活力测定

一、实验目的细胞活力是细胞生物学研究中非常重要的指标，能够反映细胞在特定条件下的生长、代谢和功能状态。

本实验旨在通过多种方法检测细胞活力，了解细胞在不同条件下的生长情况，为后续实验研究提供依据。

二、实验材料1. 细胞：人胚胎肾细胞（HEK293）2. 试剂：台盼蓝染色液、CCK-8试剂盒、Resazurin细胞活力检测试剂盒、ATP含量测定试剂盒、细胞培养液、培养基、PBS缓冲液等3. 仪器：显微镜、酶标仪、细胞计数板、细胞培养箱、超净工作台等三、实验方法1. 台盼蓝染色法（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）用PBS缓冲液洗涤细胞，加入适量的台盼蓝染色液，室温孵育5分钟。

（3）用PBS缓冲液洗涤细胞，观察细胞染色情况。

2. CCK-8试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。

（3）加入10μl CCK-8试剂，避光孵育2小时。

（4）用酶标仪检测450nm波长下的吸光度（OD值）。

3. Resazurin细胞活力检测试剂盒检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）弃去原培养液，加入100μl新鲜培养基。

（3）加入10μl Resazurin试剂，37℃孵育4小时。

（4）用酶标仪检测570nm和600nm波长下的吸光度（OD值）。

4. ATP含量测定法检测细胞活力（1）将HEK293细胞以1×10^5个/孔的密度接种于96孔板中，培养24小时后进行实验。

（2）弃去原培养液，加入100μl ATP含量测定试剂盒，室温孵育10分钟。

（3）用酶标仪检测560nm波长下的吸光度（OD值）。

四、实验结果与分析1. 台盼蓝染色法通过显微镜观察，活细胞不着色，死细胞被染成蓝色。

细胞活力检测方法
1. 代谢活性检测法：测定细胞内代谢产物的含量或分泌物的释放量，如MTT法、SRB法、LDH脱氢酶活性测定法等。

2. 流式细胞术：利用染色或荧光标记的抗体与特定的细胞表面分子结合，通过流式细胞术检测细胞状态。

3. 荧光显微镜：利用荧光探针或染色剂染色，通过显微镜观察细胞内部结构、代谢活性等。

4. 内源性酶活性测定法：测定细胞内特定酶的活性，如蛋白酶、酸性磷酸酶等。

5. 表型分析：通过观察细胞外形、大小、颜色等特征，评估细胞的生长状态。

6. 细胞周期分析：通过检测细胞的DNA含量，确定细胞的周期阶段。

7. 活细胞成像技术：如实时荧光成像技术，能够非侵入性地记录细胞活力变化的动态过程。

总之，细胞活力检测方法有多种，可以根据具体需要选择合适的方法。

植物硝酸还原酶（NR）活力测定（活体法）一、原理硝酸还原酶（NR）是植物氮素同化的关键酶，它催化植物体内的硝酸盐还原为亚硝酸盐,产生的亚硝酸盐与对–氨基苯磺酸（或对–氨基苯磺酰胺）及α–萘胺（或萘基乙烯二胺）在酸性条件下定量生成红色偶氮化合物。

其反应如下：生成的红色偶氮化合物在540nm波长下有最大吸收峰，可用分光光度法测定。

硝酸还原酶活性可由产生的亚硝态氮的量表示。

一般以Nμg·g-1·h-1为单位。

NR的测定可分为活体法和离体法。

活体法步骤简单，适合快速、多组测定。

离体法复杂，但重复性较好二、仪器与用具分光光度计；真空抽气泵（或20ml注射器筒）；天平；单面刀片；保温箱（或恒温水浴）；刻度试管（15ml）；移液管（5ml×2，2ml×8，1ml×2）。

三、试剂1. 亚硝酸钠标准液称取分析纯NaNO2 0.1000g水溶后定容至100ml，吸取5ml用水稀释定容至1000ml，即为每ml含NaNO2 5μg（亚硝态氮近似1μg/ml）的标准液。

2. 0.1mol/L pH7.5的磷酸缓冲液：K2HPO4 19.24g，KH2PO4 2.2g，加水溶解后定容至1000ml。

3. 1%（W/V）对-氨基苯磺酸溶液：称取10.0g加入250ml浓HCl中，用蒸馏水定容至1000ml。

4. 0.2%（W/V）α-萘胺溶液：称取2.0gα-萘胺溶于250ml冰醋酸中，用蒸馏水定容至1000ml。

5. 30%三氯乙酸溶液：75.0g三氯乙酸水溶后定容250ml。

6. KNO3（0.1mol/L）、异丙醇（1% V/V）、磷酸缓冲液（0.1mol/L）混合液：称10.10g KNO3溶于1000ml 0.1mol/L的磷酸缓冲液中，再加10ml异丙醇混匀。

四、方法1. 标准曲线制作取7支洁净烘干的15ml刻度试管按表13-1顺序加试剂，即配成0-2.0μg的系列标准亚硝态氮溶液。

抗冷测定发芽试验示意图
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二、活力指数测定
活力指数（VI）＝GI×S
式中： S----一定时期内幼苗长度（cm） 或幼苗重量（g）；GI----发芽指数。
三、平均发芽时间
MGT
(G t
Dt )
Gt
式中：Gt ----在不同时间的发芽数； Dt ----不同的发芽日数。
D 1天 2天 3天 G1 10 20 10 G2 20 10 10
五、抗冷测定
1、土壤卷法
五、抗冷测定
2、土壤盒法 取种子50粒，重复4次，播于装有3~4cm深潮湿土壤的盒内，覆土2cm， 10℃低温黑暗条件下处理7d， 转入适宜温度下交替光照培养。 玉米、水稻于30℃经3d；大豆、豌豆于25℃经4d，计算发芽率。 凡能形成正常幼苗的为高活力种子。
五、抗冷测定
MGT
2
101 20 2 103 2 10 20 10
1.75
四、复合逆境测定
复合逆境是将种子进行一种以上的逆境胁迫处理，然后转入适宜条件下进行发 芽。
将种子先在适温20~25℃下浸种48h，然后在2~5℃低温下浸种48h，给以种 子氧气不足和低温的逆境。
此法主要用于玉米、小麦种子。 小麦 48h 20℃，然后48h 2℃ 玉米 48h 25℃，然后48h 5℃
四、复合逆境测定
记录正常和不正常幼苗、不发芽种子。 正常幼苗分2组： （1）高活力（Hv）----幼苗高度大于最高的5株幼苗平均值×0.25 （2）中活力（Mv）----幼苗高度小于最高的5株幼苗平均值×0.25
种子批活力状况定义为：
80~100%正常幼苗Hv = 高活力种子批 48~79%正常幼苗Hv = 中等活力种子批