反相色谱切换为正相色谱操作步骤

反相色谱柱的选择和使用色谱柱操作规程液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。

正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料紧要以硅胶为基质，在其表液相色谱的柱子通常分为正相柱和反相柱。

正相柱大多以硅胶为柱，或是在硅胶表面键合—CN,—NH3等官能团的键合相硅胶柱；反相柱填料紧要以硅胶为基质，在其表面键合非极性的十八烷基官能团（ODS）称为C18柱，其它常用的反相柱还有C8,C4,C2和苯基柱等。

另外还有离子交换柱，GPC柱，聚合物填料柱等。

下面介绍一下反相色谱柱的选择和使用：一、反相色谱柱的选择1.柱子的PH值使用范围反相柱优点是固定相稳定，应用广泛，可使用多种溶剂。

但硅胶为基质的填料，使用时确定要注意流动相的PH范围。

一般的C18柱PH值范围都在2—8，流动相的PH值小于2时，会导致键合相的水解；当PH值大于7时硅胶易溶解；常常使用缓冲液固定相要降解。

一旦发生上述情况，色谱柱人口处会塌陷。

同样填料各种不同牌号的色谱柱不尽相同。

假如流动相PH较高或常常使用缓冲液时，建议选择PH范围大的柱子，例如戴安公司的Acclaim柱PH2—9或Zorbax的PH2—11.5的柱子。

2.填料的端基封尾（或称封口）把填料的残余硅羟基接受封口技术进行端基封尾，可改善对极性化合物的吸附或拖尾；含碳量增高了，有利于不易保留化合物的分别；填料稳定性好了，组分的保留时间重现性就好。

假如待分析的样品属酸性或碱性的化合物，可以选用填料经端基封尾的色谱柱。

二、液相色谱柱的使用色谱柱在使用前，可以进行柱的性能测试，并将结果保存起来，作为今后评价柱性能变化的参考。

在做柱性能测试时要依照色谱柱出厂报告中的条件进行（出厂测试所使用的条件是较佳条件），只有这样，测得的结果才有可比性。

但要注意：柱性能可能由于所使用的样品、流动相、柱温等条件的差异而有所不同。

1、样品的前处理a、可以使用流动相溶解样品。

正相柱还是反相柱特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。

此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。

此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。

3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。

如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。

当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。

若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。

通常为反相柱应用较多。

所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。

现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。

正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。

反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。

正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。

以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

正相柱反相柱的使用特别注意HPLC使用过后的系统清洗：含有缓冲盐溶液的流动相的清洗方法：1、先用100%的纯水冲洗，打开排放阀，用3~5ml/min的流量，洗二十分钟左右后停泵。

此举主要是针对吸液系统、泵头、进出口单向阀等体积较大的空间的清洗2、再用95：5的甲醇/水清洗整个系统，关闭排放阀，用1ml/min的流量，洗30~60分钟后停泵。

此举主要是用水清洗整个系统中的盐，用5%的甲醇主要是为了保护色谱柱。

3、最后用100%的甲醇清洗整个系统，用1ml/min的流量，洗2分钟左右，然后关机。

如果流动相中不含盐，则使用上述第三步清洗即可。

当固定相的极性大于流动相的极性时，可称为正相分配色谱或简称正相色谱.若固定相的极性小于流动相的极性时，可称为反相分配色谱或简称反相色谱.在用于正相色谱时，可使用如正己烷的低极性流动相，在用于反相色谱时，可使用甲醇或水的强极性流动相.正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

这种填料做成的柱子就称为正相柱.反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相,常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等.这种填料做成的柱子就称为反相柱.正相柱和反相柱缘于，柱上固定相与流动相之间极性的对比。

若固定相极性大于流动相，为正相柱，反之，为反相柱。

通常为反相柱应用较多。

所有色谱均适用，包括纸色谱和薄层。

现在一般都用反相，正相在样品对水敏感等特殊情况下才使用。

正相的固定性是极性的，流动相是非极性的，适于分离强极性物质。

反相的固定性是非极性的，流动相是极性的，适于分离弱极性物质。

正相色谱柱与反相色谱柱的区别本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。

以下是详细说明：1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

正相色谱vs反相色谱点击次数：986 发布时间：2009-11-9现代高效液相色谱中,分离效果好坏很大程度上取决于色谱填料的选择.但是色谱填料的选择范围很宽,要做合适的选择,必须对此有一定的认识和了解.1,正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶(Silica),以及其他具有极性官能团,如胺基团 (NH2,APS)和氰基团(CN,CPS)的键合相填料.由于硅胶表面的硅羟基(SiOH)或其他团的极性较强,因此,分离的次序是依据样品中的各组份的极性大小,即极性强弱的组份最先被冲洗出色谱柱. 正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低,如:正乙烷(Hexane),氯仿(Chloroform),二氯甲烷(Methylene Chloride)等.2,反相色谱反相色谱填料常是以硅胶为基础,表面键合有极性相对较弱的官能团的键合相. 反相色谱所使用的流动相极性较强,通常为水,缓冲液与甲醇,已腈等混合物. 样品流出色谱柱的顺序是极性较强组合最先被冲出,而极性弱的组份会在色谱柱上有更强的保留. 常用的反相填料有C18(ODS),C8(MOS),C4(B),C6H5(Phenyl)等.二,聚合物填料聚合物调料多为聚苯乙烯-二乙烯基苯或聚甲基丙酸酯等,其主要优点是在PH值为1～ 14均可使用. 相对与硅胶基质的C18填料,这类填料具有更强的疏水性;大孔的聚合物填料对蛋白质等样品的分离非常有效. 现在的聚合物填料的缺点是相对硅胶基质填料,色谱柱柱效较低. 三,其他无机填料其它HPLC的无机填料色谱柱也已经商品化.由于其特殊的性质,一般仅限于特殊的用途.如石墨化碳也用于正逐渐成为反相色谱填料.这种填料的分离不同与硅胶基质烷基键合相,石墨化碳的表面即是保留的基础,不再需其它的表面改性,该柱填料一般比烷基键合硅胶或多孔聚合物填料的保留能力更强,石墨化碳可用于分离某些几何导构体,又由于HPLC流动相中不会被溶解,这类柱可在任何PH与温度下使用.氧化铝也可用于HPLC, 氧化铝微粒刚性强,可制成稳定的色谱柱柱床,其优点是可在PH高达12的流动相中使用. 但由于氧化铝与碱性化合物作用也很强,应用范围受到一定的限制,所以未能广泛应用, 新型氧化锆填料也可用于HPLC,商品化的仅有聚合物涂层的多孔氧化锆微球色谱柱,应用PH范围1～14,温度可达100℃.由于氧化锆填料几年才开始研究,加之面临的实验难度,其重要用途与优势尚在进行中.怎样选择填料粒度目前,商品化的色谱料粒度从1um到超过30um均有销售,而目前分析分离主要用3um, 5um和10um填料,填料的粒度主要影响填充柱的两个参数,即柱效和背压.粒度越小,填充柱的柱效越高;小于3um的填料应用,在相同选择性条件下,提高柱效可提高分离度, 但不是唯一的因素.如果固定相选择是正确,但是分离度不够,那么选择更小粒度的填料是很有用的,3um填料填充柱的柱数比相同条件下的5um填料的柱效提高近30%;然而, 3um的色相谱的背压却是5um的2倍.与此同时,柱效提高意味着在相同条件下可以选择更短的色谱柱,以缩短分析时间,另外,可以采用低粘度的溶剂做流动相或增加色谱柱的使用温度,比如用乙腈代替甲醇,以降低色谱柱的压力.如何选择液相色谱仪发布日期：[2009-10-30] 共阅[241]次如何选择液相色谱仪一台品质优良的液相色谱系统应从以下几个方面考虑：一．主要技术指标优异首先是如何看指标。

高效液相色谱我国药典收载高效液相色谱法项目和数量比较表：鉴于HPLC应用在药品分析中越来越多，因此每一个药品分析人员应该掌握并应用HPLC。

I．概论 (2)一、液相色谱理论发展简况 (2)二、HPLC的特点和优点 (2)三、色谱法分类 (3)四、色谱分离原理 (3)II．基本概念和理论 (5)一、基本概念和术语 (5)二、塔板理论 (8)三、速率理论（又称随机模型理论） (9)III．HPLC系统 (10)一、输液泵 (11)二、进样器 (13)三、色谱柱 (14)四、检测器 (17)五、数据处理和计算机控制系统 (20)六、恒温装置 (20)IV．固定相和流动相 (20)一、基质（担体） (20)二、化学键合固定相 (22)三、流动相 (23)1．流动相的性质要求 (23)2．流动相的选择 (24)3．流动相的pH值 (24)4．流动相的脱气 (25)5．流动相的滤过 (25)6．流动相的贮存 (26)7．卤代有机溶剂应特别注意的问题 (26)8．HPLC用水 (26)V．HPLC应用 (27)一、样品测定 (27)二、方法研究 (27)附件：高效液相色谱法（HPLC）复核细则 (28)一、对起草单位的要求： (28)二、对复核单位的要求： (28)I．概论一、液相色谱理论发展简况色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各组分经过固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用（吸附、分配、离子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时间不同，从而先后从固定相中流出。

又称为色层法、层析法。

色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906年研究用碳酸钙分离植物色素时发现的，色谱法(Chromatography)因之得名。

后来在此基础上发展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色谱法。

液相色谱法开始阶段是用大直径的玻璃管柱在室温和常压下用液位差输送流动相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时间长（常有几个小时）。

液相色谱仪、气相色谱仪、原子吸收分光光度计、红外光谱仪、核磁共振、原子发射光谱等分析仪器气相色谱仪使用方法及实验操作步骤：A、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关(或氮气钢瓶总阀)，调整输出压力稳定在0.4Mpa左右（气体发生器一般在出厂时已调整好，不用再调整）。

B、打开色谱仪气体净化器的氮气开关转到“开”的位置。

注意观察色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后，打开色谱仪的电源开关。

C、设置各工作部温度。

TVOC分析的条件设置：(a)柱箱：柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终止温度250℃、终止时间10min; (b)进样器和检测器：都是250℃。

脂肪酸分析时的色谱条件：(a)柱箱：柱箱初始温度140℃、初始时间5min、升温速率4℃/min、终止温度240℃、终止时间15min; (b)进样器温度是260℃，检测器温度是280℃。

D、点火：待检测器（按“显示、换档、检测器”可查看检测器温度）温度升到150℃以上后，打开净化器上的氢气、空气开关阀到“开”的位置。

观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳定在0.1Mpa 和0.15Mpa左右。

按住点火开关（每次点火时间不能超过6~8秒钟）点火。

同时用明亮的金属片靠近检测器出口，当火点着时在金属片上会看到有明显的水汽。

如果在6~8秒时间内氢气没有被点燃，要松开点火开关，再重新点火。

在点火操作的过程中，如果发现检测器出口内白色的聚四氟帽中有水凝结，可旋下检测器收集极帽，把水清理掉。

在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法：观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。

E、打开电脑及工作站（通道一分析脂肪酸，通道二分析碘），打开一个方法文件：脂肪酸分析方法或碘分析方法。

显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。

接着可以转动色谱仪放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮，检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时，基线应随着变化)。

待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮，进行色谱数据分析。

Agilent1260液相色谱仪器操作规程一.生产厂家：美国Agilent二.到货日期：2011年1月三.附件：电脑、打印机四.使用范围：用于三聚氰胺，维生素A、D、E,β-胡萝卜素，牛磺酸，山梨酸、苯甲酸，乳糖、蔗糖等的检测五.工作环境：温度15℃~30℃，湿度20%~80%六.操作步骤:1.开机前准备：1.1.打开仪器室的空调。

1.2.配制流动相（按国标）,准备好蒸馏水、乙腈和甲醇。

2.开机：2.1.打开1260液相色谱仪器的进样器、泵、柱温箱和检测器的电源。

2.2.打开计算机。

2.3.打开“仪器1联机”图标，各模块完成自检。

2.4.点击“打开”图标，进入化学工作站。

3.设置运行模块和方法3.1.进样器（自动进样器）3.1.1.设置进样量，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，按照国标，检测不同物质，设定不同的进样量。

反相：最大进样量编制：审核：批准：为100ul，抽取速度一般设定200ul/min。

正相：最大进样量为500ul，抽取速度一般设定200~500ul/min。

3.1.2.设置进样器停止时间，在“进样器”的模块中，点击鼠标右键，在“方法”中，如标样的出峰时间为7分钟，停止时间可以设置为8分钟以上。

3.2.泵（四元泵或单泵）3.2.1.泵的流速：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，按照国标要求，如设置1.00ml/min。

3.2.2.如果是四元泵，可选择溶剂瓶，输入需要使用的各溶液的比例，如B蒸馏水90%，C乙腈10%，点击“确认”。

3.2.3.在“泵”的模块中点击鼠标右键，点击“控制”，选择“泵”（打开），确认。

3.2.4. 设置泵停止时间：在“泵”的模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，一般选择“与进样器一致/无限制”。

3.2.5. 压力限值：最小值一般设0bar，最大值一般设100bar。

3.3.柱温箱3.3.1.设置柱温箱的温度：在“柱温箱”模块中，点击鼠标右键，点击“方法”，左边按照国标要求可设置，比如35度，一般右边设置同左边。

正相色谱柱的使用方法正相色谱柱是一种广泛应用于分析领域的色谱柱类型。

它适用于水溶性化合物的分离和分析。

正相色谱柱的使用方法可以分为样品准备、溶液制备、色谱仪参数设置和结果解读等几个方面。

下面详细介绍正相色谱柱的使用方法。

一、样品准备1.确定分析目标：先确定要分析的目标化合物是何种成分，确定目标有助于选择合适的正相色谱柱。

2.样品制备：将要分析的样品溶解在适当的溶剂中，以获得合适浓度的样品溶液。

如果样品有固体颗粒，则需通过过滤或离心等方法去除杂质。

二、溶液制备1.选择合适的溶剂：根据样品的性质和分析目标，选择合适的溶剂。

一般来说，正相色谱柱适用于水溶性化合物的分析，常用的溶剂包括水、甲醇、乙醇等。

2.溶液pH调节：如果需要分析酸、碱性物质，则可以通过加入酸或碱溶液调节溶液的pH值。

注意要避免溶液的pH值过高或过低，以免对色谱柱产生损害。

3.溶液浓度调节：根据样品的浓度和分析目标的要求，适当调节溶液的浓度。

在实验中，可以通过稀释样品或者加入溶剂来调节溶液的浓度。

三、色谱仪参数设置1.选择合适的色谱柱：根据分析目标和样品特性，选择合适的正相色谱柱。

一般来说，正相色谱柱的主要特点是对极性物质有较好的分离能力。

2.设定流速：根据分析目标和样品性质，选择合适的流速。

流速的选择要兼顾分离效果和分离时间。

3.设定检测器波长：根据目标化合物的特征吸收波长，设定合适的检测器波长。

4.设置进样量：根据样品浓度和分析目标要求，设置合适的进样量。

进样量过大会影响分离效果，进样量过小则可能导致信号弱。

四、样品进样和数据采集1.样品进样：将样品溶液注入进样口，并确保样品与色谱柱充分接触。

2.数据采集：打开色谱仪软件，设置采集参数，开始数据采集。

可以选择记录色谱图和峰面积，用于结果分析和定量计算。

五、结果解读1.色谱图分析：根据色谱图，观察各峰的形状、峰高、保留时间等信息，以判断分离效果和目标物质是否达到要求。

2.峰面积计算：根据峰面积，可以计算出目标物质的含量，通过比较不同样品的峰面积，可以进行定量分析。

化学键合相色谱是一种分析化学方法，它利用化学键合相作为固定相，通过化学键合相与样品分子之间的化学作用来实现分离。

化学键合相色谱分为正相色谱和反相色谱两种类型。

正相色谱中，固定相是极性的，而流动相是非极性的，样品分子在固相和流动相之间根据极性差异进行分离。

反相色谱与之相反，固定相是非极性的，而流动相是极性的，样品分子根据溶解度差异进行分离。

1. 化学键合相色谱的定义化学键合相色谱是一种以化学键合相为固定相的色谱分离技术。

化学键合相是一种将固定相与填料表面通过化学键结合的材料，它能够提供更高的稳定性和选择性，并且适用于更广泛的分析对象。

化学键合相能够与样品分子进行特定的化学作用，从而实现样品分离。

2. 正相色谱正相色谱的固定相是极性的，如硅胶或乙醇胺等，而流动相是非极性的溶剂，例如正己烷或甲醇等。

在正相色谱中，样品分子根据其极性差异在固定相和流动相之间进行分离。

极性分子与固定相的作用力较强，因此在固定相中停留时间较长，而非极性分子则停留时间较短。

3. 反相色谱反相色谱的固定相是非极性的，如碳链或苯基等，而流动相是极性的溶剂，例如水或乙腈等。

在反相色谱中，样品分子根据其在固定相和流动相中的溶解度差异进行分离。

溶解度较大的分子在固定相中停留时间较长，而溶解度较小的分子则停留时间较短。

4. 化学键合相色谱的应用化学键合相色谱广泛应用于生物化学、药学、食品安全等领域。

正相色谱常用于酚类、羟基化合物、酮类等极性化合物的分离，反相色谱则常用于脂溶性化合物、脂肪族化合物的分离。

由于化学键合相色谱能够提供更高的选择性和分辨率，因此在复杂样品分析中具有较大的优势。

5. 化学键合相色谱的发展随着化学分析技术的不断发展，化学键合相色谱也在不断完善和创新。

新型的化学键合相材料和方法的引入，使化学键合相色谱具有更广泛的适用性和更高的分析效率。

未来，化学键合相色谱将会在更多领域得到应用，并且成为分析化学中不可或缺的重要方法之一。

uplc操作流程和注意事项下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。

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正相色谱柱和反相色谱柱的区别
本质上是填料(固定相)的不同,正相色谱柱填料极性强,洗脱顺序由弱到强；反相色谱柱填料极性弱，洗脱顺序由强到弱。

以下是详细说明：
1、正相色谱正相色谱用的固定相通常为硅胶（Silica）以及其他具有极性官能团胺基团，如（NH2，APS）和氰基团（CN，CPS）的键合相填料。

由于硅胶表面的硅羟基（SiOH）或其他极性基团极性较强，因此，分离的次序是依据样品中各组分的极性大小，即极性较弱的组份最先被冲洗出色谱柱。

正相色谱使用的流动相极性相对比固定相低，如正已烷（Hexane），氯仿（Chloroform），二氯甲烷（Methylene Chloride）等。

2、反向色谱反向色谱用的填料常是以硅胶为基质，表面键合有极性相对较弱官能团的键合相。

反向色谱所使用的流动相极性较强，通常为水、缓冲液与甲醇、乙腈等的混合物。

样品流出色谱柱的顺序是极性较强的组分最先被冲洗出，而极性弱的组分会在色谱柱上有更强的保留。

常用的反向填料有：C18（ODS）、C8（MOS）、C4（Butyl）、C6H5（Phenyl）等。

正相色谱柱正相色谱柱（Normal-Phase Chromatography）是一种将样品分离的分析技术，常用于生物分析和有机物的分离。

正相色谱柱与反相色谱柱相对应，在某些情况下，正相色谱柱比反相色谱柱更适合固定相的选择，对某些化合物有更好的选择性。

在正相色谱柱中，样品溶液滴入分离管的顶部，经过基质的过渡区，溶液被吸附在固定相表面。

随着流动的移动，溶液中的分子在固定相上逐渐分离，溶液中的分子与固定相之间的相互作用主要是极性作用，如氢键、范德华力、极性碰撞等。

正相色谱柱的固定相通常为极性固定相，例如铅、硅灰石、氨基硅胶等。

这些固定相表面活性极大，能够和溶解在样品中的极性物质产生相互作用，根据相互作用的强度，将样品分离开来。

正相色谱柱与反相色谱柱不同，一个重要的区别是，正相色谱柱中极性固定相对非极性且不易溶解的情况下，某些分子可能不可逆的吸附在固定相表面，导致某些组分无法分离出来。

因此，在正相色谱柱分离的过程中，需要注意的是选取固定相的极性与样品的极性匹配。

除了选择合适的固定相之外，正相色谱柱中需要考虑的因素还有流速、时间、温度和溶剂的选择。

对于固态相，不同的柱之间的分离性能可能存在较大差异，因此需要保证柱状物质和填充度的一致性，以保证分离效果的一致性。

在正相色谱柱的分析过程中，可以通过光学检测器或荧光检测器等技术进行信号采集，将检测器得到的信号转化为定量或定性的数据信息。

这些数据信息可以用于检测样品中的组分浓度和构成，从而对样品进行分析和鉴定。

总之，正相色谱柱是一种分离和分析样品的有效技术，在生物分析和有机分析等领域具有广泛的应用。

选择合适的正相色谱柱和固定相、优化分析条件和准确地检测分离样品中的组分，对于保证分析数据的准确性和有效性至关重要。

C18柱使用手册正相、反相和极性胶联柱使用手册Chrompack HPLC Normal-,Reversed phase and Polar bonded columns注意此色谱柱填充的是改性硅胶材料。

向柱内导入碱性溶剂（pH>7.0）或酸性溶剂（pH<2.0）会导致柱子损坏。

在使用这个柱子之前，你要充分地熟悉这本手册讲述的内容。

未正确地使用不能享受保修待遇。

1．简介此柱填充的是反相或者极性胶联型态的硅胶基质材料的硅胶。

硅胶形态的柱子用于正相（非水）条件。

反相（C8，C18，ODS，RP-8和RP-18）通常用于反相条件（水相）。

极性胶联型（APS，diol，CN和NH2）依照应用目的，可以用于正相和反相条件。

建议不要将一个相同的柱子用于差别非常大的条件下，这是因为柱子在特定的条件下，固定相的性质会发生变化，所以在其他的条件下，会影响柱效。

也不建议将硅胶柱用在反相条件下或者将方向柱用在正相条件下，这是因为这种过程会发生重复性差的问题（每一次注射之间和柱与柱之间的比较）。

2．色谱柱老化在开始分析工作以前，柱子必须经过正确的老化。

一个没有正确老化的柱子可能会带来问题，诸如很差的柱效或者分离情况发生变化等等。

A．在反相条件下老化要老化这类柱子，首先要使用乙腈或者甲醇淋洗，然后你选用的洗脱液进行平衡。

在发货以前，每根柱子都已经测试过并进行了老化。

因此没有必要在第一次使用时用水冲洗）。

如果流动相中使用了添加物（例如缓冲液或离子对试剂），建议使用正确比例的但不含此添加物的流动相进行缓冲冲洗。

缓冲冲洗应当首先以低流速进行，最后再使用正常流速。

B．在正相条件下老化柱效可能会受水与固定相的键合的严重影响。

柱子的干燥（激活）或润湿（失活）可能是需要的。

使用的溶剂可能是水饱和的或者是无水的。

干燥柱子可以使用无水的二氯甲烷。

C．对于极性键合柱的特殊说明由于这些柱子可以用于反相或者正相条件，在进行老化以前，一定要首先检查你要使用的淋洗溶剂或洗脱液是否可以与封装在柱子里的溶剂相混溶。

正相色谱（Normal-Phase Chromatography，NPC）是高效液相色谱（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）的一种类型。

在正相色谱中，固定相（Stationary Phase）通常采用极性较强的物质，如聚乙二醇（PEG）、氨基（Amine）与腈基（Cyano）键合相等。

流动相（Mobile Phase）则为相对非极性的疏水性溶剂，如烷烃类（如正已烷、环已烷）溶剂，并可能加入乙醇、异丙醇、四氢呋喃、三氯甲烷等有机溶剂以调节组分的保留时间。

正相色谱主要用于分离中等极性和极性较强的化合物，如酚类、胺类、羰基类及氨基酸类等。

在现代液相色谱中，正相色谱应用较为广泛，尤其在化学、生化、医学、工业、农业、环保、商检和法检等学科领域中，正相色谱技术发挥着重要作用。

值得注意的是，高效液相色谱还有另一种类型，即反相色谱（Reverse-Phase Chromatography，RPC）。

反相色谱中，固定相采用非极性物质，如C18、C8等，流动相则为水或缓冲液，常加入甲醇、乙腈、异丙醇、丙酮、四氢呋喃等与水互溶的有机溶剂。

反相色谱适用于分离非极性和极性较弱的化合物，据统计，反相色谱在现代液相色谱中应用占比约为80%。

⽓相⾊谱仪使⽤⽅法及实验操作步骤液相⾊谱仪、、原⼦吸收分光光度计、红外光谱仪、核磁共振、原⼦发射光谱等分析仪器⽓相⾊谱仪使⽤⽅法及实验操作步骤：A、打开氮⽓、氢⽓、空⽓发⽣器的电源开关(或氮⽓钢瓶总阀)，调整输出压⼒稳定在左右（⽓体发⽣器⼀般在出⼚时已调整好，不⽤再调整）。

B、打开⾊谱仪⽓体净化器的氮⽓开关转到“开”的位置。

注意观察⾊谱仪载⽓B的柱前压上升并稳定⼤约5分钟后，打开⾊谱仪的电源开关。

C、设置各⼯作部温度。

TVOC分析的条件设置：(a)柱箱：柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终⽌温度250℃、终⽌时间10min; (b)进样器和检测器：都是250℃。

脂肪酸分析时的⾊谱条件：(a)柱箱：柱箱初始温度140℃、初始时间5min、升温速率4℃/min、终⽌温度240℃、终⽌时间15min; (b)进样器温度是260℃，检测器温度是280℃。

D、点⽕：待检测器（按“显⽰、换档、检测器”可查看检测器温度）温度升到150℃以上后，打开净化器上的氢⽓、空⽓开关阀到“开”的位置。

观察⾊谱仪上的氢⽓和空⽓压⼒表分别稳定在和左右。

按住点⽕开关（每次点⽕时间不能超过6~8秒钟）点⽕。

同时⽤明亮的⾦属⽚靠近检测器出⼝，当⽕点着时在⾦属⽚上会看到有明显的⽔汽。

如果在6~8秒时间内氢⽓没有被点燃，要松开点⽕开关，再重新点⽕。

在点⽕操作的过程中，如果发现检测器出⼝内⽩⾊的聚四氟帽中有⽔凝结，可旋下检测器收集极帽，把⽔清理掉。

在⾊谱⼯作站上判断氢⽕焰是否点燃的⽅法：观察基线在氢⽕焰点着后的电压值应⾼于点⽕之前。

E、打开电脑及⼯作站（通道⼀分析脂肪酸，通道⼆分析碘），打开⼀个⽅法⽂件：脂肪酸分析⽅法或碘分析⽅法。

显⽰屏左下⽅应有蓝字显⽰当前的电压值和时间。

接着可以转动⾊谱仪放⼤器⾯板上点⽕按钮上边的“粗调”旋钮，检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时，基线应随着变化)。

待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按⼀下⾊谱仪旁边的快捷按钮，进⾏⾊谱数据分析。

提起高效液相色谱HPLC，对于医药化工类专业的学生并不陌生，在日常物质分析检测中，高效液相色谱仪必不可少，但就是对于这样一种常见的仪器，我们是否对其已经充分了解了呢？平时我们在接触HPLC时候，经常会看到有关“反相色谱、正相色谱”的叫法，那么究竟这两种类型的色谱有什么区别和联系呢？笔者结合个人对HPLC的一些认识和了解，跟大家分享探讨一下有关这类问题方面的知识。

液相色谱有正相和反相之分。

如果采用固定相的极性大于流动相的极性，就称为正相色谱；如果固定相的极性小于流动相的极性，则称为反相色谱。

由于极性化合物更容易被极性固定相所保留，所以正相色谱系统一般适用于分离极性化合物，极性小的组分先流出。

相反，反相色谱系统一般适用于分离非极性或弱极性化合物，极性大的组分先流出。

接下来让我们先具体了解一下正相色谱。

正相色谱基本上可以被看做是液固吸附色谱，其柱填料是吸附剂，其表面上分布有活性吸附位点，溶剂和溶质分子均能被吸附于活性位点上。

由于相互作用力有大有小，溶剂分子与溶质分子、溶质分子相互之间又存在竞争吸附，从而造成了在柱内保留时间的差异，使不同物质得到分离。

正相色谱是采用极性固定相(如带有二醇基一CH(OH)一CH2OH、氨基一NH基、和氰基一CN基的固定相及硅胶、三氧化二铝等)、非极性流动相(如正庚烷、正己烷等)的分离方法。

这是一种根据分子的极性大小将其分开的液相色谱技术。

因为正相色谱以吸附效应作为分离的基础，所以也称为吸附色谱。

在正相色谱中，样品分子与载体基质的硅醇基团发生特异的极性相互作用，与固定相产生强极性相互作用的极性样品分子比较难被洗脱，在柱内停留比较长的时间，反之，极性较弱或非极性分子与硅胶之间产生相对较弱的相互作用，比较容易被洗脱，因而在柱内停留的时间较短。

因此，正相色谱可以根据溶剂极性差别而达到分离的目的。

在正相色谱中，控制保留和选择性的决定性参数是比表面积和表面活性，通过对这两个参数的调节，可以调节一些分子的吸附一脱吸行为，从而达到分离的目的。

液相色谱仪、气相色谱仪、原子吸收分光光度计、红外光谱仪、核磁共振、原子发射光谱等分析仪器气相色谱仪使用方法及实验操作步骤：A、打开氮气、氢气、空气发生器的电源开关(或氮气钢瓶总阀)，调整输出压力稳定在0.4Mpa左右（气体发生器一般在出厂时已调整好，不用再调整）。

B、打开色谱仪气体净化器的氮气开关转到“开”的位置。

注意观察色谱仪载气B的柱前压上升并稳定大约5分钟后，打开色谱仪的电源开关。

C、设置各工作部温度。

TVOC分析的条件设置：(a)柱箱：柱箱初始温度50℃、初始时间10min、升温速率5℃/min、终止温度250℃、终止时间10min; (b)进样器和检测器：都是250℃。

脂肪酸分析时的色谱条件：(a)柱箱：柱箱初始温度140℃、初始时间5min、升温速率4℃/min、终止温度240℃、终止时间15min; (b)进样器温度是260℃，检测器温度是280℃。

D、点火：待检测器（按“显示、换档、检测器”可查看检测器温度）温度升到150℃以上后，打开净化器上的氢气、空气开关阀到“开”的位置。

观察色谱仪上的氢气和空气压力表分别稳定在0.1Mpa 和0.15Mpa左右。

按住点火开关（每次点火时间不能超过6~8秒钟）点火。

同时用明亮的金属片靠近检测器出口，当火点着时在金属片上会看到有明显的水汽。

如果在6~8秒时间内氢气没有被点燃，要松开点火开关，再重新点火。

在点火操作的过程中，如果发现检测器出口内白色的聚四氟帽中有水凝结，可旋下检测器收集极帽，把水清理掉。

在色谱工作站上判断氢火焰是否点燃的方法：观察基线在氢火焰点着后的电压值应高于点火之前。

E、打开电脑及工作站（通道一分析脂肪酸，通道二分析碘），打开一个方法文件：脂肪酸分析方法或碘分析方法。

显示屏左下方应有蓝字显示当前的电压值和时间。

接着可以转动色谱仪放大器面板上点火按钮上边的“粗调”旋钮，检查信号是否为通路(转动“粗调”旋钮时，基线应随着变化)。

待基线稳定后进样品并同时点击“启动”按钮或按一下色谱仪旁边的快捷按钮，进行色谱数据分析。

反相色谱柱和正相色谱柱
反相色谱柱和正相色谱柱是两种常见的色谱柱类型。

它们的区别在于，反相色谱柱是使用疏水性固定相，而正相色谱柱使用亲水性固定相。

在反相色谱中，样品分子与固定相之间的亲水性作用较小，因此更易被洗脱。

相反，在正相色谱中，样品分子与固定相之间的亲水性作用更强，因此需要更强的溶剂来洗脱样品。

此外，反相色谱常用于分离疏水性化合物，而正相色谱则更适合于分离亲水性化合物。

不同的色谱柱类型也会影响到分离效率和分离时间。

因此，在选择色谱柱时，需要根据样品的特性和分离要求来选择合适的柱子。

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