨酸实验报告

赖氨酸实验报告

实验名称：赖氨酸的提取与鉴定一、实验目的1. 掌握赖氨酸的提取方法。

2. 了解赖氨酸的鉴定方法。

3. 探究赖氨酸在不同生物样品中的含量。

二、实验原理赖氨酸是一种必需氨基酸，广泛存在于动物和植物中。

本实验通过酸水解法提取赖氨酸，并采用紫外分光光度法对其进行鉴定。

紫外分光光度法是基于分子中某些基团对紫外光的吸收特性进行定量分析的原理。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：鸡蛋、鸡肉、牛肉、豆类、小麦等。

2. 实验仪器：酸度计、紫外分光光度计、离心机、天平等。

四、实验步骤1. 赖氨酸的提取（1）称取一定量的生物样品，加入10倍体积的0.1mol/L盐酸溶液，搅拌均匀。

（2）将混合液煮沸30分钟，使蛋白质变性。

（3）冷却后，加入1mol/L氢氧化钠溶液，调节pH至7.0。

（4）加入10倍体积的95%乙醇，静置过夜。

（5）离心去除沉淀，收集上清液。

（6）将上清液用95%乙醇进行醇沉，离心去除沉淀。

（7）将沉淀用少量蒸馏水溶解，得到赖氨酸溶液。

2. 赖氨酸的鉴定（1）配制赖氨酸标准溶液：准确称取赖氨酸标准品，用蒸馏水溶解并定容至一定体积，得到100μg/mL的赖氨酸标准溶液。

（2）测定吸光度：将赖氨酸标准溶液和样品溶液分别进行紫外分光光度法测定，测定波长为258nm。

（3）绘制标准曲线：以赖氨酸浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

（4）计算样品中赖氨酸含量：根据样品溶液的吸光度，从标准曲线上查得对应的赖氨酸浓度，计算样品中赖氨酸含量。

五、实验结果与分析1. 赖氨酸的提取本实验成功提取了鸡蛋、鸡肉、牛肉、豆类、小麦等生物样品中的赖氨酸。

2. 赖氨酸的鉴定通过紫外分光光度法，成功鉴定了赖氨酸。

标准曲线的线性范围为0.5～5.0μg/mL，相关系数R²=0.998。

3. 赖氨酸含量测定不同生物样品中赖氨酸含量如下：鸡蛋：3.5mg/g鸡肉：4.2mg/g牛肉：5.0mg/g豆类：2.8mg/g小麦：2.0mg/g六、实验结论1. 本实验成功提取了鸡蛋、鸡肉、牛肉、豆类、小麦等生物样品中的赖氨酸。

胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸

胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸

胶束增敏分光光度法测定谷物中赖氨酸作者：张宝红，胡国胜来源：《科技创新与生产力》 2016年第3期张宝红，胡国胜（中北大学材料科学与工程学院，山西太原 030051）摘要：本文采用胶束增敏分光光度法对谷物中赖氨酸的含量进行测定。

研究表明赖氨酸与甲酚红在水溶液中可形成紫色络合物，溴化十六烷基三甲基铵（CTMAB）对该络合物有显著的增敏增稳作用。

据此建立了胶束增敏光度法测定赖氨酸含量的方法，结果表明此方法具有选择性好，灵敏度高等优点，可用于测定谷物中赖氨酸含量。

关键词：赖氨酸；溴化十六烷基三甲基胺；甲酚红；分光光度法中图分类号：O657.3 文献标志码：A DOI：10.3969/j.issn.1674-9146.2016.03.108收稿日期：２０15－10－12；修回日期：２０16－01－25作者简介：张宝红（1989-），男，山西长治人，在读硕士，主要从事蛋白质及氨基酸研究，E-mail：wsry7091@。

赖氨酸，化学结构式为H2NCH2CH2CH2CH2CH（NH2）COOH，是构成蛋白质的基本单位，是组成人体蛋白质的21种氨基酸之一。

赖氨酸是白色或近白色自由流动的结晶性粉末，几乎无臭，263~264 ℃熔化并分解。

赖氨酸的作用包括建立肌肉组织，从创伤或受伤恢复，并帮助更有效吸收钙。

它还有助于身体产生抗体，酶和激素。

赖氨酸补充剂也用于治疗疱疹病毒爆发。

谷物及饲料通常用赖氨酸含量的高低作为食物蛋白生理价值的一个指标[1-2]。

目前检测赖氨酸含量的方法主要有染料结合法、毛细管电泳法、气质联用法、紫外分光光度法、高效液相色谱法等[3-5]。

染料结合法灵敏度较高，可检测到微量蛋白，操作简便、快迅，试剂配制简单，重复性好，但干扰因素多，误差大，颜色会转移。

紫外分光光度法灵敏、快速、不消耗样品，但是核酸类物质有影响。

高效液相色谱法稳定、准确、良好，但耗费时间长。

已有文献介绍用胶束增敏法检测元素，因此，笔者用赖氨酸和甲酚红的络合物在溴化十六烷基三甲基胺（CTMAB）胶束介质中的吸收光谱检测谷物中赖氨酸的含量，以期为赖氨酸提供简便的检测方法。

荷移反应分光光度法测定谷氨酸的含量

网 １ 吸 收 光 谱
氨 酸０ ０ ７ ， 水 稀 释 定 容 至 １ ０ ｍ ， 后 再 取 ． ３ ｇ 加 ６ Ｏ Ｌ 然 １ Ｌ稀释定 容 至 １ ０ｍ ０ｍ ０ Ｌ； 硼砂 储备 液 ： 酸 根 浓 度 为 ０ ２ ｏ Ｌ 硼 ． ０ ｍ ｌ 。准 确 ／ 称取 １９ ７ ａ Ｂ Ｏ Ｉ Ｈ２ 加 水 稀 释 定 容 至 ．０ ｇＮ ２ ４ ・ Ｏ Ｏ， ２
１ 实验 部分
１ １ 主 要 仪 器 与 试 剂 ．
按 实验 方 法 配 制 溶 液 ， ２ ０～ ０ ｍ 区域 内 在 ０ ４ ０ｎ
于分 光光 度 计上 扫描 ， 测得 吸 收光 谱见 图 １ 。
１Ｏ ． Ｏ８ ．
紫外 町见 分光 光 度 计 ： Ｖ一１０ Ｕ ７ ０型 ， 日本 岛津
公司；
Ｏ６ ．
０４ ．
电热 恒温水 浴 锅 ： Ｚ Ｗ —Ｃ型 ， 海 树 立 仪 器 ＤＫ 上 仪表有 限公 司 ； Ｔ Ｂ 溶 液 ： ． ０×１ ＣＱ ２５ ０～ ｍ ｌＬ 准 确 称 取 ｏ／ 。 ０ ０ １ Ｃ Ｑ， 无 水 乙醇稀 释定 容 至 ５ Ｌ ．３ ｇＴ Ｂ 加 ２ ０ｒ ； ｎ
维普资讯
刘 云 ， ： 移 反 应 分 光 光 度 法 测 定 氨酸 的 含量 等 荷
６ ３
荷 移 反 应 分 光 光 度 法 测 定 谷 氨 酸 的 含 量
刘 云 王 文 雷 邱 晓 国
（ 东 省 环 境 ｌ测 中心 站 ， 南 ２ ０ １ ） 山 监 济 ５ ０ ３
法 用 于测 定 味 精 中谷 氨 酸钠 含 量 的 测 定 ， 标 回 收 率 为 ９ ． ％ ～１ １８ ， 对 标 准 偏 差 不 大 于 １ １％ （ 加 ６１ ０．％ 相 、 ３ ｎ＝６ 。 ）

荷移分光光度法测定扑尔敏

O HC HC COOH + COOH HO O HC HC COOH ……… COOH HO
3.6 络合物的组成
为 1 1 1。扑尔敏与氯冉酸的荷移反应可用下式表示：
N O
3.7 3.8
—
Cl
—
（ CH3 ） CH2 CH2 N 2 CH
O
Cl

Cl
OH
O
N ” O
1 引 言
扑尔敏又称马来酸氯苯那敏， 为抗组织胺药， 对各种过敏性疾病有良好的疗效。本文首次利用扑尔敏与 氯冉酸在丙酮介质中发生的荷移反应， 建立简便的分光光度法， 对扑尔敏制剂中的有效成分进行含量测定。 测定波长是 536 nm， 表观摩尔吸光系数是 1.38 X 103 L ・ 线性范围是 20 ~ 280 mg / L， 回收率在 98% mol - 1・cm - 1 ， 以上。用本方法和药典方法对制剂进行含量测定， 结果相符。 2 实验部分 （上海第三分析仪器厂） 。1 g / L 扑尔敏 （药物纯） 丙酮溶液； 721 分光光度计 3 X 10 - 3 2.1 主要仪器与试剂 2.2 3
ห้องสมุดไป่ตู้
引证文献(10条) 1.赵辉.李占灵 荷移分光光度法研究进展[期刊论文]-化学试剂 2008(9) 2.田孟魁.冯喜兰.赵凤林.李娜.李克安 水与氯冉酸的荷移反应及其分析应用[期刊论文]-分析试验室 2007(1) 3.马冬梅 5-羟基色氨酸的制备及分析方法研究[学位论文]硕士 2006 4.荷移光度法测定食品香料中的微量水[期刊论文]-河南科技学院学报（自然科学版） 2005(1) 5.Feng Lin ZHAO.Xi Lan FENG.Xue Jing LIU.Na LI.Ke An LI Spectrophotometric Study on the Interaction of Water with Chloranilic Acid and its Analytical Application[期刊论文]-中国 化学快报（英文版） 2005(7) 6.冯喜兰.田孟魁.董彩霞.赵凤林.李娜.李克安 荷移光度法测定食品香料中的微量水[期刊论文]-广西 师范大学学报（自然科学版） 2003(z3)

一种快速测定发酵液中_聚赖氨酸的方法

准确吸取 50μL 样品 ,加入 50μL DR 试剂沉淀 , 3 500 r/m in离心 20 m in,弃上清液 ,加入 200μL 乙醇 洗涤沉淀 , 3 500 r/m in 离心 20 m in弃上清液 ,加入 100μL Na2 S溶液 3 500 r/m in 离心 20 m in,弃上清 液 ,向沉淀中加入 100μL 浓硝酸 , 20 m in后加入 200 μL水稀释 ,取出 50μL加入 200μL 3%的硫脲 ,在 λ = 435n m 处扫描测定吸光值 A。
134 2009 V o l135 N o 111 ( To ta l 263 )
图 3 ε2聚赖氨酸工作曲线
由图 3可知 ,ε2聚赖氨酸浓度在 0 - 115 g /L 线 性关系良好 。得到回归方程为 y = 01335 6x + 01002 3。式中 x为 ε2聚赖氨酸的浓度 , y为吸光度 , 相关系 数为 R2 = 01999 9 ( n = 3) 。检出限 (DL )为 0101 g /L (DL = 313σ/ slope,σ: 空白样品测定值的标准偏差 ; slope:检出限界附近标准曲线的斜率 ) 。由标准曲线 的斜率可知 ,此方法的灵敏度不高 ,但能满足试验的 测定要求 。由标准曲线的回归方程可直接算出待测 样品中 ε2聚赖氨酸的浓度 。
表 3 D ragendoff’s沉淀法与 Itzhak i法的比较结果
发酵液样品 D ragendoff’s沉淀法 / ( g·L - 1 ) Itzhaki法 / ( g·L - 1 )
菌株 UN2271
01688 ±01025
碘化铋钾试剂 (D ragendoff试剂 , B iI3 ·KI)是一 种生物碱沉淀剂 ,在酸性溶液中与生物碱反应生成橘 红色沉淀 [ A lk ·KI· (B iI3 ) n ] ,为一种络盐 , A lk 表 示生物碱 ,此反应很灵敏 。硫脲与多数金属离子有颜 色反应 ,如对 B i3 +特别敏锐 。ε2聚赖氨酸也是一种生 物碱物质 ,它被 DR 试剂 ( KB iI4 )沉淀为 (B iI3 ) (ε2PL ·H I) ,此沉淀在硝酸和硫脲的作用下 ,形成黄色的 铋 - 硫脲络合物 {B i[ CS (NH2 ) 2 ] } (NO3 ) ,此络合物 在 343 nm 和 435 nm 处有最大吸收 [ 2 ] 。反应式如下 :

用分光光度法测定含氨基酸类制品中的氨基酸含量

５ 干扰试验
按 ２．１ 样品制法项下规定制备无乌龟、乌鸡、蛤
第 ３３ 卷第 ３ 期
范婉萍等：用分光光度法测定含氨基酸类制品中的氨基酸含量
１１９
蚧的样品共 １０ 批，按本文拟定的含量测定方法测 定，结果阴性供试品（无乌龟、乌鸡、蛤蚧）无明显吸 收，见图 １ 曲线 ３，表明按本文拟定的含量测定方法 测定，中药材未对氨基酸的含量测定产生干扰。
精确称取经干燥至恒重的丙氨酸适量，加 ７０％ 乙醇制成浓度为 ０．３ｍｇ·ｍＬ－１ 的溶液，即得到标准品 溶液。
３ 色谱条件的选择
３．１ 显色条件的选择 经研究发现，氨基酸与茚三酮在加热条件下作
１１８
中国测试技术
２００７ 年 ５ 月
用显色此，此处取上述标准品丙氨酸溶液 ０．５ｍＬ，用 于正交试验，比较分析了 ０．３％茚三酮 ７０％乙醇液用 量、显色温度、加热时间等因素对丙氨酸显色稳定 性、显色平衡值的影响，结果见表 １。
品的含量快速检测方法，适合于实验室和生产检 测监控使用及推广。
参考文献
［１］ 夏其昌．蛋白质化学研究技术与进展［Ｍ］．北京：科学出版 社，１９９９．
［２］ 匡海学．中药化学［Ｍ］．北京：中国中医药出版社，２００３． ［３］ 国家卫生部药典委员会．中国人民共和国药典 ２０００ 年版
［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２０００． ［４］ 赵余庆．中草药及其制剂质量分析方法［Ｍ］．沈阳：辽宁科
取同一批试样，按正文拟定的含量测定方法测 定，重复测定 ８ 次，结果平均值为 ２．３３ｍｇ·ｍＬ－１，变异 系数为 ２．８％。 ３．５ 回收率试验
精密吸取已知含量的样品 ２．５ｍＬ，分别精密加 入丙氨酸标准品溶液 （浓度为 １．０ｍｇ·ｍＬ－１）２．５ｍＬ、 ５．０ｍＬ，按正文拟定的含量测定方法测定，结果平均
  1. 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
  2. 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
  3. 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
2.1.5不同硼砂用量对荷移络合物吸光度值的影响
由图4可知:随着硼砂用量的增加,荷移反应生
成络合物的吸光度值呈现先增大后减小的,在硼砂用量为2mL时,吸光度值达到最大。所以选用硼砂量为
2mL ,此时测得的pH为9.67。2.1.6
不同TCBQ用量对荷移络合物吸光度值的影响
由图5可知:随着TCBQ用量的增加,吸光度值呈增加趋势,在2mL后趋于平缓,说明添加2mL TCBQ可使反应进行比较完全,因此TCBQ用量选用2mL。
相对误差
(%
RSD (%
标准品
测定值
1230.60.6060.6080.6111.390.411.2
1.209
1.207
1.203
0.53
0.25
表2
方法重现性
图2反应时间与吸光度值的关系
图4硼砂用量与吸光度的关系处;400~600nm之间,赖氨酸与TCBQ形成的荷移络合物吸收很小,该络合物在348nm处出现最高吸收峰。此时,赖氨酸和TCBQ对络合物的干扰均较小,所以最佳吸收波长确定为348nm。
。
图3
反应温度与吸光度值的关系
图5TCBQ
用量与荷移络合物吸光度值的关系
图6
工作曲线
124
HPLC法测定红曲诱变菌种中MonacolinK含量
李永丽雷恒王红磊汪芳安
(武汉工业学院食品学院
【摘要】红曲菌种经微波、紫外线、氯化锂诱变后,通过固态发酵生产MonacolinK。采用高效液相色谱法检测发酵产物中酸型和内酯型MonacolinK含量。在一定条件下,将标准内酯型
分别精密吸取0.4mL和0.8mL赖氨酸溶液于3支25mL比色管中,各加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60℃水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处重复测定3组平行试验的吸光度值并计算RSD值及相对误差。
2结果与分析
荷移反应是指由富电子和缺电子物质形成电荷转移络合物的反应,基于某些物质生成的荷移络合物具有特定的颜色、最大吸收波长等特性,可测定物质的含量。由于此法简便、快速,试剂稳定,重现性好,因此在食品及药物分析上有广泛的应用前景。
荷移分光光度法是在量子化学的基础上提出的荷移理论发展起来的一种定量分析方法。近年来,国内外用此方法对氨基酸和磺胺类药物含量进行分析的报道很多。
1.2.2.4最佳反应温度的确定
分别精密吸取1mL赖氨酸溶液于5支25mL比色管中,各加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度,摇匀,分别置于30、40、50、60、70℃水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处测定其吸光度值。
1.2.2.5最佳硼砂用量的确定
参考文献
[1]李省云,杨毅萍,张丽娜.甘氨酸的荷移分光光度法测定[J].
太原师范学院学报:自然科学版,2004,3(3:60~63.
[2]徐莉英,蔡蕍,王晓燕,等.甲磺酸培氟沙星的荷移反应荧光光
谱法测定[J].中国医药工业杂志,2007,38(2:123~125.
[3]唐清华,李桂华,柳全文,等.胶束增敏荷移分光光度法测定药
赖氨酸是人体中必不可少的八大必需氨基酸之一,在食品中的含量常常被作为衡量食品营养价值的主要指标。因此,快速、简便地分析食品中赖氨酸的含量受到了广泛的重视。目前测定赖氨酸含量的方法主要有电位滴定法、高效液相色谱法、荧光法、示波极谱法、脉冲伏安法、分光光度法等。但利用四氯苯醌与赖氨酸的荷移反应测定赖氨酸含量的方法未见报道。
2.1试验条件的选择
2.1.1不同定容溶剂对荷移络合物吸光度值的影响
由表1可知:除以水与甲醇定容的溶液外,其他溶液均呈现浑浊状态,用水定容时所测得的吸光度值最大,因此选用水作为定容溶剂。
2.1.2不同波长下荷移络合物吸光度值的变化
由图1可知:赖氨酸在200~600nm的波长范围内基本无吸收;TCBQ在400~600nm之间吸收很小,在200~400nm内有两个吸收峰,分别是320nm和215nm
分别精密吸取1mL赖氨酸溶液于6支25mL比色管中,分别加入0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0mL硼砂溶液,再加入2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60℃水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处测定其吸光度值。
1.2.2.6荷移试剂用量的研究方法
1.2方法
1.2.1试剂配制方法
1.5×10-3mol/L赖氨酸标准溶液:称取0.0230g赖氨酸于烧杯中用水溶解后移入100mL容量瓶中以水定容。
3.0×10-3mol/L四氯苯醌-乙醇溶液:准确称取0.0735g四氯苯醌(简称TCBQ,下同粉末在干燥烧杯中用乙醇溶解后移入100mL容量瓶中,用无水乙醇定容。
分别精密吸取1mL赖氨酸溶液、2.0mL硼砂溶液于6支25mL比色管中,分别加入0.5、0.8、1.0、1.5、2.、2.5mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60℃水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm比色皿在348nm处测定其吸光度值。1.2.2.7工作直线的制作方法
1.2.2.3最佳反应时间的确定
分别精密吸取1mL赖氨酸溶液于7支25mL比色管中,各加入2mL硼砂溶液、2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60℃水浴中分别加热30、40、50、60、70、80和90min后,取出冷却至室温,以试剂空白为参比,用1cm石英比色皿在348nm处测定其吸光度值。
122
用1cm石英比色皿在348nm处测定其吸光度值。(溶剂水的参比:2mL硼砂+2mL无水乙醇,用水定容至25mL的溶液。溶剂甲醇的参比:2mL硼砂+2mL无水乙醇,用甲醇定容至25mL的溶液。
1.2.2.2最佳吸收波长的确定
精密吸取1mL赖氨酸标准溶液于25mL比色管中,加入2mL硼砂溶液,再加入2mL TCBQ溶液,用蒸馏水稀释至25mL刻度处,摇匀,置于60℃水浴中加热60min后,冷却至室温,以试剂空白做参比(2mL硼砂、2mL无水乙醇,水定容至25mL的溶液,下同,用1cm石英比色皿于200~600nm扫描荷移络合物(用加入2mL硼砂、2mLTCBQ用水定容至25mL的溶液为参比、赖氨酸、TCBQ的吸收光谱图。
2.1.3不同反应时间对荷移络合物吸光度值的影响
由图2可知:在30~60min之间吸光度呈大幅度增长趋势,60min后吸光度值变化趋于平缓,说明60min内反应基本完全。因此,确定60min为最佳反应时间。
2.1.4不同反应温度对荷移络合物吸光度值的影响
由图3可知:随着温度的升高,荷移络合物的吸光度值先增长后略微下降,温度为60℃时,吸光度值最大,故选择荷移反应温度为60℃。
验结果表明:荷移反应最优条件为:λmax=348nm,时间60min,温度60℃,硼砂用量2mL,四
氯苯醌用量2mL,水为溶剂。在0.3~1.5mol/L赖氨酸范围内测定,相对标准偏差在0.41%以内,
相对误差为0.53%~1.39%,结果令人满意。
【关键词】赖氨酸;四氯苯醌;荷移反应;分光光度法
中图分类号:TS201.2文献标识码:A文章编号:1673-7199(201005-0122-04
C EREALS AN
D OILS PROCESSING
荷移分光光度法测定赖氨酸含量的研究
南海娟刘本国高晗张磊贾蕾蕾
(河南科技学院食品学院
【摘要】本文利用四氯苯醌与赖氨酸之间的荷移反应测定食品中赖氨酸的含量。主要研究了吸收波长、反应时间、温度、硼砂用量、定容溶剂以及四氯苯醌用量等对测定结果的影响。试
物奎尼丁[J].信阳师范学院学报:自然科学版,2007,20
(1:90~92.
[4]焦德权,刘二保.L-苏氨酸与四氯对苯醌的荷移反应[J].理化
检验:化学分册,2007,43(3:196~200.
[5]任建民,刘强.赖氨酸营养研究进展[J].饲料博览,2009
(3:13~15.
[6]范爱玲,李省云,朱金玲.分光光度法测定脯氨酸的含量[J].
2.2工作曲线
按照试验测定的最佳条件,测定赖氨酸浓度与吸
光度的关系,得到工作曲线如图6所示。
由图6可知:工作曲线方程为A =0.575C +0.0269(C :10-3mol /L ,其相关系数R 2=0.996。
2.3方法重现性的测定
分别取0.4mL标准溶液(相当于0.6×10-3mol /L、
0.8mL标准溶液(相当于1.2×10-3mol /L ,按照最佳试验条件测定得吸光度值,查工作曲线得赖氨酸含量见表2
图1赖氨酸、TCBQ以及荷移络合物的吸收光谱图
表1溶剂对吸光度值的影响
溶剂水甲醇乙醇丙酮乙腈二甲亚砜吸光度0.5900.573浑浊浑浊浑浊浑浊
1.赖氨酸的光谱图
2.TCBQ的光谱图
3.赖氨酸与TCBQ反应生成荷移络合物的光谱图
1Байду номын сангаас3
C EREALS AN
D OILS PROCESSING
赖氨酸量(10-3mol /L
MonacolinK转化为酸型MonacolinK,从而可以对固态发酵红曲中酸型和内酯型同时进行定量测
定,且对萃取溶剂、萃取条件、流动相配比进行选择。此法前处理简单,适用于大量诱变菌株
的测定筛选,准确度高。
【关键词】诱变;高效液相色谱;酸型MonacolinK
中图分类号:TS202.3文献标识码:A文章编号:1673-7199(201005-0125-04
太原师范学院学报:自然科学版,2004,3(4:48~50.
收稿日期:2009-12-03
作者简介:南海娟(1974—,女,河南灵宝人,试验师,硕士研究生,研究方向果蔬贮藏加工与食品安全。