慢病毒系统简介及应用

慢使用操作指南慢使用操作指南1.慢简介1.1 定义：慢是一种特殊的，能够在细胞中长期存活并进行复制。

1.2 用途：慢广泛应用于基因转导、基因敲除和基因表达等实验研究中。

2.慢使用前准备工作2.1 实验室准备工作2.1.1 实验室空间准备：确保实验室内有足够的操作空间和合适的消毒设备。

2.1.2 材料准备：准备好所需的培养基、细胞培养物、慢载体等。

2.1.3 设备准备：确保离心机、冰箱等设备正常工作，并准备好相关的仪器和器材。

2.2 人员准备工作2.2.1 人员培训：对参与慢操作的人员进行培训，了解操作步骤和安全风险。

2.2.2 个人防护：提供必要的防护装备，如实验服、手套、面罩等。

3.慢操作步骤3.1 细胞培养3.1.1 细胞培养物准备：根据实验需求选择合适的细胞培养物，并进行细胞的预处理和培养。

3.1.2 细胞密度调整：根据实验要求，调整细胞培养物的密度，以保证细胞的正常生长。

3.2 慢感染3.2.1 慢载体注射：将慢载体注射到培养好的细胞中。

3.2.2 感染条件控制：根据实验需求，控制慢感染的时间、浓度和温度等条件。

3.3 细胞培养和检测3.3.1 细胞培养：将感染好的细胞进行培养，并观察细胞的生长状态。

3.3.2 细胞检测：使用相关实验方法，对感染细胞进行检测和分析。

4.实验安全措施4.1 操作环境控制：确保实验室内通风良好，避免慢的扩散和污染。

4.2 废液处理：将产生的废液经过正确处理，避免对环境和人体造成污染和伤害。

4.3 事故应急处理：在发生事故或意外情况时，立即采取应急措施，并及时报告相关人员。

5.附件本文档所涉及的附件，包括但不限于实验记录表格、实验数据文件等。

6.法律名词及注释6.1 慢：指一种具有长周期和潜伏期的。

7.结束语感谢您阅读本文档，如有任何疑问或意见，请随时与我们联系。

慢病毒的筛选及其应用研究慢病毒是一种慢性感染病毒，能够长期存在于病体内。

近些年来，随着分子生物学和基因工程技术的发展，慢病毒系统成为了非常重要的遗传学研究工具。

在疾病治疗、基因治疗以及细胞基因工程等方面被广泛应用。

本文将从慢病毒的生物学特性、筛选方法和应用进行讨论。

一、慢病毒的生物学特性1. 慢病毒能够在细胞中进行高效的基因转移慢病毒在感染宿主后，能够将基因组拼接到宿主基因组中，使得转录后的RNA成为宿主基因组的一部分。

因此，慢病毒能够实现高效的基因转移。

2. 慢病毒的基因组结构稳定慢病毒的基因组结构是稳定的、不容易受到外部干扰。

这种稳定性使得慢病毒能够在细胞分裂和基因组修复等过程中，保持对基因组的整合。

3. 慢病毒能够进行长期的基因表达慢病毒在宿主细胞中可以长期存在，能够确保基因的表达不受时间和局部环境的影响。

这为基因治疗和细胞工程提供了广泛的可能性。

二、慢病毒的筛选方法慢病毒的生成和筛选过程涉及多种技术和方法，主要包括以下步骤：1. 慢病毒载体构建慢病毒载体是一种能够携带目标基因进入宿主细胞并在宿主基因组中长期存在的一种质粒。

通过基因工程技术，在载体上构建目标基因以及慢病毒相关基因。

2. 慢病毒包装将慢病毒载体构建到特定的包装细胞中，在细胞中表达出慢病毒相关基因，从而使得载体在细胞内部生成慢病毒病毒颗粒。

3. 慢病毒感染使用合适的方法将慢病毒颗粒导入到宿主细胞中进行感染。

4. 慢病毒筛选通过检测转染后的细胞中被慢病毒携带的目标基因表达，来筛选出携带目标基因的慢病毒。

5. 慢病毒纯化通过慢病毒包装细胞培养和病毒粒子收集，对慢病毒进行纯化，为后续实验提供高质量的慢病毒病毒颗粒。

三、慢病毒的应用1. 基因治疗慢病毒作为基因转移载体，被广泛应用于基因治疗。

他能够将治疗基因导入到病人的细胞中，进行基因修正和基因治疗，从而治疗遗传疾病，如肌萎缩侧索硬化症，糖尿病和细胞免疫缺陷病毒病等。

2. 细胞基因工程在体外进行细胞工程技术，通过慢病毒载体导入外源基因，改变细胞的性质和功能，进行基因编辑等。

慢病毒在病毒学研究中的应用随着科技的不断发展和进步，病毒学研究也在不断地深入和扩展。

慢病毒的发现和应用，为病毒学研究提供了新的思路和方法。

本文将探讨慢病毒在病毒学研究中的应用。

一、慢病毒是什么慢病毒是一种病毒，属于逆转录病毒的一类。

其基因组为RNA，但可以通过逆转录酶转录成为DNA。

慢病毒具有很强的侵染性，可以感染多种细胞，包括神经细胞和免疫细胞等。

慢病毒具有长周期的生命周期，可以在细胞中长期存在，慢慢地对细胞进行破坏。

慢病毒感染可以导致一些慢性疾病的发生和发展，如艾滋病等。

二、慢病毒在病毒学研究中的应用1. 基因治疗慢病毒可以用于基因治疗。

慢病毒感染后可以将基因序列导入细胞，并在细胞内进行表达和复制。

这为基因治疗提供了理论基础和实验依据。

因为慢病毒可以继续存在于细胞内，从而使导入的基因序列长期保持在细胞内，具有稳定和持久的表达效果。

而且慢病毒也可以甄别目标细胞，靶向进行基因传递。

这可以大大提高基因治疗的效果和成功率。

2. 疫苗开发慢病毒可以用于疫苗的开发。

疫苗的免疫机制是在免疫细胞中产生对病原体的免疫反应，并产生免疫记忆。

慢病毒可以被作为病毒载体，将目标病原体的基因序列导入免疫细胞中，使其产生对病原体的反应。

这样，就可以通过慢病毒制备出特异性疫苗，来预防和治疗一些病原体感染导致的疾病，如乙型肝炎等。

3. 疾病模型研究慢病毒可以用于疾病模型的建立和研究。

慢病毒的侵入和感染能力很强，可以模拟一些疾病在细胞和组织层面的发展和变化。

例如，慢病毒可以在神经细胞中表达外源基因，模拟一些神经退行性疾病的发生和发展过程。

这有助于揭示疾病的发生机制和治疗方法。

三、慢病毒在病毒学研究中的挑战和应对1. 安全性问题慢病毒具有侵染性和导入基因序列的能力，因此需要对其进行严格的安全性检测和监测。

在疫苗和基因治疗等方面的应用中，需要确保慢病毒对人体无害，不会导致不良反应和病原体的突变产生。

2. 菌株选择问题在慢病毒的应用过程中，需要选择最适合应用的菌株，以确保其对细胞和组织的侵染和基因导入效果最佳。

慢病毒使用手册慢病毒（Lentivirus）是一类非常常见的病毒，它属于逆转录病毒家族。

与其他病毒相比，慢病毒具有一些特殊的特征，使其在生物研究领域和基因治疗等应用中变得非常重要。

本文将介绍慢病毒的基本特征、制备和使用方法，以及慢病毒在基因转染、基因表达和基因治疗中的应用。

一、慢病毒的基本特征慢病毒是一类具有外包膜的病毒，其基因组由一条单链正义RNA组成。

慢病毒具有较大的基因载量能力，可携带长达9kb的外源DNA序列。

另外，慢病毒具有高度的细胞性选择性，能够感染多种哺乳动物细胞，并将外源基因稳定地集成到细胞基因组中。

二、慢病毒的制备方法慢病毒的制备包括构建慢病毒载体和包装慢病毒。

构建慢病毒载体通常采用三元质粒系统，其中包括基因载体、包装载体和包衣载体。

基因载体负责携带外源基因序列，而包装载体负责表达与慢病毒复制有关的基因，如gag、pol和env等。

包衣载体则负责表达包衣蛋白，使慢病毒能够正常装配和释放。

包装慢病毒的方法通常采用转染细胞的方式。

将构建好的慢病毒载体与包装载体和包衣载体一同转染到特定的细胞中，通过包装载体表达的基因来启动慢病毒的复制和包装过程。

经过适当的培养和处理后，可以获得高效包装的慢病毒颗粒。

三、慢病毒的使用方法慢病毒主要通过基因转染、基因表达和基因治疗等方式应用于生物研究和医学领域。

1. 基因转染：慢病毒可以用于将外源基因导入到细胞中，实现基因转染。

通过选择性的感染特定细胞或细胞系，可以研究和探索特定基因的功能和调控机制。

2. 基因表达：慢病毒可以被用作基因表达工具。

外源基因在细胞内被稳定地整合到基因组中，从而实现长期稳定的基因表达。

慢病毒可以用于产生稳定的细胞株，并通过基因敲入或敲除等方法研究基因功能。

3. 基因治疗：慢病毒在基因治疗中的应用非常广泛。

通过将修正后的基因导入到患者体内的细胞中，可以实现对某些慢病毒引起的遗传疾病的基因治疗。

此外，慢病毒载体还可以用于制备疫苗和用于癌症免疫治疗等领域。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒的基本原理和应用慢病毒（Slow Virus）是指一种具有长期潜伏期或长期进展的病毒，在宿主体内繁殖较慢，而病程较长的感染性疾病。

慢病毒以肝炎病毒、感能病毒、人免疫缺陷病毒（HIV）等为代表。

慢病毒是一种特殊的病毒，其感染机制、致病机理和治疗方法都与其他病毒不同。

一、慢病毒的基本原理慢病毒的基本原理可以简单地分为以下几个方面。

1. 慢病毒的潜伏期长。

以艾滋病毒为例，患者感染后，可潜伏多年，甚至10年以上，其间没有任何症状表现。

这就给治疗患病的时机带来了难度，也使得艾滋病具有了很强的传染性。

2. 慢病毒可以长期影响人体的免疫系统。

慢病毒比其他病毒更加复杂，可以在人体内长期生存。

慢病毒通过影响人体的免疫系统，消耗人体的免疫力，使得患者陷入易感染、易发病、病程较长的状态。

3. 慢病毒的感染难以被查明。

由于慢病毒繁殖较慢，对人体产生的毒性较小，因此在感染初期难以快速检测出来。

这也是慢病毒传染性强的原因之一。

二、慢病毒的应用虽然慢病毒对人体的危害不小，但科学家也发现慢病毒也具有较大的疗效。

下面我们来看看慢病毒的应用领域。

1. 肿瘤治疗。

慢病毒呈现的长期作用和稳定的表达是其治疗肿瘤的重要特点之一。

利用载了有效目标基因的慢病毒病毒载体，经过基因修饰而改变其发病机制，可以将慢病毒载体作为介导治疗的载体，将其放置在肿瘤细胞中，从而减少肿瘤细胞的生长。

2. 神经退行性疾病的治疗。

神经退行性疾病是指一类慢性神经系统疾病，常常由于神经元死亡导致，如阿尔茨海默症、帕金森病等。

慢病毒通过基因修饰可帮助人体产生某种神经元离子通道，通过将离子通道放在感觉神经元和中枢神经元上，减少神经元死亡，保护人体神经系统的健康。

3. 病毒基因敲除治疗。

利用了慢病毒的基因敲除能力，将慢病毒转化成人体行为控制器，将慢病毒病毒载体作为载体，递送到患者体内，进行病毒治疗。

通过这种治疗方式，可以更加有效地处理患病问题，避免上述疾病的出现，并显著提高生命质量。

慢病毒包装原理介绍 HUA system office room 【HUA16H-TTMS2A-HUAS8Q8-HUAH1688】慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

慢病毒包装原理介绍慢病毒包装系统简介及应用、慢病毒包装简介及其用途慢病毒(Lentivirus )载体是以HIV-1 (人类免疫缺陷I型病毒)为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA半衰期短，体外合成siRNA对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达siRNA的载体，然后转移到细胞内转录siRNA的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的siRNA表达载体中，是由RNA聚合酶川启动子来指导RNA合成的，这是因为RNA聚合酶川有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA不会带poly A 尾。

当RNA聚合酶川遇到连续4个或5个T时，它指导的转录就会停止，在转录产物3'端形成1~4个U。

U6和H1 RNA启动子是两种RNA聚合酶川依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达?21ntRNA和?50ntRNA茎环结构(stem loop )。

在siRNA表达载体中，构成siRNA的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成siRNA ;也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于RNA聚合酶川启动子和4?5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4个U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA。

慢病毒使用操作指南慢病毒是一种常用的实验工具，广泛应用于细胞和分子生物学研究。

本文档旨在提供慢病毒使用的操作指南，帮助研究人员更好地利用慢病毒进行实验研究。

第一部分：慢病毒基本知识1. 什么是慢病毒？慢病毒是一种具有RNA基因组的病毒，属于反转录病毒。

它能够将自身的RNA基因组逆转录成DNA，再与宿主细胞的基因组融合，长期稳定地存在于宿主细胞中。

2. 利用慢病毒进行基因转染的优势相比其他常用的基因转染方法，慢病毒具有以下优势：- 高效性：慢病毒能够高效地转染多种类型的细胞，包括非分裂细胞。

- 长期稳定性：慢病毒转染的基因能够长期稳定地存在于宿主细胞中。

- 遗传稳定性：慢病毒转染的基因可以遗传给后代细胞，因此适用于长期实验研究。

第二部分：慢病毒使用的关键步骤1. 选择合适的慢病毒载体慢病毒载体是慢病毒的基础构建单元，其中包含转录启动子、报告基因等必要的元件。

根据实验需要选择合适的载体。

2. 包装慢病毒慢病毒的包装是将慢病毒载体与包装载体共转染至特定细胞株，通过包装载体中的包装酶，将慢病毒的RNA基因组逆转录成DNA，形成可复制的慢病毒。

3. 提取慢病毒经包装后的细胞培养基中含有包装好的慢病毒。

可通过超速离心等方法，将细胞培养物离心，提取慢病毒。

4. 病毒滴定病毒滴定是用来确定病毒滴度的重要步骤。

通过适当稀释提取的慢病毒，将其感染指定细胞株，计算出感染单位的浓度。

5. 慢病毒感染及筛选将提取的慢病毒添加至目标细胞中，通过细胞培养和筛选，筛选出具有所需基因的细胞株。

第三部分：慢病毒使用的注意事项1. 安全操作慢病毒具有一定的传染性，进行实验时需要遵守生物安全操作规范，佩戴一次性手套、口罩等个人防护装备，避免直接接触慢病毒。

2. 避免交叉感染实验室中使用慢病毒时，应尽可能避免交叉感染。

定期对实验室环境进行消毒，使用一次性材料，避免共享器械等措施可以减少交叉感染的风险。

3. 合理控制病毒滴度对于不同类型的细胞，需要确定合适的病毒滴度，以避免过度感染或感染不足的情况。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（Lentivirus ）载体是以HIV-1 （人类免疫缺陷I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的siRNA 半衰期短，体外合成siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的siRNA 表达载体中，是由RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导RNA 合成的，这是因为RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的RNA 不会带poly A 尾。

当RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续4 个或5 个T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物3' 端形成1~4 个U 。

U6 和H1 RNA 启动子是两种RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA 和～50ntRNA茎环结构（stem loop ）。

在siRNA 表达载体中，构成siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于RNA 聚合酶Ⅲ启动子和4 ～5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和4 ～5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有 1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在siRNA 表达载体中，构成 siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成siRNA 。

慢病毒包装系统简介及应用一、慢病毒包装简介及其用途慢病毒（ Lentivirus ）载体是以 HIV-1 （人类免疫缺陷 I 型病毒）为基础发展起来的基因治疗载体。

区别一般的逆转录病毒载体，它对分裂细胞和非分裂细胞均具有感染能力。

慢病毒载体的研究发展得很快，研究的也非常深入。

该载体可以将外源基因有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达。

在感染能力方面可有效地感染神经元细胞、肝细胞、心肌细胞、肿瘤细胞、内皮细胞、干细胞等多种类型的细胞，从而达到良好的的基因治疗效果，在美国已经开展了临床研究，效果非常理想，因此具有广阔的应用前景。

目前慢病毒也被广泛地应用于表达 RNAi 的研究中。

由于有些类型细胞脂质体转染效果差，转移到细胞内的 siRNA 半衰期短，体外合成 siRNA 对基因表达的抑制作用通常是短暂的，因而使其应用受到较大的限制。

采用事先在体外构建能够表达 siRNA 的载体，然后转移到细胞内转录 siRNA 的策略，不但使脂质体有效转染的细胞种类增加，而且对基因表达抑制效果也不逊色于体外合成 siRNA ，在长期稳定表达载体的细胞中，甚至可以发挥长期阻断基因表达的作用。

在所构建的 siRNA 表达载体中，是由 RNA 聚合酶Ⅲ启动子来指导 RNA 合成的，这是因为 RNA 聚合酶Ⅲ有明确的起始和终止序列，而且合成的 RNA 不会带 poly A 尾。

当 RNA 聚合酶Ⅲ遇到连续 4 个或 5 个 T 时，它指导的转录就会停止，在转录产物 3' 端形成 1~4 个U 。

U6 和 H1 RNA 启动子是两种 RNA 聚合酶Ⅲ依赖的启动子，其特点是启动子自身元素均位于转录区的上游，适合于表达～ 21ntRNA 和～ 50ntRNA 茎环结构（ stem loop ）。

在 siRNA 表达载体中，构成siRNA 的正义与反义链，可由各自的启动子分别转录，然后两条链互补结合形成 siRNA ；也可由载体直接表达小发卡状 RNA(small hairpin RNA, shRNA)，载体包含位于 RNA 聚合酶Ⅲ启动子和 4 ～ 5 T转录终止位点之间的茎环结构序列，转录后即可折叠成具有1~4 个 U 3 ' 突出端的茎环结构，在细胞内进一步加工成 siRNA 。