脯氨酸(Pro)含量测定试剂盒使用说明

植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果本实验的目的是测定植物中脯氨酸的含量。

脯氨酸是一种非常重要的氨基酸，它在植物中起着调节渗透压、抗逆性、保护细胞膜完整性等多种生理功能。

因此，测定植物中脯氨酸含量对于研究植物生理学和生物化学具有重要意义。

实验所需材料和仪器设备有：植物组织样品、乙醇、脯氨酸标准物质、离心机、溶液混合器、超声波清洗器、显微管、比色皿、分光光度计等。

实验步骤如下：1.准备样品：收集植物样品后，在洁净条件下取样品约10克，稍微清洗并切碎成小片，以利于提取脯氨酸。

2.浸提脯氨酸：将植物样品放入超声波清洗器中，加入适量的乙醇，使乙醇能充分接触到样品。

使用超声波清洗仪提取样品中的脯氨酸，提取时间为30分钟。

3.离心处理：将乙醇提取液离心10分钟，将上清液转移至显微管中。

4.标准曲线的制备：取不同浓度的脯氨酸标准物质，分别加入适量的乙醇，制备不同浓度（如0.2、0.4、0.6、0.8和1.0 mg/mL）的标准品溶液。

5.比色测定：取0.2~1.0 mL标准品溶液，分别加入10%冰醋酸溶液（2.3 mL），然后加入15%草酸溶液（2.5 mL），混合均匀。

再加入0.2%法拉第试剂（0.2 mL），充分混合，并静置15分钟。

测量样品的最大吸收波长为535 nm。

6.吸光度测定：使用分光光度计进行吸光度测定，按照比色皿中的液体，即可得到对应吸光度值。

7.测量样品中脯氨酸的含量：根据标准曲线上的吸光度值，可以通过光谱仪测得样品溶液的吸光度值，然后将其代入标准曲线中计算脯氨酸的含量。

通过以上步骤，我们可以测定植物中脯氨酸的含量。

实验的结果按照以下格式进行记录：表1植物样品中脯氨酸含量的测定结果样品编号吸光度值脯氨酸含量(mg/mL)--------------------------------10.320.120.450.230.520.340.570.450.620.5通过实验测定的结果，我们可以发现不同植物样品中脯氨酸含量的差异，并进一步探究其对于植物生长和生理功能的影响。

脯氨酸的检测方法1. 原理样品用茚三酮处理，样品中的脯氨酸反应生成橙色物质，在520nm 检测吸光度，并作空白对照实验。

2. 应用范围本方法适用于蜂蜜、果汁和浓缩汁中的脯氨酸的检测。

本方法在其它方面的应用必须经过个别论证。

3. 试剂及仪器3.1 脯氨酸3.2 3%茚三酮2-甲氧基乙醇溶液（0.3g 茚三酮溶解于10ml 2-甲氧基乙醇，每天保持新鲜，即现用现配）3.3 2-甲氧基乙醇3.4 蚁酸（96%），即甲酸3.5 异丙醇（2- 丙醇）水溶液：水：丙醇= 1：13.6 15ml 旋盖玻璃离心管（确保离心管的边缘没有缺口，将有缺口的离心管丢掉）3.7 分光光度计，检测吸光度设定在520nm 下3.8 1cm 玻璃比色皿4. 样品准备4.1苹果，梨和大部分浆果的果汁用单一浓度（即原果汁浓度），橙汁用1：20 的水进行稀释。

其它的果汁应进行适当的稀释，以保证稀释后的样品中的脯氨酸的含量低于50mg/L（见稀释表）。

浓缩果汁用水稀释到单一浓度，然后再进一步进行适当的稀释。

蜂蜜的稀释，采用2.5g蜂蜜加50ml水。

将样品在分析之前离心5min 左右，去除悬浮物，取上清液进行分析。

4.2 原果汁稀释表稀释比例颜色空白期望值样品类型Apple 苹果1:1 yesApricot 杏21:1 yesAronia 野樱莓1:1 yesBanana 香蕉1:1 yesBlackberry 黑莓1:1 yesCherry 樱桃1:1 yesCranberry 蔓越莓1:1 yesGrape 葡萄16:1 yesGrapefruit 柚子21:1 noGuava 番石榴3:1 yesKiwi 泥猴桃1:1 yesLem on柠檬21:1 noLime酸橙21:1 noMandarin中国柑桔21:1 noMango芒果1:1 yesNectarine 油桃21:1 noOran ge柑桔21:1 noPapaya番木瓜1:1 yesPassion Fruit 西番连1:1 yesPeach 桃6:1 yesPin eapple 菠萝1:1 yesPlum李子7:1 yesPrune 西梅16:1 yesRaspberry悬钩子（树梅）5:1 yesStrawberry 草莓1:1 yesTan geri ne 橘子21:1 noTomato番茄1:1 yes5. 标准溶液的制备5.1脯氨酸贮备液（500mg/L） : 0.0500g脯氨酸加水定容至100ml。

脯氨酸含量的测定脯氨酸是一种重要的氨基酸，由于其参与了生物体内多种代谢反应，因此在生物学、医学、食品科学等领域都具有重要的应用价值。

对于脯氨酸含量的测定，常用的方法主要有生物化学法、色谱法、质谱法等。

下面将详细介绍这些方法的原理和操作步骤。

一、生物化学法生物化学法是一种常用的脯氨酸含量测定方法，其原理是利用苯酰亚胺与脯氨酸在强酸条件下的酰化反应，生成具有紫色色素的N-苯酰脯氨酸，可通过分光光度计测定其吸收光谱来确定含量。

1. 操作步骤：（1）样品制备将待测样品粉碎并过筛，加入盐酸或硫酸等强酸，混合均匀，常温下反应数小时，将反应溶液转移至滤袋中过滤，然后将滤液经旋转浓缩至干燥，加入适量的甲醇或氯仿等溶剂，振荡溶解，即可制备待测样品。

（2）标准曲线制备取不同浓度的脯氨酸标准溶液，分别进行相同的处理方法，制备不同浓度的标准溶液。

然后以标准溶液的吸收值为纵坐标，相应浓度为横坐标，绘制标准曲线。

（3）分光光度计测定将待测样品和标准溶液分别置于分光光度计中，以标准曲线为参照，通过测定吸收光谱来确定样品中脯氨酸的含量。

二、色谱法色谱法多用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用离子交换色谱分离脯氨酸，在检测器中进行检测并计算。

将待测样品加入甲醇或氯仿等溶剂中，过滤经过滤纸，然后加入0.5N NaOH(或1N NaOH) 溶剂，混合并振荡，使脯氨酸完全转化为盐基态的氨基酸。

（2）色谱条件设置利用离子交换色谱柱，设置流速，根据需求设置检测器(如紫外检测器)，调整溶液的pH值、离子强度等，使得脯氨酸能够被完全分离。

（3）色谱分离及检测按照设定条件进行色谱分离，并在检测器中检测脯氨酸的吸收光谱，通过计算峰面积或峰高，来确定样品中脯氨酸的含量。

三、质谱法质谱法通常用于测定含量较低的脯氨酸，其原理是利用高分辨率质谱仪对样品进行荷质比分析，获得脯氨酸分子的荷质比和相应的亚分子和碎片离子，进而计算出样品中脯氨酸的含量。

将待测样品中的脯氨酸沉淀或提取出来，常用的提取方法包括利用乙酸酐等试剂进行衍生化处理。

测定脯氨酸药品配制及操作一、药品二、试验用具电子天平、烧杯、蒸馏水、容量瓶（250ml）1个、50ml容量瓶6个、试管6支（制作标曲应用）、水浴锅、试管若干、药品、标签、研钵、称量纸、注射器。

三、溶液配制酸性茚三酮溶液：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol/L的磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解贮于冰箱中。

6mol/L磷酸：浓度为85%的磷酸大约是14mol/l，如果要配置6M的磷酸大约稀释到原来体积的2.3倍即可。

3%的磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。

冰醋酸甲苯四、试验步骤1、标准曲线的制作(1)在分析天平上精确称取25 mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250 ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每毫升含脯氨酸100 μg。

(2)系列脯氨酸浓度的配制取6个50 ml容量瓶，分别盛入脯氨酸原液0.5，1.0，1.5，2.0，2.5及3.0 ml，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1，2，3，4，5及6 μg·ml-1。

(3)取6支试管，分别吸取2 ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2 ml冰醋酸和3 ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30 min。

表2-5脯氨酸标准曲线表试剂 1 2 3 4 5 6系列Pro 溶液(mL) 2 2 2 2 2 2冰醋酸 2 2 2 2 2 2酸性印三酮溶液 2 2 2 2 2 2Pro 含量 2 4 6 8 10 12(4)冷却后各试管准确加入5 ml甲苯，振荡30 s，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。

(5)用注射器轻轻吸取各管上层脯氨酸甲苯溶液至比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，于520 nm波长处进行比色。

(6)标准曲线的绘制：先求出吸光度值(Y)依脯氨酸浓度(X)而变的回归方程式，再按回归方程式绘制标准曲线，计算2 ml测定液中脯氨酸的含量(μg·2 ml-1)。

脯氨酸脱氢酶（ProDH）活性检测试剂盒说明书可见分光光度法注意：正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

货号：BC4160规格：50T/48S产品内容：提取液一：液体60mL×1瓶，4℃保存；提取液二：液体0.6mL×1支，4℃保存；试剂一：液体40mL×1瓶，4℃保存；试剂二：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入5mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂三：粉剂×1瓶，4℃保存；临用前加入4mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂4℃保存；试剂四：粉剂×1瓶，-20℃保存；临用前加入10mL蒸馏水充分溶解待用，用不完的试剂可分装-20℃保存，避免反复冻融。

产品说明：ProDH是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。

降低ProDH活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

ProDH催化脯氨酸脱氢生成延丙酮酸，脱下的氢通过吩嗪二甲酯硫酸（PMS）传递还原2,6-二氯酚靛酚（DCPIP），并且在600nm处具有特征吸收峰，通过600nm吸光度的下降，测定2,6-DCPIP的还原速度，代表ProDH活性。

自备实验用品及仪器：天平、低温离心机、可见分光光度计、1mL玻璃比色皿、丙酮、匀浆器/研钵。

操作步骤：一、样本处理：组织：按照组织质量（g）：提取液一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g 样本，加入1mL 提取液一），进行冰浴匀浆，1500g 4℃离心15min，取上清液于一支新的EP 管中，加入一滴提取液二（用10μL 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置30min 后，15000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。

细胞或细菌：按照细胞数量（104个）：提取液一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL 提取液一），冰浴匀浆，1500g 4℃离心15min，取上清液于一支新的EP 管中，加入一滴提取液二（用10μL 的枪头加入），涡旋混匀，冰浴放置30min 后，15000g 4℃离心20min，取上清置冰上待测。

羟脯氨酸（HYP ）含量检测试剂盒说明书微量法货号：BC0255规格：100T/96S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系索莱宝工作人员。

试剂名称规格保存条件提取液液体200 mL×1瓶（自备）常温保存试剂一液体8 mL×1瓶4℃保存试剂二液体8 mL×1瓶4℃保存标准品液体0.5 mL×1支4℃保存溶液的配制：1.提取液：自备6 mol/L 盐酸，提供一个125mL 空瓶。

6 mol/L 盐酸的配制：浓盐酸（37%）和H 2O 的体积比是1：1。

2.标准品：0.5 mg/mL 羟脯氨酸标准品。

产品说明：HYP 是机体胶原蛋白主要成分之一，胶原蛋白大多分布于皮肤、腱、软骨和血管等，因此HYP 含量是反映胶原组织代谢及纤维化程度的一项重要指标。

样本经水解产生游离的HYP ，进一步被氯胺T 氧化，氧化产物与对二甲氨基苯甲醛反应，产生红色化合物，在560nm 处有特征吸收峰。

通过测定样本水解液560nm 吸光值，可计算HYP 含量。

技术指标：最低检出限：0.057 μg/mL 线性范围：0.117-30 μg/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：天平、玻璃管、离心机、水浴锅、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、6mol/L 盐酸和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）1、组织：称取约0.2g 样本于玻璃管，将组织尽量剪碎以便消化，盖子稍松不密闭。

加入2mL 的提取液，煮沸或110℃烘箱2至6小时消化至没有可见大的团块，冷却后用10mol/L NaOH （约1mL ）调节pH 值至6-8范围内（不可过酸或过碱），再蒸馏水定容至4mL 。

最后16000rpm ，25℃，离心20min（若离心后仍有杂质，可通过过滤去除），取上清待测。

脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：脯氨酸(Proline，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，水中可溶162g左右，易潮解不易得结晶，有甜味。

与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分。

羟脯氨酸也存在于多种植物蛋白质中，尤其与细胞壁的形成有关，在正常情况下脯氨酸含量较低，但在逆境下(旱、热、冷、冻、盐碱等)，常有脯氨酸的明显积累，即积累指数与植物的抗逆性有关。

在临床、生物材料、工业等方面均有广泛应用。

Leagene脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。

该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、蒸馏水2、研钵或匀浆器3、离心管或试管4、滤纸或纱布5、水浴锅6、比色杯7、分光光度计操作步骤(仅供参考)：编号名称TO111350TStorage试剂(A): 脯氨酸标准(100μg/ml) 1ml 4℃试剂(B): PRO Lysis buffer 250ml RT试剂(C): PRO Assay buffer80ml RT试剂(D): 茚三酮2支RT 避光使用说明书1份1、准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入PRO Lysis buffer 后匀浆或研磨，沸水浴(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，冻存，用于脯氨酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PRO Lysis buffer进行适当匀浆，留取上清即脯氨酸提取液，4℃保存备用，用于脯氨酸的检测。

脯氨酸含量测定方法
脯氨酸含量咋测定呢？其实有个简单的办法！先准备好材料，像啥呢，就像大厨准备食材一样，咱得有要检测的样品、试剂啥的。

然后呢，把样品处理好，这就好比给食材切好、备好。

接着加入特定的试剂，看着颜色变化，哇塞，这多神奇！
那测定的时候有啥要注意的呢？嘿，可不能粗心大意！得严格按照步骤来，不然结果可就不准啦。

就像搭积木，一块错了，整个就歪了。

这过程安全不？稳定不？放心吧！只要操作得当，那是相当安全稳定。

就跟走在平坦的大路上一样，没啥危险。

这测定方法有啥应用场景呢？那可多了去了！比如在农业领域，看看植物的抗逆性，这多重要啊！难道不是吗？在医学上也能派上用场呢，帮助医生了解病情。

多厉害啊！
优势呢？速度快啊，结果准啊！不像有些方法，磨磨唧唧半天还不准。

多棒啊！
我给你讲个实际案例哈。

有个研究团队，用这个方法测定了一批植物的脯氨酸含量，一下子就搞清楚了植物的抗逆情况。

效果那叫一个好！这
就像找到了一把神奇的钥匙，打开了知识的大门。

所以啊，这个脯氨酸含量测定方法真的很不错，值得大家去用。

植物中脯氨酸含量的测定实验报告及结果摘要
本文介绍了有关植物中脯氨酸含量的测定实验报告。

首先，对脯氨酸
的性质和结构进行简要的介绍。

然后介绍了设计用于测定植物脯氨酸含量
的试验方法。

最后，本文提供了一系列实验结果，以表明所采取的实验方
法是正确的。

关键词：脯氨酸，测定，实验报告
1引言
脯氨酸（Proline）是一种结构上尤其复杂的氨基酸。

它具有异构和
加氧作用，在蛋白质调节中起着重要作用。

脯氨酸在植物体内具有多种功能，如参与胞内多种代谢过程，从而提高植物的抗逆能力。

为了评估植物
的调节性能，有必要定量研究它们在体内的脯氨酸含量。

2材料与方法
2.1实验材料
本实验采用新鲜的植物材料，自土壤中收集30份样品，每份样品重
约3克。

样品在实验室内放置，经过24小时的调节，以保证其质量和完
整性。

2.2试验方法
2.2.1样品处理
将每份样品加入15ml的酒精，用搅拌机搅拌30秒，然后用水或乙醇
冲洗，以去除样品表面残留的酒精，冷冻干燥样品，记录样品残留的重量。

2.2.2经碱水合、脱羧和油酸酰胺处理。

第1篇一、实验目的1. 了解脯氨酸的物理和化学性质。

2. 掌握脯氨酸的提取、分离和鉴定方法。

3. 通过实验，加深对氨基酸结构和性质的认识。

二、实验原理脯氨酸（Proline）是一种非极性氨基酸，分子式为C5H9NO2。

在生物体内，脯氨酸是构成蛋白质的重要氨基酸之一。

本实验通过提取、分离和鉴定脯氨酸，了解其化学性质。

三、实验材料与仪器材料：1. 脯氨酸样品2. 氢氧化钠溶液3. 盐酸溶液4. 硫酸铜溶液5. 酒精6. 水浴锅7. 离心机8. 紫外可见分光光度计仪器：1. 烧杯2. 漏斗3. 玻璃棒4. 离心管5. 滴定管6. 移液管四、实验步骤1. 脯氨酸提取：1. 将脯氨酸样品溶解于适量水中。

2. 加入氢氧化钠溶液，调节pH至9.0。

3. 加热至沸腾，保持10分钟。

4. 冷却，离心分离沉淀。

2. 脯氨酸分离：1. 将沉淀用适量水洗涤。

2. 加入硫酸铜溶液，观察颜色变化。

3. 加入酒精，观察沉淀溶解情况。

3. 脯氨酸鉴定：1. 取少量分离得到的脯氨酸溶液，加入硫酸铜溶液，观察颜色变化。

2. 将溶液滴入紫外可见分光光度计，测定脯氨酸的最大吸收波长。

五、实验结果1. 脯氨酸提取：溶液呈淡黄色，说明脯氨酸已溶解。

2. 脯氨酸分离：加入硫酸铜溶液后，溶液呈蓝色，加入酒精后，沉淀溶解，说明脯氨酸已分离。

3. 脯氨酸鉴定：加入硫酸铜溶液后，溶液呈蓝色，最大吸收波长为214nm，说明脯氨酸已鉴定。

六、实验讨论1. 脯氨酸在生物体内具有重要的生理功能，如参与蛋白质合成、调节细胞内环境等。

2. 本实验成功提取、分离和鉴定了脯氨酸，为后续研究脯氨酸的生理功能奠定了基础。

3. 在实验过程中，应注意以下几点：1. 脯氨酸提取过程中，加热时间不宜过长，以免蛋白质变性。

2. 脯氨酸分离过程中，酒精浓度不宜过高，以免影响脯氨酸的溶解。

3. 脯氨酸鉴定过程中，紫外可见分光光度计的波长设置应准确。

七、实验结论1. 本实验成功提取、分离和鉴定了脯氨酸，为后续研究脯氨酸的生理功能提供了实验基础。

植物体内游离脯氨酸含量的测定一、原理磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。

然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。

二、仪器及试剂1. 仪器：分光光度计；电子分析天平；离心机；10ml+2ml离心管；恒温水浴锅；2 .试剂及配制：冰醋酸；甲苯。

2.5﹪酸性茚三酮溶液配制：将1.25g茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol·L －1磷酸(7ml磷酸+13ml蒸馏水)中，37度摇床摇动溶解，贮于4℃冰箱中。

3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。

1mg·ml-1脯氨酸标准母液配制三、实验步骤1. 脯氨酸标准曲线的制作1.1 取6支10ml离心管编号，按下表配制每管含量为0～25μg的脯氨酸标准液。

加入表中试剂后，标准曲线样品和待测样品一起置于沸水浴中加热60min （注意管盖需要压住，不然会爆开挥发液体），取出冷却，各试管再加入2ml 甲苯，振荡30秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。

1.2 以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。

1.3 标准曲线的绘制以1～5号管脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。

2. 样品的测定2.1 脯氨酸的提取液氮研磨样品材料，称取适当重量样品粉末（0.1-0.2g）于2ml离心管, 然后向各管分别加入1.5ml3％的磺基水杨酸溶液，振荡混匀。

（注意：样品一定要精确称量并记录）离心12000g，10min，上清液1ml移至新10ml离心管中。

2.2 测定加入1ml冰醋酸及1ml 2.5﹪酸性茚三酮试剂，在沸水浴中加热60min，溶液即呈红色。

冷却后加入2ml甲苯，摇荡30秒钟，静置片刻，用吸管轻轻吸取上层脯氨酸红色甲苯溶液于比色杯中，以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。

脯氨酸含量的测定在逆境条件下，植物体内脯氨酸〔proline，Pro〕的含量显著增加。

植物体内脯氨酸含量在一定程度上反映了植物的抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。

因此测定脯氨酸含量可以作为抗旱育种的生理指标。

另外，由于脯氨酸亲水性极强，能稳定原生质胶体及组织内的代谢过程，因而能降低凝固点，有防止细胞脱水的作用。

在低温条件下，植物组织中脯氨酸含量增加，可提高植物的抗寒性，因此，亦可作为抗寒育种的生理指标。

一、原理当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即为红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。

在520nm波长下比色，从标准曲线上查出〔或用回归方程计算〕脯氨酸的含量。

二、材料、仪器设备及试剂〔一〕材料待测植物叶片〔二〕仪器设备1. 722型分光光度计；2.研钵；小烧杯；4.容量瓶；5.大试管；6.普通试管；7.移液管；8.注射器；9.水浴锅；10.漏斗；11.漏斗架；12.滤纸；13.剪刀。

〔三〕试剂1.酸性茚三酮溶液：将茚三酮溶于30ml冰醋酸和20ml 6mol/l 磷酸中，搅拌加热〔70℃〕溶解，贮于冰箱中。

2. 3%磺基水杨酸：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100ml。

3.冰醋酸。

4.甲苯。

三、实验步骤1.标准曲线的绘制〔1〕在分析天平上精确称取25mg脯氨酸，倒入小烧杯中内，用少量蒸馏水溶解，然后倒入250ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，此标准液中每毫升含脯氨酸100ug。

〔2〕系列脯氨酸浓度的配置：取6个50ml容量瓶，分别加入脯氨酸原液、1.0ml、1.5ml、2.0ml、2.5ml及，用蒸馏水定容至刻度，摇匀，各瓶的脯氨酸浓度分别为1ug/ml、2ug/ml、3ug/ml、4ug/ml、5ug/ml及6ug/ml。

〔3〕取6支试管，分别吸取2ml系列标准浓度的脯氨酸溶液及2ml冰醋酸和2ml酸性茚三酮溶液，每管在沸水浴中加热30min。

脯氨酸（PRO）含量测定试剂盒说明书货号：QS1605 规格：50管/48样脯氨酸（PRO）含量测定试剂盒说明书可见分光光度法正式测定前务必取2-3 个预期差异较大的样本做预测定测定意义：Pro广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，逆境条件下，植物体内Pro含量显著增加。

Pro增加量在一定程度上反映了抗逆性，抗旱性强的品种往往积累较多的脯氨酸。

因此，脯氨酸增加量可以作为抗逆育种的生理指标之一。

测定原理：用磺基水杨酸（SA）提取Pro，加热处理后，Pro与酸性茚三酮溶液反应生成红色；加甲苯萃取后，在520nm测定吸光度。

自备实验用品及仪器：可见分光光度计、水浴锅、台式离心机、可调式移液器、1 mL玻璃比色皿、冰乙酸50mL、甲苯50mL、研钵、冰和蒸馏水。

试剂的组成和配制：提取液：液体50mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：冰乙酸25 mL×1瓶，4℃保存。

（自备）试剂二：液体25 mL×1瓶，4℃保存。

试剂三：甲苯50mL×1瓶，4℃保存。

（自备）样品测定的准备：1、细菌、细胞或组织样品的制备：细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（104个）：提取液体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或200W，超声3s，间隔10s，重复30次）；之后置95℃水浴振荡提取10min；10000g，25℃离心10min，取上清，冷却后待测。

组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆；之后置95℃水浴振荡提取10min；10000g，25℃离心10min，取上清，冷却后待测。

2、血清（浆）样品：按照血清（浆）体积（mL）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议取0.1mL血清（浆）加入1mL提取液），充分混匀，之后置95℃水浴振荡提取10分钟，10000g，25℃离心10分钟，取上清，冷却后待测。

脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：脯氨酸(Proline ，Pro)是一种环状的α-亚氨基酸，呈中性，等电点为6.30，水中溶解度比任何氨基酸都大，25℃时100g 水中可溶162g 左右，易潮解不易得结晶，有甜味。

与茚三酮溶液共热，生成黄色化合物，一旦进入肽链后，可发生羟基化作用，从而形4-羟脯氨酸，是组成动物胶原蛋白的重要成分。

Leagene 脯氨酸(PRO)检测试剂盒(茚三酮比色法)检测原理是脯氨酸游离于磺基水杨酸溶液中，前者与茚三酮共热发生反应，能产生稳定的红色产物，以分光光度计测定520nm 处吸光度，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与脯氨酸浓度成正比。

该试剂盒主要用于测定植物组织中的游离脯氨酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：自备材料：1、 蒸馏水2、 研钵或匀浆器3、 离心管或试管4、 滤纸或纱布5、 比色杯6、 分光光度计操作步骤(仅供参考)：1、 准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，加入PRO Lysis buffer 后匀浆或研磨，沸水浴10min(期间经常摇动)，混匀，用滤纸或纱布过滤，滤液即为脯氨酸提取液，4℃保存备用。

编号 名称TO1113 50T Storage试剂(A): 脯氨酸标准(100μg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): PRO Lysis buffer 250ml RT 试剂(C): PRO Assay buffer 80ml RT 试剂(D): 茚三酮 2支 RT 避光 试剂(E): 茚三酮稀释液 2×50mlRT 使用说明书1份②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于脯氨酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用PRO Lysis buffer进行适当匀浆，留取上清即脯氨酸提取液，用于脯氨酸的检测。

脯氨酸含量的测定
1．标准曲线制作
（1）取7支具塞刻度试管按表1加入各试剂。

混匀后加玻璃球塞，在沸水中加热40min。

（2）取出冷却后向各管加入5ml甲苯充分振荡，以萃取红色物质。

静置待分层后吸取甲苯层以“0”管为对照在波长520nm下比色。

表1 各试管中试剂加入量(ml)
管号0 1 2 3 4 5 6
标准脯氨酸H2O2
冰乙酸
显色液
2.0
2.0
2.0
0.2
1.8
2.0
2.0
0.4
1.6
2.0
2.0
0.8
1.2
2.0
2.0
1.2
0.8
2.0
2.0
1.6
0.4
2.0
2.0
2.0
2.0
2.0
（3）以消光值为纵坐标，脯氨酸含量为横坐标，绘制标准曲线，求线性回归方程。

测定：0.3克叶片，加入5毫升磺基水杨酸，加盖，沸水浴10分钟，过滤，吸取滤液2毫升（同时作空白，吸取2毫升蒸馏水）、2毫升冰醋酸和3毫升酸性茚三酮，沸水浴40分钟，冷却，加入5毫升甲苯，充分振荡，静止分层，取上层甲苯溶液于比色皿中，520纳米下比色。

结果计算：脯氨酸含量（μg/g鲜重）=C×V/a/W
C:提取液中脯氨酸含量
V：提取液总体积
a:测定时所吸取的提取液的体积
w:样品重。

医院检验中心脯氨酸肽酶测定(Prolidase Test Kit)操作规程
脯氨酸肽酶(PLD)是参与胶原蛋白胞内最后一步降解的酶，将富含(羟)脯氨酸的末端氨基二肽水解，富含于肝细胞浆中临床与实验研究均证实，血清PLD活性与肝纤维化有关，同时肝细胞炎症坏死时释放该酶，因而又可反映肝损害程度．故广泛用于各类急，慢性肝病的诊断和预后观察．（1）试剂组成：
1)样品稀释液：7Oml
2)基质液：使用前加5ml稀释液溶解
3)终止液：100ml
4)标准脯氨酸溶液：3ml
5)显色液：100ml 1瓶使用前摇匀。

二、操作方法：
1）样品稀释：取0．1ml血清加0.5ml稀释液，37℃水浴24h(稀释血清)
2）活性测定(单位： ul)
充分混匀，88—90℃水浴10min(准确计时)冷水冷却至室温用空白管调零，在分光光度计515nm比色(A) 3）活性计算：
A测定管—A对
照管
血清PLD活性(U/L)= ──────
─
×
[标准浓
度]
×24
00
A测定管（0.65）
4）正常人参考值：
932土236U/L,无明显性别，年龄差异。

（3）注意事项：
1)由于对照管A值平均0.010土0．005，常规检测时可
免设讨对照而按0.01计；
2)空腹静脉血清，—20℃保存半个月活性无变化，溶血
标本结果偏高；
3)当A测定管＞1．8时，血清宜用冰醋酸倍比稀释后再
测定.。