《疟原虫的镜检技术》PPT课件

采血详细部位、取血方法有 小技巧。
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血膜的制作
用于检查疟原虫的血涂片有两种：一种是将 血液涂呈薄膜状，称薄血膜；一种是血液涂 成圆盘，称厚血膜。无特殊要求的可厚薄血 膜分载玻片涂制。
发热病人血片
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标本片
血膜的制作（涂片操作）
• 涂制厚、薄血膜的位置 通常将厚、薄血膜涂在一张 载玻片上。方法是将载片分为6等分，第1、2格备贴 标签及编号用；厚血膜涂在第3格中央，薄血膜涂在 第4格前缘至第6格中部。作为标本的血片每张玻片涂 厚、薄血膜各1个；门诊和发热病人血片每片1人， 涂2个厚血膜1个薄血膜， 以防血膜脱落而影响检查；
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标准的疟疾厚薄血膜位置
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各种不同的疟疾血片涂制法：
标准血片（1人） 门诊发热病人血片（1人）
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居民普查血片（2人）
血膜的制作
血膜编号，以防差错；待薄血膜 干后再用铅笔于薄血膜中写上血片种 类的代号和受检者的个人编号，依次 顺序插入标本盒内。
疟原虫的镜检技术
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血膜的制作（涂片操作）
• 采血时间 现症病人和流调普查时可不考虑取血时机。但在 诊断或需要某期疟原虫作标本时，则应掌握适宜的取血时机。
• 疟疾典型的临床表现分前驱期、发冷（寒战）期、发热期、 出汗期和间歇期五期。
• 间日疟在前驱期相当于肝内期疟原虫发育，因原虫密度太低， 镜检多为阴性。发冷（寒战）期相当于红内期成熟裂殖体涨 破红细胞期，镜检多为裂殖体和环状体。
单张血片染色：将处理好的血膜，加姬氏母液1-2滴， 加中性蒸馏水15-30滴，染色30分钟左右，然后用清水轻 轻将片上的染液冲洗干净，晾干镜检。
较理想的染色结果是红细胞为淡红或淡紫红色，疟原
虫的胞质呈蓝色，核为紫红色，疟色素为棕褐色。
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吉氏染液浓度
门诊染色
操作1 （快染） 配制5%染液，（每张血片约需染 液2ml）：量筒内量2ml缓冲液或新鲜凉开水， 直接滴加吉氏原液7滴，混匀，滴入待染标本的 厚薄血膜上，染色10min，清水细缓冲洗，晾干 镜检。（一般配制5%-10%，染色时间短，一定掌握好时间。）
操作2 (慢染)配制3%染液：在染色量筒内量2ml蒸馏 水或新鲜凉开水， 再滴加吉氏原液4滴，混匀， 滴入待染标本上，染色30~40min。清水细缓冲 洗，晾干镜检。（一般配制2.5%-3%染液，染色效果稳定。）
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全国疟疾镜检知识与技能竞赛
血片制作和染色质量评价标准
• 好血片制作质量: • 厚血膜：血量 4.0～5.0ul,位置 玻片右1／3稍
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血膜的制作（取血操作）
在采集标本、制作血片前，首先要核对 患者的姓名、年龄和住址。 • 采血部位和方法：采血部位一般人为耳 垂，指头；一人一针，常规消毒、采血。
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取血部位和血量
采血部位和取血方法：
耳垂或无名指（婴幼儿母 趾或足跟），通常在耳垂 取血，先用75%酒精棉球消 毒取血部位，待酒精干后， 用左手拇指和食指紧捏耳 垂上方或无名指指尖，右 手持消毒针迅速刺入皮肤， 不宜过深或过浅。然后用 右手中指轻轻挤压出血。 厚血膜血量约一粒大米 （即火柴头）大小。
• 发热期，外周血中以环状体（小滋养体）为主，也可见到裂 殖体；出汗期因原虫密度太低，镜检多为阴性。发作后数小 时（h），间歇期外周血中以大滋养体为主，形态较易辩认， 为诊断的有利时机；发作36-48h，可检出裂殖体；发作1-2次 后，配子体出现较多。
• 恶性疟较理想的取血时间是在发作后至20h内取血，初发患者 退热后常查不到原虫。 末梢血血检到恶性疟原虫配子体，是在末梢血出现环状 体之后的10天左右。
标签
标本片
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发热病人血片
薄血膜的制作
• 薄血膜 用推片一端边缘的中点从取血部分①取约 1～1.5微升的血量（相当于1/4火柴头大小），使血 滴与平置的载玻片接触，并形成25～350夹角，待血 液向两侧扩展约② 2cm～2.5cm宽时，均匀而迅速 地从右向左推成舌状薄血膜（约2.5cm长）。推制时 速度要均匀，血滴大小、推片与载玻片之间夹角大 小及展开血膜的速度快慢等常影响血膜的厚薄。制 成的薄血膜应在玻片上形成平铺的血细胞，细胞之 间互相接触而不相互重叠。③薄血膜外观：舌状厚
偏右,直径 0.8～1.0cm，外观 圆形厚薄均匀。 • 薄血膜：血量 1～1.5 ul，位置 玻片1／2～1／
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染液的种类
染液种类：疟原虫的染色，目前临床上应用 最广泛的是瑞氏（Wright stain）和吉氏 染液（Giemsa stain）。这些染液中的主 要染剂都包含美蓝、伊红和由美蓝氧化所 成的天青，所以称多色性染剂。
我们主要用吉氏染液，它具有方便，染色效果 稳定，便于长期保存的优点。瑞氏染色，染色时 间短，但染色效果不如吉氏稳定，主要在门诊量 大的门诊实验室使用。
薄均匀，无划痕，④位于玻片1/2～1/3处【左半部 分（或第4—6份）】 。
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熟练工作者的推片姿势
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厚血膜的制作
• 厚血膜 用推片的左下角，从取血部位刮取①约 4～5微升血量（相当于火柴头大小），使血滴 与平置的载玻片接触，再由里向外一个方向旋 转，转2～4圈，涂成②直径0.8～1cm大小圆形 厚血膜(厚血膜的厚度以一个油镜视野内可见到 5～10个白细胞为宜)，③厚血膜的位置，位于 玻片右1/3处[中央偏右（或6等份中的与贴标签 的1、2份相邻的第3份中部）] 。④厚血膜外观： 圆形厚薄均匀，无划痕。过厚易于脱落，过薄 达不到检出率的要求，以油镜视野5-10个WBC 为宜。
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姬氏染液的染色方法
先用甲醇或无水酒精固定薄血膜,再用清水对厚血膜溶脱血 红蛋白，然后再进行染色。
注意：吸取母液时，不要晃动瓶子,以免沉淀物泛起影响 染色效果.
成批血片染色：将已用甲醇固定薄血膜的血片插入染 色缸，倒入3%吉氏染液稀释液（3毫升吉氏原液加缓冲液 或净水97毫升，混匀）浸没血片，同时对厚薄血膜染色 30min（根据当地实际情况，酌情增减染色时间和浓度）， 然后用清水轻轻将染液漂洗干净，将血片标本（血膜面朝 下）插于晾干板上晾干，包装，镜检。