SDS_PAGE-原理和方法

SDS-PAGE电泳的基础原理和实验步骤概述十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳（sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis，简称SDS-PAGE）是聚丙烯酰胺凝胶电泳中最常用的一种蛋白表达分析技术。

此项技术的原理，是根据检体中蛋白质分子量大小的不同，使其在电泳胶中分离。

在大肠杆菌表达纯化外源蛋白的实验中，SDS-PAGE更是必不可少的操作，其通常用于检测蛋白的表达情况（表达量，表达分布），以及分析目的蛋白的纯度等。

SDS-PAGE作用机理蛋白中含有很多的氨基（+）和羧基（-），不同的蛋白在不同的pH值下表现出不同的电荷，为了使蛋白在电泳中的迁移率只与分子量有关，我们在上样前，通常会进行一些处理（上样缓冲液）。

即在样品中加入含有SDS和β-巯基乙醇的上缓冲液。

SDS即十二烷基磺酸钠（CH3-（CH2）10-CH2OSO3-Na+），是一种阴离子表面活性剂，它可以断开分子内和分子间的氢键，破坏蛋白质分子的二级和三级结构；β-巯基乙醇是强还原剂，它可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键。

电泳样品加入样品处理液后，经过高温处理，其目的是将SDS与蛋白质充分结合，以使蛋白质完全变性和解聚，并形成棒状结构同时使整个蛋白带上负电荷；另外样品处理液中通常还加入溴酚蓝染料，用于监控整个电泳过程；另外样品处理液中还加入适量的蔗糖或甘油以增大溶液密度，使加样时样品溶液可以快速沉入样品凹槽底部。

当样品上样并接通两极间电流后（电泳槽的上方为负极，下方为正极），在凝胶中形成移动界面并带动凝胶中所含SDS负电荷的多肽复合物向正极推进。

样品首先通过高度多孔性的浓缩胶，使样品中所含SDS多肽复合物在分离胶表面聚集成一条很薄的区带（或称积层）。

电泳启动时，蛋白样品处于pH6.8的上层，pH8.8的分离胶层在下层，上槽为负极，下槽为正极。

出现了pH 不连续和胶孔径大小不连续：启动时Cl¯解离度大，Pro¯解离度居中，甘aaCOO¯解离度小，迁移顺序为（pH6.8）Cl¯>Pro¯>—COO¯。

简述SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳的原理和应用1. 原理SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，简称SDS-PAGE）是一种常用的蛋白质分离和分析技术。

它基于蛋白质的分子量和电荷差异，通过电场作用将蛋白质分离成不同的带。

SDS-PAGE的原理基于以下几个方面：1.SDS的作用：SDS是一种阴离子表面活性剂，可以使蛋白质分子迅速与其结合，并赋予蛋白质大量的负电荷，使得蛋白质在电场中按照大小和形状进行分离。

2.聚丙烯酰胺凝胶：聚丙烯酰胺凝胶是一种聚合物，可以形成一种网状结构，这种结构具有孔隙，可以通过孔隙大小筛选不同大小和形状的蛋白质分子。

3.电场作用：在电泳槽中施加电场后，带负电荷的蛋白质会向阳极迁移，迁移速度取决于蛋白质分子的质量和形状。

通过以上原理，可以将蛋白质样品加载在聚丙烯酰胺凝胶的孔隙中，然后施加电场，蛋白质按照其分子量的大小和形状进行分离，最终形成不同的蛋白质带。

2. 应用SDS-PAGE广泛应用于生物医学和生命科学的各个领域，以下是SDS-PAGE的几个主要应用：2.1 蛋白质分离与纯化SDS-PAGE是一种常用的蛋白质分离和纯化技术。

通过SDS-PAGE，可以将混合蛋白质样品根据其分子量进行分离，得到纯化的蛋白质。

这对于研究蛋白质的结构、功能以及相互作用具有重要意义。

2.2 亚细胞结构研究通过SDS-PAGE，可以将细胞或亚细胞结构中的蛋白质分离出来，进一步研究其在细胞内的定位、功能以及与其他分子的相互作用。

这有助于揭示细胞和亚细胞结构的功能机制。

2.3 蛋白质质量测定通过SDS-PAGE，可以通过与已知分子量的蛋白质标准品进行比较，估计未知蛋白质的分子量。

这对于研究蛋白质的结构、功能以及其在生物过程中的变化具有重要意义。

2.4 蛋白质组学研究SDS-PAGE结合质谱技术可以进行蛋白质组学研究。

SDS－PAGE 蛋白电泳分析一、目的掌握SDS-PAGE 电泳原理与方法二、电泳原理聚丙烯酰胺凝胶是由丙烯酰胺(简称Acr) 和交联剂N，N’—亚甲基双丙烯酰胺（简称Bis）在催化剂作用下，聚合交联而成的具有网状立体结构的凝胶，并以此为支持物进行电泳。

聚丙烯酰胺凝胶电泳可根据不同蛋白质分子所带电荷的差异及分子大小的不同所产生的不同迁移率将蛋白质分离成若干条带，如果分离纯化的样品中只含有同一种蛋白质，蛋白质样品电泳后，就应只分离出一条区带。

SDS 是一种阴离子表面活性剂能打断蛋白质的氢键和疏水键，并按一定的比例和蛋白质分子结合成复合物，使蛋白质带负电荷的量远远超过其本身原有的电荷，掩盖了各种蛋白分子间天然的电荷差异。

因此，各种蛋白质-SDS 复合物在电泳时的迁移率，不再受原有电荷和分子形状的影响，而只是棒长的函数。

这种电泳方法称为SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（简称SDS—PAGE）。

由于SDS-PAGE 可设法将电泳时蛋白质电荷差异这一因素除去或减小到可以略而不计的程度，因此常用来鉴定蛋白质分离样品的纯化程度，如果被鉴定的蛋白质样品很纯，只含有一种具三级结构的蛋白质或含有相同分子量亚基的具四级结构的蛋白质，那么SDS—PAGE 后，就只出现一条蛋白质区带。

三、试剂配制1．30% 丙烯酰胺：将29g 丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml 的水中。

加热至37℃溶解之，补加水至终体积为100ml。

用过滤器（0.45μm 孔径）过滤除菌，查证该溶液的pH值应不大于7.0，置棕色瓶中保存于室温(丙烯酰胺具有很强的神经毒性并可以通过皮肤吸收，其作用具累积性。

称量丙烯酰胺和亚甲双丙烯酰胺时应戴手套和面具。

可认为聚丙烯酰胺无毒，但也应谨慎操作，因为它还可能会含有少量未聚合材料)。

2．1M Tris-Cl: 称取12.191g Tris 碱溶于80ml 蒸馏水中，用浓HCl 调到所需pH 值，定容至100ml。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS-PAGE）一、材料准备（1）丙烯酰胺单体（Arc）：在交联剂作用下形成聚丙烯酰胺（2）N，N’-甲叉双丙烯酰胺（Bis）：交联剂（3）10%十二烷基硫酸钠（SDS）：阴离子去污剂，可与蛋白质结合，形成SDS-蛋白质复合物。

由于SDS带有大量负电荷，当与蛋白质形成复合物后好比蛋白质穿上带负电的“外衣”，蛋白质本身带有的电荷则被掩盖，即消除了蛋白质分子之间电荷差异。

配制方法：10g SDS，用双蒸水溶解并定容至100ml，室温保存。

（4）10%过硫酸铵（Ap）：引发剂。

配制方法：0.1 g过硫酸铵溶解于1ml双蒸水中。

过硫酸铵会缓慢分解，应新鲜配制。

（5）N、N、N’、N’－四甲基乙二胺（TEMED）：其碱基催化AP产生氧自由基，激活单体形成自由基，发生聚合。

配制方法：原液使用。

应使用电泳级TEMED。

（6）30%丙烯酰胺凝胶贮液（Arc-Bis贮液）配制方法（50mL体系）：14.55 g丙烯酰胺＋0.45 g N，N-甲叉双丙烯酰胺，先用40ml双蒸水溶解，搅拌，直到溶液变成透明，再用双蒸水稀释至50 ml，0.45μm滤膜过滤。

用棕色瓶储存于4℃（丙烯酰胺单体贮液在储存过程中因光和碱催化发生脱氨反应，会缓慢转化成丙烯酸和双丙烯酸，储存液应测定pH值不超过7.0。

丙烯酰胺单体贮液应在暗色瓶中保存，每隔数月须重新配制。

丙烯酰胺具有很强的神经毒性和致癌性，并可通过皮肤吸收，其作用具有累积性。

称量时必须戴手套和面具。

）（7）分离胶缓冲液（pH8.8的Tris-HCl缓冲液）：1.5M Tris-HCl，pH8.8。

配制方法：9.08 g Tris溶解在40ml 双蒸水中，用4 mol/L盐酸调节pH值8.8，再用双蒸水加至50ml。

4℃保存。

（8）浓缩胶缓冲液（pH6.7的Tris-HCl缓冲液）：1.0M Tris-HCl，pH6.8。

配制方法：6.06 g Tris溶解在40 ml双蒸水中，用4 mol/L盐酸调节pH值6.8，再用双蒸水加至50 ml。

序一：认识SDS-PAGESDS-PAGE（Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis，十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质电泳技术，可以对蛋白质进行分离和检测。

它通过凝胶的孔隙大小和电泳的受力使蛋白质在凝胶中进行分离，是生物化学实验中的重要手段。

今天我们就来深入探讨SDS-PAGE的原理及在物质分离与检测中的步骤。

序二：SDS-PAGE的原理在SDS-PAGE技术中，其原理主要包括两个方面：SDS和聚丙烯酰胺凝胶电泳。

1. SDS的作用SDS是一种阴离子表面活性剂，它的主要功能是将蛋白质变性并赋予负电荷。

蛋白质经过SDS处理后，其构象被完全展开，获得了相同的质量比电荷的分布，使得蛋白质在电泳过程中只受到电场的作用而不再因其本身的结构而迁移速度有差异。

2. 聚丙烯酰胺凝胶电泳聚丙烯酰胺凝胶是一种网状结构的凝胶，其孔隙大小可以根据需要调整，能够使蛋白质根据其分子大小在凝胶中被有效地分离。

序三：SDS-PAGE在物质分离与检测中的步骤1. 样品处理需要将待测样品进行SDS处理，在加热的条件下，SDS可以使蛋白质获得带负电的线性结构，这样可以消除蛋白质的构象差异，从而在电泳过程中只受到电场的作用而进行迁移。

2. 样品加载处理好的样品需要被加在SDS-PAGE的凝胶孔中，然后进行电泳操作。

3. 电泳电泳的原理是利用电场的作用，使具有电荷的离子或分子在电场中移动。

在SDS-PAGE中，蛋白质通过受到电场的作用，根据其分子大小在凝胶中被有效地分离。

4. 凝胶染色蛋白质在凝胶中分离后需要进行染色，通常使用银染或共染技术，使蛋白条带清晰可见，便于进一步的分析。

序四：SDS-PAGE的个人观点和理解通过对SDS-PAGE的原理及在物质分离与检测中的步骤的了解，我深刻认识到这一技术在蛋白质研究领域中的重要性。

SDS-PAGE能够对蛋白质进行高效分离和定量，为蛋白质的性质和功能研究提供了有力的手段。

S D S聚丙烯酰胺凝胶电泳S D S P A G E实验原理和操作步骤The pony was revised in January 2021SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)实验原理和操作步骤实验原理：SDS-PAGE是对蛋白质进行量化，比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法。

该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构，并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中。

SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比。

在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后，电荷因素可被忽略。

蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。

试剂和器材：试剂：1. 5x样品缓冲液（10ml）:0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油，2ml 10%的SDS，0.5ml巯基乙醇，1ml 1%溴酚蓝，0.9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。

2. 凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0.8g，加重蒸水溶解后，定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中，4℃保存，一般可放置1个月。

3. pH8.9分离胶缓冲液： Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8.9，定容至100ml，4℃保存。

4. pH6.7浓缩胶缓冲液： Tris5.98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6.7，定容至100ml，4℃保存。

5. TEMED（四乙基乙二胺）原液6.10%过硫酸铵（用重蒸水新鲜配制）7. pH8.3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6.0g，甘氨酸28.8g，加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存，临用前稀释10倍。

8. 考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70%的过氯酸，最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤。

SDSPAGE原理和流程操作步骤详解SDS-（Sodium Dodecyl Sulfate Polyacrylamide Gel Electrophoresis）是一种电泳技术，用于分离蛋白质。

它是目前最常用的蛋白质分离方法之一、以下将详细介绍SDS-的原理和操作步骤。

一、原理SDS-利用凝胶电泳原理，在电场作用下，将蛋白质按照其分子量大小分离。

其中SDS（Sodium Dodecyl Sulfate）是一种阴离子表面活性剂，它会使蛋白质解离成单个多聚体，并赋予了所有蛋白质相同的电荷密度，使其仅以分子量来分离。

此外，SDS还能够疏水化蛋白质，使其保持线性构象。

二、流程操作步骤1.制备凝胶：a.准备获得所需蛋白质分子量范围内的分离凝胶（通常为8-20%)和浓缩凝胶（通常为4%）。

b.根据实验需要，自制聚丙烯酰胺凝胶，或购买预铸凝胶片。

c. 使用缓冲液（常见的是Tris-HCl缓冲液）将凝胶片激活。

d.将激活的凝胶放在垂直电泳仓中，然后在最上层加入新鲜的蒽胺溶液以形成平整的上胶液面。

2.蛋白质样品处理：a. 将样品蛋白质进行还原处理，可以使用还原剂如β-巯基乙醇（β-mercaptoethanol）或二巯基甘油（dithiothreitol）。

b.加入相应体积的SDS缓冲液（含有SDS和甘油），将样品加热至100°C，以使其完全变性。

c.在样品中加入跟踪染色剂，常用的有溴酚蓝。

3.加载样品：a.打开电泳仓的盖子并插入试验板。

b.将样品架（通常是细长的注射器或者微量吸管）插入样品孔中，并缓慢地向内注入样品。

c.尽量确保样品的数量均匀，然后小心地将试验板放入电泳槽中。

4.电泳：a. 确保试验板完全浸没在含有缓冲液（如Tris-Glycine缓冲液）的电泳槽中。

b.调整电泳仓的参数，如电流和电压。

c.开启电源，运行电泳，直到跟踪染色剂移动到凝胶底部。

5.凝胶染色和成像：a.将凝胶从电泳槽中取出，并进行染色。

SDSPAGE的原理及应用1. SDSPAGE的简介SDS-PAGE(Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis)是一种常用的蛋白质电泳技术。

它是利用SDS和聚丙烯酰胺凝胶的化学和物理性质对蛋白质进行分离和分析的方法。

SDSPAGE技术在生物医学研究、生物制药、生物工程等领域具有广泛的应用。

2. SDSPAGE的原理SDSPAGE的原理可以分为凝胶制备、样品处理、电泳和凝胶分析四个步骤。

2.1 凝胶制备SDSPAGE使用的凝胶通常是由聚丙烯酰胺、缓冲液和加入聚合物化学变性剂SDS组成的。

聚丙烯酰胺形成一个网状结构，可以促使蛋白质在电泳过程中进行分离。

为了调整凝胶的孔隙大小，通常会添加交联剂以控制凝胶的致密度。

2.2 样品处理在SDSPAGE中，样品处理是非常重要的。

首先，样品需要用样品缓冲液稀释或溶解，以保持样品在电泳过程中的稳定性。

然后，可以将样品加热处理，以使蛋白质的结构变性并且具有相同的带电量。

最后，可以添加还原剂，如2-巯基乙醇，以使蛋白质的二硫键断裂，从而使其以线性形式迁移。

2.3 电泳电泳是SDSPAGE中的一个关键步骤。

在电泳过程中，将样品加在凝胶的孔中，然后通电，带正电的蛋白质会迁移到凝胶的阳极，带负电的蛋白质会迁移到凝胶的阴极。

通过电场作用，蛋白质会根据其分子量的大小在凝胶中进行分离。

2.4 凝胶分析凝胶分析是SDSPAGE的最后一步。

通过染色剂或其他检测方法，可以将分离的蛋白质进行可视化。

通常使用的染色剂有Coomassie蓝染剂、银染剂等。

染色后，可以通过比较蛋白质的迁移距离和分子量标准品的迁移距离来确定样品中的蛋白质分子量。

3. SDSPAGE的应用SDSPAGE技术在生物学研究和生物工业中有广泛的应用。

3.1 蛋白质分离和纯化SDSPAGE技术可以将蛋白质按照其分子量进行分离和纯化。

分离得到的蛋白质可以用于进一步的研究，如质谱分析、酶活性测定等。

sds-page蛋白凝胶电泳原理SDS-PAGE蛋白凝胶电泳（Sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis）是一种常用的蛋白质分析和分离技术。

本文将从原理、方法与步骤、应用以及优缺点等方面详细介绍SDS-PAGE蛋白凝胶电泳。

一、原理SDS-PAGE蛋白凝胶电泳是一种基于电泳原理的方法，主要通过蛋白质的质量和电荷来进行分离。

其原理主要包括以下几个方面：1.蛋白质的复性破坏：SDS-PAGE在凝胶中加入SDS（十二烷基硫酸钠）和还原剂（如巯基乙醇）可以使蛋白质发生复性破坏，其中SDS具有较强的负电性，可以使蛋白质在水溶液中带有负电荷。

同时，还原剂可以将蛋白质中的二硫键还原为巯基，从而进一步破坏其空间结构。

2.蛋白质的质量分离：SDS-PAGE的较高浓度的聚丙烯酰胺凝胶可以提供较高的分辨率，使得蛋白质根据其质量而发生迁移。

SDS为蛋白质提供了一个数量几乎相等的负电量，使得每个蛋白质分子以近似相同的速率移动。

3.蛋白质的电荷分离：由于SDS-PAGE中的凝胶含有离子，电荷可以影响蛋白质的迁移速率。

正电蛋白质受到SDS的负电荷影响而发生迁移，负电蛋白质则受到进一步迁移的影响。

因此，在电泳时，蛋白质的负电荷将决定其迁移方向。

二、方法与步骤SDS-PAGE蛋白凝胶电泳的方法与步骤可以大致分为以下几个步骤：1.制备凝胶：首先制备聚丙烯酰胺凝胶，通常使用两种浓度的聚丙烯酰胺溶液，分别称为分离凝胶和浓缩凝胶。

在凝胶中加入TEMED和过硫酸铵来引发聚合反应。

制备完分离凝胶后，将它移至电泳槽中，同时注入上缓冲液。

2.样品处理：将待测试的蛋白质样品与SDS和还原剂混合，使蛋白质变性并带上负电荷。

样品通常需要经过煮沸过程，进一步破坏蛋白质的空间结构。

3.蛋白质电泳：将样品注入凝胶孔洞中，开启电源，让电流通过凝胶，使得蛋白质在凝胶中移动。

电泳完毕后，取出凝胶并进行染色。

sds-page原理
SDS-PAGE（聚丙烯酰胺凝胶电泳）是一种常用的蛋白质分离和分析方法，其原理可以分为以下几个步骤：
1. 准备样品：将待分析的蛋白质样品溶解在含有SDS（十二烷基硫酸钠）和还原剂（如二巯基乙醇）的缓冲液中。

SDS
可以使蛋白质变为带有负电荷的线性形式，并破坏蛋白质之间的非共价相互作用；还原剂可以断裂蛋白质之间的二硫键。

2. 准备凝胶：通常使用聚丙烯酰胺（Polyacrylamide）作为凝胶材料，用于形成一个互联的三维网络结构。

通过改变凝胶的浓度和聚合物化学交联程度来调控凝胶的孔径大小。

3. 装配电泳装置：将经聚合的凝胶放置在电泳槽中，同时使凝胶与正、负极电极接触。

在前导缓冲液中加入迁移染色前蛋白样品。

4. 进行电泳：将电场通电，带电的蛋白质在电场力的作用下从凝胶上端迁移至下端。

由于SDS使蛋白质带有负电荷，所以蛋白质的迁移速率与其分子量反相关，分子量越大的蛋白质迁移速度越慢。

5. 染色和可视化：在电泳结束后，可以使用染色剂（如Coomassie蓝染剂）对蛋白质进行染色，可以直观地看到不同蛋白质的迁移情况。

还可以使用特异性的抗体进行免疫染色，以检测特定蛋白质的存在与否。

6. 分析和解释：通过测量蛋白质迁移距离和与已知分子量标准品的比较，可以确定待测蛋白质的相对分子量。

根据蛋白质在凝胶上的迁移位置，可以推测其可能的结构和功能。

总之，SDS-PAGE利用SDS破坏非共价相互作用，并使蛋白质带有负电荷，通过电场作用下的迁移速率差异，实现对蛋白质的分离和分析。

SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）实验原理和操作步骤实验原理：SDS—PAGE是对蛋白质进行量化,比较及特性鉴定的一种经济、快速、而且可重复的方法.该法是依据混合蛋白的分子量不同来进行分离的。

SDS是一种去垢剂，可与蛋白质的疏水部分相结合，破坏其折叠结构,并使其广泛存在于一个广泛均一的溶液中.SDS蛋白质复合物的长度与其分子量成正比.在样品介质和凝胶中加入强还原剂和去污剂后,电荷因素可被忽略。

蛋白亚基的迁移率取决于亚基分子量。

试剂和器材：试剂：1。

5x样品缓冲液(10ml）：0。

6ml 1mol/L的Tris-HCl （pH6。

8),5ml 50％甘油，2ml 10%的SDS,0。

5ml巯基乙醇，1ml 1％溴酚蓝，0。

9ml蒸馏水。

可在4℃保存数周，或在－20℃保存数月。

2。

凝胶贮液：在通风橱中，称取丙烯酰胺30g，甲叉双丙烯酰胺0。

8g，加重蒸水溶解后,定容到100ml。

过滤后置棕色瓶中,4℃保存，一般可放置1个月.3。

pH8.9分离胶缓冲液：Tris 36.3g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH8。

9，定容至100ml，4℃保存.4。

pH6。

7浓缩胶缓冲液: Tris 5。

98g ，加1mol/L HCl 48ml，加重蒸水80ml使其溶解，调pH6。

7，定容至100ml，4℃保存。

5. TEMED(四乙基乙二胺）原液6。

10％过硫酸铵(用重蒸水新鲜配制）7。

pH8。

3 Tris-甘氨酸电极缓冲液：称取Tris 6。

0g，甘氨酸28.8g,加蒸馏水约900ml，调pH8.3后，用蒸馏水定容至1000ml。

置4℃保存,临用前稀释10倍。

8。

考马斯亮蓝G250染色液：称100mg考马斯亮蓝G250，溶于200ml蒸馏水中，慢慢加入7.5ml 70％的过氯酸,最后补足水到250ml，搅拌1小时，小孔滤纸过滤.器材：电泳仪,电泳槽，水浴锅，摇床。

实验操作(一）样品制备将蛋白质样品与5X样品缓冲液(20ul＋5ul）在一个Eppendorf 管中混合。

sds-page电泳的原理
SDS-PAGE电泳是一种常用的蛋白质分离技术，其原理是利用蛋白质的分子大小和电荷差异在凝胶中进行电动力学分离。

首先，将待分离的蛋白质样品用SDS（十二烷基硫酸钠）缓冲液进行处理，使蛋白质完全解性，并在分子表面结合一定数量的SDS分子。

SDS的作用是给予蛋白质相同的电荷密度，使蛋白质在电场中迁移速度与分子量成反比。

这样，蛋白质在电场的作用下，由负极迁移到正极。

同时，在电解液缓冲液中加入还原剂（如2-巯基乙醇）和丙二醇等添加剂，可以防止蛋白质在电泳过程中发生氧化反应，保持还原态。

然后，将蛋白质样品加载到聚丙烯酰胺凝胶孔中，然后施加直流电场。

由于缓冲液和凝胶都是离子导电的，电场通过凝胶时会造成凝胶中的离子产生移动，形成离子漂移流。

分子量较小的蛋白质会受到凝胶的糊精网络的限制，迁移速度较慢；而分子量较大的蛋白质迁移速度较快。

这样，不同分子量的蛋白质会在凝胶中产生分离。

最后，电泳结束后，将凝胶从电泳槽中取出，并经过染色或转印等进一步处理。

染色后，可以观察到不同大小的蛋白质在凝胶中形成的带状条带。

根据已知分子量的标准蛋白质样品的迁移距离绘制标准曲线，就可以确定待测蛋白质的分子量。

总之，SDS-PAGE电泳利用蛋白质的分子大小和电荷差异，在凝胶中进行电动力学分离，是一种常用的蛋白质分析技术。