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肝糖原的提取与鉴定实验报告实验六肝糖原的提取实验六肝糖原的提取、鉴定与定量(生物化学实验操作考核卷)姓名，学号，专业，级班组，月日目的要求:1. 掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2. 了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3. 正确操作使用刻度吸管和可调微量取液器。
4. 熟练运用溶液混匀的各种方法(视具体情况，采用合适的混匀方法)。
5. 正确掌握溶液转移的操作。
6. 正确操作使用分光光度计。
实验原理:(一)肝糖原的提取、鉴定糖原储存于细胞内，采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎，低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，而糖原仍稳定地保存于上清液中，从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水，故先用95,乙醇将滤液中糖原沉淀，再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中，依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖，利用呈色反应和葡萄糖的还原性，可判定肝组织中糖原的存在。
CuSO4十2NaOH ? Na2 SO4+Cu(OH)2?2Cu(OH)2十C6H12O6 ? 2CuOH十氧化型葡萄糖+H2O2CuOH ? Cu2O?(红色)+H2OCu(OH)CuO?(黑色)+H2O(二)肝糖原的定量糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖，浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛，此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm处有最大吸收。
糖含量在(10?100)?g范围内，溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色，通过标准对照法(直接比较法)即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定，故在显色之前，肝组织先置于浓碱中加热，以破坏其它成分，而保留肝糖原。
实验材料:(一)仪器1. 普通离心机，室温?100?恒温水浴箱(×2)，722型分光光度计，精度为10mg级电子天平(×1)2. 剪刀(×1)，镊子(×1)，研钵(×1)3. 试管架(×1)，10mL离心管(×2)，(100×15)mm试管(×6)4. 刻度吸量管(2mL×1，5 mL×2)，1000μL微量可调取液器(×1)5. 100mL容量瓶(×1)6. 白瓷反应板(×1)(二)实验样品和试剂1. 鸡肝。
肝糖原测定实验报告引言：材料与方法：实验组织了6只健康小鼠，体重范围在18-22g之间。
为了控制干扰因素，小鼠在实验前24小时内禁食但可以饮水。
实验分为两组，其中一组为正常对照组，另一组进行饥饿处理。
正常对照组小鼠在实验前24小时内采食正常饲料，而饥饿组小鼠在实验前24小时内不提供饲料。
实验过程中，我们使用了生化试剂盒进行肝糖原测定。
结果：使用酶促色谱法测定，正常对照组小鼠肝糖原平均含量为X mg/g，标准差为S mg/g；饥饿组小鼠肝糖原平均含量为Y mg/g，标准差为Zmg/g。
根据t检验的结果，两组之间肝糖原含量存在显著差异（p<0.05）。
讨论与分析：实验结果表明，在饲养正常鼠类的情况下，小鼠肝脏中的糖原含量较高。
这与肝脏是糖原主要储存器之一的事实相符。
糖原是机体在需求能量时首先被分解的物质，在需要时可通过糖原的分解补充能量。
另一方面，饥饿组小鼠的肝糖原含量明显下降。
这意味着在长时间饥饿的情况下，小鼠体内糖原储备被耗尽。
这可能是由于机体需求能量增加，导致糖原被快速分解以满足机体各种生理活动的需要。
糖原含量的减少表明饥饿状态下机体会不断消耗储备能量，以维持正常生理功能。
然而，本实验存在一些局限性。
首先，样本容量较小，可能会影响结果的统计学意义。
其次，仅仅通过测定肝糖原含量无法全面了解机体的能量代谢情况，后续实验需要进一步考虑其他因素的影响。
结论：通过本实验发现，肝糖原在正常和饥饿状态下存在差异。
正常情况下小鼠肝中的糖原含量较高，而长时间饥饿会导致肝糖原含量的显著下降。
这些结果对于了解机体能量代谢和糖原储存具有重要意义。
在进一步研究中，我们将探索不同条件下糖原的动态变化，以更深入地了解机体能量代谢的机制。
生物化学实验报告姓名：符含敏学号： 3140090079专业年级： 2014级预防医学组别：第三实验室生物化学与分子生物学实验教学中心实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验日期2015-1-8 实验地点第三实验室合作者杨锐指导老师朱利娜评分教师签名批改日期格式要求：正文请统一用：小四号，宋体，1.5倍行距；数字、英文用Times New Roman；标题用：四号，黑体，加粗。
需强调的地方请用蓝颜色标出。
不得出现多行、多页空白现象。
一、实验目的：提取鸡肝中的肝糖原进行肝糖原的定性以及定量实验二、实验原理：1.低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性，破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质，使糖原能很好地保存在上清液中，95%的乙醇能将滤液中的糖原沉淀。
2.糖原溶液遇碘呈红棕色，糖原水解成的葡萄糖与班氏试剂水浴加热可变黑色。
3.糖原在浓酸中可水解为葡萄糖，浓硫酸可使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物，它再与蒽酮试剂脱水缩合生成蓝色的化合物。
4.糖含量在10-100μg，溶液颜色深浅与可溶性糖含量成正比。
三．实验材料：1.鸡肝乙醇 5%三氯醋酸 50%NaOH 12mol/LHCl 碘试剂班氏试剂普通离心机室温至100℃恒温箱可见光分光光度计天平剪刀镊子研钵试管架10ml离心管刻度吸量管白瓷反应板2. 30%KOH 标准葡萄糖溶液 90%浓硫酸蒽酮显色剂四．实验步骤：1.肝糖原的提取与鉴定：鸡肝约1.5 g，剪碎＋5%CClCOOH 1 ml3研磨至乳状＋5%CClCOOH 3 ml3研磨成肝匀浆3分钟（4000 r / min）3 ml）＋3ml 95%乙醇，混匀，静置10分钟5分钟（4000 r / min）＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀糖原溶液1ml＋浓HCl 5滴加碘试剂沸水浴糖原溶液2滴滴呈色对比＋班氏试剂4滴沸水浴2分钟，观察变化2.肝糖原的定量测定：鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml （用吸量管)沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液取3支试管，按下表操作:试剂（ml）空白管标准管样品管标准葡萄糖溶液— 1.0 —糖原提取液—— 1.00.2%蒽酮溶液2.5 2.5 2.5（用吸量管）混匀，沸水浴10分钟，冷却c。
实验三饱食和饥饿大白鼠肝糖原含量的比较实验人：刘彦汶学号：20100331024 班级：针外2010七同组人：郑婉碧、伍晓慧、刘恩茂、董摩扬、曲畅、付建平、石嘉恒实验日期：2012年3月29日指导老师:路雪雅一、实验目的1．学习肝糖原的测定方法。
2．比较饱食和饥饿大白鼠肝糖原的含量二、实验原理许多因素可以影响肝糖原的含量。
如饱食后肝糖原含量增加，饥饿时肝糖原逐渐降低。
糖原不溶于乙醇但可溶于热水，先用三氯醋酸破坏肝组织的酶和蛋白质，使其沉淀而保留糖原，再用乙醇溶液将糖原从滤液或上清液中沉淀出来，溶于热水中，即为糖原溶液。
糖原溶液呈乳样光泽，遇碘呈红棕色，经酸水解可生成还原性的葡萄糖，后者可将碱性铜溶液（班氏试剂）中二价铜还原为氧化亚铜。
利用上述性质可以进行饱食与饥饿肝糖原含量的比较。
1.糖原+碘---棕红色物质2.糖原+Hcl（水解）---葡萄糖+班氏试剂（Cu2+）+（OH-）--- Cu2O三、实验器材水浴锅（100 o C）、研钵、白磁盘、旋涡混合器、离心机、手术机械、滤纸四、实验试剂1、5％三氯乙酸2、0.3％碘液3、95％乙醇4、20％氢氧化钠5、浓盐酸6、班氏试剂五、操作步骤及实验结果1、糖原溶液的制备将大白鼠（饥饿）采用拉断脊柱使其窒息死亡的方法将大白鼠杀死，然后剖腹取出肝脏，迅速用滤纸吸去附着的血液，将整块肝脏放入研钵内剪碎、研磨。
再加5％三氯醋酸溶液20ml，再研磨到肝组织充分磨碎为止（饱食大白鼠，重复上述操作）。
过滤，每组取饱食和饥饿滤液各2ml于离心管（小试管）中，观察两种滤液并比较（解饿组滤液为淡黄色，饱食组滤液为乳白色）。
分别于滤液中加入等体积95％乙醇，混匀后离心5分钟（3000转/分钟），比较两管糖原沉淀量（饥饿组无沉淀，饱食组有白色沉淀）。
小心倾去上清液，于每管各加入蒸馏水1ml，玻璃棒搅起，水浴加热2分钟，即为糖原溶液2、糖原溶液的鉴定3、糖原水解液的比较取试管两支，各加入饥饿鼠或饱食鼠干糖原溶液2ml，每管各加入浓盐酸10滴，置沸水浴中加热10分钟，取出冷却，然后用20％氢氧化钠中和（约20滴），此即为肝糖原水解液。
进食状态对糖尿病大鼠血糖及肝糖原的影响实验目的：1.熟悉常用的糖尿病大鼠造模方法2.掌握血糖仪的使用方法3.掌握组织样品的制备方法4.了解血清胰岛素水平检测方法5.熟悉肝糖原提取、鉴定的方法与原理6.通过本实验探讨临床糖尿病患者不同进食状态对血糖的影响实验用品：一、器材：普通离心机，酶标仪，恒温水浴箱，分光光度计，0.01g电子天平、0.1g电子天平，血糖仪，棉签，干棉球，剪刀2把，镊子2把，研钵2个，白磁盘，试管架，拆条酶标板，吸水纸，5ml离心管，试管，烧杯，漏斗，玻璃棒，刻度吸量管，EP管，滤纸，1000μl微量可调取液器，50ml容量瓶3个，注射器，白瓷反应板，塑料手套，布手套，抹布，记号笔二、试剂：5%三氯乙酸溶液，蒸馏水，生理盐水，碘试剂，95％乙醇，标准葡萄糖溶液（50mg/L），98%浓硫酸，30%KOH溶液，0.2%蒽酮显色剂，柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液（PH4.4），1%链脲佐菌素（STZ）溶液，10%水合氯醛溶液，大鼠胰岛素（INF）ELISA检测试剂盒实验步骤：一、标记：二、造模：A、抓取大鼠并称重。
（结果见表一）B、大鼠先禁食12小时后（此部分为老师帮忙完成），进行血糖检测。
然后抓取大鼠单次腹腔注射按1%STZ溶液（65mg/Kg），注射后一小时，给予自由饮食、饮水。
具体抓取大鼠方法：用右手将鼠尾抓住提起，放在较粗糙的台面或鼠笼上，抓住鼠尾向后轻拉，左手紧抓两耳和头颈部皮肤，余下三指紧捏鼠背部皮肤，如果大鼠后肢挣扎厉害，可将鼠尾放在小指和无名指之间夹住。
C、以后每天安排人员进去喂养动物，记录饮食量和更换垫料。
D、待72小时后大鼠尾静脉采血再次检测血糖，以餐后血糖≥16.7mmol/L为大鼠糖尿病模型造模成功的判定标准。
血糖检测具体步骤：将血糖检测专用试纸插入血糖分析仪中，待血糖仪显示屏上显示滴血标记时，方可使用。
用剪刀剪断大鼠尾尖约＜0.5cm，挤出的第一滴血用棉球擦掉不要，第二滴血滴在试纸上。
生物化学实验报告姓名：学号：专业年级：组别：实验名称肝糖原的提取、鉴定与定量实验实验日期实验地点合作者指导老师评分教师签名批改日期一、实验目的1．掌握组织样品的制备方法，了解其注意事项。
2．了解肝糖原提取、糖原和葡萄糖鉴定与蒽酮比色测定糖原含量的原理和注意事项，掌握其操作方法。
3．正确操作使用刻度吸管和可调微量移液器。
4．熟练运用溶液混匀的各种方法（视具体情况，采用合适的混匀方法）。
5．正确掌握溶液转移的操作。
6．正确操作使用分光光度计。
二、实验原理1、肝糖原的提取与鉴定糖原储存于细胞内,采用研磨匀浆等方法可使细胞破碎,低浓度的三氯醋酸能使蛋白质变性,破坏肝组织中的酶且沉淀蛋白质,而糖原仍稳定地保存于上清液中,从而使用糖原与蛋白质等其它成分分离开来。
糖原不溶于乙醇而溶于热水,故先用95%乙醇将滤液中糖原沉淀,再溶于热水中。
糖原水溶液呈乳样光泽,遇碘呈红棕色。
这是糖原中葡萄糖长链形成的螺旋中, 依靠分子间引力吸附碘分子后呈现的颜色。
糖原还可被酸水解为葡萄糖,利用呈色反应和葡萄糖的还原性,可判定肝组织中糖原的存在。
2、肝糖原定量测定糖原在浓酸中可水解成为葡萄糖,浓硫酸能使葡萄糖进一步脱水生成糠醛衍生物——5-羟甲基呋喃甲醛,此化合物再与蒽酮脱水缩合生成蓝色的化合物。
该物质在620nm 处有最大吸收。
糖含量在(10~100)g范围内,溶液颜色的深浅与可溶性糖含量成正比。
利用此反应与同样处理的已知葡萄糖含量标准溶液比色,通过标准对照法即可计算出样品中糖原的含量。
糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前,肝组织先臵于浓碱中加热,以破坏其它成分,而保留肝糖原。
三、材料与方法：以流程图示意1、材料(1)样品:鸡肝(2)试剂:95%乙醇、5%(W/V)三氯乙酸、浓盐酸、12.5mol/L(50%)NaOH溶液、碘试剂、班氏试剂、5.35mol/L(30%)KOH溶液、标准葡萄糖液(50mg/L)、蒽酮显色剂(3)仪器和器材:普通离心机、室温-100℃恒温水浴箱、可见光分光光度计、托盘天平、剪刀、镊子、研钵、试管架、离心管、试管、100mm*15mm试管、刻度吸量管(2ml、5ml)、1000μl微量可调取液器、100ml容量瓶、白瓷反应板2、操作方法（1）肝糖原提取与鉴定鸡肝约1.5 g，剪碎COOH 1 ml＋5%CCl3研磨至乳状COOH 3 ml＋5%CCl3研磨成肝匀浆全部转入离心管中，离心3分钟（4000 r / min）沉淀（弃去）上清（取约3 ml）＋3ml （等量）95%乙醇，混匀，静置10分钟离心5分钟（4000 r / min）上清（弃去）沉淀＋蒸镏水1 ml沸水浴2分钟，溶解沉淀白瓷板孔穴中糖原溶液1ml＋浓HCl 250μl加碘试剂2滴加碘试剂2滴沸水浴15分钟，冷却糖原溶液2滴呈色对比糖原水解液2滴糖原水解液＋班氏试剂4滴混匀沸水浴2分钟，观察变化（2）肝糖原定量实验鸡肝0.15 g＋30%KOH 1.5ml沸水浴15分钟冷却，全部转入100 ml容量瓶中加水至标线，仔细混匀，此为糖原提取液糖原的测定取3支试管，按下表操作。
