4-甲基伞形酮90-33-5

TLC铺板经验大全！！！薄层色谱（TLC）的使用指南综述：薄层色谱（TLC）是一种非常有用的跟踪反应的手段，还可以用于柱色谱分离中合适溶剂的选择。

薄层色谱常用的固定相有氧化铝或硅胶，它们是极性很大（标准）或者是非极性的（反相）。

流动相则是一种极性待选的溶剂。

在大多数实验室实验中，都将使用标准硅胶板。

将溶液中的反应混合物点在薄板上，然后利用毛细作用使溶剂（或混合溶剂）沿板向上移动进行展开。

根据混合物中组分的极性，不同化合物将会在薄板上移动不同的距离。

极性强的化合物会“粘”在极性的硅胶上，在薄板上移动的距离比较短。

而非极性的物质将会在流动的溶剂相中保留较长的时间从而在板上移动较大的距离。

化合物移动的距离大小用Rf值来表达。

这是一个位于0～1之间的数值，它的定义为：化合物距离基线（最先点样时已经确定）的距离除以溶剂的前锋距离基线的距离。

薄层色谱（TLC）实验步骤：1) 切割薄板。

通常，买来的硅胶板都是方形的玻璃板，必需用钻石头玻璃刀按照模板的形状进行切割。

在切割玻璃之前，用尺子和铅笔在薄板的硅胶面上轻轻地标出基线的位置（注意不要损坏硅胶面）。

借助锋利的玻璃切割刀和一把引导尺，你便可方便地进行玻璃切割。

当整块玻璃被切割后，你就可以进一步将其分成若干独立的小块了。

（开始的时候，也许你会感到有一些难度，但经过一些训练以后，你便会熟练地掌握该项技术。

）2) 选取合适的溶剂体系。

化合物在薄板上移动距离的多少取决于所选取的溶剂不同。

在戊烷和己烷等非极性溶剂中，大多数极性物质不会移动，但是非极性化合物会在薄板上移动一定距离。

相反，极性溶剂通常会将非极性的化合物推到溶剂的前段而将极性化合物推离基线。

一个好的溶剂体系应该使混合物中所有的化合物都离开基线，但并不使所有化合物都到达溶剂前端，Rf值最好在0.15~0.85之间。

虽然这个条件不一定都能满足，但这应该作为薄层色谱分析的目标（在柱色谱中，合适的溶剂应该满足Rf在0.2~0.3之间）。

薄层色谱的显色反应显色试剂显色剂可以分成两大类：一类是检查一般有机化合物的通用显色剂；另一类是根据化合物分类或特殊官能团设计的专属性显色剂。

显色剂种类繁多，本章只能列举一些常用的显色剂。

l．通用显色剂①硫酸常用的有四种溶液：硫酸-水(1：1)溶液；硫酸-甲醇或乙醇(1：1)溶液；1.5mol／L硫酸溶液与0.5-1.5mol／L硫酸铵溶液，喷后110oC烤15min，不同有机化合物显不同颜色。

②0.5％碘的氯仿溶液对很多化合物显黄棕色。

③中性0.05％高锰酸钾溶液易还原性化合物在淡红背景上显黄色。

④碱性高锰酸钾试剂还原性化合物在淡红色背景上显黄色。

溶液I：1％高锰酸钾溶液；溶液Ⅱ：5％碳酸钠溶液；溶液I和溶液Ⅱ等量混合应用。

⑤酸性高锰酸钾试剂喷1.6％高锰酸钾浓硫酸溶液(溶解时注意防止爆炸)，喷后薄层于180oC加热15～20min。

⑥酸性重铬酸钾试剂喷5％重铬酸钾浓硫酸溶液，必要时150oC烤薄层。

⑦5％磷钼酸乙醇溶液喷后120oC烘烤，还原性化合物显蓝色，再用氨气薰，则背景变为无色。

⑧铁氰化钾-三氯化铁试剂还原性物质显蓝色，再喷2mol／L盐酸溶液，则蓝色加深。

溶液I：1％铁氰化钾溶液；溶液Ⅱ：2％三氯化铁溶液；临用前将溶液I和溶液Ⅱ等量混合。

2．专属性显色剂由于化合物种类繁多，因此专属性显色剂也是很多的，现将在各类化合物中最常用的显色剂列举如下：(1)烃类①硝酸银／过氧化氢检出物：卤代烃类。

溶液：硝酸银O.1g溶于水lml，加2-苯氧基乙醇lOOml，用丙酮稀释至200ml，再加30％过氧化氢1滴。

方法：喷后置未过滤的紫外光下照射；结果：斑点呈暗黑色。

②荧光素／溴检出物：不饱和烃。

溶液：I．荧光素0.1g溶于乙醇lOOml；Ⅱ．5％溴的四氯化碳溶液。

方法：先喷(I)，然后置含溴蒸气容器内，荧光素转变为四溴荧光素(曙红)，荧光消失，不饱和烃斑点由于溴的加成，阻止生成曙红而保留荧光，多数不饱和烃在粉红色背景上呈黄色。

1168 20192判断题1、供试品溶液配制时，若供试品为纯品、原料药品，称量一般为50 mg，不得少于1 mg，否则误差较大（sizing: border-box;"></br<>1. A.√2. B.×2、配制供试品溶液时，从冰箱中取出的供试品，称量前要先回温至室温（）。

<br< span="" styl1. A.√2. B.×3、配制供试品溶液时，操作人员按要求穿戴无菌服，进入无菌室；操作前，先用酒精棉球消毒手，再用酒精span="" style="box-sizing: border-box;"></br<>1. A.√2. B.×4、细菌内毒素主要是来自革兰氏阳性细菌细胞壁的脂多糖。

（）1. A.√2. B.×5、在药品的微生物检验中，若作摇瓶培养，则15-20ml培养基/250ml的三角瓶，保证通气良好。

（）1. A.√2. B.×6、在异常毒性检查项目中，选择试验豚鼠的标准为：体重250-350g，同性，健康，清洁级以上。

（）1. A.√2. B.×7、大肠杆菌在胆盐硫乳琼脂平板上的菌落形态为无色至浅橙色，半透明，菌落中心带黑色或全部黑色或无黑1. A.√2. B.×8、在破伤风梭菌毒力实验中，小白鼠强直性痉挛，抽搐。

呈现弓背反张，腿部强直，尾巴竖立等症状，最后1. A.√2. B.×9、一般细菌毒素包括内毒素和外毒素。

（）1. A.√2. B.×10、异常毒性检查时，实验动物分组：分别将小鼠和豚鼠随机分组，供试品组小鼠5只/批，豚鼠2只/批；1. A.√2. B.×11、在异常毒性检查项目中，选择试验豚鼠的标准为：体重250-350g，同性，健康，清洁级以上。

第53卷 第11期 2023年11月中国海洋大学学报P E R I O D I C A L O F O C E A N U N I V E R S I T Y O F C H I N A53(11):087~098N o v .,2023黄河口及莱州湾海域磷的时空分布及浮游生物对低磷胁迫的响应❋段晓萌1,2,秦华伟3,马浩阳1,许泽昊1,2,吕浩然1,2,梁生康1,2❋❋(1.中国海洋大学化学化工学院,山东青岛266100;2.中国海洋大学海洋化学理论与工程技术教育部重点实验室,山东青岛266100;3.山东省海洋资源与环境研究院,山东烟台250299)摘 要: 本文利用2019 2021年在黄河口及莱州湾海域进行的4次陆海同步调查结果,分析了环莱州湾主要入海河口和排污口陆源输入磷的季节变化㊁黄河口及莱州湾海域内不同形态磷及不同碱性磷酸酶活性(A P A )的时空分布特征,探讨了海域内磷受限状况及浮游植物和浮游细菌对低磷胁迫的响应㊂结果表明,磷的陆源输入中黄河贡献最大,小清河次之;总磷(T P )入海通量呈现出夏季>春季>秋季>冬季的季节变化,春㊁夏㊁秋季磷输入以颗粒态磷(P P )为主,冬季以溶解态磷(D P )为主;受农业施肥及河道内浮游生物活动的影响,春季陆源D P 以溶解有机磷(D O P )为主,其他季节以活性磷酸盐(P O 4-P )为主㊂研究海域内T P 浓度及构成不仅受陆源输入的影响,还受浮游生物消亡㊁海上养殖活动和沉积物释放等作用共同调控,T P 浓度呈现出春季>夏季ʈ秋季>冬季的季节变化㊁近岸高远岸低的分布特征,高值区主要位于黄河和小清河河口区域;T P 构成上,春季以D P 为主,夏㊁秋季D P 与P P 相当,冬季以P P 为主;春㊁秋季D P 以D O P 为主,而夏㊁冬季D P 以P O 4-P 为主㊂海域内浮游植物普遍受到P O 4-P 的绝对限制和相对限制,夏季强降雨导致大量磷排放入海,研究海域磷限制情况得到缓解㊂海域内A P A 处于较高水平,秋㊁冬季A P A t o t a l 分别主要由A P A p h y ㊁A P A f r e e 贡献;当水体中D I N ʒP O 4-P 极高㊁P O 4-P 严重缺乏时,A P A p h y ㊁A P A b a c 较高,浮游植物及细菌主要依赖细胞周质及细胞膜上的A P 来水解D O P 以维持新陈代谢㊂P O 4-P 通过诱导-抑制机制对A P 进行调控,A P A 随P O 4-P 的增加而降低,当P O 4-P 低于0.05μm o l ㊃L -1时,浮游植物迅速分泌出大量的碱性磷酸酶来应对低磷胁迫;当高于阈值时,A P A 维持在较低水平㊂关键词: 黄河口;莱州湾;磷;时空分布;碱性磷酸酶活性;低磷胁迫中图法分类号: P 734 文献标志码: A 文章编号: 1672-5174(2023)11-087-12D O I : 10.16441/j.c n k i .h d x b .20220268引用格式: 段晓萌,秦华伟,马浩阳,等.黄河口及莱州湾海域磷的时空分布及浮游生物对低磷胁迫的响应[J ].中国海洋大学学报(自然科学版),2023,53(11):87-98.D u a n X i a o m e n g ,Q i n H u a w e i ,M a H a o y a n g ,e t a l .T e m p o r o s p a t i a l d i s t r i b u t i o n o f p h o s p h o r u s a n d r e s p o n s e o f p h y t o pl a n k -t o n t o l o w p h o s p h o r u s s t r e s s i n t h e Y e l l o w R i v e r e s t u a r y a n d L a i z h o u B a y [J ].P e r i o d i c a l o f O c e a n U n i v e r s i t y of C h i n a ,2023,53(11):87-98.❋ 基金项目:国家重点研究发展计划项目(2018Y F C 1407601);中央高校基本科研业务费专项资金(201962011,202042008)资助S u p p o r t e d b y t h e N a t i o n a l K e y R e s e a r c h a n d D e v e l o p m e n t P r o je c t of C h i n a (2018Y F C 1407602);t h e F u n d a m e n t a l R e s e a r c h F u n d s f o r t h e C e n t r a l U n i v e r s i t i e s (201962011,202042008)收稿日期:2022-05-10;修订日期:2022-06-06作者简介:段晓萌(1996 ),女,硕士生㊂E -m a i l :d x m 8338@s t u .o u c .e d u .c n❋❋ 通信作者:E -m a i l :l i a n gs k @o u c .e d u .c n 磷作为重要的生源要素,在海洋浮游植物和浮游细菌新陈代谢的过程中具有关键作用[1-3]㊂根据其存在形态,海水中的磷通常被分为溶解态磷(D i s s o l v e d i n o r ga n i c p h o s p h o r u s ,D P )和颗粒态磷(P a r t i c u l a t e p h o s ph o r u s ,P P )㊂D P 又以溶解无机磷(D i s s o l v e d i n o r g a n i c p h o s p h o r -u s ,D I P )和溶解有机磷(D i s s o l v e d o r g a n i c p h o s ph o r u s ,D O P )两种形式存在㊂D I P 的主要存在形式为正磷酸盐(P O 4-P ),P O 4-P 可以被大多数微生物直接吸收[4]㊂通常认为,当海水中P O 4-P <0.10μm o l ㊃L -1时,浮游生物无法从环境中获取足够的P O 4-P 来维持生长,即受到P O 4-P 的绝对限制;当溶解无机氮(D i s s o l v e d i n o r g a n i c n i t r o g e n ,D I N )与P O 4-P 比值超过16ʒ1时,认为浮游生物生长会受到P O 4-P 的相对限制㊂目前,许多河口区及近海海域的浮游生物生长受到磷的限制[5-11]㊂研究发现大部分D O P 需要通过相关酶类的转化为D I P 后才能被浮游生物利用[6,12],其中,含量占D O P 总量80%~85%的磷酸酯[13-14]可以在碱性磷酸酶(A l k a l i n e p h o s ph a t a s e ,A P )的水解作用下,释放出P O 4-P 被浮游植物及细菌利用㊂A P 作为一种典型的胞外酶,通常存在于水体㊁细胞周质内或细胞膜上[5],碱性磷酸酶活性(A l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y,A P A )常被用来衡量海区内浮游生物受磷胁迫的状态Copyright ©博看网. All Rights Reserved.中国海洋大学学报2023年以及D O P的生物可利用性㊂根据过滤孔径和浮游生物粒径将A P A分为游离态(A P A f r e e,<0.2μm)及结合态,结合态被区分为浮游植物结合态(A P A p h y,> 3μm)和细菌结合态(A P A b a c,0.2~3μm)[15-18]㊂A P A f r e e来源复杂,游离于海水环境中,可在较长时间内保持活性[19-20],而位于细胞膜或细胞周质内的A P A p h y 和A P A b a c与细胞结合紧密[21],三者可以在磷限制条件下促进浮游植物和细菌对D O P的利用,对P的生物地球化学循环均有较大贡献㊂莱州湾作为渤海三大海湾之一,处于黄河三角洲高效生态经济区的核心区域和山东半岛城市群经济圈的腹地,其生态环境对山东省沿海社会经济的高质量发展具有重要支撑作用㊂而黄河口作为连接黄河与莱州湾㊁渤海湾的通道,其营养盐水平和透明度等要素显著影响莱州湾海域的生产力及浮游植物群落[22-23]㊂自1970年代末以来,随着工业化和城市化等人类活动高速增长,氮磷排放量大幅增加,导致莱州湾生态环境质量趋于恶化㊂1980年代初以来,已有众多学者对莱州湾氮㊁磷营养物质浓度及时空分布开展较为系统的研究,并基于P O4-P 浓度及D I NʒP O4-P比值对湾内营养盐限制状况进行了判定[24-26]㊂由于入湾总氮增幅远远高于总磷增幅[27],导致1990年代中期湾内的D I P大部分时段均处于较低水平,磷限制严重[11,28-31]㊂随着营养盐浓度和结构变化,湾内浮游植物群落结构也发生了显著的变化,突出表现在甲藻等磷需求低的物种及嗜氮性藻种明显增加,并在局部海域占据优势地位[22-23,31-32],浮游植物小型化趋势明显,如聚球藻等微微型浮游植物在海湾内被广泛检出[33-35],结果进一步导致了渔业资源衰退㊁生态系统服务功能下降等后果,已对环莱州湾地区高质量发展形成制约㊂目前,对莱州湾磷的赋存形态及时空分布特征缺乏系统了解,而且对海域磷限制背景下D O P的生物可利用性缺乏客观认知,导致对该海域磷的循环尤其对浮游生态系统磷的供给补充机制仍缺乏深入认知㊂因此,本研究通过2019 2021年在莱州湾开展的4次陆海同步调查,分析了黄河口及莱州湾海域不同形态磷的时空分布,以及陆源输入磷的季节变化特征;研究黄河口及莱州湾海域内不同碱性磷酸酶活性的季节变化,解析莱州湾浮游生物对低磷胁迫的响应㊂研究结果可为深化莱州湾磷的生物地球化学循环认知提供帮助㊂1材料与方法1.1调查区域及时间课题组分别于2019年5月10 12日(春季)㊁2019年8月18 21日(夏季)㊁2021年11月2 14日(秋季)和2021年3月22 27日(冬季)进行了4次陆海同步调查㊂其中,2019年8月航次时间处于强台风 利奇马 登陆山东[36]之后;2021年8月下旬至10月黄河中下游经历了历史上罕见的秋汛洪水[37],2021年11月航次处于秋汛之后㊂陆海同步调查站位如图1所示,海域大面站位覆盖了整个莱州湾及黄河口邻近海域;海域整体位于渤海南部,具有显著的大陆性气候持征,潮汐类型属不正规混合半潮,海域内水体交换能力较弱[38-41]㊂陆上监测站位分别布设于黄河㊁广利河㊁小清河等10条河流入海口及莱州湾污水处理厂(莱污处)和龙口市第二污水处理厂(龙二污)2个直排海口,径流量和污染物入海通量之和占到环莱州湾陆源排放总量的95%以上[42]㊂调查时间上,陆上流量监测及样品采集与海域大面站调查准同步进行,海域水文㊁化学和生物生态要素同步测定㊂图1黄河口及莱州湾海域调查站位图F i g.1S a m p l i n g s t a t i o n s o n l a n d-s e a s y n c h r o n o u s i n v e s t i g a t i o nf o r Y e l l o w R i v e r E s t u a r y(Y R E)a n d L a i z h o u B a y(L Z B)1.2样品采集及测定海水样品采集及测定参照‘海洋监测规范“(G B 17378 2007)和‘海洋调查规范“(G B/T12763 2007),水样经过孔径为0.45μm醋酸纤维滤膜过滤后,装入经酸洗的聚乙烯瓶中,与膜样一起冷冻保存(-20ħ),水样用于测定溶解态营养盐(主要包括N H4-N㊁N O3-N㊁N O2-N㊁P O4-P㊁S i O3-S i㊁D N㊁D P),膜样用于测定叶绿素a(C h l a)㊁悬浮颗粒物(S P M)及颗粒态营养盐㊂玻璃滤器预先经过2%~10%的盐酸浸泡24h,然后用超纯水清洗3~6次㊂环莱州湾河流和直排海口的样品按照‘地表水和污水监测技术规范标准(H J-T92002)“采集,并同步监测流量,水样盛于2L高密度聚乙烯塑料桶中冷藏保存(4ħ),6h内运回实验室中进行过滤和分析㊂主要入海口流量采用直读转子流速仪(Z S X-5,中国)测量㊂海水温度和盐度用多参数仪(M a n t a3.0, E u r e k a,美国)测定㊂营养盐通过营养盐自动分析仪(Q u A A t r o A p p l i c a t i o n s,德国)测定;N H4-N㊁N O3-N㊁N O2-N㊁P O4-P㊁S i O3-S i的检出限分别为0.03㊁0.02㊁0.01㊁0.01和0.14μm o l㊃L-1㊂溶解无机氮(D I N)为88Copyright©博看网. All Rights Reserved.11期段晓萌,等:黄河口及莱州湾海域磷的时空分布及浮游生物对低磷胁迫的响应N O3-N㊁N O2-N和N H4-N之和㊂C h l a用90%丙酮萃取后通过荧光法(F-4500,日本岛津)测定,检测限为0.01μg㊃L-1㊂S P M采用差减法测定㊂D N和D P采用碱性过硫酸钾氧化法测定[43]㊂D O N和D O P分别为D N和D I N㊁D P和P O4-P的差值㊂P N㊁P P通过将膜样经碱性过硫酸钾氧化法后测定[44]㊂T N㊁T P分别为D N和P N㊁D P和P P之和㊂A P A样品的采集及测定参照文献[15,45-46]㊂海水样品采集后分别用0.22和3μm孔径的针头式微孔滤膜过滤[47],分级过滤的海水和原位未过滤海水中分别加入荧光底物(4-甲基伞形酮磷酸酯,M U F-P),在原位海水温度下避光反应2h后,带回实验室用荧光光度计(F4700,日本岛津)测定样品的荧光强度(E x=365n m, E m=445n m),每个样品采集3个平行样[48]㊂A P A t o t a l 为总的A P A,以未过滤水样中A P A含量表示;A P A p h y 为浮游植物结合态的A P A,通过未过滤原位水样与3μm孔径膜上的A P A差值计算;A P A b a c表示浮游细菌结合态的A P A,以3μm孔径膜与0.22μm孔径膜上A P A的差值计算;A P A f r e e表示游离态的A P A,以经0.22μm孔径膜过滤的滤液中A P A含量表示㊂1.3数据处理及分析数据分析使用S P S S25.0软件进行;平面分布图使用S u r f e r15.0绘制;柱状图㊁散点图等使用O r i g i n2021绘制㊂2结果与讨论2.1黄河口及莱州湾海域陆源输入磷的季节变化所调查的入海河流和排污中,黄河流量最大[42],对陆源T P入海通量贡献也最大,各季节黄河口T P通量平均占比高达88.7%;小清河沿途受纳大量工业废水和固体废弃物,水质污染严重[49-50],其入海通量仅次于黄河,各季节平均占比为9.7%;广利河㊁虞河㊁白浪河㊁潍河入海通量占比分别为0.6%㊁0.3%㊁0.3%㊁0.2%,对湾内磷贡献相对较少;其余河流及直排污口磷的输入量极低,占比之和不足0.1%㊂陆源输入磷的赋存形态和入海通量均具有显著的季节变化特征㊂受径流量影响,夏季T P入海通量最高,合计达到6.52ˑ106m o l㊃d-1(见图2(b))㊂受高悬浮颗粒物含量影响,河流中P P为T P的主要存在形态[51-52],在T P中占比达到89%,其次为P O4-P,占比为7%,D O P仅占4%(见图2(d))㊂春季T P的入海通量为0.93ˑ106m o l㊃d-1(见图2(b)),磷的形态仍以P P为主,占比为66%,其次为D O P,占比为29%,远高于P O4-P,这可能是由于春季农业施用的有机肥较多,导致各入海口D P均以D O P为主;也可能是由于春季温度适宜,河道内浮游植物生长后聚集,大量的P O4-P在生物作用下被转化为D O P(见图2(c))㊂秋季径流量高于春季,而T P入海通量低于春季,为0.39ˑ106m o l㊃d-1 (见图2(b)),这主要是因为调查前环莱州湾经历了历时长且雨量大的降水过程[37],大量的磷已被冲刷入海;秋季仅针对黄河口进行了T P构成的调查,P赋存形态与夏季相似,以P P为主,占T P的83%,P O4-P㊁D O P 分别占15㊁2%(见图2(e))㊂冬季径流量较小,T P入海通量最低,仅为0.17ˑ106m o l㊃d-1(见图2(f));水体中磷赋存形态明显受到悬沙量的影响[53],明显区别于其他三个季节,P P占比降至17.9%,T P以D P为主,占比达81.7%,D P中以P O4-P为主(见图2(f))㊂图2黄河口及环莱州湾主要入海口(包括黄河㊁广利河㊁小清河㊁弥河㊁白浪河㊁虞河㊁潍河㊁胶莱河㊁莱州市污水处理厂㊁界河和龙口市污水处理厂的入海口)的流量(a)㊁T P入海通量(b)及不同形态P在T P中占比的季节变化((c)春季;(d)夏季;(e)秋季;(f)冬季㊂)F i g.2S e a s o n a l v a r i a t i o n o f r u n o f f(a),T P f l u x(b)a n d t h e p r o p o r t i o n s o f d i f f e r e n t f o r m s i n T P a t m a i n e n t r a n c e s o ft h e Y e l l o w R i v e r a n d L a i z h o u B a y((c)S p r i n g;(d)S u m m e r;(e)A u t u m n;(f)W i n t e r.)T h o s e e n t r c m r e s a r e l o c t e d i n Y e l l o w R i v e r,G u a n g l i R i v e r,X i a o q i n g R i v e r,M i R i v e r,B a i l i a n g R i v e r,Y U R i v e r,W e i R i v e r,J I a o l a i R i v e r,t h e s e w a g e p l a n t L a i z h o u R i v e r,J i e R i v e r,a n d t h e s e w a g e p l a n t i n L o n g k o u98Copyright©博看网. All Rights Reserved.中 国 海 洋 大 学 学 报2023年2.2黄河口及莱州湾海域中不同形态磷的时空分布及影响因素春季,莱州湾水体中T P 呈现近岸高㊁远岸低 的分布趋势,平均值为(1.35ʃ0.26)μm o ㊃L -1(见表1),最高值和最低值分别出现在潍河口和湾口东部海域(见图3q)㊂T P 中,P P 呈斑块状分布(见图3m ),整体浓度较低,平均值为(0.25ʃ0.09)μm o l ㊃L -1,在T P 中的平均占比为24%(见图4(b))湾内,这是由于春季径流量较小,河流运输的P P 主要积累于河口处[53]㊂D P 与T P 的分布趋势基本一致(见图3i ),平均值为(1.01ʃ1.05)μm o l ㊃L -1,在T P 中的平均占比为77%(见图4(b ))㊂D P 中,P O 4-P 呈现湾西南部高于其他区域的分布特征(见图3a ),小清河口附近有一明显高值区,与刘义豪等[26]的研究结果一致㊂D O P 也基本呈现近岸高远岸低分布特征(见图3e ),平均值为(0.91ʃ0.75)μm o l ㊃L -1,在T P 中的平均占比高达70%,是D P 的主要成分㊂P O 4-P ㊁D O P 均与盐度呈显著负相关(r =-0.846,P <0.01;r =-0.765,P <0.01),这表明D P 组成和分布明显受到陆源输入的显著影响[23,28,54-55]㊂浮游生物的生命活动也是D O P 的重要来源,春季温度适宜浮游植物生长,C h l a 却处于较低水平(见表1),这表明调查可能处于浮游植物消亡期,在此期间水体中大量P O 4-P 被大量消耗㊁D O P 被释放[56],图3 黄河口及莱州湾海水中不同形态磷的时空分布(a d ㊁e h ㊁i l ㊁m p ㊁q t :春㊁夏㊁秋㊁冬季P O 4-P ㊁D O P ㊁D P ㊁P P ㊁T P 的平面分布㊂)F i g .3 T e m p o r o s p a t i a l d i s t r i b u t i o n o f d i f f e r e n t p h o s p h o r u s i n s u r f a c e w a t e r s o f t h e Y e l l o w R i v e r a n d L a i z h o u B a yi n d i f f e r e n t s e a s o n s (a d ,e h ,i l ,m p :H o r i z o n t a l d i s t r i b u t i o n s o f P O 4-P ,D O P ,D P ,P P a n d T P i n i n s p r i n g ,s u m m e r ,a u t u m n a n d w i n t e r .)09Copyright ©博看网. All Rights Reserved.11期段晓萌,等:黄河口及莱州湾海域磷的时空分布及浮游生物对低磷胁迫的响应导致D O P 为D P 主要成分,P O 4-P 绝对受限面积高达81.5%,除湾西南部沿岸外大部分区域处于磷绝对限制㊂夏季T P 平均值为(0.97ʃ1.42)μm o l ㊃L -1(见表1),P P ㊁D P 平均值分别为(0.46ʃ0.60)μm o l ㊃L -1㊁(0.51ʃ0.93)μm o l ㊃L -1(见表1),两者水平相当,且分布趋势均与T P 的一致㊂湾东部养殖区附近D P 和P P 浓度也较高(见图3r),这表明海水养殖也是影响湾内磷浓度及分布的重要因素,海水养殖不仅会直接增加海域内的磷负荷[57-58],也会通过下行调控作用影响浮游植物对磷的积累和消耗㊂D P 以P O 4-P 为主,P O 4-P 的平均值为(0.39ʃ0.96)μm o ㊃L -1(见表1),P O 4-P 在小清河口有一梯度较大的高浓度水舌,这主要是由于 利奇马 台风导致沿岸形成以风浪为主的海浪[36],海浪的作用下沿岸沉积物再悬浮作用增强,暴雨行洪导致小清河内大量的污染物和底泥被冲刷入海,使得大量P O 4-P 被释放于水体中[59],P O 4-P 绝对受限面积显著减少㊁D I NʒP O 4-P 明显降低,湾内的磷限制得到缓解;D O P 仅为(0.12ʃ0.06)μm o l ㊃L -1(见表1),远低于P O 4-P ,无明显的空间分布特征(见图3f )㊂秋季T P 平均值为(0.64ʃ0.42)μm o l ㊃L -1(见表1),在小清河口附近存在高值区(见图3s )㊂T P 构成与夏季相似,D P 与P P 水平相当,平均值分别为(0.31ʃ0.31)㊁(0.33ʃ0.17)μm o l ㊃L -1(见表1),均在小清河口存在高浓度水舌(见图3k ㊁o )㊂D O P 平均值为(0.26ʃ0.20)μm o l ㊃L -1(见表1),平面分布特征与D P 一致(见图3g );P O 4-P 平均值仅为(0.09ʃ0.16)μm o l ㊃L -1(见表1),远低于D O P ,湾内P O 4-P 仅在小清河口附近浓度较高(见图3c ),浮游植物在高浓度营养盐的刺激下迅速生长后将P O 4-P 转化为P P 后又以D O P 的形式释放于水体中,进而导致海域内D P 以D O P 为主㊂此外,秋汛期间,黄河水体流速快㊁泥沙含量高[59-60],大量的无机氮被汇入湾内,导致P O 4-P 迅速被吸收利用,湾内D I N ʒP O 4-P 高达R e d f i e l d 比值的69倍,P O 4-P 绝对限制面积高达87.45%,这表明调水期间输入大量高氮㊁低磷的淡水,加重了莱州湾海域的磷限制和营养盐失衡的程度[61]㊂冬季T P 的平均值为(0.49ʃ0.34)μm o l ㊃L -1(见表1),在黄河口附近的浓度较高(见图3t );T P 以P P为主(见图4(b )),P P 平均值为(0.33ʃ0.26)μm o l ㊃L -1(见表1),在黄河口处存在高值(见图3p );P O 4-P ㊁D O P ㊁D P 均处于较低水平,平均浓度分别为(0.09ʃ0.10)㊁(0.07ʃ0.05)㊁(0.16ʃ0.11)μm o l ㊃L -1(见表2;图3d ㊁h ㊁l)㊂磷的形态㊁浓度及分布受浮游植物生长调控,P P 与C h l a 间呈显著正相关(r =-0.915,P <0.01),表明浮游植物吸收P O 4-P 转化为P P ㊂由于受陆源输入㊁浮游生物生消过程㊁沉积物悬浮释放等多重因素的影响,调查海域内磷形态和分布具有显著差异性㊂降雨等自然因素㊁农业施肥及调流调沙等人类活动的共同作用,环莱州湾各条河流的磷负荷及赋存形态有明显的季节差异[53,62]㊂丰水期河流的入莱州湾通量在全年中占绝对优势[63],磷在河口区的吸附解吸及生物的吸收转化等过程导致陆源输入T P的季节变化与海域内的并不一致㊂海域内T P 基本呈现出春季>夏ʈ秋季>冬季的特征(见图4(a))㊂2.3黄河口及莱州湾海域内浮游生物的低磷胁迫响应A P A 是衡量海水生态系统对D O P 利用的重要指标,磷限制条件下,浮游植物及浮游细菌通过合成㊁分泌出大量的A P 利用D O P 来应对低磷胁迫[64-66]㊂调查海域水体中均检测到了A P A ,这表明调查期间莱州湾海域浮游植物及细菌的生长㊁繁殖在很大程度上受到了磷的胁迫作用㊂图4 黄河口及莱州湾海水中T P 浓度(a )及构成(b)的季节变化F i g .4 S e a s o n a l v a r i a t i o n o f c o n c e n t r a t i o n (a )a n d c o m po s i t i o n (b )o f t o t a l p h o s p h o r u s i n s u r f a c e w a t e r s o f t h e Y e l l o w R i v e r a n d L a i z h o u B a y19Copyright ©博看网. All Rights Reserved.中 国 海 洋 大 学 学 报2023年表1 不同季节黄河口及莱州湾水文参数及各项营养盐要素T a b l e 1 H y d r o l o g i b a l pa r a m e t e r s a n d n u t r i e n t e l e m e n t s i n d i f f e r e n t s e a s o n s i n Y R E a n d L Z B 参数P a r a m e t e r统计值S t a t i s t i c 春季S p r i n g夏季S u m m e r秋季A u t u m n冬季W i n t e rT /ħ平均值①16.80ʃ2.3126.18ʃ1.1612.88ʃ3.636.74ʃ1.79范围②12.23~22.9323.56~27.885.45~17.013.84~12.10S平均值①27.43ʃ4.9126.12ʃ7.1722.72ʃ3.6727.64ʃ4.55范围②0.01~31.340.94~32.6911.15~29.484.24~31.25C h l a /(μg ㊃L -1)平均值①1.20ʃ0.986.82ʃ6.075.56ʃ6.196.30ʃ5.92范围②N .D .~4.130.95~22.100.18~27.490.37~24.94S P M /(m g ㊃L -1)平均值①41.60ʃ47.43 61.83ʃ177.8113.78ʃ14.6324.05ʃ10.30范围②15.94~254.068.50~10620.28~67.8011.55~52.13D I N /(μm o l ㊃L -1)平均值①38.88ʃ23.9145.06ʃ51.0943.50ʃ41.0328.16ʃ68.97范围②12.31~129.431.02~208.8111.48~140.212.45~440.94D O N /(μm o l ㊃L -1)平均值①123.08ʃ131.4445.23ʃ118.9025.22ʃ26.649.68ʃ4.26范围②1.03~747.931.03~747.934.58~142.622.93~27.04D N /(μm o l ㊃L -1)平均值①152.67ʃ148.6078.38ʃ128.4267.29ʃ46.8838.51ʃ72.42范围②40.07~877.3613.69~877.3619.85~282.839.00~467.99P N /(μm o l ㊃L -1)平均值①3.59ʃ1.5057.93ʃ52.196.44ʃ3.033.86ʃ1.75范围②0.73~8.140.73~237.391.79~14.402.07~12.40T N /(μm o l ㊃L -1)平均值①159.05ʃ152.70137.91ʃ136.7073.74ʃ47.4342.37ʃ73.89范围②42.01~877.3620.70~877.3623.32~290.6912.10~480.39P O 4-P /(μm o l ㊃L -1)平均值①0.19ʃ0.400.39ʃ0.960.09ʃ0.160.09ʃ0.10范围②0.02~1.810.02~4.950.01~0.860.02~0.51D O P /(μm o l ㊃L -1)平均值①0.91ʃ0.750.12ʃ0.060.26ʃ0.200.07ʃ0.05范围②0.45~3.950.02~0.22 0.07~1.20 N .D .~0.26D P /(μm o l ㊃L -1)平均值①1.01ʃ1.050.51ʃ0.93 0.31ʃ0.310.16ʃ0.11范围②0.15~5.760.05~4.950.11~2.060.06~0.62P P /(μm o l ㊃L -1)平均值①0.25ʃ0.090.46ʃ0.600.33ʃ0.170.33ʃ0.26范围②0.06~0.460.07~3.420.08~0.840.15~1.73T P /(μm o l ㊃L -1)平均值①1.35ʃ0.260.97ʃ1.420.64ʃ0.420.49ʃ0.34范围②0.62~1.450.18~6.300.30~2.820.23~2.35D I N ʒP O 4-P 平均值①711.47ʃ423.11452.88ʃ500.211083.64ʃ1043.69363.69ʃ308.48范围②71.51~1547.0517.61~2632.45116.35~5348.0216.56~1248.97P N ʒP P平均值①14.34ʃ6.66284.24ʃ277.1320.12ʃ4.1512.37ʃ1.80范围②N .D .~45.77 3.05~1056.5810.33~29.037.16~15.09A P A p h y/(n m o l ㊃L -1㊃h -1)平均值① 715.10ʃ1592.604.63ʃ9.43范围② 3.75~7568.500.05~58.67A P A b a c/(n m o l ㊃L -1㊃h -1)平均值① 55.04ʃ286.231.50ʃ1.73范围② N .D .~1786.25N .D .~7.00 A P A f r e e/(n m o l ㊃L -1㊃h -1)平均值① 25.72ʃ61.199.16ʃ4.10 范围② 0.25~327.000.02~16.33A P A t o t a l /(n m o l㊃L -1㊃h -1)平均值① 795.86ʃ1749.8715.28ʃ11.74范围②5.25~8091.500.07~75.50注:表中 N .D . 表示未检出, 表示未采集㊂ N .D . i n t h e t a b l e m e a n s n o t c h e c k e d o u t ,a n d m e a n s n o t c o l l e c t e d .①M e a n V a l u e ;②R a n ge .29Copyright ©博看网. All Rights Reserved.11期段晓萌,等:黄河口及莱州湾海域磷的时空分布及浮游生物对低磷胁迫的响应秋季,A P A t o t a l 基本呈现出湾南部近岸高㊁远岸低的特征(见图5d ),A P A p h y 与AP A f r e e 的平面分布特征与A P A t o t a l 相似(见图5a ㊁c ),A P A b a c 则在湾东部养殖区附近存在一高值(见图5b )㊂A P A t o t a l 平均含量(795.86ʃ1749.87)n m o l㊃L -1㊃h -1(见表1),其中,A P A p h y 贡献最大,在AP A t o t a l 中的平均占比为85%,其次为A P A b a c ,平均占比为12%,A P A f r e e 占比最小,仅为3%㊂这表明,秋季莱州湾在较长时间内处于严重受限状态[67],浮游植物及细菌合成㊁分泌出的A P 会大量聚集在细胞周围,快速利用D O P [16]㊂冬季A P A t o t a l 分布与秋季类似,在白浪河㊁弥河口有一高值,但黄河口附近较低(见图5h );A P A p h y 在弥河口㊁白浪河口存在一小范围高值区(见图5e );A P A f r e e则在黄河口出现低值区(见图5g );A P A b a c 整体处于较低水平(见图5f )㊂A P A t o t a l 均值为(15.28ʃ11.74)n m o l ㊃L -1㊃h -1(见表1),仅为秋季的1/50(见图6(a )),与长江口[68]㊁黄海[47]等海域A P A 处于同等水平,这可能是由于冬季D I N ʒP O 4-P 比值低㊁磷受限程度轻,A P 被大量表达;另外秋季温度远高于冬季,有利于A P 的表达,进一步导致秋季A P A 远高于冬季㊂A P A t o t a l 中,A P A f r e e 在A P A t o t a l 中占比最高,均值为62%,A P A p h y次之,占比均值为27%(见图6(b )),这表明,磷受限程度相对较轻时,浮游植物及细菌对细胞周质内和细胞膜上A P 的依赖程度会明显降低㊂此外,浮游生物种类是影响A P 表达的直接因素[69-71],秋㊁冬季节A P A t o t a l及构成的差异也可能是由浮游生物种类不同所致㊂(a d :秋季,e h :冬季㊂a d :A u t u m n ,e h :W i n t e r .)图5 黄河口及莱州湾海域中不同类型A P A 的季节变化F i g .5 S e a s o n a l v a r i a t i o n o f d i f f e r e n t s i z e f r a c t i o n s o f a l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y (A P A )i n s u r f a c e w a t e r o f t h e Y e l l o w R i v e r a n d L a i z h o uB a y图6 黄河口及莱州湾海域中A P A t o t a l (a )及其构成(b )的变化F i g .6 S e a s o n a l v a r i a t i o n o f A P A t o t a l (a )a n d i t s c o m p o s i t i o n (b )o f t h e Y e l l o w R i v e r a n d L a i z h o u B a y 研究表明,海洋浮游生态系统中A P 的分泌显著受水体中P O 4-P 含量的影响,P O 4-P 主要通过 诱导 抑制 机制调节A P 的活性,即P O 4-P 缺乏状态下浮游生物会诱导产生大量碱性磷酸酶,在很大程度上接触并水解D O P ;当P O 4-P 浓度较高时酶的活性受到抑制[72-75]㊂对于黄河口及莱州湾海域(见图7),当P O 4-P 39Copyright ©博看网. All Rights Reserved.中 国 海 洋 大 学 学 报2023年低于阈值0.05μm o l ㊃L -1时,不同类型的A P A 均显著增加,表明低磷环境下浮游植物和细菌会产生大量A P 来利用D O P 以维持自身的新陈代谢;当P O 4-P 高于阈值时,浮游生物对磷的需求基本得到满足,A P A 维持在较低水平,A P 的分泌受到抑制㊂本文的P O 4-P 阈值与大西洋和太平洋等海域的(0.030μm o l㊃L -1)较为接近[73];然而,马来西亚半岛沿海水域和河口区P O 4-P 的阈值则高达0.9μm o l ㊃L -1[74],表明不同海域调控A P A 的P O 4-P 有较大差异㊂这可能是由于不同海域浮游生态系统以及温度㊁营养盐等环境因子的差异所致,具体原因还需要进一步深入研究㊂黄河口及莱州湾海域中P O 4-P 阈值明显低于P O 4-P 绝对受限阈值(0.1μm o l ㊃L -1),表明A P A 作为衡量磷限制的指标更为灵敏[11]㊂图7 黄河口及莱州湾海域中碱性磷酸酶活性与P O 4-P 之间的关系F i g .7 T h e r e l a t i o n s h i p b e t w e e n d i f f e r e n t A P A P O 4-P i n s u r f a c e w a t e r o f t h e Y e l l o w R i v e r a n d L a i z h o u B a y3 结论(1)黄河口对T P 总通量的贡献最大,小清河次之;受径流量影响,入海口T P 通量呈现出夏季>春季>秋季>冬季的季节变化;春㊁夏㊁秋季入海T P 均以P P 为主,春季D P 以D O P 为主,夏㊁秋季以P O 4-P 为主;冬季T P 以D P 为主,D P 以P O 4-P 为主㊂(2)海域内T P 浓度及构成受陆源输入和浮游生物活动共同调控,呈现出春季>夏季ʈ秋季>冬季的季节变化㊁近岸高远岸低的分布特征,高值区基本位于黄河口及小清河口㊂T P 中,春季以D P 为主,夏㊁秋季P P 与D P 相当,冬季以P P 为主;D P 中,春㊁秋季以D O P 为主,夏㊁冬季以P O 4-P 为主㊂海域内浮游植物普遍受到P O 4-P 的绝对限制和相对限制,夏季 利奇马 台风带来的强降雨及风浪使海域内磷限制得到缓解;黄河秋汛可能向湾内汇入大量的氮,加快了P O 4-P 的消耗,磷限制程度被加重㊂(3)海域内A P A 处于较高水平,秋季A P A t o t a l 主要由A P A p h y 贡献,冬季A P A t o t a l 主要由A P A f r e e 贡献;当水体中D I N ʒP O 4-P 极高㊁P O 4-P 严重缺乏时,A P A p h y ㊁A P A b a c 较高,浮游植物及细菌主要依赖细胞周质及细胞膜上的A P 来水解D O P 以维持新陈代谢㊂(4)P O 4-P 通过诱导-抑制机制对A P 进行调控,A P A 随P O 4-P 的增加而降低,当P O 4-P 低于0.05μm o l ㊃L -1时,浮游植物迅速分泌出大量的碱性磷酸酶来应对低磷胁迫;当高于阈值时,A P A 维持在较低水平;湾内浮游植物为适应磷限制环境可能已降低了对磷的需求㊂参考文献:[1] B j ör k m a n K M ,K a r l D M.B i o a v a i l a b i l i t y o f d i s s o l v e d o r ga n i c p h o s p h o r u s i n t h e e u ph o t i c z o n e a t s t a t i o n A L O H A ,N o r t h P a c i f i c S u b t r o p i c a l G y r e [J ].L i m n o l o g y a n d O c e a n o g r a p h y,2003,48(3):1049-1057.[2] D y h r m a n S T ,R u t t e n b e r g K C .P r e s e n c e a n d r e gu l a t i o n o f a l k a -l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y i n e u k a r y o t i c p h y t o pl a n k t o n f r o m t h e c o a s t a l o c e a n :I m p l i c a t i o n s f o r d i s s o l v e d o r g a n i c p h o s p h o r u s r e m i -n e r a l i z a t i o n [J ].L i m n o l o g y a n d O c e a n o g r a p h y,2006,51(3):1381-1390.[3] D y h r m a n S ,A m m e r m a n J ,V a n M o o y B.M i c r o b e s a n d t h e m a r i n e p h o s p h o r u s c y c l e [J ].O c e a n o g r a p h y (W a s h i n gt o n ,D .C .),2007,20(2):110-116.[4] C u r r i e D J ,K a l f f J .T h e r e l a t i v e i m p o r t a n c e o f b a c t e r i o pl a n k t o n a n d p h y t o p l a n k t o n i n p h o s p h o r u s u p t a k e i n f r e s h w a t e r [J ].L i m -n o l o g y a n d O c e a n o g r a p h y,1984,29(2):311-321.[5] C h r ós t R J .E n v i r o n m e n t a l C o n t r o l o f S y n t h e s i s a n d A c t i v i t y of A q u a t i c M i c r o b i a l E c t o e n z y m e s [M ].N e w Y o r k :S p r i ng e r -V e r l a g,1991:29-54.[6] C o n t e r J B ,W e t z e l R G .U p t a k e o f d i s s o l v e d i n o r g a n i c a n d o r ga n i c p h o s p h o r u s c o m p o u n d sb y p h y t o p l a n k t o n a n d b ac t e r i o pl a n k t o n [J ].L i m n o l o g y a n d O c e a n o g r a p h y,1992,37(2):232-243.[7] C o t n e r J B ,A m m e r m a n J W ,P e e l e E R ,e t a l .P h o s ph o r u s l i m i t e d b a c t e r i o p l a n k t o n g r o w t h i n t h e S a r g a s s o S e a [J ].A q u a t i c M i c r o b i a l E c o l o g y,1997,13:141-149.[8] L o m a s M W ,B u r k e A L ,L o m a s D A ,e t a l .S a r ga s s o S e a p h o s -p h o r u sb i o g e oc h e m i s t r y :A n i m p o r t a n t r o l e f o rd i s s o l ve d o r ga n i c p h o s p h o r u s (D O P )[J ].B i o ge o s c i e n c e s ,2010,7:695-670.[9] L o m a s M W ,B o n a c h e l a J A ,L e v i n S A ,e t a l .I m pa c t o f o c e a n p h y t o p l a n k t o n d i v e r s i t y o n p h o s p h a t e u p t a k e [J ].P r o c e e d i n gs o f t h e N a t i o n a l A c a d e m y o f S c i e n c e s ,2014,111(49):17540-17545.[10] M a l f a t t i F ,T u r k V ,T i n t a T ,e t a l .M i c r o b i a l m e c h a n i s m s c o u -p l i n g c a r b o n a n d p h o s p h o r u s c y c l e s i n p h o s ph o r u s -l i m i t e d n o r t h -e r n A d r i a t i c S e a [J ].S c i e n c e o f T h e T o t a l E n v i r o n m e n t ,2014,470-471:1173-1183.[11] X i n M ,W a n g B ,X i e L ,e t a l .L o n g -t e r m c h a n ge s i n n u t r i e n t r e -g i m e s a n d t h e i r e c o l o gi c a l e f f e c t s i n t h e B o h a i S e a ,C h i n a [J ].M a -r i n e P o l l u t i o n B u l l e t i n ,2019,146:562-573.[12] B j o r k m a n .B i o a v a i l a b i l i t y o f i n o r g a n i c a n d o r g a n i c p h o s ph o r u s c o m p o u n d s t o n a t u r a l a s s e m b l a g e s o f m i c r o o r ga n i s m s i n H a w a i i a n 49Copyright ©博看网. All Rights Reserved.11期段晓萌,等:黄河口及莱州湾海域磷的时空分布及浮游生物对低磷胁迫的响应c o a s t a l w a t e r s[J].M a r i n e E c o l o g y P r o g r e s s S e r i e s,1994,111:265-273.[13] Y o u n g C L,I n g a l l E D.M a r i n e d i s s o l v e d o r g a n i c p h o s p h o r u sc o m p o s i t i o n:I n s i g h t s f r o m s a m p l e s r e c o v e r ed u s i n g c o m b i ne de l e c t r o d i a l y s i s/r e v e r s e o s m o s i s[J].A q u a t i c G e o c h e m i s t r y,2010,16(4):563-574.[14] P a y t a n A,M c l a u g h l i n K.T h e o c e a n i c p h o s p h o r u s c y c l e[J].C h e m i c a l R e v i e w s,2007,107(2):563-576.[15] H o p p e.P h o s p h a t a s e a c t i v i t y i n t h e s e a[J].H y d r o b i o l o g i a,2003,493:187-200.[16] H u a n g B,O u L,W a n g X,e t a l.A l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y o fp h y t o p l a n k t o n i n E a s t C h i n a S e a c o a s t a l w a t e r s w i t h f r e q u e n th a r m f u l a l g a l b l o o m o c c u r r e n c e s[J].A q u a t i c M i c r o b i a l E c o l o g y,2007,49:195-206.[17] N a u s c h M.A l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t i e s a n d t h e r e l a t i o n s h i p t oi n o r g a n i c p h o s p h a t e i n t h e P o m e r a n i a n B i g h t(s o u t h e r n B a l t i c S e a)[J].A q u a t i c M i c r o b i a l E c o l o g y,1998,16:87-94. [18] O u L,H u a n g B,L i n L,e t a l.P h o s p h o r u s s t r e s s o f p h y t o p l a n k-t o n i n t h e T a i w a n S t r a i t d e t e r m i n e d b y b u l k a n d s i n g l e-c e l l a l k a-l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y a s s a y s[J].M a r i n e E c o l o g y P r o g r e s s S e-r i e s,2006,327:95-106.[19] T h o m s o n B,W e n l e y J,C u r r i e K,e t a l.R e s o l v i n g t h e p a r a d o x:C o n t i n u o u s c e l l-f r e e a l k a l i n e p h o s p h a t a s e a c t i v i t y d e s p i t e h i g hp h o s p h a t e c o n c e n t r a t i o n s[J].M a r i n e C h e m i s t r y,2019,214:1-6.[20] T h o m s o n B,W e n l e y J,L o c k w o o d S,e t a l.R e l a t i v e i m p o r t a n c eo f p h o s p h o d i e s t e r a s e v s.p h o s p h o m o n o e s t e r a s e(a l k a l i n e p h o s p h a-t a s e)a c t i v i t i e s f o r d i s s o l v e d o r g a n i c p h o s p h o r u s h y d r o l y s i s i n e p i-a n d m e s o p e l a g i c w a t e r s[J].F r o n t i e r s i n E a r t h S c i e n c e,2020,8:1-8.[21] K a m e n n a y a N A,G e r a k i K,S c a n l a n D J,e t a l.A c c u m u l a t i o n o fa mb i e n t p h o s p h a t e i n t o t h e p e r i p l a s m o f m a r i n e b ac t e r i a i s p r o t o nm o t i v e f o r c e d e p e n d e n t[J].N a t u r e C o m m u n i c a t i o n s,2020,11(1):1-14.[22]栾青杉,康元德,王俊.黄河口邻近海域浮游植物群落及其多样性的长期变化(1960 2010)[J].中国水产科学,2017,24(5): 913-921.L u a n Q i n g s h a n,K a n g Y u a n d e,W a n g J u n.L o n g-t e r m c h a n g e s o f p h y t o p l a n k t o n c o m m u n i t y a n d d i v e r s i t y i n a d j o i n i n g w a t e r s o f t h e Y e l l o w R i v e r e s t u a r y(1960 2010)[J].J o u r n a l o f F i s h e r y S c i-e n c e s of C h i n a,2017,24(5):913-921.[23]苏芝娟,王玉珏,董志军,等.调水调沙后黄河口邻近海域浮游植物群落响应特征[J].海洋学报,2015,37(4):62-75.S u Z h i j u a n,W a n g Y u y u,D o n g Z h i j u n,e t a l.R e s p o n s e o f p h y t o-p l a n k t o n a s s e m b l a g e s t o t h e w a t e r-s e d i m e n t r e g u l a t i o n i n t h e a d-j a c e n t s e a o f t h e Y e l l o w R i v e r m o u t h[J].H a i y a n g X u e b a o,2015, 37(4):62-75.[24]夏斌,张晓理,崔毅,等.夏季莱州湾及附近水域理化环境及营养现状评价[J].渔业科学进展,2009,30(3):103-111.X i a B i n,Z h a n g X i a o l i,C u i Y i,e t a l.E v a l u a t i o n o f t h e p h y s i c o-c h e m i c a l e n v i r o n m e n t a nd n u t r i t i o n s t a t u s i n L a i z h o u B a y a n d a d-j a c e n t w a t e r s i n s u m m e r[J].P r o g r e s s i n F i s h e r y S c i e n c e s,2009, 30(3):103-111.[25]由丽萍,赵玉庭,孙珊,等.2018年春季和夏季莱州湾营养盐结构及限制特征[J].渔业科学进展,2021,42(6):15-24.Y o u L i p i n g,Z h a o Y u t i n g,S u n S a n,e t a l.C h a r a c t e r i s t i c s o f n u-t r i e n t s t r u c t u r e s a n d l i m i t a t i o n s i n L a i z h o u B a y i n t h e s p r i n g a n d s u m m e r o f2018[J].P r o g r e s s i n F i s h e r y S c i e n c e s,2021,42(6): 15-24.[26]张亮,宋春丽,张乃星,等.莱州湾西部海域营养盐分布特征及营养化程度评价[J].广西科学院学报,2017,33(2):82-86.Z h a n g L i a n g,S o n g C h u n l i,Z h a n g N a i x i n g,e t a l.N u t r i e n t d i s t r i-b u t i o n a n d e u t r o p h ic a t i o n a s s e s s m e n t i n w e s t s e a a r e a o f L a i z h o uB a y[J].J o u r n a l o f G u a n g x i A c a d e m y o f S c i e n c e s,2017,33(2):82-86.[27]张锦峰,高学鲁,李培苗,等.莱州湾西南部海域及其毗邻河流水体营养盐的分布特征及长期变化趋势[J].海洋通报,2015,34(2):222-232.Z h a n g J i n f e n g,G a o X u e l u,L i P e i m i a o,e t a l.N u t r i e n t d i s t r i b u-t i o n c h a r a c t e r i s t i c s a n d l o n g-t e r m t r e n d s i n t h e s o u t h w e s t o f t h e L a i z h o u B a y a n d i t s a d j a c e n t r i v e r s[J].M a r i n e S c i e n c e B u l l e t i n, 2015,34(2):222-232.[28]蒋红,崔毅,陈碧鹃,等.渤海近20年来营养盐变化趋势研究[J].海洋水产研究,2005(6):61-67.J i a n g H o n g,C u i Y i,C h e n B i j u a n,e t a l.T h e v a r i a t i o n t r e n d o f n u t r i e n t s a l t s i n t h e B o h a i S e a[J].M a r i n e F i s h e r i e s R e s e a r c h, 2005(6):61-67.[29]刘义豪,杨秀兰,靳洋,等.莱州湾海域营养盐现状及年际变化规律[J].渔业科学进展,2011,32(4):1-5.L i u Y i h a o,Y a n g X i u l a n,J i n Y a n g,e t a l.D i s t r i b u t i o n a n d i n t e r a-n n u a l v a r i a t i o n o f n u t r i e n t s i n L a i z h o u B a y[J].P r o g r e s s i n F i s h-e r y S c i e n c e s,2011,32(4):1-5.[30]赵玉庭,苏博,李佳蕙,等.2013年春季莱州湾海域理化环境及水质状况分析[J].渔业科学进展,2016,37(4):74-80.Z h a o Y u t i n g,S u B o,L i J i a h u i,e t a l.E v a l u a t i o n o f p h y s i c o c h e m-i c a l e n v i r o n m e n t a n d w a t e r q u a l i t y i n t h e L a i z h o u B a y i n S p r i n g o f2013[J].P r o g r e s s i n F i s h e r y S c i e n c e s,2016,37(4):74-80.[31]孙军,刘东艳,徐俊,等.1999年春季渤海中部及其邻近海域的网采浮游植物群落[J].生态学报,2004,24(9):2003-2016.S u n J u n,L i u D o n g y a n,X u J u n,e t a l.T h e n e t z-P h y t o p l a n k t o nc o m m u n i t y o f t h e c e n t r a l B o h a i S e a a nd i t s a d j a ce n t w a t e r s i ns p r i n g,1999[J].A c t a E c o l o g i c a S i n i c a,2004,24(9):2003-2016.[32]宋秀凯,程玲,付萍,等.莱州湾金城海域网采浮游植物年际变化及与环境因子的关系[J].生态学报,2019,39(8):2784-2793.S o n g X i u k a i,C h e n g L i n g,F u P i n g,e t a l.C h a n g e s o f n e t-c o l l e c t-e d p h y t o p l a n k t o n c o m m u n i t y i n J i n c h e n g a r e a of L a i z h o u B a y a n di t s r e l a t i o n s h i p w i t h e n v i r o n m e n t a l f a c t o r[J].A c t a E c o l o g i c a S i n-i c a,2019,39(8):2784-2793.[33]王彩霞.渤海海域微生物群落结构的时空变化及其对环境压力的响应[D].烟台:中国科学院烟台海岸带研究所,2018.W a n g C a i x i a.S p a t i a l a n d T e m p o r a l V a r i a t i o n o f M i c r o b i a l C o m-m u n i t y S t r u c t u r e i n t h e B o h a i S e a A n d I t s R e s p o n s e t o E n v i r o n-m e n t a l[D].Y a n t a i:Y a n t a i I n s t i t u t e o f C o a s t a l Z o n e R e s e a r c h,C h i n e s e A c a d e m y o f S c i e n c e s,2018.[34]杨琳.渤海微微型浮游植物的时空分布[D].青岛:中国海洋大学,2012.Y a n g L i n.T h e S p a t i a l a n d T e m p o r a l D i s t r i b u t i o n o f P i c o p h y t o-p l a n k t o n i n B o h a i S e a[D].Q i n g d a o:O c e a n U n i v e r s i t y o f C h i n a, 2012.59Copyright©博看网. All Rights Reserved.。

急支平喘软胶囊微生物限度检查的方法验证方李，吴晶晶，钱琳娜，苏华，王玉喜，王曙东(南京军区南京总医院制剂科，江苏南京210002)摘要：目的建立急支平喘软胶囊的微生物限度检查法。

方法采用平皿法、培养基稀释法，通过5种阳性对照菌的回收率试验进行细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证；采用阳性菌对照与阴性菌对照的方法进行药品控制菌检查方法的验证。

结果采用培养基稀释法，5种试验菌的回收率均高于70%；控制菌可用常规法检查。

结论该方法可用于急支平喘软胶囊的微生物限度检查。

关键词：急支平喘软胶囊；微生物限度检查；方法验证Validation for determination method of microbacteria limit ofJizhipingchuan soft capsulesFANG Li ，WU Jing-jing ，QIAN Lin-na ，et al（Department of Preparation Division ，Nanjing General Hospital of Nanjing MilitaryCommand ，PLA ，Nanjing 210002，China ）Abstract ：ObjectiveTo establish a method of microbial limit test of Jizhipingchuan soft capsule．MethodsPlate counting method andculture medium diluted method were used．The method of counting bacteria and mould was validated by the recovery rates with 5control trains．The method of checking control bacteria was validated by observing positive bacteria control and negative bacteria control．Results The recovery rate of every trial bacteria was higher than 70%when culture medium-diluting was used in the counting bacteria mould．The conventional method could be used for the examination of control bacteria．Conclusions The method can be used for the examina-tion of microbacteria limit of Jizhipingchuan soft capsule．Key words ：jizhipingchuan soft capsule ；microbacteria limit determination ；validation 通信作者：王曙东，男，博士，主任药师，研究方向：中药制剂，E-mail ：su-huash@sina．com．cn急支平喘软胶囊是由木蝴蝶、没药、冰片等药材经加工而成的中成药胶囊剂，具有清肺平喘，镇咳祛痰的功效，用于治疗急性支气管炎、慢性支气管炎急性发作期［1］。

说明书【产品名称】通用名称：甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）英文名称：VIDAS T4【包装规格】60人份/盒【预期用途】该产品用于定量检测人血清或血浆（肝素锂抗凝）中的总四碘甲腺原氨酸（T4）。

该产品是一种在VIDAS®系列分析仪上使用的自动定量试剂，使用ELFA（酶联荧光分析）技术，定量检测人血清或血浆（肝素锂作为抗凝剂）中的总四碘甲腺原氨酸(T4)的酶免疫测定法。

甲状腺素或者四碘甲腺原氨酸(T4)是甲状腺分泌的激素，大部分（99.9%）与其载体蛋白相结合。

这些载体蛋白主要是TBG（甲状腺素结合球蛋白）。

少部分的游离甲状腺素被认为是这种激素的活性形式。

该产品有助于评价甲状腺的功能。

在甲状腺功能亢进的病人，甲状腺激素水平升高，而在甲状腺功能衰退的病人，甲状腺激素水平一般都会下降。

T4的检测依赖于其在载体蛋白中的浓度，因此有必要检测激素与载体蛋白的结合能力。

这种结合能力的检测还需要与其他甲状腺机能评估的检测相结合，如TSH和T3，同时还要包括患者的临床检查。

甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）有助于对甲状腺功能失调的诊断。

【检验原理】甲状腺素检测试剂盒（酶联荧光法）采用将酶免疫竞争分析方法与最后荧光检测(ELFA)相结合的分析原理。

固相管（SPR®）在分析中除作为反应的固相表面，也作为移液装置。

反应试剂为即用型并事先加入到试剂条的孔中，再将孔密封。

所有分析步骤都由仪器自动进行。

反应物进出SPR数次。

首先，取样并加入到含有碱性磷酸酶标记的T4抗原（共扼物）的孔中。

样品中存在的抗原和标记的抗原竞争结合包被于SPR内表面的特异性抗T4抗体。

在最后检测步骤当中，底物（4-甲基伞形酮磷酸酯）循环进出SPR。

共扼物酶催化水解底物成荧光产物（4-甲基伞形酮），在450nm处测量其荧光强度。

荧光强度与样本中抗原的浓度成反比。

分析结束的时候，根据储存在存储器中的校准曲线，由VIDAS®分析仪自动计算结果，然后打印输出。

4-甲基伞形酮基-β-d-葡糖苷酸水合物4-甲基伞形酮基-β-d-葡糖苷酸水合物（Methylumbelliferyl-β-D-glucuronide hydrate，缩写MU-Glu）是一种用于检测β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶（beta-glucuronidase，EC 3.2.1.31）活性的底物。

它是一种白色结晶粉末，分子式为C16H16O9，分子量为352.29。

β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶是一种重要的酶，参与生物体内许多代谢过程，如药物和毒素代谢、胆固醇代谢、激素代谢等。

在临床医学中，测定β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶的活性可以用于诊断一些肝、胆道疾病，如肝癌、胆道结石等。

MU-Glu 是一种荧光化合物，当它被β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶水解时，会释放出荧光染料甲基伞形酮基（Methylumbelliferone，缩写MU），从而可以通过荧光分析的方法测定β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶的活性。

MU-Glu的使用步骤如下：1.将MU-Glu溶解于适量的缓冲液中，使最终浓度在0.5-5.0 mM之间。

2.样品中加入适量的MU-Glu溶液，同时在另一组样品中加入MU-Glu和β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶。

3.将两组样品分别孵育于37℃下一定时间，孵育结束后加入终止液止反应。

4.在荧光分析仪上分别测定两组样品的荧光强度，从而计算出β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶的活性。

需要注意的是，在MU-Glu的使用过程中应该避免光照，因为它对光敏感，容易分解。

同时在取样和分析过程中应该注意操作规范，避免污染和误差。

综上所述，MU-Glu是一种用于测定β-D-葡萄糖醛酸酰转移酶活性的底物，具有灵敏、快速、简便、经济等优点，是肝胆道疾病诊断和研究领域的重要工具。