丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书

血清丙型肝炎病毒抗体检测作业指导书（ELISA）原理在微孔条上预包被丙型肝炎病毒（HCV）重组嵌合抗原，采用ELISA法检测丙型肝炎病毒抗体。

样品加入已有样品稀释液的包被抗原反应孔，在随后的温育过程中，若样品中含特异抗体，则该抗体与包被抗原形成抗原抗体复合物被吸附到固相，再加入酶标记的第二，最终形成抗原-抗体-酶标二抗复合物，洗涤除去未结合的游离酶，加入显色剂后显色。

标本采集2.1 采集前病人准备：受检者应空腹2.2 标本种类：血清或血浆2.3 标本要求：采集病人静脉血2ml，室温放置不超过4小时，分离血清备用。

标本储存：2-8°C保存不应超过1周，-20°C不应超过3个月，-70°C长期保存，应避免反复冻融。

标本运输：密封，室温运输。

标本拒收标准：污染、标本量不足、严重溶血或脂血标本不宜作此项检测。

试剂6.1 试剂名称：丙型肝炎病毒抗体诊断试剂盒6.2 试剂生产厂家：河南华美生物工程有限公司。

6.3 包装规格：96Test/Kit6.4 试剂盒组成：包被反应板，样品稀释液，酶标记抗体，阳性对照血清，阴性对照血清，浓缩洗涤液，底物A，底物B，终止液，封口膜，密封袋。

6.5 试剂储存条件及有效期：2-8°C避光保存，有效期6个月。

仪器设备7.1 仪器名称：自动酶标仪7.2 仪器厂家：KHB7.3 仪器型号：ST360操作步骤8.1 平衡：将试剂盒各组分取出，平衡至室温（18-25°C），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。

8.2 配液：浓缩洗涤液配制前充分摇匀（如有晶体应充分溶解），浓缩洗涤液和蒸馏水或去离子水按1：19稀释后使用。

8.3 编号：将微孔条固定于支架，按序编号。

8.4 加样品稀释液：用加样器在微孔反应条板孔中加入样品稀释液，每孔100μl，空下四孔准备加对照。

8.5 加标本和留空白：将每份待检标本各10μl分别加入已有样品稀释液的各孔中，留下一孔不加标本作空白对照，标好位置。

丙型肝炎病毒核酸定量检测标准作业指导书1.目的采用PCR技术、实时荧光探针技术，用于临床血清或血浆标本中的丙型肝炎病毒核酸的定性检测，适用于丙型肝炎病毒感染的辅助诊断。

2.范围适用于丙型肝炎病毒核酸定量检测。

3. 职责操作人员：负责标本制备检测、仪器操作、报告发送。

专业组组长：负责本组耗材的请购，监督本组标本检测、仪器操作、报告发送、质控管理等各方面工作。

实验室主任：负责监督和指导实验室各方面工作。

4. 原理采用荧光PCR技术，以丙型肝炎病毒基因编码区的高度保守区为靶区域，设计特异性引物及荧光探针，进行一步法RT-PCR扩增，并检测荧光信号，仪器软件系统自动绘制出实时扩增曲线，根据阈循环值(CT)实现对未知样本的检测。

另外，本试剂盒带有内标物质，用于对核酸提取的整个过程进行监控，减少假阴性结果的出现。

5. 样本要求适用标本类型：血清标本采集用一次性无菌注射器抽取受检者静脉血 2 ml，注入无菌的真空采血管中（未加抗凝剂），室温（22-25℃）放置30-60min血标本可自发完全凝集析出血清，或直接使用水平离心机，1500rpm离心5min；吸取上层血清，转移至灭菌离心管。

标本保存和运送所采集的标本可立即用于测试或长期保存于-70℃，也可保存于-20℃待测，保存期为3个月，标本应避免反复冻融。

标本运送采用干冰（或者冰袋）保持低温，运输时间不应超过4天。

拒收标本：拒绝重度溶血样本、肝素抗凝的血浆。

6. 仪器和试剂设备AB7500核酸扩增仪、恒温金属浴、生物安全柜、低温离心机等。

试剂生产厂家：中山大学达安基因股份有限公司产品标准批号：YZB/国 7271-2013最低检出量：最低检出量为500 IU/ml试剂各组分见表1：表1 试剂盒组分表7. 操作步骤试剂准备（试剂储存和准备区）进入试剂准备区，打开通风设备，按照消毒清洁程序擦拭实验台面，并在检验流程记录表上做相应记录。

PCR反应液配制取出HCV反应液A、HCV反应液AB，室温溶化后振荡混匀，8000rpm离心数秒后使用。

丙型肝炎病毒抗体测定标准操作程序（）【目的】指导免疫项目丙型肝炎病毒抗体的测定。

【适用仪器】酶标仪36O、洗板机36W等。

【该变动程序】本标准操作程序的改动，可由任一使用本的工作人员提出，并报经下述人员批准签字：专业主管、科主任。

【方法原理】法：用特异性抗原包被酶联板，待检血清中的抗抗体与包被抗原反应，再与酶标结合，形成抗原-抗体-酶标抗体复合物，加底物（）显色，在酶标仪上测定后根据值判定有无抗体的存在。

【标本要求】种类：血清、血浆。

【试剂】试剂盒：样品稀释液、阴性和阳性对照、浓缩洗液、酶标抗体、底物液A、底物液B、终止液。

保存条件及有效期：28℃储存。

自生产日期起，有效期半年。

【质控品】试剂盒中的阴性和阳性对照、省临检中心下发的，依说明书4–8℃冷藏。

【操作步骤】1．加生物素试剂：每次试验设空白对照1孔；阴性对照3孔，阳性对照2孔，分别加入阴、阳性对照10微升。

除空白孔外，其余孔加入50微升生物素试剂。

2．加样：分别在相应孔中加入待测样本、阴性对照和阳性对照各50微升，空白孔除外。

3．温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育60分钟。

4．洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。

5．加酶:空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物100微升。

6．温育：振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。

7．洗涤：用洗板机洗板，重复洗5次后拍干。

8．显色：每孔加入底物缓冲液50微升，再加入底物液50微升，振荡混匀，盖上封板膜，置37±1℃温育30分钟。

9．终止：每孔加入终止液50微升，混匀。

10.用酶标仪读值，零置酶标仪450或双波长450630下测定值。

结果判定1．阴、阳性对照和被检样品的值减去空白对照值即为计算值。

2．试剂空白需<0.08，阴性对照孔值≤0.1，阳性对照孔值≥0.8。

3．临界值（值）的设定：值=0.12+阴性对照均值4．被检样品的值>=临界值应判为抗体阳性反应，<临界值为阴性反应。

丙型肝炎病毒(H C V)核酸扩增(PCR)荧光定量检测标准操作程序一、目的：明确丙肝病毒核酸定量检测的操作规程，指导检验人员正确进行丙肝病毒核酸定量的检测,保证检测结果及时可靠。

二、范围：适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。

三、职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。

四、检测原理：本试剂盒从血清或血浆中提取HCV RNA，在逆转录酶作用下将RNA逆转录为HCV cDNA，在引物的指导下，以四种脱氧核苷酸为底物，通过耐热DNA聚合酶的酶促作用，对cDNA进行体外扩增，用Taqman探针法检测扩增产物。

通过标准曲线，即可计算出被检物的含量。

五、试剂：1. 来源：上海复星HCV核酸扩增荧光定量检测试剂盒〕。

2. 规格：32人份/盒。

3. 试剂盒组成：3.1 病毒RNA提取试剂：用于从血清或血浆中提取HCV RNA。

裂解液 4ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液助沉剂1瓶含有助沉剂的冻干粉末去抑制剂1瓶含有去抑制剂的冻干粉末洗涤液A 14ml×1瓶含有硫氰酸胍的溶液洗涤液B 4ml×1瓶含有Tris的溶液洗脱液1×2支含0.04% NaN3的灭菌双蒸水（无RNase）核酸提取柱32支×1包含连接套管3.2 核酸扩增（PCR）―荧光检测试剂：RT―PCR试剂PCR主反应液 250ul×1支含有一对引物和dNTP的溶液酶混合物 180ul×1支含有Taq酶、逆转录酶和RNA酶抑制剂的溶液荧光探针20ul×1支含有荧光探针的溶液250ul×1支阴性对照含有0.05% NaN的HCV RNA阴性的混和人血清3强阳性对照 250ul×1支含有约2×106 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA弱阳性对照 250ul×1支含有约2×104 IU/ml的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品1 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品2 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品3 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品4 250ul×1支含有适量的HCV基因片段的非传染性体外转录RNA工作标准品①～④的参数和强、弱阳性对照的定值允许范围根据批号不同而不同。

丙型肝炎病毒IgG抗体定量测定作业指导书一、目的：规范丙型肝炎病毒IgG抗体测定的标准操作程序，确保丙型肝炎病毒IgG抗体测定的结果准确有效。

二、适用范围：在AutoLumo A2000化学发光检测仪上定量测定人血清中的丙型肝炎病毒IgG抗体。

三、临床意义丙型肝炎是一种广泛流行的病毒性疾病，据 WHO调查，全世界估计有1.7亿人感染丙型肝炎病毒 (HCV)，在不同的国家慢性丙型肝炎病毒感染的流行病学统计是在 0.5％～20％，我国一般人群抗 HCV阳性率为3.2％。

而急性丙型肝炎绝大多数都会形成有慢性感染的过程，慢性丙型肝炎病毒感染是肝硬化和肝癌的主要原因之一[1,2]。

丙型肝炎的诊断有赖于 HCV抗体的血清学检定及病毒学检测。

HCV抗体阳性代表机体对病毒感染的应答，一般在感染 1～2月后出现抗体，急性和慢性丙型肝炎的区别在于 HCV核心 IgG量的差异，慢性病人的 IgG抗体水平比急性的要高些，并且通常有更长的免疫活性。

通过自然恢复或经治疗清除病毒的急性丙型肝炎患者，IgG会在几年之后消失或低于检测下限而无法检出[3]。

临床上也应注意到一些血液透析、免疫功能缺陷和自身免疫性疾病患者可出现抗-HCV假阳性，可以采用抗-HCV RIBA或HCV RNA检测确认，有助于确诊这些患者是否合并感染HCV。

四、方法原理本试剂盒采用间接法原理进行检测。

以HCV抗原包被磁微粒，辣根过氧化物酶标记的抗人IgG制备酶结合物，通过免疫反应形成抗原－抗体－酶标记抗体复合物，该复合物催化发光底物发出光子，发光强度与HCV IgG抗体的含量成正比。

五、标本的采集与处理5. 1. 采用正确医用技术收集血清样本（详见标准血液标本前处理流程）。

5.2. 样本中勿添加叠氮钠作为防腐剂。

5.3.样本中的沉淀物和悬浮物可能会影响试验结果，应离心除去，并确定样本未变质方可使用。

5.4. 样本处理、收集后在室温放置不可超过8小时；如果不在8小时内检测需将样本放置在2～8℃的冰箱中；若需48小时以上保存或运输，则应冻存于-20℃以下，避免反复冻融。

抗体效价测定操作规程 Hessen was revised in January 2021抗体效价测定操作规程操作步骤：一．IgG类1.IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me溶液混合，封口，置37℃水浴箱作用60分钟，先稀释血清：200L病人血清600L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。

第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，在第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。

这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。

2.加红细胞悬液（自配红细胞悬液同反定型试剂）每管各加2％相应红细胞悬液200L，混匀。

（如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液；如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液；如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液；）3.先直接观察离心结果，之后在每管分别加入凝聚胺试剂盒中的R1液3d，混合30S均匀后，在各加R2液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法，然后判读结果。

通常以肉眼观察到的第一个“±”的凝集管作为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价（Titer），或称滴度。

二．IgM1.血清连续倍量稀释法先稀释血清：100L病人血清+700L生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。

第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200L，第一管和第二管中各加入稀释血清200L，第二管混匀后移出200L转至第三管，以同样操作第六管，从第六管吸出200L暂时保留在另一试管中（可做为第七管），以备必要时作进一步稀释。

这样从第一管到第六管的血清稀释度依次是1:8,1:16,1:32,1:64,1:128,1:256。

丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）说明书【产品名称】通用名称：丙型肝炎病毒抗体检测试剂（胶体金法）【包装规格】条型单人份：50人份/盒；板型单人份:40人份/盒。

【预期用途】本产品用于定性检测人血清.血浆样本中的丙型肝炎病毒（HCV）抗体。

丙型肝炎病毒是一种很小的.具有包膜的单股正链RNA病毒，是主要引起非肠道传播的非甲非乙型肝炎病毒，据文献报道，90%以上非肠道传播的非甲非乙型肝炎（NANBH）和25%以上急性散发性肝炎均为HCV感染所致，且35-50%的非甲非乙型肝炎发展为慢性肝炎，与肝癌的发生相关。

HCV主要传播通过血源传播，此外还可以其他方式如通过母婴垂直传播，家庭日常接触和性传播等。

【检验原理】本试剂采用高度特异性的抗体抗原反应原理及胶体金标记免疫层析分析技术，试剂含有被预先固定于膜上检测区（T）的包被用HCV重组抗原。

检测时，样本滴入试剂加样处于预包被的胶体金颗粒结合的标记用HCV重组抗原反应。

然后，混合物再毛细效应下向上层析。

如是阳性，标记用HCV重组抗原金标粒子在层析过程中先于样本中的HCV重组抗体结合，随后结合物会被固定在膜上的包被用HCV重组抗原结合，在检测区内（T）会出现一条紫红色条带。

这条带是包被用HCV重组抗原-HCV抗体-标记用HCV重组抗原金标粒子的复合物在膜上结合形成的。

如是阴性，则检测区内（T）将没有紫红色条带。

无论HCV抗体是否存在于样本血样中，一条紫红色条带都会出现在质控区内（C）.质控区内（C）所显现的紫红色条带是判定是否有足够样本，层析过程是否正常的标准，同时也作为试剂内控标准。

【主要组成成分】丙型肝炎病毒抗体检测试剂：包被用HCV重组抗原，标记用HCV重组抗原。

羊抗鼠IgG，硝酸纤维素膜，玻璃纤维；缓冲液：成份为氯化钠，磷酸氢二钠，磷酸二氢钠；25ul吸管检测记录表各组份的包装数量如下：说明：不同批号试剂中各组份不能够互换使用，以免产生错误结果。

检验时另需准备样本收集容器和计时器。

丙型肝炎病毒抗体(胶体金法)标准操作规程1.检验目的用于体外定性检测人血清或血浆样本中的丙型肝炎病毒(HCV)抗体。

2.检验程序的原理和方法采用胶体金免疫层析技术，应用间接法原理定性检测人血清(浆)HCV抗体。

在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体(anti-IgGAb),在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被重组丙肝混合抗原(Core、NS3、NS4、NS5,源自大肠杆菌)和人IgG 抗体(丙种球蛋白)。

检测阳性样本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗人IgG 抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-IgGAb-HCVAb-HCVAg”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人IgG抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。

阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。

3.性能特征3.1用国家参考品测定，产品性能应符合以下要求。

3.1.1阴性参考品符合率：对20份阴性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阴性结果。

3.1.2阳性参考品符合率：对20份阳性参考品进行检测，要求在15分钟内全部显示阳性结果。

3.1.3最低检出量：灵敏度1号1:8进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。

灵敏度2号1:64进行检测，要求在15分钟内显示阳性结果。

3.1.4精密性：用精密性参考品平行检测10次，均在15分钟内显示出清晰可辨的检测线，且显色深度无显著差别。

3.1.5稳定性：试剂盒置37℃20天，阴性参考品符合率、阳性参考品符合率、最低检出量和精密性均应符合要求。

3.2乙肝、人类免疫缺陷病毒(HIV)、甲肝、庚肝、戊肝、类风湿因子(RF)、红斑狼疮等各种类型的标本不会对测试产生干扰。

3.3胆红素(342.0μmol/L)、胆固醇(20.7mmol/L)、血红蛋白(5.0g/L)、甘油三酯(28.2mmol/L)),不影响检测结果。

丙型肝炎病毒抗体检测（酶联免疫法）1、原理：本法采用间接法酶联免疫吸附试验原理。

在微孔条上预包被基因重组HCV结构和非结构区，配以酶标记IgG抗体及TMB显色等其他试剂，检测人血清或血浆中的丙型肝炎病毒抗体。

2、标本采集与处理?2.1 受检者准备：对于体检对象抽血前保持平时的饮食习惯，采血前应禁食4-6小时。

2.2静脉采血：除非是卧床病人，一般在采血时取坐位。

体位影响水分在血管内外的分布，因此影响测定水平。

故在采血前至少应静坐５分钟。

一般从肘静脉取血，使用止血带的时间不超过１分钟，穿刺成功后立即松开止血带。

2.3采血管：一般采用血清做检验，可以用一般洁净的塑料管或玻璃试管作为容器。

2.4标本处理：血液标本应尽快地送实验室。

本试剂使用样品为人血清或血浆，含EDTA、柠檬酸钠或肝素等抗凝剂的样品可用于本实验。

2.5标本接收：接收标本时应检查标本是否符合要求(要求密封、无溶血、无杂物)、所用试管是否正确、试管是否填写完整、并问讯采血日期，对不合格标本应退回重采，并填写记录。

2.6标本储存：样品中应无微生物，可在2-8o c储存1周，长期储存应低温冻存，避免反复冻融。

3、试剂与仪器：?3.1测定试剂：3.1.1生产厂商：北京万泰生物药业股份有限公司3.1.23.1.3包装：96T×13.1.3试剂配置：浓缩洗涤液 50ml×1瓶样品稀释液 12ml×1瓶HCV酶标板 8×12孔或12×8孔HCV酶标试剂 12 ml×1瓶 HCV阳性对照 0.2ml×1支 HCV阴性对照 0.2ml×1支底物液A、B液各6ml×1瓶终止液 6ml×1瓶自封袋 1个封版膜 2张说明书 1份3．2测定仪器：3.2.1酶标仪：上海安泰model MT-8583.2.2洗板机： ANALYTECH 8284、操作步骤：4．1配液：浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。

检验科免疫室分析项目作业指导书风疹IgG (Rubella IgG)第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-0135根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；更换某些试剂时，根据规定进行多次标定。

5.操作步骤参见仪器标准操作规程。

6.质量控制用质控品1和质控品2，至少每24小时或每一次定标后测定一次。

质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。

检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。

7.计算方法对每一个标本，仪器会自动计算含量。

单位是IU/mL.8.结果解释阴性< 10 IU/mL阳性≥10 IU/mL9.分析性能检测范围：0.17-500 IU/mL精密度：以下列出了此试剂盒在Elecsys仪器上的表现。

每个实验室结果会不同。

重复性测定采用的是美国临床化学实验室标准委员会修订稿EP5-A标准方法进行评估，使用了Elecsys试剂及人血清池、质控进行测定：连续测定10天，每天测定6次（n＝60次）；E170的批内重复性共测定了21次。

结果如下：检验科免疫室分析项目作业指导书风疹IgG (Rubella IgG)第页，共页版本：A/0生效日期：2008-02-014510.干扰因素该方法不受黄疸（胆红素<30mg/dl）、溶血（血红蛋白<5.6 g/dl）、脂血（脂质<2000mg/dl）生物素<60ng/ml 等干扰，接受高剂量生物素（>5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。

不受类风湿因子（1500U/ml）和透析的干扰。

异常病人应结合病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。

11.临床意义风疹病毒是德国麻疹的病原体，德国麻疹是一种通常发生在儿童时期的普通轻微皮疹。

但是，孕妇特别是妊娠早期的最初三个月的感染风疹则是一种严重疾病，风疹病毒可以通过胎盘，导致胎儿死亡或严重残障，通常称之为先天性风疹综合征（CRS），可引起失明，耳聋，先天性心脏病和智力发育迟缓。

区人民医院丙肝抗体检测（HCV-Ab）操作规程1.方法：胶体金法2.原理：本品采用胶体金免疫层析专业技术，在玻璃纤维素膜上预包被金标鼠抗人IgG抗体，在硝酸纤维素膜上检测线和对照线处分别包被丙肝混合抗原和人IgG抗体。

检测阳性标本时，血清样本中HCV-Ab与胶体金标记鼠抗体IgG抗体结合形成复合物，由于层析作用复合物沿纸条向前移动，经过检测线时与预包被的抗原结合形成“Au-anti-IgG Ab-HCV Ab-HCV Ag”夹心物而凝聚显色，游离金标鼠抗人IgG 抗体则在对照线处与人IgG抗体结合而富集显色。

阴性标本则仅在对照线处显色，15分钟内观察结果即可。

3 .试剂英科新创（厦门）科技有限公司4 .试剂组成4.1HCV胶体金试纸条 50条 4.2说明书 1份4.3样品稀释液 4.4塑料滴管5 .仪器目测6 .操作步骤6.1将待测标本从储存条件下取出，平衡至室温并编号。

6.2用塑料滴管加1滴样本血清或血浆，加到试纸条指示箭头下端的加样处。

6.3 随即加2滴样本稀释液。

6.4加样后，阳性标本可在1-15分钟内检出，建议15分钟再最终观察并记录试验结果。

7.结果判断阴性：出现一条红线。

阳性：出现二条红线。

无效：不出现红线。

8 .正常参考值阴性9 .临床意义同ELISA法测定。

10 .标本采集10.1 无菌条件下抽取静脉血2毫升，及时分离血清。

10.2 如采用血浆测定，临床常用抗凝剂（EDTA、肝素、枸橼酸钠）不影响实验结果。

10.3 标本溶血、脂血、严重黄疸或加热灭活的血清标本均可能影响检测结果。

11. 注意事项11.1标本应新鲜澄清。

11.2在良好光线下判断结果。

11.3试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中时间过长，导致受潮。

11.4检测线颜色的深浅程度与样品中抗体的滴度没有一定的必然；联系。

11.5任何一种测试都不能绝对保证样品中没有低浓度抗体存在，所以阴性结果任何时候不能排除含有HCV暴露和感染的可能。

免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）检测作业指导书1 检验目的规范免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）检测试验，确保检测结果准确性和重复性。

2 测定方法免疫透射比浊法。

3 检测原理样品中的免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）抗原分别与试剂中的IgG、IgA、IgM抗体发生免疫反应，生成免疫复合物，形成一定浊度，其浊度与免疫球蛋白的含量成正比。

与通过同样处理的校准液比较，即可计算出样品中免疫球蛋白（IgG、IgA、IgM）的含量。

4 样本血清处理方法见生化标本采集程序。

稳定性：2～8℃稳定4天。

5 仪器和试剂5.1 仪器：美国贝克曼-库尔特DXC800全自动生化仪。

5.2 试剂：由武汉元景商贸公司提供原装贝克曼-库尔特试剂（详见试剂说明书），超过失效期的试剂不能使用。

5.3 校准物：Rodan混合校准品，符合WHO标准，贮存、准备严格遵照其说明书。

5.4 质控物：Rodan正常值及病理值质控品，符合WHO 标准，贮存、准备严格遵照说明书。

6 校准6.1 仪器校准：每年由该仪器维修工程师参照厂方的技术规范对仪器进行一次校准。

6.2 项目校准：试剂盒在仪器上放置稳定期后；试剂批号更换后；由质控结果随时决定。

7 操作步骤上机操作，操作程序、质量控制程序见相应生化仪操作程序。

8 参考范围IgG： 7～16.5g/L，IgA： 0.59～3.5g/L，IgM： 0.48～2.12g/L。

9 警告/危急值未规定。

10 性能指标10.1 线形上限：IgG ≤32g/L，IgA ≤7 g/L，IgM≤24g/L。

10.2 精密度：批内CV ≤4%,批间CV≤8%。

10.3 准确度:不准确度≤8%。

10.4试剂贮存:试剂密闭避光贮存2～8℃可稳定12个月。

11 干扰因素及变异的潜在来源标本出现溶血对测定结果有一定影响。

12 临床意义12.1 免疫球蛋白增高：12.1.1 各种感染，特别是慢性细菌感染如骨髓炎、慢性肺脓肿等，血Ig可升高。

毒核酸定量的检测。

2.适用范围：2.1适用于进行丙肝病毒核酸定量检测的检验人员。

2.2适合仪器：LightCycler480型核酸扩增荧光检测仪2.3方法原理：采用PCR方法结合荧光探针的扩增技术2.4样品要求：血清3.职责：实验操作人员应严格按操作规程进行实验。

4.试剂来源：深圳凯杰公司HCV RNA荧光PCR检测试剂盒。

5.质控物：阴性、阳性对照及阳性参控品系列均来源于试剂盒6.标准操作：6.1 试剂准备（在试剂准备区操作）6.1.1将试剂盒及其它所需试剂置室温解冻，完全融解后混匀。

6.1.2根据当次实验标本量，取出相应试剂（1管=28ul反应液+2ul Enzyme Mix）总的需求量于一管中（其余随即放回原温度保存），如所需要的管数为n (n=标本数+1管阴性对照+1管阳性对照+1管临界阳性对照+4管阳性参控品)（定性检测无需做阳性参控品），取PCR反应管转移至样本制备区。

6.2.实验前准备步骤：6.2.1所需试剂置室温平衡，裂解液和洗液1如出絮状沉淀，37℃温浴至沉淀完全消失。

6.2.2在洗液1中加入16ml无水乙醇，做好标记,室温保存,使用前摇匀。

6.2.3在洗液2中加入23ml无水乙醇，做好标记,室温保存,使用前摇匀。

6.2.4将310ul的洗脱液加入含有310ug的Carrier RNA中,充分混匀,分装,-20℃储存.不要反复冻融3次.6.2.5裂解液工作液的制备混合后2-8℃稳定保存48小时,裂解液工作液必须每次实验前新鲜配制裂解液工作液制备表6.2.6将1.4ml蛋白酶溶解液加入蛋白酶冻干粉试剂瓶中,混匀至完全溶解,避免有泡沫,2-8℃保存.6.3样本制备及加样（在标本制备区操作）6.2.1取n个1.5ml的灭菌离心管（n=样本数＋1管阴性对照+1管强阳性对照＋1管临界阳性对照），做好标记。

6.2.2分别加入25ul蛋白酶溶液.6.2.3分别加入待测样本,阴性对照,强阳性对照,临界阳性对照各200ul6.2.4加200ul新鲜配制的裂解液工作液盖上盖子,振荡15秒,混匀(不可把蛋白酶溶液加入到裂解液中).6.2.5 56℃温浴15min,瞬时离心,去除盖上液滴.6.2.6加入250ul无水乙醇,盖上盖子,振荡15s,室温静置5min. ,瞬时离心,去除盖上液滴.(室温超过25℃,无水乙醇要预冷.)6.2.7将n个纯化柱放入收集管中,将6.2.7的液体移入到纯化柱中,盖上盖子,6000g 离心1min,倒掉废液.6.2.8打开纯化柱的盖子,加入500ul洗液1, 6000g离心1min,倒掉废液.6.2.9打开纯化柱的盖子,加入500ul洗液2, 6000g离心1min,倒掉废液.6.2.10打开纯化柱的盖子,加入500ul无水乙醇, 6000g离心1min,倒掉废液.将纯化柱放入新的收集管中.6.2.11 20000g高速离心3min,除去乙醇.6.2.12将纯化柱放入干净的1.5ml离心管中,开盖,56℃温浴3min,以除去残留液体.6.2.13将纯化柱放入另一个干净1.5ml离心管中,加入60ul洗脱液(加到膜中央).盖上盖子,室温静置5min.20000g离心1min收集滤出液.4℃保存备用.应在2h内用于PCR扩增,或-70℃保存一个月6.2.14取20ul的6.2.13的RNA溶液及定量标准品,加入PCR反应管中.6.3 PCR扩增（在扩增区操作）6.3.1打开稳压器电源，再打开计算机电源。

医院IgG抗Ａ（Ｂ）测定规程1.试剂和材料1.1.0.2mol/L巯基乙醇应用液：以pH7.4PBS（KH２PO41.73g,Na2HPO4˙12H2O19.35,NaCl8g加蒸馏水至100ml）稀释到100ml,用热合机分装到塑料管中，每段含0.25ml,保存冰箱备用。

1.2.5%A型和B型红细胞悬液1.3.抗球蛋白血清。

2 .操作2.1.吸取受检者血清0.2ml，加巯基乙醇应用液0.2ml,混合，将试管口塞紧，置37℃水浴中2h.2.2.排列小试管一排（10支），每管加pH7.4PBS0.2ml。

2.3.第一管加巯基乙醇应用液处理的血清0.2ml,混合，吸取0.2移至第二管内，混和，以此类推，作倍比稀释至第10管，每管内留有1:4, :8,1:16,…1:2048不同稀释度血清。

2.4.每管各加5%A（或B）型红细胞悬液0.2ml，置37℃致敏一小时。

2.5.结果观察，如在前几管内发现有红细胞凝集者，是由于高效价IgG抗A（B）或IgA抗A（B）所引起，2.6.其余红细胞未见凝集的试管，再以PH7.4PBS洗涤3次，除去洗涤液，留取压积红细胞。

2.7.各管各加pH7.4PBS2滴，混合。

2.8.每管各取1滴，分别移至另一排小试管中，再各加最适稀释度的抗球蛋白血清1滴，混合。

2.9.1000r/min离心1min。

2.10轻轻摇动试管，观察结果，红细胞凝集的最高稀释度的倒数即为IgG抗Ａ（B）效价。

3.附注：3.1 0.01mol/L二硫苏糖醇（DDT）盐水溶液也可用于灭活ＩgM抗体。

3.2当母亲血清中IgG抗A（B）效价大于1:64时提示婴儿有受害的机会，大于1:128时提示婴儿很可能受害，大于1:512时几乎100%发病。

3.3当父亲血型为AB时，应排列小试管两排，第一排加5%A 型红细胞悬液, 第二排加5%B型红细胞悬液,分别测抗A、抗B效价。

抗核抗体谱(IgG)检测标准操作规程1.目的规范抗核抗体谱(IgG)检测，保证结果的准确性。

2.适用范围检验科免疫组工作人员。

3.试剂规格名称与组成型号名称：ANA 谱 1靶抗原：nRNP/Sm，Sm，SS-A，Ro-52，SS-B，Scl-70，Jo-1，CENP B，dsDNA，核小体，组蛋白，核糖体 P 蛋白类型：IgG基质：抗原包被的检测膜条规格：16×01(16)4.预期用途：用于体外定性检测人血清或血浆中的抗 nRNP、Sm、SS-A（天然 SS-A 和 Ro-52）、SS-B、Scl-70、PM-Scl、Jo-1、CENP B、PCNA、dsDNA、核小体、组蛋白、核糖体P 蛋白和 AMA M2 共 14 种不同抗原 IgG 类抗体。

5.适应症：夏普综合征（MCTD），系统性红斑狼疮（SLE），干燥综合征，进行性系统性硬化症，多肌炎皮肌炎、重叠综合征、局限型进行性系统性硬化症（CREST 综合征），原发性胆汁性肝硬化。

6.临床意义：抗核抗体识别是各种细胞核组分（细胞核的生化成份）[1,2]，包含核酸、细胞核蛋白及核糖蛋白。

可特征性地出现于许多疾病中，尤其是风湿性疾病[3,4,5]。

在炎症性风湿性疾病中，这些抗核抗体的阳性率在 20%到 100%之间，以风湿性关节炎的阳性率最低，在 20%至40%之间。

因此，ANA 鉴别诊断在对个别风湿疾病的确认十分必要，而且对自身免疫性疾病的进一步诊断也很有价值。

[3,6,7,8,9,10,11]风湿疾病—夏普综合征（混合结缔组织病＝MCTD)[8]—系统性红斑狼疮（SLE)[8, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22]—干燥综合征（原发性干燥综合征）[5],—系统性硬化症（系统性硬皮病,SSc)[1, 23],—局限型系统性硬化症（CREST 综合征） [28]—多肌炎/皮肌炎[12,15]—类风湿性关节炎[5]7.主要组成成分：8.储存条件及有效期： 2-8°C 保存，不要冷冻。