微生物试验-培养基的制备

实验一微生物培养基的制备方法一、培养基(medium)培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质。

任何培养基中均需含有微生物所必需的能源、碳源、氮源、矿质元素、水和生长因素，但不同营养类型、不同种类的微生物对营养元素的要求又有很大差异。

目前已使用的各种培养基都是前人经过反复实践，比较设计的成果。

二、培养基的基本成分●能源、碳源：自养微生物以二氧化碳为碳源，光或无机物为能源，在无机物组成的培养基中生长。

例如化能自养型的氧化硫杆菌培养基中，加入粉末状硫为能源，以空气中的CO2为碳源。

异养微生物以有机物为碳源和能源，培养基中常需加入葡萄糖、蔗糖或麦芽糖、乳糖等单糖或双糖，有的可利用淀粉、纤维素等多糖，或利用动物组织中的糖类。

例如培养细菌常用的牛肉膏蛋白胨培养基，其中牛肉膏即为主要碳源和能源。

●氮源：自养微生物以含氮无机物铵盐、硝酸盐等为氮素营养，例如氧化硫杆菌以(NH4)2SO4为氮源；异养微生物以无机物铵盐、硝酸盐或含氮有机物为氮源。

自生固氮菌利用空气中的N2为氮素营养，其培养基中无须加入氮源，称为无氮培养基。

●矿质元素、生长因子：微生物生长繁殖需要P、K、Na、S、Mg、Ca等主要矿质元素以及Fe、Cu等微量元素，因此培养基中常加入K2HPO4、KH2PO4、MgSO4、NaCl、KCl、FeSO4等无机盐类；生长因子主要是调节微生物代谢活动的B族维生素，常由酵母膏、肝浸出液等提供。

许多天然成分的原料如牛肉膏、麦芽汁、玉米粉、豆芽汁等，含有各种无机元素和生长因子，不需另外添加。

三、培养基的类型根据原料来源不同，可将培养基分为合成培养基、半合成培养基与天然培养基。

●合成培养基：由化学成分已知的有机物和无机物配制而成。

成分精确，重复性强。

但营养局限，微生物生长缓慢。

适用于菌种分离、选育、遗传分析及生物测定等。

如培养放线菌的高氏培养基、培养霉菌的察氏培养基以及各种化能自养菌培养基等。

●半合成培养基：由某些天然物质与少量已知成分的化学物质配制而成。

实验一、培养基的制备和消毒灭菌培养基的配制1.培养基：人工配制的供微生物生长繁殖或积累代谢产物所需的营养基质。

2.培养基的配制原则（1）目的明确：不同微生物所需营养基质不同，配制培养基的目的也有不同。

（2）营养协调：营养成分的比例和浓度要适当。

（3）理化适宜：渗透压、pH和氧化还原电位。

（4）经济节约。

实验步骤---斜面培养基的制备和灭菌计算→称量→加热溶化→调pH →过滤（可省略）→分装→加塞（附棉塞制作）→包扎(皮筋或绳子)→灭菌→摆斜面→无菌检查。

1.称量按照配方，准确称量各成份放于烧杯中。

对于不是粉状药品（如牛肉膏），应用烧杯和玻璃棒称量。

2.配制（1）向烧杯中加入适量的水，搅拌，使其溶解（可加热助溶）。

（2）如果配制固体培养基，在琼脂熔化时，需不断搅拌，并控制火力不要使培养基溢出或烧焦。

一般要求琼脂沸腾3次，完全熔化后，补足所失水分。

3.调节pH值培养基溶解后，用pH试纸测pH，然后根据要求加酸或碱（一般用1M HCl和1M NaOH），要缓慢少量且多加搅拌。

培养基配方为自然pH时，不用调节。

4.过滤用滤纸或多层纱布，无特殊要求时可省去。

5.分装（1）将培养基分装入试管内或三角瓶内，管（瓶）口塞上棉塞。

固体培养基要趁热装。

（2）分装量①斜面：装量为管长的1/5。

②液体培养基：装量为管长的1/4。

③半固体培养基：装载量为管长的1/3。

（3）注意分装时要避免培养基粘染管（瓶）口，引起污染。

6.灭菌塞棉塞，包扎，灭菌。

培养基做完后，要求在2-4小时内灭菌，否则会被污染。

7.摆斜面灭菌完毕，冷却到60℃左右再摆斜面，以免产生过多冷凝水。

配制培养基时注意事项1.称量要准确，取药品的角匙不能混用。

2.加热融化时要不断搅拌，以免糊底和溢出,（每加热30s关掉电源，开盖看一次）。

3.蛋白胨极易吸湿，称取时动作要迅速。

5.节约药品。

实验二细菌的简单染色和革兰氏染色革兰氏染色法的基本步骤是：先用初染剂结晶紫进行初染，再用碘液媒染，然后用乙醇(或丙酮)脱色，最后用复染剂(如番红)复染。

微生物培养基配制实验报告(共5篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。

2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。

三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。

2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。

四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。

（2）N源：包括无机氮和有机氮。

（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。

（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。

微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。

有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。

2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。

培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。

3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。

（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。

若是含糖培养基，110℃、30min。

（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。

因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。

（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。

（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。

除病菌需更小。

五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。

实验二微生物培养基的制备一、目的要求1、巩固培养基的配制原理及培养基的理论知识2、掌握培养基制作的基本方法3、熟悉2种常用培养基的制作过程二、实验原理培养基是按照微生物生长发育的需要，用不同组分的营养物质调制而成的营养基质。

人工制备培养基的目的，在于给微生物创造一个良好的营养条件。

把一定的培养基放入一定的器皿中，就提供了人工繁殖微生物的环境和场所。

自然界中，微生物种类繁多，由于微生物具有不同的营养类型，对营养物质的要求也各不相同，加之实验和研究上的目的不同，所以培养基在组成原料上也各有差异。

但是，不同种类和不同组成的培养基中，均应含有满足微生物生长发育的水分、碳源、氮源、无机盐和生长素以及某些特需的微量元素等。

此外，培养基还应具有适宜的酸碱度(pH值)和一定缓冲能力及一定的氧化还原电位和合适的渗透压。

根据制备培养基对所选用的营养物质的来源，可将培养基分为天然培养基、半合成培养基和合成培养基三类。

按照培养基的形态可将培养基分为液体培养基和固体培养基。

根据培养基使用目的，可将培养基分为选择培养基、加富培养基及鉴别培养基等。

培养基的类型和种类是多种多样的，必须根据不同的微生物和不同的目的选择配制。

固化体培养基是在液体培养基中添加凝固剂制成的，常用的凝固剂有琼脂、明胶和硅酸钠，其中以琼脂最为常用，其主要成份为多糖类物质，性质较稳定，一般微生物不能分解，故用凝固剂而不致引起化学成份变化。

琼脂在95℃的热水中才开始融化，融化后的琼脂冷却到45℃才重新凝固。

因此用琼脂制成的固体培养基在一般微生物的培养温度范围内(25℃-37℃)不会融化而保持固体状态。

三、实验器材1、药品琼脂，1N NaOH溶液，1N HCl溶液，牛肉膏蛋白胨培养基、高氏一号合成培养基和马铃薯蔗糖培养基的配方药品；2、材料具刻度1000毫升塘瓷盅，铝锅，天平，20×200mm试管，量筒，小烧杯，玻璃棒，骨匙，pH试纸，分装漏斗，试管盒，纱布，棉花，报纸，麻绳，标签。

培养基的制备实验报告实验目的，通过制备培养基，培养微生物，观察微生物的生长情况，了解培养基对微生物生长的影响。

实验原理，培养基是为了提供微生物生长所需的营养物质而制备的一种特定的生长环境。

培养基的制备包括选择合适的基础成分、添加适当的营养物质和调节pH值等步骤。

实验步骤：1. 准备所需材料和设备，蒸馏水、琼脂、培养基粉、试管、培养皿、pH试纸、称量器等。

2. 精确称量培养基粉，并加入适量的蒸馏水中，搅拌均匀。

3. 将培养基溶液加热至沸腾，使琼脂完全溶解。

4. 调节培养基的pH值，使其达到微生物生长所需的最适pH。

5. 将培养基倒入培养皿中，待其凝固后，即可用于培养微生物。

实验结果与分析：经过制备的培养基，观察到微生物在培养基上生长良好，形成了典型的菌落。

通过不同培养基的制备，我们发现不同的微生物对培养基的要求也有所不同，有些微生物对酸性培养基更适应，有些对碱性培养基更适应。

因此，制备不同类型的培养基对于不同微生物的培养具有重要意义。

实验总结：通过本次实验，我们深入了解了培养基的制备过程和对微生物生长的影响。

制备培养基是微生物学实验中的重要环节，合理的培养基制备可以为微生物的培养提供良好的生长环境，有利于我们对微生物的研究和应用。

同时，我们也意识到不同微生物对培养基的要求不同，因此在实际应用中需要根据具体微生物的特性来选择合适的培养基。

通过本次实验，我们不仅掌握了培养基的制备方法，还加深了对微生物生长环境的理解，为今后的微生物学研究奠定了坚实的基础。

参考文献：1. 李华. 微生物学实验教程. 北京，高等教育出版社，2008.2. 微生物学实验指导. 北京，科学出版社，2015.3. 培养基制备与应用. 北京，化学工业出版社，2012.。

微生物培养基的制备一、玻璃器皿的清洗在制备培养基的过程中，首先要使用一些玻璃器皿，如试管、三角瓶、培养皿、烧杯和吸管等。

这些器皿在使用前都要根据不同的情况，经过一定的处理，洗刷干净。

有的还要进行包装，经过灭菌等准备就绪后，才能使用。

1、新购的玻璃器皿除去包装沾染的污垢后，先用热肥皂水刷洗，流水冲净，再浸泡于１～２％的工业盐酸中数小时，使游离的碱性物质除去，再以流水冲净。

对容量较大的器皿，如大烧瓶、量筒等，洗净后注入浓盐酸少许，转动容器使其内部表面均沾有盐酸，数分钟后倾去盐酸，再以流水冲净，倒置于洗涤架上将水空干，即可使用。

2、用过的玻璃器皿凡确无病原菌或未被带菌物污染的器皿，使用后可随时冲洗，吸取过化学试剂的吸管，可先浸泡于清水中，待到一定数量后再集中进行清洗。

有可能被病原菌污染的器皿，必须经过适当消毒后，将污垢除去，用皂液洗刷，再用流水冲洗干净。

若用皂液未能洗净的器皿，可用洗液浸泡适当时间后再用清水洗净。

洗液的主要成份是重铬酸钾和浓流酸，其作用是将有机物氧化成可溶性物质，以便冲洗。

洗液有很强的腐蚀作用，使用时应特别小心，避免溅到衣服、身体和其他物品上。

二、培养基的类型在实验室中配制的适合微生物生长繁殖或累积代谢产物的任何营养基质，都叫做培养基(Media)。

由于各类微生物对营养的要求不同，培养目的和检测需要不同，因而培养基的种类很多。

我们可根据某种标准，将种类繁多的培养基划分为若干类型。

1、根据对培养基组成物质的化学成分是否完全了解来区分，可以将培养基分为天然培养基、合成培养基和半合成培养基。

１）天然培养基天然培养基是指利用各种动、植物或微生物的原料，其成分难以确切知道。

用作这种培养基的主要原料有：牛肉膏、麦芽汁、蛋白胨、酵母膏、玉米粉、麸皮、各种饼粉、马铃薯、牛奶、血清等。

用这些物质配成的培养基虽然不能确切知道它的化学成分，但一般来讲，营养是比较丰富的，微生物生长旺盛，而且来源广泛，配制方便，所以较为常用，尤其适合于配制实验室常用的培养基。

培养基的制备与灭菌实验报告实验目的，通过本次实验，掌握培养基的制备方法和灭菌技术，为后续微生物培养实验打下基础。

一、培养基的制备。

1.准备所需试剂和设备，蔗糖、蛋白胨、酵母提取物、琼脂、蒸馏水、培养皿、量筒、坩埚、移液器等。

2.称取适量蔗糖、蛋白胨、酵母提取物加入蒸馏水中，充分溶解后调节pH值至7.0。

3.加入适量琼脂，搅拌均匀。

4.分装至培养皿中，待凝固后进行灭菌处理。

二、培养基的灭菌。

1.将制备好的培养基装入培养皿中，封口。

2.将培养皿放入高压灭菌锅中，进行高压灭菌处理。

3.灭菌条件，121℃，压力为15psi，持续20分钟。

4.取出培养皿，放置在无菌工作台上待凉，避免细菌再次污染。

5.观察培养基表面是否有凝固不均匀或气泡，如有则说明灭菌不彻底，需重新处理。

三、实验结果。

1.经过灭菌处理的培养基表面平整，无气泡，无明显异物。

2.在无菌条件下打开培养皿，用无菌移液器移取适量微生物菌种接种于培养基表面。

3.将接种好的培养皿放入培养箱中，进行培养观察。

4.培养箱条件，温度控制在37℃，培养时间根据不同微生物而定。

四、实验结论。

本次实验通过制备培养基和灭菌处理，成功培养出微生物菌种，并观察到了微生物的生长情况。

培养基的制备和灭菌是微生物实验中非常重要的步骤，只有保证培养基的无菌，才能得到准确的实验结果。

通过本次实验的学习，相信对于今后的微生物实验有了更深入的认识和理解。

五、实验注意事项。

1.在制备培养基时，需注意称取试剂的准确性和加入顺序。

2.灭菌处理时，要确保培养基充分接受高压蒸汽的灭菌作用。

3.实验操作要在无菌条件下进行，避免外界污染。

4.培养箱的温度和培养时间要根据不同微生物的生长特性进行调整。

六、实验延伸。

在今后的实验中，可以尝试不同种类的培养基制备和灭菌处理，观察其对微生物生长的影响，进一步探索微生物的生长规律和特性。

总之，培养基的制备和灭菌是微生物实验中不可或缺的重要环节，只有掌握了这些基本技能，才能进行准确可靠的微生物实验。

微生物培养基的制备实验报告
《微生物培养基的制备实验报告》
一、实验前准备
1、实验器材及试剂：镊子、移液管、玻片、烧杯、自配液、营养培养基、微生物。

2、开展实验前需要准备微生物样本，冰箱内温度需要维持在4~8摄氏度，确保实验室洁净无尘，洁净台面下需要使用75%酒精进行消毒。

二、培养基制备过程
1、将自配液（含氯仿、葡萄糖、碳水化合物和微量元素）与营养培养基（包含维生素、氨基酸、脂肪酸和胞外因子）加入烧杯中，按比例混合搅拌。

2、将混合液穿透0.45微米的超滤膜滤出，经抗原体和游离细菌滤除，消毒后的液体集中成培养基。

3、将微生物样本放入玻片中，用镊子均匀涂抹在玻片表面，再将其加入到烧杯中。

4、将混合液用移液管移到培养皿中，上面覆盖一层无菌纸，放入37摄氏度的培养箱中培养48小时，即可正常繁殖成熟。

三、实验观察结果
1、几乎99%的膜通量率被超滤膜滤出，液体清澈，污染较少，实验结果满意。

2、经过48小时的培养，微生物繁殖数量显著增加，可以观察到大量的微生物群落在培养基中，表明培养基中有较高的生物可用性。

3、细菌细胞及环境氢离子浓度在正常范围内，PH值稳定在7.2-7.3，表明培养基环境适宜微生物生长繁殖。

四、总结
以上实验证明，自配的微生物培养基可以有效的支持微生物的繁殖，环境条件稳定而有利于微生物生命活动，培养基污染率低，满足了培养表面的要求。

本实验为进一步在微生物培养基中开展实验提供了良好的条件，为研究微生物起到了重要作用。