液相色谱-四极杆飞行时间质谱联用(HPLC-QTOF)

液相色谱-四极杆/飞行时间质谱联用（HPLC-QTOF）

一、开机

1.打开计算机，LAN Switch电源。

2.打开液相各个模块电源，打开质谱前面的电源开关，等待大约两分钟，当听到第二声溶剂阀切换的声音(表明质谱自检完成)后，仪器可以联机。

3.在计算机桌面上双击MassHunter采集软件图标，进入MassHunter工作站。

4.如果MassHunter工作站在之前曾经打开和关闭过，请确认在再次打开工作站之前，关闭MassHunter所有的进程；双击桌面上的图标，在弹出的窗口点击Shut Down，等待所有的Status都变为Terminated后，点击Close。然后再打开MassHunter工作站。注意：在MassHunter采集软件关闭后，再次打开之前，必须执行上面的操作，否则无法进入采集软件。

5. 点击Standby按钮，检查前级真空（典型值应≤2.5Torr）和高真空，等到高真空≤2×10-6Torr后，关闭工作站。

6. 进入仪器诊断软件界面，在菜单上选择Connection > Connect，输入IP地址

192.168.254.12，点击OK。

根据不同的情况，选择不同的Condition HV的模式。0.6 Hour Cycle (Quick Vent) 适用于Q-TOF短暂关机后的Condition，比如更换泵油，短时间停电等。2 Hour Cycle (Optics Service) 适用于对Q-TOF关机，进行简单维护后的Condition，比如清洗毖绅管等。8 Hour Cycle (TOF Service) 适用于对Q-TOF关机，进行比较长时间的维修后的Condtion，比如仪器出现故障后Agilent工程师上门维修后再次开机。13 Hour Cycle (Installation) 适用于Q-TOF安装时第一次开机后的Condtion；当者是比如长假关机后再次开机。

7. 标签栏显示Instrument ON/OFF界面，点击Condition HV。

8. 当Condition HV结束后，在File菜单上选择Connection > Disconnect，关闭TOF Diagnostics软件。

9. 重新进入MassHunter工作站。

二、调谐和校正

准备调谐和校正

将稀释好的TOF-ESI调谐液装入Calibrant B瓶中，调谐液的配置方法见下表(以制备100mL 调谐液计算)。

切换到调谐界面左键/当右键点击Q-TOF图标，选择On。然后在Context下拉框中选择Tune，切换到Tune界面，如果出现Method Editor对话框，选择No。接着出现Agilent MS Acquisition Worklist Pane对话框，选择No。

对于Q-TOF仪器，TOF部分的调谐和校正有下面几种模式：Initial Tune，Standard Tune，Quick Tune，Check Tune，Set Detector Gain以及Calibration。Initial Tune做的项目最多，所需时间最长；Standard TOF Tune次之；Quick Tune最少。Check Tune只是检查仪器状态，不会修改任何参数；Calibration只校正质量轴。注意：建议每天仪器运行之前运行Calibration。

三、方法编辑

在桌面上双击数据采集软件图标，进入MassHunter数据采集界面。在这个界面中完成所有HPLC和Q-TOF的方法参数设置。

新建方法

通过菜单File>New>Method创建一个新的方法。当者通过菜单File>Open>Method来打开D:\MassHunter\Methods\目录下的默认方法Default.m。在这个方法的基础上创建新的方法。注意：不建议使用已有方法直接选择“另存为”来创建新方法，最好的办法就是像上面所述通过全新的方法模板来创建新方法。

自动进样器选项卡

点击自动进样器页面(h-ALS-SL)，设置自动进样器的参数。Standard injection是指进样器吸取样品后直接进样分析。Injection with Needle Wash是指进样器吸取样品后，会先自动清洗进样针的外壁，然后再进样分析。Use Injection Program是指对自动进样器的动作按照自己的需要进行编程，来决定自动进样器一步步如何操作。这种模式很少用到，但对一些特殊的分析，如氨基酸柱前衍生自动分析是最佳的选择。一般建议设置为Injection with Needle Wash，即带洗针的进样方式，这样可以显著减少样品交叉污染。

对于一般的应用来说，不要设置High Throughput。其作用是通过减少两次进样的间隔时间，加快样品分析的速度。这个选项可以一定程度减少每次进样运行之间的等待时间，但若设置不当也可能会增加交叉污染，降低重现性。

Options和Carryover Reduction页面下的参数一般不需要设置，使用默认值即可。

泵选项卡

点击泵的页面，设置泵的参数。在Setup页面设置泵的流量、流动相比例等。Timetable可以让您建立一个梯度程序。也可以编写流量和压力的时间程序。可以通过Insert、Append、Cut、Copy和Paste等功能方便的进行编辑。在Option菜单下可以设置冲程、压缩因子、及最大流量梯度等。

柱温箱选项卡

在柱温箱编辑画面输入柱温箱温度。大部分应用情况下，左右加热的温度设置成相同值。Time Table和Options内的参数一般不需设置，使用默认值

Q-TOF选项卡

Time Segments

可以设定不同的质谱采集时间片断，在每个时间片断内还可以设定不同的试验参

数(Experiment #)。在Q-TOF的参数里面，如果某个参数后标有Seg，则说明这是可以按照Time Segment来设置的参数。如果某个参数后面标有Expt，则说明这是可以按照Experiment来设置的参数。

General

在这里设置离子源的各种参数。在此主要应考虑进入质谱的流动相的实际组成及流量确定适合的Gas Temp，Drying Gas，Nebulizer的值。依据化合物特性及分子量大小来确定适合的Fragmentor，Skimmer，OCT1 RF Vpp，VCap等。