ABO血型鉴定---玻片法资料

ABO血型鉴定实验原理与方法步骤【实验目的】1．理解间接鉴定血型的原理。

2．掌握人体ABO血型鉴定的方法。

【实验原理】血型是指红细胞膜上特异性抗原的类型，通常红细胞血型即为血型。

将血型不相容的两个人的血液滴于玻片上红细胞将聚集成簇，这种现象称为凝集。

红细胞凝集的机制是抗原－抗体反应，即位于红细胞膜上的抗原与相应血清中的抗体（凝集素）发生免疫反应。

在ABO 血型系统中，血型鉴定就是将检测血液分别加入已知含有A或B凝集素的标准血液中，观察凝集现象是否发生，用以判断待检血液红细胞上含何种凝集原，由此确定待检血液的血型。

【实验对象】人。

【实验器材与药品】采血针，玻片，玻棒，棉球，消毒注射器，小试管，记号笔；标准A、B血清，生理盐水，75％酒精，碘酒。

【实验方法和步骤】1. 玻片法：用记号笔在玻片两端分别标上A、B，并各滴加一滴相应的已知标准血清。

用75％酒精棉球消毒耳垂或指端，以消毒针刺破皮肤，玻棒采血后分别滴于玻片A、B标准血清中。

2～5分钟后观察有无凝集现象，20～30分钟后再根据有无凝集现象判定血型（图9-1）。

2. 试管法：先用上述方法采血，滴加1～2滴血液于盛有1ml生理盐水的小试管中混匀，制成红细胞悬液（浓度约5％）。

然后取小试管两支，分别标明A、B字样。

各加入标准血清与受检红细胞悬液各1～2滴，混匀后低速离心1min（1000rpm），取出试管后轻弹管底，使沉淀物被弹起，在良好的光线下观察结果。

若有沉淀物成团飘起，表示发生凝集现象；若沉淀之物呈烟雾状逐渐上升，最后试管内液体恢复红细胞悬液状态，则表示无凝集现象。

【注意事项】1. 试管法较玻片法结果准确。

2. 若结果判断困难时，可借助显微镜。

3. 用玻璃棒蘸血时，都是只蘸一次，避免交叉污染。

4. 红细胞悬液及血清必须新鲜，加用标准血清的试管不能交叉使用，否则可能出现假阳性结果。

A B O血型鉴定正反定型试验方法(总1页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除ABO血型鉴定正反定型试验方法一、试剂和材料：（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）（二）显微镜、载玻片（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血（五）竹签二、方法（玻片法）：（一）正定型：1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。

（二）反定型：1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。

分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；3.混匀（同正定型）；4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。

6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1三、附注：（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO 血型；（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

3。

abo血型鉴定实验报告
ABO血型鉴定实验报告
摘要：
本实验旨在通过观察红细胞与不同抗血清的凝集反应，鉴定被测者的ABO血型。

实验结果表明，被测者为A型血。

引言：
ABO血型系统是人类最常见的血型系统之一，由A、B、O和AB四种血型组成。

不同的血型决定了人体红细胞表面的抗原种类，对输血和器官移植等医疗操作
具有重要意义。

因此，准确鉴定个体的ABO血型对于医学实践至关重要。

材料与方法：
1. 实验材料：被测者的血液样本、A、B、O抗血清。

2. 实验步骤：
步骤一：在玻璃片上滴取被测者的血液样本。

步骤二：将A抗血清滴在一片玻璃片上的血液样本上，观察凝集反应。

步骤三：将B抗血清滴在另一片玻璃片上的血液样本上，观察凝集反应。

步骤四：将O抗血清滴在第三片玻璃片上的血液样本上，观察凝集反应。

结果：
在A抗血清的作用下，被测者的血液样本出现了凝集反应；在B抗血清的作用下，未出现凝集反应；在O抗血清的作用下，未出现凝集反应。

综合观察，被
测者为A型血。

讨论：
本实验通过观察红细胞与不同抗血清的凝集反应，成功鉴定了被测者的ABO血
型。

然而，实验中可能存在的误差包括血液稀释不均匀、观察时的光线条件等。

在实际应用中，应结合多种方法进行血型鉴定，以确保结果的准确性。

结论：
通过本实验，成功鉴定了被测者的ABO血型为A型。

这一结果对于医学实践具有重要意义，为输血和器官移植等医疗操作提供了重要参考依据。

ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料：
（一）单克隆抗A、抗B试剂由试剂厂家提供
（二）显微镜、载玻片
（三）A型、B型红细胞本实验室制备的5%混悬液
（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血
（五）竹签
二、方法玻片法：
（一）正定型：
1.在一块干净的玻片上,间隔一定距离做好标记,分别滴一滴抗A和抗B试剂；
2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；
3.用竹签混匀试剂和红细胞,并使混合物直径＞15mm；
4.轻摇玻片,两分钟内观察结果,必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果;
（二）反定型：
1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样;分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；
2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；
3.混匀同正定型；
4.轻摇玻片,两分钟内观察结果,必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果;
6.结合正反定型反应结果、判定血型,见表1
表1 ABO血型正反定型试验结果判定
三、附注：
（一）表中“O”表示无凝集,“+”表示凝集,一般都是3-4个+的强凝集反应；（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；
（三）若得到弱的或可凝集反应结果,该标本应用试管法重新试验；
（四）由于新生儿在出生4~6个月内,血浆中的ABO抗体活动太弱,并且含有来自母亲的抗体,故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；
（五）做正定型时,还可加一抗A、B血清O型人血清,以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞,借以证实是否有不规则抗体的存在;。

ABO血型鉴定的方法步骤与注意事项一.原理根据红细胞上有或无A抗原或B抗原，将血型分为A型、B型、AB型及O型4种。

可利用红细胞凝集试验，通过正、反定型准确鉴定ABO血型。

所谓正定型，是用已知抗—A和抗—B分型血清来测定红细胞上有无相应的A抗原或B抗原；所谓反定型，是用已知A细胞和B细胞来测定血清中有无相应的抗—A或抗—B。

二.试剂和材料1．抗—A(B型血)、抗—B(A型血)及抗—A十B(O型血)分型血清（制备方法见本节附注）2．5％A、B及O型试剂红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注；3．受检者血清；4．受检者5％红细胞盐水悬液，制备方法见本节附注。

三.方法1．试管法(1)取洁净小试管3支，分别标明抗—A、抗—B和抗—A十B，用滴管分别加抗—A、抗—B和抗—A十B。

分型血清各l滴于试管底部，再以滴管分别加入受检者5％红细胞盐水悬液1滴，混和。

(2)另取洁净小试管3支，分别标明A、B和O细胞。

用滴管分别加入受检者血清l滴于试管底部，再分别以滴管加入A、B和O型5％试剂红细胞悬液l滴，混和。

(3)立即以1000r／min离心1min。

(4)将试管轻轻摇动，使沉于管底的红细胞浮起，先以内眼观察有无凝集(或溶血)现象。

如内眼不见凝集，应将反应物倒于玻片上，再以低倍镜检查。

(5)观察结果时既要看有无凝集，更要注意凝集强度，此有助于A、B亚型、类B或cisAB的发现。

(6)凝集强度判断标准凝集强度判断标准4+红细胞凝集成一大块，血清清晰透明。

3+红细胞凝集成数小块，血清尚清晰。

2+红细胞凝块分散成许多小块，见到游离红细胞。

1+肉眼可见大颗粒，周围有较多游离红细胞镜下可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多游离红细+-胞混合凝集外观(mixed field)是指镜下可见少数红细胞凝MF集，而极大多数红细胞仍呈分散分布。

-表示阴性，镜下未见凝集，红细胞均匀分布。

2.玻片法（1）取清洁玻片1张(或白瓷板1块)，用蜡笔划成方格，标明抗-A、抗-B和抗-A十B，分别用滴管滴加抗-A、抗-B和抗-A十B分型血清l滴于标明的方格内，再各加受检者2％红细胞悬液1滴，混和。

ABO血型的测定（直接凝集玻片法)
（一)实验目的了解ABO血型鉴定的原理；掌握玻片凝集试验的方法。

（二)实验原理已发现人类红细胞有20多种血型系统，其中ABO血型系统在输血中最为重要，必须血型相合才能输血。

血型鉴定是根据人类红细胞表面有不同的血型抗原，故用已知的抗A、抗B单克隆抗体作直接玻片凝集试验，可测定血型。

（三)实验材料
1、诊断用抗A及抗B单克隆抗体试剂各一支。

2、玻片、无菌刺血针、消毒用碘酒、酒精、无菌棉签、牙签，记号笔等
（四)实验方法
1、取洁净玻片一张用蜡笔分成两半，分别标记A、B，然后A侧滴一滴抗A抗体（蓝色)，B侧滴一滴抗B抗体（黄色)
2、被检者耳垂或手指用碘酒消毒，酒精脱碘并凉干后，用刺血针刺血。

3、用牙签刮取两滴血液充分与两种抗体混匀，即可观察结果
;
（五)实验结果
血型鉴定结果
（六)注意事项
1、A、B两侧不能混，否则结果不可靠。

2、无菌观念：消毒按一定方向，以一点为中心，由内向外；注意酒精脱碘，否则损伤皮肤、色素沉着；酒精脱碘后，要晾干，否则进针会有烧灼疼痛；。

实验二 ABO血型鉴定【实验目的】血型鉴定的方法，加深对ABO血型的分型和鉴定原理的理解。

2学会观察红细胞凝集现象。

【实验原理】根据凝集反响的原理，用的抗A凝集素和抗B凝集素鉴定红细胞膜上未知的凝集原，根据红细胞膜上所含A、B凝集原的种类及有无判定血型。

【实验材料】实验对象：人实验器材与试剂：双凹玻片、75%酒精棉球，干棉球、采血针、试管、滴管、试管架、牙签、抗A和抗B标准血清、生理盐水、显微镜。

【实验步骤】1．制备红细胞悬液用75%酒精消毒指尖或耳垂，采血1～2滴参加1mL生理盐水混匀即得。

2．取一块清洁双凹玻片，用蜡笔划上记号，左上角写A字，右上角写B字。

3．在A侧滴上1滴抗A标准血清，在B侧滴上1滴抗B标准血清。

4．玻片的每侧各参加一滴红细胞悬液，用牙签搅拌混匀。

每侧用一支牙签，切勿混用。

5．室温下静置10～15min后，观察有无凝集现象，假设只是A侧发生凝集，那么血型为A型；假设只是B侧凝集，那么为B型；假设两侧均凝集，那么为AB型；假设两侧均未发生凝集，那么为O型〔图1〕。

这种凝集反响的强度因人而异，所以有时需借助显微镜才能确定是否出现凝集。

【考前须知】1加试剂顺序：一般先加标准血清，然后再加，以便核实是否漏加标准血清。

2所用器材必须枯燥清洁、防止溶血。

3为防止交叉污染，建议使用一次性器材。

标准血清从冰箱取出后，应待其平衡至室温后再用，用毕后应尽快放回冰箱保存。

，否那么较弱凝集不能出现，造成假阴性。

【思考题】1如何区别血液的凝集和凝固？其机理有何差异？2根据你的血型，判断你能接受何种血型并且能够给何种血型供血？3．试想如果出现假阴性会出现何种误判？如何防止？。

（完整版）ABO⾎型鉴定正反定型试验⽅法ABO⾎型鉴定正反定型试验⽅法⼀、试剂和材料：（⼀）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂⼚家提供）（⼆）显微镜、载玻⽚（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）（四）EDTA抗凝的待测红细胞全⾎（五）⽵签⼆、⽅法（玻⽚法）：（⼀）正定型：1.在⼀块⼲净的玻⽚上，间隔⼀定距离做好标记，分别滴⼀滴抗A和抗B试剂；2.在每滴试剂中加⼀滴待测红细胞全⾎；3.⽤⽵签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；4.轻摇玻⽚，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。

（⼆）反定型：1.在玻⽚上间隔⼀定距离标明Ac和Bc字样。

分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各⼀滴；2.在玻⽚每滴红细胞悬液上滴加待测⾎清各⼀滴；3.混匀（同正定型）；4.轻摇玻⽚，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；5.判读、解释并记录反应结果。

6.结合正反定型反应结果、判定⾎型，见表1表1 ABO⾎型正反定型试验结果判定三、附注：（⼀）表中“O”表⽰⽆凝集，“+”表⽰凝集，⼀般都是3-4个+的强凝集反应；（⼆）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应⽤试管法重新试验；（四）由于新⽣⼉在出⽣4~6个⽉内，⾎浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来⾃母亲的抗体，故新⽣⼉⾎型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO⾎型；（五）做正定型时，还可加⼀抗A、B⾎清（O型⼈⾎清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试⼀O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。

生理盐水凝集法①玻片法：操作简单，适于大量标本检查，但反应时间长；被检查者如血清抗体效价低，则不易引起红细胞凝集，因此，不适于反向定型。

②试管法：由于离心作用可加速凝集反应，故反应时间短，而且，借助于离心力可以使红细胞接触紧密，促进凝集作用，适于急诊检查。

红细胞亚型抗原性弱，如抗A抗B标准血清效价低时，易造成漏检或误定。

如加用O型（抗A、B）血清和反向定型，可避免此类错误。

玻片法凝集结果判断：红细胞呈均匀分布，无凝集颗粒，镜下红细胞分散。

在低倍镜下凝集程度强弱判断标准：①呈一片或几片凝块，仅有少数单个游离红细胞为（++++）。

②呈数个大颗粒状凝块，有少数单个游离红细胞为（+++）。

③数个小凝集颗粒和一部分微细凝集颗粒，游离红细胞约占1／2为（++）。

④肉眼可见无数细沙状小凝集颗粒。

于镜下观察，每凝集团中有5～8个以上红细胞凝集为（+）。

⑤可见数个红细胞凝集在一起，周围有很多的游离红细胞（±）。

⑥可见极少数红细胞凝集，而大多数红细胞仍呈分散分布为混合凝集外观。

⑦镜下未见细胞凝集，红细胞均匀分布为（-）。

凝胶微柱法是红细胞抗原与相应抗体在凝胶微柱介质中发生凝集反应的免疫学方法。

血型抗体为单克隆抗体，加入试剂、标本，用专用离心机离心后可直接用肉眼观察结果或用血型仪分析。

此法操作标准化，定量加样，确保结果准确性。

抗A、抗B和抗AB标准血清标准准血清均采自健康人，并应符合下述条件：①特异性：只能与相应的红细胞抗原发生凝集，无非特异性凝集。

②效价：我国标准抗A和抗B血清效价均在1：128以上。

③亲和力：我国标准要求抗A对A1、A2及A2B发生反应开始出现凝集的时间分别是15s、30s和45s；抗B对B型红细胞开始出现凝集的时间为15s。

凝集强度为3min时，凝块不小于1mm2。

④冷凝集素效价：在1：4以下。

⑤无菌。

⑥灭活补体。

[3]1、所用器材必须干燥清洁、防止溶血，凝集和溶血的意义一样。

为避免交叉污染，建议使用一次性器材。

ABO血型分型操作规程sop
1．项目名称：ABO血型分型
2．方法：玻片法
3．试剂：抗A、抗B血型定型试剂（单克隆抗体）
上海市血液中心生产
含抗A、抗B血型定型试剂各10ml
成分：分泌抗人A型和抗人B型血型抗原单抗的杂交瘤细胞培养上清液。

4．原理：A型红细胞膜上含有A抗原，B型红细胞膜上含有B抗原。

AB型红细胞膜上含有A、B两种抗原。

O型红细胞膜上不含有抗原。

抗A、抗B分型试剂与受检者的红细胞混合时，可发生凝集，结果判定见下表：
5．操作步骤：将抗A分型试剂、抗B分型试剂各一滴，分别滴于玻璃片A、B两处。

分别取等体积待检血样于抗A分型市集和抗B分型试剂处，用不同的竹签将市集与血样混匀，同时不停的摇动玻璃片并观察血球凝集的出现
6．注意事项：1。

调匀后就不要用竹签搅动，以免影响大凝块的形成。

2．如发现检定结果与交叉合血结果不符，应进行反定型。

3.对含有较多自身凝集素的受检者，需用37度生理盐水洗涤受检者红细胞2—3次，然后鉴定。

7．标本要求病人准备：新鲜静脉血或末梢血.采血应顺利，不应有溶血和凝块。

对病人无特殊要求，特殊病人由临床医生告知注意事项8. 参考文献：
1)全国临床检验操作规程（第3版）
2)厂商说明书
9. 编写者：
制定日期：
修改日期：
科主任对规程认可：。

ABO血型鉴定正反定型试验方法
一、试剂和材料：
（一）单克隆抗A、抗B试剂（由试剂厂家提供）
（二）显微镜、载玻片
（三）A型、B型红细胞（本实验室制备的5%混悬液）
（四）EDTA抗凝的待测红细胞全血
（五）竹签
二、方法（玻片法）：
（一）正定型：
1.在一块干净的玻片上，间隔一定距离做好标记，分别滴一滴抗A和抗B试剂；
2.在每滴试剂中加一滴待测红细胞全血；
3.用竹签混匀试剂和红细胞，并使混合物直径＞15mm；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。

（二）反定型：
1.在玻片上间隔一定距离标明Ac和Bc字样。

分别滴加5%的A型红细胞悬液、B型红细胞悬液各一滴；
2.在玻片每滴红细胞悬液上滴加待测血清各一滴；
3.混匀（同正定型）；
4.轻摇玻片，两分钟内观察结果，必要时可以在低倍镜下观察；
5.判读、解释并记录反应结果。

6.结合正反定型反应结果、判定血型，见表1
表1 ABO血型正反定型试验结果判定
三、附注：
（一）表中“O”表示无凝集，“+”表示凝集，一般都是3-4个+的强凝集反应；
（二）2分钟后红细胞仍呈均匀混悬状态是阴性反应；
（三）若得到弱的或可凝集反应结果，该标本应用试管法重新试验；
（四）由于新生儿在出生4~6个月内，血浆中的ABO抗体活动太弱，并且含有来自母亲的抗体，故新生儿血型只能由检测红细胞抗原的正定型来测定其ABO血型；
（五）做正定型时，还可加一抗A、B血清（O型人血清），以检测ABO弱抗原；做反定型时可以加试一O型红细胞，借以证实是否有不规则抗体的存在。