细胞培养心得
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毕业实习报告总结:细胞培养首先,我要感谢我的导师和实验室的同事们,他们在我的实习期间给予了我无私的帮助和指导。
通过这次实习,我对细胞培养这一领域有了更深入的了解,也积累了宝贵的实践经验。
细胞培养是生物医学和生物技术领域中重要的实验技术,它通过模拟细胞在体内的生长环境,使细胞在体外继续生长和繁殖。
在实习期间,我学习了细胞培养的基本原理和操作技术,包括细胞的复苏、传代、胰蛋白酶消化、细胞计数、铺板等步骤。
我也了解了细胞培养中常用的仪器设备,如二氧化碳培养箱、显微镜、细胞计数仪等。
在实习过程中,我不仅掌握了细胞培养的基本技能,还参与了一些具体的实验项目。
我参与了一项关于细胞凋亡的研究,通过细胞培养技术,我成功地培养了所需细胞,并进行了凋亡实验。
通过观察细胞形态的变化和流式细胞术的分析,我得出了实验结果,并协助导师进行了数据分析和论文撰写。
这个过程中,我不仅学习了实验设计和数据分析的方法,还提高了自己的实验操作能力。
在实习期间,我也遇到了一些挑战和困难。
例如,细胞培养过程中细胞的生长速度较慢,有时需要耐心等待。
另外,细胞的复苏和传代过程中,也有一些技巧需要掌握。
通过请教导师和同事,我逐渐克服了这些困难,并取得了较好的实验结果。
通过这次实习,我不仅学到了专业知识和技能,还锻炼了自己的团队合作和沟通能力。
在实验室中,我与同事们共同合作,互相学习和帮助。
我们也定期进行实验室会议,分享实验进展和心得体会,这让我感受到了团队合作的重要性。
总之,这次细胞培养实习是一次非常宝贵的学习经历。
我不仅掌握了细胞培养的基本技能,还参与了一些具体的实验项目,并取得了较好的研究成果。
同时,我也学会了团队合作和沟通的能力。
我相信这次实习对我未来的学术研究和职业发展将产生积极的影响。
一、前言细胞是生物体的基本结构和功能单位,是生命现象的基础。
细胞生物学是研究细胞的结构、功能、发生、发育和相互作用的科学。
细胞实训作为生物学专业学生的必修课程,旨在让学生通过实践操作,加深对细胞生物学知识的理解和掌握。
本文将从实训过程、收获体会和反思改进三个方面,详细阐述细胞实训的心得体会。
二、实训过程1. 实训准备在实训开始前,我们首先对细胞生物学的基本概念、细胞结构、细胞功能等理论知识进行了复习和预习。
同时,我们了解了实训所需的仪器设备、试剂和实验步骤,为实训做好充分准备。
2. 实训操作(1)细胞观察在实训过程中,我们首先进行了细胞观察实验。
通过使用显微镜观察各种细胞样本,如口腔上皮细胞、红细胞、白细胞等,我们对细胞的基本结构有了直观的认识。
在观察过程中,我们学会了如何调整显微镜的焦距和光圈,以及如何观察细胞的形态、大小、结构等特征。
(2)细胞培养接着,我们进行了细胞培养实验。
在无菌操作条件下,我们接种了细胞,观察了细胞的生长、分裂和衰老过程。
通过实验,我们掌握了细胞培养的基本操作,如培养基配制、细胞接种、细胞传代等。
(3)细胞分子生物学实验在细胞分子生物学实验中,我们进行了DNA提取、PCR扩增、Western blot等实验。
通过这些实验,我们了解了细胞内DNA、RNA、蛋白质等分子的提取、纯化和检测方法,以及基因表达调控的分子机制。
3. 实训总结在实训结束后,我们进行了实验报告的撰写,总结实训过程中的收获和体会。
同时,我们还对实验中遇到的问题进行了讨论和交流,为今后的学习和研究奠定了基础。
三、收获体会1. 提高了实验技能通过细胞实训,我们掌握了细胞生物学实验的基本操作,如细胞观察、细胞培养、细胞分子生物学实验等。
这些实验技能对于今后从事生物学研究具有重要意义。
2. 深化理论知识细胞实训使我们对细胞生物学的基本概念、细胞结构、细胞功能等理论知识有了更深入的理解。
通过实验操作,我们将理论知识与实际应用相结合,提高了学习的兴趣和效果。
养了很久的细胞,有一些经验和体会总结一下,和大家分享一下。
关于如何把细胞养的形态很好更漂亮。
1.不同的细胞,喜欢的环境是不一样的。
这个不仅仅是说培养基的不同,还有就是细胞生长的空间密度问题。
有一些细胞是数量多一点比较好生长,生长状态也比较好。
这种一般是属于生长速度慢的细胞。
譬如内皮细胞。
而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较好,譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。
尤其是巨噬细胞,生长速度非常得快,贴壁速度很快,所以传代时就应该留很少量的细胞,这样细胞状态会比较好。
并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长,而堆与堆之间是有空间的。
如果长成相连在一起的一满片的时候,细胞形态基本上就会差了,老化的会比较多,对后期实验结果是不好的。
所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。
2.对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不好的问题。
这个其实是有一个方法可以改善的。
对于贴壁细胞,如果细胞形态不好,(或者细胞形态不清晰,表面似有异物等)可以在传代的时候进行如下操作:首先,倒掉旧的培养基,加入3ml新的培养基(有无血清的都可)洗涤一次,用滴管吸走,然后再加入3ml的培养基,进行预吹打,控制吹打力度,轻轻地大概沿着瓶底过一遍,然后吸走。
这时侯再开始正式的消化、吹打。
(巨噬细胞我们只吹打,不消化的)其次,把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内,培养瓶事先加入培养基,放入培养箱内培养,按时间点观察细胞贴壁情况。
10分钟观察一次,20分钟,30分钟观察一次。
选择一个时间点,已经有部分细胞贴壁的情况下,重新置于洁净台,底面朝上迅速倒出其中的培养基,加入3ml 新培养基再轻轻洗一次。
然后加入完全培养基培养。
后续观察细胞生长情况以及形态。
我称之为“二传”。
呵呵。
如果一次效果还不理想,可重复多次。
直到找到细胞完美形态。
其中要注意,结合细胞喜欢的生长情况。
喜欢多一点数量长得好的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。
反之亦然。
这个是我师兄发明的,谢谢他了。
HEK293细胞培养心得首先,为了成功培养HEK293细胞,一个优良的细胞培养基是必不可少的。
一般来说,培养基应包含必需的营养物质,比如氨基酸、维生素、糖类和无机盐等。
同时,培养基还应该含有足够的抗生素以预防细菌和真菌的污染。
最好使用无血清的培养基,以避免动物源性成分对细胞培养的影响。
其次,准备一个合适的细胞培养环境也是至关重要的。
温度、湿度和二氧化碳浓度等条件应符合HEK293细胞的生长要求。
一般来说,细胞应在37°C的温度下培养,在5%的二氧化碳气氛中保持培养皿内的湿度。
细胞的传代是维持细胞活力和健康状态的重要步骤。
对于HEK293细胞,通常使用胰酶进行消化和洗涤来分离细胞。
对于细胞的新鲜分离,可以将细胞培养皿放入冰箱中进行预冷却,然后使用含有胰酶的PBS缓冲液进行洗涤。
定期检查细胞的密度和健康状况,并及时进行传代是非常重要的。
在培养细胞的过程中,细胞污染是一个常见的问题。
为了避免细菌和真菌的污染,可以在细胞培养过程中添加抗生素。
此外,操作时应注意细胞培养器具的无菌性,使用经过消毒的培养器具并保持培养环境的清洁是必要的。
细胞的冻存是为了保存和传递细胞的重要方法。
在将细胞冻存之前,应通过使用逐渐降低培养基中血清含量的方法适应细胞在无血清条件下生长。
然后使用冷冻保护剂配制适当的冻存液,将细胞分装到冻存管中,并使用液氮罐进行快速冷冻。
最后,定期检查细胞的健康和生长状态是维持细胞培养的重要步骤。
观察细胞的形态和贴壁情况,并使用显微镜检查细胞的活力和细胞数目。
如果细胞出现异常形态或生长减慢,可能是因为细菌或真菌污染,应及时采取相应的措施。
总之,HEK293细胞的培养需要一定的技巧和经验。
通过优化培养基、培养条件和消毒措施,加强细胞观察和细胞传代,可以有效地培养和维持HEK293细胞的活性和生长。
这些心得经验将有助于研究人员在实验室中更好地使用HEK293细胞进行相关研究。
细胞培养入职培训心得体会细胞培养是生物医学实验中非常重要的一个环节,它对实验结果的准确性和可重复性有着至关重要的影响。
在我入职的第一个月,我接受了公司的细胞培养入职培训,通过授课和实际操作,我对细胞培养有了更加深入的认识和了解。
在培训的过程中,我不仅学到了细胞培养的基本理论和技术,还体会到了团队合作和沟通的重要性。
在这篇文章中,我将分享我在细胞培养入职培训中的心得体会。
在第一次接触细胞培养的时候,我对这个过程感到非常陌生。
虽然在学校里学过相关理论知识,但在实际操作中还是感到非常吃力。
因此,我对细胞培养的重要性产生了更加深刻的认识。
这也激发了我对细胞培养的学习热情,我希望通过这次培训,能够掌握细胞培养的基本技术,为日后实验工作的顺利开展打下坚实的基础。
培训的第一天,我们就开始了理论知识的学习。
导师详细讲解了细胞培养的流程、原理和注意事项,并且配以图文并茂的PPT,使我们更加直观的了解了这方面的内容。
在理论课上,我学到了许多新知识,例如:细胞的培养条件、培养环境的要求、细胞培养的基本流程等。
这些知识的学习使我对细胞培养有了一个全面的认识,也为后续的实际操作打下了良好的基础。
除了理论课,我们还进行了细胞培养实操课。
导师为我们带来了不同种类的细胞,通过操作视频和实际操作,在导师的指导下,我们逐步学会了细胞培养的基本技术。
例如:细胞的传代、培养基的配制、细胞的分离和传代等。
通过实操,我进一步加深了对细胞培养技术的理解,并且掌握了细胞培养的基本操作流程。
在实操课中,我最大的收获就是学会了严格控制细胞培养的条件。
比如,细胞培养必须在无菌操作条件下进行,培养皿和器具都必须经过高温高压消毒,培养基和培养液的配制也需要按照一定的比例和方法进行。
这些细节性的操作确保了细胞培养的可靠性和准确性。
此外,在细胞培养中,对于细胞的分代和传代也有着严格的要求。
要注意细胞的数量和活力,不可使细胞过度密集或过度释放,要及时传代,保证细胞在健康状态下进行培养。
细胞生物学学习心得我认为通过学习运用细胞及组织培养技术主要收获体现在以下几个方面:首先,对细胞及组织培养在现代生命科学中的重要地位有了全面的了解和深刻的认识。
细胞组织培养是当前细胞生物学乃至整个生命科学研究与生物工程中最基本的实验技术之一。
近年来细胞生物学一系列主要理论研究的进展,癌变机理与细胞衰老,基因表达与调控,细胞融合以及一些细胞工程技术的建立都是与细胞培养技术分不开的。
动物细胞培养为疫苗生产、药物研制与肿瘤防治等医学实践提供了全新的手段。
被培养的组织或细胞是非常好的实验对象。
细胞培养广泛应用于现代医学和生物科学研究之中。
细胞培养的突出优点表现在:便于研究各种物理、化学等外界因素对细胞生长发育和分化等的影响;细胞培养便于人们对细胞内结构、细胞生长及发育等过程的观察。
因而细胞培养是探索和指示细胞生命活动规律的一种简便易行的实验技术,同时我们也不可忽略的另--个因素,那就是它脱离了生物机体后的一些变化。
细胞培养技术是生物技术中最核心、最基础的技术。
细胞培养技术目前已广泛地被应用于生物学的各个领域。
如分子生物学、细胞生物学、遗传学、免疫学、肿痛学及病毒学等。
其次,对一些与实验有关的理论和实验原理加深了记忆和理解。
这主要有,一些生物学基本实验操作的规则,例如培养基配制时需要注意的问题和培养基各个成分的存在意义,不同灭菌方法的使用范围和注意事项,原代、传代培养的意义,细胞冻存和复苏的基本原理。
除此以外,对细胞及组织培养中的一些常用概念有了较为深刻的理解,这主要包括体外培养、贴壁培养、悬浮培养等等。
综合这些概念,使得我在每次做实验之后不仅对操作有着较为深的印象,而且对每次实验的原理有了深刻的理解,也就是说在知道如何做的同时,也明确了为什么这样做,这样会在今后操作生疏的时候避免不必要的错误。
总结起来,细胞及组织培养实验不仅仅像其它实验一样让我获得了相应实验技能的提高,并且巩固了我细胞生物学和组织培养技术的基本理论。
细胞培养技术心得体会范文细胞培养技术是现代生物科学研究中非常重要的实验技术之一,它可以使科研人员对细胞进行体外培养和研究。
在我进行细胞培养技术学习的过程中,我深深感受到了它的重要性和应用的广泛性。
下面是我对细胞培养技术的一些心得体会。
首先,细胞培养技术是一门基础的实验技术。
在进行任何与生物学相关的实验研究时,细胞培养技术都是不可或缺的。
通过细胞培养技术,科研人员可以获得大量的特定类型细胞,并对其进行后续的实验操作。
比如,通过细胞培养技术,可以获得肝细胞、肺细胞等特定细胞,然后可以对这些细胞进行药物检测、基因转染等实验,从而研究细胞的生命活动和相关机制。
因此,细胞培养技术是生物学等学科的基础。
其次,细胞培养技术对实验操作的要求非常高。
在进行细胞培养的过程中,需要严格控制培养液的成分、温度、湿度、CO2浓度等多个参数,以保证细胞能够正常生长和繁殖。
同时,需要注意培养器具的消毒和无菌操作,以避免培养过程中的细菌和真菌污染。
因此,细胞培养技术对科研人员的实验技术和操作规范要求非常高,这也是我在学习过程中深受启发的地方。
另外,细胞培养技术需要耐心和细心。
由于细胞生长和繁殖的周期相对较长,所以在进行细胞培养实验时,需要耐心等待细胞的生长和繁殖。
此外,由于细胞对环境的变化非常敏感,稍有不慎可能导致细胞的死亡或繁殖异常。
因此,细胞培养技术需要科研人员具备细心和耐心的品质,随时观察和调整培养条件,以保证实验的顺利进行。
此外,细胞培养技术也存在一定的风险。
细胞培养液中的成分和培养条件可能会对细胞产生毒性影响,导致细胞的死亡或繁殖异常。
此外,细胞也可能会被真菌、细菌等微生物污染,从而影响实验结果。
因此,在进行细胞培养实验时,需要对培养液和培养条件进行严格控制和检测,以降低实验风险。
细胞培养技术不仅在科研领域中有广泛应用,在医学领域也有重要的应用价值。
通过细胞培养技术,可以获得人体细胞,并进行药物筛选和毒理学评价等实验。
动物细胞培养·心得在学习动物细胞培养的过程中,我了解到是动物细胞工程中最常用的技术手段,而且动物细胞培养技术是其他动物细胞工程技术的基础点,细胞培养是生物医学中一项重要技术,应用较为广泛,目前已渗透到细胞生物学、生物化学、临床检验学等多个领域。
在这次PPT 制作中,我对无脊椎动物和脊椎动物两大领域细胞培养取得的进展及应用作了较为详细的了解,并在此基础上探讨了动物细胞培养存在的问题以及未来的发展方向。
为相关领域研究者探讨其他种类细胞系的建立及筛选合适的细胞系培养方法作为理论的参考依据我了解到历史上组织培养技术创建于 18 世纪末,之后于 1907 年美国生物学家Harrison在无菌条件下,以淋巴液为培养基在试管中培养蛙胚神经组织宣告成功后,才逐渐发展成为一种从体内组织取出细胞,模拟体内生存环境,在无菌、适当温度及酸碱度和一定营养条件下,使其生长繁殖并维持结构和功能的实验技术。
这种技术为细胞学、遗传学、病毒学、免疫学的研究和应用做出了重要贡献。
特别是随着近年来现代生物科学领域的迅速拓展,各种分子生物学实验诸如核移植、细胞杂交、DNA 介导的基因转移等,都是借助细胞培养技术而得以实现的。
然而,在种类繁多的动物世界里,细胞培养实验技术的发展并不均衡,构建动物细胞培养体系的研究效率和效果上也存在较大的局限性。
而动物细胞培养,在1907年,哈里森(Harrison)在无菌条件下用淋巴液作培养基,培养蛙胚神经组织存活数周,并观察到神经细胞突起的生长过程,由此创建了盖片覆盖凹窝玻璃悬滴培养法,奠定了动物组织体外培养的基础。
之后,又有人将悬滴培养法改良为双盖片培养,提高了传代效率并减少了污染;1923年,卡雷尔(Carrel)设计了卡氏瓶培养法,扩大了组织生存空间。
1951年,厄尔(Earle)发明了体外培养动物细胞的人工合成培养基。
1951年,波米拉(Pomerat)设计了灌流小室,使细胞生活在不断更新的培养液中,便于作显微摄影和细胞代谢的研究。
第1篇一、前言细胞培养技术作为生物技术领域的基础性技术,在医学、生物学、制药等多个领域发挥着重要作用。
作为细胞培养员,我在过去的工作中,不仅积累了丰富的实践操作经验,也深刻体会到了细胞培养技术在科研和产业中的重要性。
现将我的工作总结如下:一、工作内容1. 细胞培养操作(1)细胞复苏:按照标准操作流程,对冻存细胞进行复苏,确保细胞活力。
(2)细胞传代:根据细胞生长状态,进行细胞传代,保证细胞数量。
(3)细胞冻存:将细胞按照一定比例分装,进行冻存,以便后续实验需求。
(4)细胞培养条件调控:控制温度、湿度、二氧化碳浓度等,确保细胞生长环境稳定。
(5)细胞培养质量监控:定期检测细胞活力、生长状态等,确保细胞质量。
2. 细胞实验(1)细胞实验设计:根据实验目的,设计实验方案,包括实验材料、实验方法、实验步骤等。
(2)细胞实验操作:按照实验方案,进行细胞实验操作,包括细胞接种、培养、处理、检测等。
(3)实验数据记录与分析:对实验数据进行记录、整理、分析,得出实验结论。
3. 实验室管理(1)实验室环境维护:保持实验室干净、整洁,确保实验环境安全。
(2)实验室仪器设备维护:定期检查、保养实验仪器设备,确保其正常运行。
(3)实验室耗材管理:合理采购、使用实验室耗材,降低成本。
二、工作心得1. 严谨的工作态度细胞培养员的工作要求严谨,从细胞复苏到实验操作,每一个环节都关系到实验结果的准确性。
因此,在工作中,我始终保持严谨的态度,严格按照操作规程进行实验,确保实验数据的可靠性。
2. 持续学习,提升技能细胞培养技术不断更新,作为细胞培养员,我深知自己需要不断学习,提升自己的技能。
在工作中,我积极参加各类培训,学习新的实验技术和方法,提高自己的业务水平。
3. 团队协作,共同进步细胞培养员的工作往往需要团队协作完成,我深知团队的力量。
在工作中,我与同事们相互支持、相互学习,共同解决实验中的问题,共同提高。
4. 注重细节,追求完美细胞培养实验过程中,细节决定成败。
细胞培养实验个人心得体会细胞培养实验个人心得体会细胞培养是一项常见且重要的实验技术,广泛应用于生物医学研究、药物筛选和生物工程等领域。
通过细胞培养,我们可以观察到细胞的生长、增殖和分化等现象,以及细胞对外界环境的反应。
在进行细胞培养实验的过程中,我积累了许多宝贵的经验和体会。
首先,细胞培养前要做好实验准备工作。
在进行细胞培养实验之前,我首先要检查培养基、培养器具和试剂等是否准备充足。
培养基的种类多种多样,不同类型的细胞需要使用不同的培养基。
试剂的质量和保存状态则直接影响实验结果的准确性。
此外,还要将培养器具进行灭菌处理,以防止细菌和真菌污染。
其次,在细胞培养中要严格遵守无菌操作规范。
无菌操作是细胞培养实验的重中之重。
一旦发生污染,会对细胞生长和试验结果产生不良影响。
因此,在培养器具操作前,我会进行90%酒精消毒和紫外线辐照消毒。
手套、口罩、帽子、防护眼镜等个人防护用具也不能缺少。
同时,在实验进行过程中,注意避免胶皮塞和吸管口接触空气,避免细胞培养盘或培养瓶的盖子长时间离开培养器。
只有严格遵守无菌操作规范,才能保证细胞培养实验的可靠性。
然后,在细胞培养实验中,控制细胞密度也是非常重要的。
细胞密度过高会导致养分不足,细胞密度过低则会导致细胞死亡和生长缓慢。
因此,在进行细胞传代和细胞处理时,我会根据实验需要,合理控制细胞的密度。
一般来说,细胞密度应在80%至90%之间,这样既可保证细胞的生长和增殖,又可避免过多细胞的黏连和无效分化。
此外,细胞培养实验中还需要合理利用显微镜进行观察。
显微镜是观察细胞形态和细胞数量变化的重要工具。
我会调整显微镜的光源和焦距,使得观察到的细胞更加清晰和准确。
同时,要耐心细致地观察细胞的变化,及时记录细胞的形态和数量,为后续实验提供准确的数据支持。
最后,我认识到细胞培养实验需要具备一定的耐心和细心。
细胞是非常微小和脆弱的,细胞培养实验的成功与否往往需要多次实验和反复尝试。
有时,可能会遇到实验前期没有注意的小问题,导致整个实验的失败。
目录
293和293T
293T细胞的培养心得293T细胞的培养与传代Jurcat细胞的传代
悬浮细胞培养方法Jurcat细胞培养方法
293T细胞的培养心得
点击次数: 12 发表于:2008-08-24 23:25转载请注明来自丁香园
来源:丁香园
293T细胞差点被我养死,幸好我又将它起死回生,一点心得。
细胞传代:当细胞在细胞培养瓶内长满达到80%时就要传代,一传二,24小时后再传代。
48小时传就不好了,如果在24小时后细胞没有长到80%,应该换新的培养基,不然,培养基变黄,细胞脱落。
细胞消化:将细胞培养瓶竖立放置,吸走培养基,如果培养基中的脱落细胞较多,说明细胞现在很容易脱落,只要加入1ml的PBS+EDTA(0.02%),来回轻微晃动培养瓶直到细胞完全脱落,加入10mlMEM(10%杭州四季青胎牛血清),混匀,不能吹打,分装2瓶,如果细胞没长满就脱落,则只需加入5mlMEM,不分装。
如果培养瓶中的细胞贴壁较牢固,培养基上清没有细胞脱落碎片,且细胞长满达到80%以上,吸走培养基,加入5ml 的PBS+EDTA(0.02%),迅速轻微晃动,竖立培养瓶,吸走,加入1ml0.05%胰酶,37度消化不超过3min,细胞完全消化脱壁,取出加入10ml培养基轻微吸打混匀,分装2瓶。
培养基:MEM(GIBCO)+10%胎牛血清(杭州四季青)+双抗
293T细胞的培养与传代
点击次数: 24 发表于:2008-08-25 20:47转载请注明来自丁香园
来源:丁香园
293细胞是转染腺病毒E1A基因的人肾上皮细胞系,293T细胞由293细胞派生,同时表达SV40大T抗原,含有SV40复制起始点与启动子区的质粒可以复制。
大家注意293T细胞的一个重要特性:室温下不贴壁,但37度时可以重新贴壁。
我的293T细胞时老板从美国千里迢迢带回来的,当时正是冬天,老板把瓶子放在大衣口袋里在飞机上折腾了两天,等拿到实验室已经看不到贴壁的细胞了。
我以为在外面这么久细胞可能已经冻死了,肯定没救了。
但本着死马当活马医的想法在培养箱里放了一个星期,还是不见起色。
正准备丢的时候,一次上网查293T细胞的特性时看到:“室温下不贴壁,但37度时可以重新贴壁”。
如获至宝,赶紧跑到实验室在显微镜下仔细寻找,竟然真的发现少量贴壁细胞,后来经过我们的细心呵护,这些细胞终于活了下来。
通过这个也让我明白了一个道理,不到最后时刻不要轻言放弃。
言规正传,这个细胞我按照老板在美国的习惯处理:
用90%的DMEM+10%的胎牛血清培养37度培养箱。
这个细胞增殖很快,大概2-3天就要传代。
需要提醒的是:细胞贴壁很疏松,换液时注意不要用力摇晃培养瓶,否则有可能会把细胞摇下来。
细胞容易消化,我用0.02 g/L蛋白酶E消化半分钟就可以了。
要注意的是:消化下来的细胞容易成团,要吹打很久才能把细胞打开。
否则传代后细胞会成团生长,不均匀,影响试验结果。
Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞)的传代
点击次数: 46 发表于:2008-08-24 23:07转载请注明来自丁香园
来源:丁香园
Jurkat细胞(人外周血白血病T细胞),是一种悬浮细胞。
我的经验如下:
1、培养液:RPMI1640,15%小牛血清,2%Na2CO3,1%HEPES,青霉素100IU /1ml,庆大霉素100IU/ml;
2、培养条件:5%CO2,37度,30%湿度;
3、细胞复苏:要快速将冻存管放入37度水中,不断轻轻摇晃,直到细胞完全溶解,加入10ml左右的培养液,800~1000rpm,10分钟离心,之后倒掉液体,加入新的培养基就可以进行培养了;
4、细胞培养:起初进行传代时由于细胞刚刚复苏,长得比较慢,所以可以3~4天传一代,传过两代后,一般2~3天传一代,每次传代后在倒置显微镜下观察细胞形态,在传过几代合适的时候可以进行实验。
5、细胞冻存:1000rpm离心后,弃去液体,加入含有15%DMSO的冻存液,按下列顺序降温:室温→4℃(20分钟〕→冰箱冷冻室(30分钟)→低温冰箱(-80℃1小时)→液氮。
6、我在做细胞培养时的一些小经验:
(1)细胞培养箱在每使用1个月最好用酒精擦洗一次,这样可以减少污染;
(2)虽然说加样器放在紫外下照射会不准,但我们还是丢了一把1ml的加样器在超净台,没有拿出来过,我想这样也许会减少污染;
(3)小牛血清我们用的是国产的,所以在一开始的时候加了15%的小牛血清,但细胞总是长不好,后来摸索条件,把小牛血清的量调到了20%,细胞生长旺盛;
(4)HEPES虽然贵点,但加上去后细胞会长的不错;
(5)在超净台操作前要用0.1%的新洁尔灭或75%酒精擦手。
悬浮细胞培养方法求心得
点击次数: 226 发表于:2008-08-03 19:17转载请注明来自丁香园
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goingba网友的观点:
悬浮细胞最好养,不用消化,关于几天离一次心,要看你的细胞生长状态了,我养过血液肿瘤细胞,增值比较快。
我一般是第二天半量换液(加等量培养基后一分二),第三天若长得比较满,就离心换液。
若你不想每天都去管它,你可以把细胞密度中的相对稀一点(不能太稀,太细了细胞不好好长),可以2-3天换一次液(半量,不用离心),这要看细胞状
态,和你试验进度,若你急着用细胞,那就将细胞中密一点,天天换液,用胎牛血清,这样细胞会疯长的。
要是比较娇气的细胞,象RPMI-8226,一定要用胎牛血清,2-3天半量换液,依据细胞状态再离心换液,等细胞进入对数生长期了,养起来也就好养了。
若是正常人T 细胞,也要3-5天换一次液,最好3天的时候加入些新培养基,我曾经有一次1周忘了换液(因为T细胞增殖很慢,或者说在体外不给刺激基本不增殖,所以培养基的颜色不发生改变,但他也消耗营养),最后作流式发现细胞大部分凋亡和死亡了。
有关jurkat的培养方法
jurkat,就是1640 10%NBS,养,没什么特殊要求。
我是用培养皿在养jurkat,换液的时候不想293那样方便,每次都要离心。
但我听说离心多了对细胞不好,请问可有什么好办法不用离心也能换液的?谢谢!
建议你先看看细胞培养方面的书。
里面对悬浮细胞怎么培养说得很清楚。
悬浮细胞换液当然要离心,只要注意离心速度和时间,对细胞没什么影响。
谁说要震荡培养了?
我之前也是找了几本细胞培养的书,但是都没有悬浮培养细胞的具体方法。
能介绍下合适的书吗?谢谢了
悬浮细胞比贴壁细胞还要容易培养,换液过程中不需要消化, 只需要离心去上清,新鲜培养基重悬细胞沉淀,再进行培养就是了,培养过程中注意观察细胞状态,一般为晶莹剔透的,粘连在一起的状如葡萄串状,很容易吹散, 每天至少观察一次, 一般3天左右换液一次.。