硫酸铵沉淀蛋白质方法

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析法The manuscript was revised on the evening of 2021蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼；绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀；还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长……幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。

本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。

-------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一我是超级蜘蛛精看我有劲儿不？冲啊，我是美国队而我是一只冷静的科研小蜗牛这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。

硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。

蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。

每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。

硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。

硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。

各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。

在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。

（1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液；例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH到。

饱和硫酸铵析出的蛋白质一、引言饱和硫酸铵（Ammonium Sulfate, (NH4)2SO4）是一种常用的沉淀试剂，可用于分离和纯化蛋白质。

通过改变溶液中的盐浓度，可以使蛋白质在特定的饱和度下发生沉淀，从而实现对蛋白质的分离和纯化。

本文将详细介绍饱和硫酸铵析出法在蛋白质分离中的应用原理、步骤以及注意事项。

二、原理饱和硫酸铵析出法利用了蛋白质在高盐浓度下容易发生沉淀的特性。

在饱和硫酸铵溶液中，硫酸铵分子会与蛋白质中的水分子竞争结合，从而导致蛋白质发生改变，使其结构发生变化。

当硫酸铵浓度达到一定的饱和度时，蛋白质将沉淀出来。

三、步骤饱和硫酸铵析出的蛋白质的步骤如下所示：1.准备工作：将所需的试剂和设备准备齐全。

试剂包括硫酸铵和待析出蛋白质的溶液。

设备包括离心管、离心机、冷藏设备等。

2.设定分离条件：根据待析出蛋白质的特性和要求，确定合适的硫酸铵浓度范围。

通常情况下，硫酸铵的饱和度为30%至90%之间。

3.配制硫酸铵溶液：根据所设定的分离条件，称取适量的硫酸铵，加入适量的溶剂（一般为纯水或缓冲液）中，并充分溶解。

4.添加硫酸铵溶液：将待析出蛋白质的溶液加入到硫酸铵溶液中，并充分混合。

注意，这个过程需保持低温，可以放在冷藏设备中。

5.离心沉淀：将溶液离心，以分离蛋白质的沉淀。

离心的条件可以根据具体的实验要求进行调整，一般来说，离心速度为10000-15000rpm，离心时间为10-20分钟。

6.分离蛋白质：将上一步离心得到的沉淀与上清分离。

可以通过倒置离心管将上清液倒出，或通过吸取上清液来分离蛋白质。

7.洗涤沉淀：使用适当的洗涤缓冲液洗涤沉淀，以去除杂质。

洗涤次数和洗涤缓冲液的浓度和体积需要根据具体的实验要求来确定。

8.蛋白质的溶解或储存：将洗涤后的蛋白质溶解在适合的缓冲液中，以便后续分析或储存。

根据需求，可以在储存前对蛋白质进行浓缩和纯化等处理。

四、注意事项1.操作过程中保持低温，以防止蛋白质的降解和变性。

一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。

用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。

高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。

这种方法称之为盐析。

盐浓度通常用饱和度来表示。

硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。

二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。

各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。

通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。

（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。

用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。

此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。

（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。

弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。

沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。

蛋白质的沉淀的方法
蛋白质的沉淀方法主要有酒精沉淀法、酸沉淀法和盐沉淀法。

1. 酒精沉淀法：将含有蛋白质的溶液中加入适量的冷酒精，使浓度达到
70%-90%，静置一段时间后，可观察到蛋白质的沉淀。

酒精沉淀法适用于分离较大分子量的蛋白质。

2. 酸沉淀法：将含有蛋白质的溶液中加入适量的稀酸（如醋酸、盐酸等），使pH值下降到4以下，蛋白质会失去水溶性，从而沉淀。

酸沉淀法适用于分离亲水性较弱的蛋白质。

3. 盐沉淀法：将含有蛋白质的溶液中加入适量的盐（如氯化铵、硫酸铵等），使其浓度达到饱和或超饱和，蛋白质会与盐结合形成复合物，从而沉淀。

盐沉淀法适用于分离亲水性较强的蛋白质。

在沉淀过程中，可以通过离心等方法加快沉淀的速度和提高沉淀的纯度。

另外，沉淀后的蛋白质可以通过洗涤和溶解等步骤进一步纯化。

蛋白质沉淀的方法
蛋白质沉淀是一种通过加入沉淀剂使溶液中的蛋白质沉淀下来的方法，以下是几种常用的蛋白质沉淀方法：
1. 盐析法：通过加入高浓度的盐溶液，如氯化铵或氯化铵硫酸铵混合溶液，使溶液中的蛋白质沉淀下来。

由于盐浓度的变化会改变蛋白质的溶解度，从而使蛋白质沉淀出来。

2. 酸沉淀法：通过加入弱酸，如醋酸或盐酸，使溶液中的蛋白质变性，从而导致蛋白质沉淀。

酸沉淀法常用于从乳液、血清或细胞裂解液中提取蛋白质。

3. 醇沉淀法：通过加入有机溶剂，如乙醇或异丙醇，使溶液中蛋白质与水产生排斥作用，从而使蛋白质沉淀下来。

醇沉淀法常用于从水溶性蛋白质中提取。

4. 聚合物沉淀法：通过加入聚合物，如聚乙二醇，在溶液中形成络合物，从而使蛋白质沉淀。

聚合物沉淀法常用于从复杂的样品中分离蛋白质。

5. 冷冻沉淀法：通过将溶液在低温下冷冻，使蛋白质变性和聚集，然后离心沉淀。

冷冻沉淀法常用于从细胞裂解液或组织提取物中分离蛋白质。

这些方法可以根据实验需求和样品类型进行选择和优化，以获得最佳的蛋白质沉淀效果。

硫酸铵沉淀原理
硫酸铵沉淀法的基本原理:这是一种从大量粗制品中提取并部分提纯蛋白质的方法。

主要是通过将免疫球蛋白从试样中分离，通常采用的方法是：高浓度的盐离子蛋白溶液和蛋白质的水分子发生竞争，导致其水和蛋白质分子减弱，通过溶解度从溶液沉淀出来。

因不同的蛋白质溶解度相同，所以用相同的盐溶液进行沉淀，称为盐析。

盐的含量一般用饱和度来表示，而硫酸铵由于具有较高的溶解度，较低的温度系数，容易引起蛋白的变性，因此得到广泛的应用。

硫酸铵沉淀法
硫酸铵沉淀法（Ammonium sulfate precipitation）是一种常用的蛋白质纯化方法。

其原理是利用硫酸铵对蛋白质的沉淀作用进行蛋白质的分离和纯化。

硫酸铵对蛋白质的沉淀作用是由于硫酸铵对蛋白质中的部分疏水性氨基酸侧链产生物理分离作用的结果。

硫酸铵沉淀法的步骤如下：
1. 加入适量的硫酸铵至蛋白质溶液中，使溶液中的硫酸铵浓度达到一定值，使蛋白质沉淀。

2. 用离心将沉淀分离出来。

3. 溶解沉淀并用适当的缓冲液进行层析纯化。

硫酸铵沉淀法的优点是简单易行，沉淀效果好，适用范围广，并且可以采用多次沉淀提高纯化程度。

缺点是会降低蛋白质的活性并且会引入硫酸铵等离子体，可能对下游应用造成影响。

1. 了解蛋白质的沉淀现象及其原理；2. 掌握几种常见的蛋白质沉淀方法；3. 分析蛋白质沉淀过程中的影响因素。

二、实验原理蛋白质在溶液中形成胶体，具有稳定性和可逆性。

在一定条件下，蛋白质胶体发生凝聚，形成沉淀。

蛋白质沉淀的原因主要有：电解质的作用、pH值的变化、温度的影响、有机溶剂的作用等。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 鸡蛋清溶液- 硫酸铵溶液- 乙醇- 氯仿- 玻璃棒- 离心管- pH试纸- 移液管- 烧杯- 水浴锅2. 实验仪器：- pH计- 离心机- 恒温水浴锅1. 电解质沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，加入等体积的硫酸铵溶液，充分搅拌；（2）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（3）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。

2. pH值沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，用pH计测定pH值；（2）逐滴加入稀盐酸或氢氧化钠溶液，调节pH值至4.7；（3）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（4）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。

3. 温度沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，置于恒温水浴锅中；（2）分别在不同温度下（如30℃、50℃、70℃）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（3）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。

4. 有机溶剂沉淀法（1）取鸡蛋清溶液5mL，加入等体积的乙醇；（2）观察溶液颜色变化，记录沉淀形成时间；（3）将混合溶液离心，弃去上清液，观察沉淀情况。

五、实验结果与分析1. 电解质沉淀法：加入硫酸铵溶液后，溶液颜色变浅，沉淀形成时间约为5分钟。

离心后，沉淀较多。

2. pH值沉淀法：调节pH值至4.7后，溶液颜色变深，沉淀形成时间约为10分钟。

离心后，沉淀较多。

3. 温度沉淀法：随着温度升高，沉淀形成时间逐渐缩短，沉淀量逐渐增多。

在70℃时，沉淀最多。

4. 有机溶剂沉淀法：加入乙醇后，溶液颜色变浅，沉淀形成时间约为3分钟。

离心后，沉淀较多。

六、实验结论1. 蛋白质在溶液中具有稳定性和可逆性，在一定条件下会发生沉淀；2. 电解质、pH值、温度和有机溶剂等因素均可影响蛋白质的沉淀；3. 通过本实验，掌握了蛋白质的沉淀方法及其原理，为后续实验奠定了基础。

一，基本原理硫酸铵沉淀法可用于从大量粗制剂中浓缩和部分纯化蛋白质。

用此方法可以将主要的免疫球从样品中分离，是免疫球蛋白分离的常用方法。

高浓度的盐离子在蛋白质溶液中可与蛋白质竞争水分子，从而破坏蛋白质表面的水化膜，降低其溶解度，使之从溶液中沉淀出来。

各种蛋白质的溶解度不同，因而可利用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。

这种方法称之为盐析。

盐浓度通常用饱和度来表示。

硫酸铵因其溶解度大，温度系数小和不易使蛋白变性而应用最为广范。

二，试剂及仪器1 . 组织培养上清液、血清样品或腹水等2. 硫酸铵（NH 4 ）SO 43. 饱和硫酸铵溶液（SAS ）4. 蒸馏水5. PBS( 含0.2g /L 叠氮钠)6. 透析袋7. 超速离心机8. pH 计9. 磁力搅拌器三，操作步骤以腹水或组织培养上清液为例来介绍抗体的硫酸铵沉淀。

各种不同的免疫球蛋白盐析所需硫酸铵的饱和度也不完全相同。

通常用来分离抗体的硫酸铵饱和度为33% —50% 。

（一）配制饱和硫酸铵溶液（SAS ）1.将767g （NH 4 ）2 SO 4 边搅拌边慢慢加到1 升蒸馏水中。

用氨水或硫酸调到硫酸pH7.0 。

此即饱和度为100% 的硫酸铵溶液（4.1 mol/L, 25 °C ）.2.其它不同饱和度铵溶液的配制（二）沉淀1.样品（如腹水）20 000 ′g 离心30 min ，除去细胞碎片；2.保留上清液并测量体积；3.边搅拌边慢慢加入等体积的SAS 到上清液中，终浓度为1 ：1 （4.将溶液放在磁力搅拌器上搅拌6 小时或搅拌过夜（4 °C ），使蛋白质充分沉淀。

（三）透析1.蛋白质溶液10 000 ′g 离心30 min （4 °C ）。

弃上清保留沉淀；2.将沉淀溶于少量（10-20ml ）PBS -0.2g /L 叠氮钠中。

沉淀溶解后放入透析袋对PBS -0.2g /L 叠氮钠透析24-48 小时（4 °C ），每隔3-6 小时换透析缓冲液一次，以彻底除去硫酸氨；3.透析液离心，测定上清液中蛋白质含量。

蛋白纯化硫酸铵沉淀盐析还能想起那些在荧屏中曾经震撼过我们，具有超能力的英雄么？蜘蛛侠，敏捷，灵活迅速飞流直下，忽闪直冲高楼；绿巨人浩克，力量，速度，耐力，在我们的想象力中膨胀；还有，我们随身携带星形盾牌，品格高尚的美国队长……幻想里中的人物形象存在我们的记忆力，然而生物背景出身的我们，总归要锻炼出属于自己的实验技能，即便是相同的实验步骤，每个人做出来的结果也不尽相同，差别在哪？反复练习，用心总结出属于自己的心得，转化为自己的实验“超能力”吧。

本文总结了蛋白纯化硫酸铵沉淀详细的实验原理、步骤，供大家参考。

-------锻炼属于我们自己的实验“超能力”之一我是超级蜘蛛精看我有劲儿不？冲啊，我是美国队长而我是一只冷静的科研小蜗牛这次，我们所要分享的便是一种很常见，但是也很重要的蛋白质纯化方法：硫酸铵沉淀蛋白法，一起走进实验室吧。

硫酸铵沉淀法是粗分离蛋白时常用的纯化和浓缩蛋白的技术。

蛋白质的溶解度和盐浓度密切相关，在低浓度的条件下，随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加；但在高浓度的盐溶液里，盐离子竞争性的结合蛋白表面的水分子，破坏蛋白表面的水化膜，溶解度降低，蛋白质在疏水作用下聚集形成沉淀。

每种蛋白质的溶解度不同，因此可以用不同浓度的盐溶液来沉淀不同的蛋白质。

硫酸铵的溶解度大，解离形成大量的NH4+、SO42-离子，会结合大量的水分子，使蛋白质的溶解度下降，另外，其温度系数小，不易使蛋白质变性，因此，蛋白质粗分离时硫酸铵沉淀法是很重要的一种技术，后续可采用层析技术进一步纯化蛋白，效率更高。

硫酸铵沉淀法是常用的分离免疫球蛋白的方法。

各种不同蛋白质盐析需要不同浓度的硫酸铵溶液。

在实验中建议配置不同梯度浓度的硫酸铵溶液来确定蛋白质沉淀所需的最佳浓度。

（1）参照如下表格配置不同浓度的硫酸铵溶液；例如，在25 ℃条件下，配置饱和度为100 %的硫酸铵溶液，称取767 g的硫酸铵固体，边搅拌边加入到1 L的蒸馏水中，完全溶解后，用氨水或者硫酸调节pH 到7.0。