氨基酸( AA)含量检测试剂盒说明书 可见分光光度法

肥料氨基酸含量检测方法
肥料中氨基酸含量的检测方法可以采用多种技术和方法，以下是其中一些常用的方法：
1.高效液相色谱法（HPLC）：这是一种常见的氨基酸含量检测方法。

它通过将样品中的氨基酸分离，并使用紫外检测器或荧光检测器检测各种氨基酸的浓度。

HPLC法通常具有高灵敏度和高分辨率，能够准确地测定各种氨基酸的含量。

2.气相色谱法（GC）：气相色谱法也可用于氨基酸含量的检测。

在这种方法中，样品中的氨基酸首先转化为相应的氨基酸甲酯衍生物，然后通过气相色谱柱进行分离和检测。

GC法通常需要较长的分析时间，但具有较高的精确度和可靠性。

3.红外光谱法（IR）：红外光谱法可以用于氨基酸的快速检测。

该方法通过分析样品中氨基酸分子的振动和拉伸模式来确定其含量。

红外光谱法具有快速、简便的优点，但灵敏度相对较低。

4.比色法：比色法是一种常用的定性和定量分析方法。

对于氨基酸含量的检测，可以使用特定的试剂与氨基酸反应产生显色反应，然后通过比色计或分光光度计测定溶液的吸光度来确定氨基酸的含量。

5.离子交换色谱法（IEC）：离子交换色谱法是一种常用于分析氨基酸的方法。

在这种方法中，氨基酸根据其电荷性质在离子交换树脂柱上进行分离，并通过检测器检测各个氨基酸的浓度。

在选择合适的检测方法时，需要考虑样品的性质、所需的分析精度和灵敏度、分析时间以及实验室设备和经验等因素。

常见的检测方法通常会结合使用，以确保结果的准确性和可靠性。

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１ 材料 与方法

北京温分公司LC98-I AAA 氨基酸分析系统北京温分分析仪器技术开发有限公司第1章简介1.1 LC98-I AAA氨基酸分析系统氨基酸是构成蛋白质的基本单位，是生物、医药、卫生、农牧业、食品、饮料及饲料等行业生产和科研中必须的分析测试项目，氨基酸的定性和定量分析必将成为企业的必备检测项目。

由于氨基酸种类较多，结构接近，大部分没有紫外或荧光响应，使得氨基酸分析一直是高效液相色谱领域较难解决的问题之一。

LC98-I AAA氨基酸分析系统采用二元梯度高效液相色谱系统及专用C18色谱柱使18种氨基酸得到很好的分离，采用紫外检测器完成氨基酸的检测。

1.2 原理反相色谱具有分离效率高、应用范围广、性能稳定等特点，是HPLC中应用最为广泛的分离模式，但是由于氨基酸带电荷，在反相色谱柱上保留弱。

用离子对试剂虽然能够在一定程度上增加保留，但是选择性差异小，分离比较困难；同时氨基酸的检测也是难点。

目前最为常用的氨基酸分析方法是在分离之前使氨基酸与带疏水性基团的衍生试剂反应生成利于在反相柱上保留、分离的化合物，经柱分离后，通过相应的检测器定性、定量。

氨基酸与苯异硫氰酸（PITC）的反应LC98-I AAA氨基酸分析系统采用苯异硫氰酸（PITC）作为柱前衍生的衍生试剂，在弱碱性条件下，氨基酸的α-氨基可与苯异硫氰酸（phenylisothiocyanate, PITC）反应生成相应的苯氨基硫甲酰氨基酸（简称PTC-氨基酸）。

在酸性条件下，PTC-氨基酸环化形成在酸中稳定的苯乙内酰硫脲氨基酸（phenylthiohydantoin，简称PTH）。

蛋白质多肽链N-末端氨基酸的α-氨基也可有此反应，生成PTC-肽，在酸性溶液中释放出末端的PTH-氨基酸和比原来少一个氨基酸残基的多肽链（图1）。

PTH-氨基酸在酸性条件下极稳定并可溶于乙酸乙酯，用乙酸乙酯抽提后，经高压液相就可以确定肽链N-末端氨基酸的种类。

该法的优点是可连续分析出N端的十几个氨基酸。

T logy科技分析与检测鱼露，是一种有特殊鲜香味的水产调味品，特别是在沿海地区，受到人们的广泛喜爱。

鱼露可以用小鱼小虾或其他水产品的加工下脚料为原材料制作而成，成本低廉且营养丰富。

鱼露制作是利用鱼体所含的酶，在多种微生物共同参与下，对原料鱼中的蛋白质、脂肪等成分进行发酵分解，酿制而成。

其味咸、极鲜美、含有所有的人体必需氨基酸和牛磺酸，还含有钙、碘等多种矿物质和维生素[1-2]。

鱼露不仅在味道上独树一帜，它含有的氨基酸种类和矿物质也很丰富[3]。

鱼露质量好坏的关键是氨基酸态氮含量。

氨基酸态氮含量越高，营养价值越高。

本文主要研究食品安全国家标准食品中氨基酸态氮的测定方法即 GB 5009.235-2016中的两种方法：甲醛法和分光光度计法[4]。

本文利用建立的方法对8份市售鱼露样品进行测定，比较两种检测方法的精密度、加标回收以及优缺点。

1　甲醛法和分光光度计法操作 步骤1.1　甲醛法操作步骤吸取鱼露样品5.0 mL至100 mL 容量瓶中，用水定容至标线，混匀后吸取20.0 mL置于200 mL烧杯中，加60 mL水，开动磁力搅拌器，用氢氧化钠标准溶液c（NaOH）= 0.05 mol/L滴定至pH=8.2，再加入10.0 mL甲醛溶液，混匀。

再用氢氧化钠标准溶c（NaOH）=0.05 mol/L滴定至pH=9.2，记录氢氧化钠标准溶液的毫升数。

同时取80 mL水，做试剂空白试验[4]。

1.2　分光光度计法操作步骤定量吸取鱼露样品1.0 mL置于200 mL容量瓶中，用水定容至标线，混匀。

精密吸取1 mL试样稀释溶液于10 mL比色管中，加入4 mL乙酸钠乙酸缓冲溶液（pH4.8）及4 mL显色剂，用水稀释至刻度，混匀。

置于100 ℃水浴中加热15 min，取出，水浴冷却至室温后，移入1 cm比色皿内，以零管为参比，于波长400 nm处测量吸光度，同时取氨氮标准使用液做标准曲线[4]。

2　样品测定结果取8份市售的鱼露按照甲醛法和分光光度法分别测定试样中氨基酸态氮含量，其结果如表1所示。

仪器分析实验报告
氨基酸类物质的紫外光谱分析和定量测定
zuozhe
一、 实验目的
（1）掌握紫外–可见分光光度计的工作原理与基本操作。 （2）学习紫外–可见吸收光谱的绘制及定量测定方法。 （3）了解氨基酸类物质的紫外吸收光谱的特点。
二、 实验原理
紫外-可见分光光度法属于吸收光谱法，分子中的电子总是处在某一种运动状 态中，每一种状态都具有一定的能量，属于一定的能级。电子由于受到光、热、 电等的激发，从一个能级转移到另一个能级，称为跃迁。当这些电子吸收了外来 辐射的能量，就从一个能量较低的能级跃迁到另一个能量较高的能级。物质对不 同波长的光线具有不同的吸收能力，如果改变通过某一吸收物质的入射光的波 长，并纪录该物质在每一波长处的吸光度（A）,然后以波长为横坐标，以吸光度 为纵坐标作图，这样得到的谱图为该物质的吸收光谱或吸收曲线。 当一定波长的光通过某物质的溶液时，入射光强度 I0 与透过光强度 It 之比的 对数与该物质的浓度 c 及厚度 b 成正比。其数学表达式为：
312.87
图 7 对待测波长处的放大图像 根据峰值绘制标准曲线：
仪器分析实验报告
图12 酪氨酸溶液的4阶导数标准曲线 然后带入未知样品在峰值处的一阶导数强度，可以得出c=82.4mg/L。
六、
思考题
（1）本实验是采用紫外吸收光谱中最大吸收波长进行测定的，是否可以在波长较短的吸 收峰下进行定量测定，为什么？ 答：不可以，因为在波长较短的吸收峰处很窄的波长范围内随λ的变化改变很大， 此工作条件难于控制准确一致，将会影响测定结果的精密度和准确度。 （2）被测物浓度过大或过小对测量有何影响？应如何调整？调整的依据是什么？ 答：浓度过大容易超出线性范围，浓度过小则会造成较大的误差。应当在粗略估 计待测浓度之后将其稀释或浓缩至工作曲线浓度范围内后再进行测量。 （3）思考紫外-可见分光光度法应用于蛋白质测量的依据，并设计相应的实验方案，测 定奶粉中蛋白质的含量。

文章编号:1004-7964(2004)03-0039-05收稿日期:2003-11-05基金项目:国家高技术研究发展计划(863计划)经费资助,课题编号:2001AA647020四川大学青年基金,课题编号:H2002[9-057]第一作者简介:戴红,女,1966年出生,副教授。

主要研究方向:分析检验。

氨基酸分析的检测方法评述戴红,张宗才,张新申(皮革化学与工程教育部重点实验室(四川大学),四川成都610065)摘　要:对氨基酸分析常用的化学方法、电化学方法、分光光度法(包括可见光分光光度法,紫外光分光光度法和荧光分光光度法)等检测方法进行综述,以期为提高氨基酸分析的灵敏度、准确性,为快速、高效的氨基酸分析方法的建立提供参考。

关键词:氨基酸;检测;分析中图分类号:Q517;Q503 文献标识码:ADetermination M ethods of Amino A cids A nalysisDA I Hong ,ZHA N G Zong 2cai ,ZHA N G Xi n 2shen (Key L aboratory of L eather Chemist ry and Engi neeri ng(S ichuan U niversity ),M i nist ry of Education ,Chengdu 610065,Chi na )Abstract :Determination methods for amino acids ,including chemistry determination ,elec 2tric 2chemistry determination ,spectrophotometer determination and conductivity detection method were reviewed for the sake of improving the analysis sensitivity and accuracy.The paper aimed at providing useful reference to building a fast and effective amino acids aualytic methods.K ey w ords :amino acid ;analysis ;determination 氨基酸是蛋白质的基本结构单位和生物代谢过程中的重要物质,氨基酸分析技术对蛋白质化学、生物化学和整个生命科学研究以及产品开发、质量控制和生产管理等具有重要意义,广泛地应用于化工、轻工、食品加工、医药卫生行业的医药、食品、保健品等的分析,并且用于皮革化学鞣革机理的研究中[1,2,3]。

氨基酸检测试剂盒（茚三酮比色法）氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)简介：氨基酸(Amino acid ，AA)是组成蛋白质的基本单位，也是蛋白质的分解产物。

动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，氨基酸(AA)检测试剂盒(茚三酮比色法)(Amino Acid Assay kit)检测原理是在弱酸条件下，氨基酸与茚三酮共热情况下，能定量的产生蓝紫色的二酮茚胺(又称Ruhemans 紫)，其吸收峰在波长570nm 处，在一定范围内颜色深浅(即吸光度)与氨基酸浓度成正比。

该试剂盒主要用于检测血清、尿液、植物组织、食品、药品等中的总游离氨基酸含量。

该试剂盒仅用于科研领域，不宜用于临床诊断或其他用途。

组成：操作步骤(仅供参考)：1、准备样品：①植物样品：取新鲜植物组织，清洗干净，擦干，切碎，迅速称取，按植物组织：AA Lysis buffer=的比例加入AA Lysis buffer 匀浆或研磨，用去离子水稀释至，混匀，用滤纸过滤，滤液即为氨基酸粗提液，4℃保存备用。

②血浆、血清和尿液样品：血浆、血清按照常规方法制备后可以直接用于本试剂盒的测定，-20℃冻存，用于氨基酸的检测。

③细胞或组织样品：取恰当细胞或组织裂解液，如有必要用AA Lysis buffer 进行适当匀浆，离心5min ，留取上清即为氨基酸粗提液，4℃保存备用，用于氨基酸的检测。

④高活性样品：如果样品中含有较高浓度的氨基酸，可以使用AA Lysis buffer 进行恰当的稀释。

2、配制茚三酮工作液: 取适量的茚三酮显色液、AAAssaybuffer ，按茚三酮显色液：AAAssaybuffer=的比例混合，即为茚三酮工作液。

4℃避光密闭保存，2周有效。

3、配制维生素C 工作液: 取出1支维生素C ，准确溶解于10ml 去离子水，混匀。

4℃预冷备用。

-20℃保存1周有效。

注意：该试剂盒提供的维生素C 及其配制的工作液为过编号名称TC2153 100T Storage试剂(A): 氨基酸标准(50μg/ml) 1ml 4℃ 试剂(B): AALysisbuffer 250ml RT 试剂(C): 茚三酮显色液120ml RT 避光试剂(D):AAAssaybuffer 10.5ml RT 试剂(E): 维生素C 2支RT 使用说明书1份量。

可见分光光度法氨基酸（AA）含量检测试剂盒说明书货号:UPLC-MS-4434规格:50T/48S产品组成：使用前请认真核对试剂体积与瓶内体积是否一致，有疑问请及时联系工作人员。

试剂名称规格保存条件试剂一液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂二液体50mL×1瓶2-8℃保存试剂三粉剂×1瓶2-8℃保存试剂四粉剂×1瓶2-8℃保存标准品粉剂×1瓶2-8℃保存溶液的配制：1、试剂三：临用前加入4mL无水乙醇，盖紧后充分混匀，再加入56mL蒸馏水混匀，避光保存。

2、试剂四：临用前加5mL蒸馏水，充分溶解。

3、标准品：10mg半胱氨酸，临用前加入8.26mL蒸馏水，得到10μmol/mL的半胱氨酸标准溶液备用。

产品说明：动物肝脏、肾脏是氨基酸代谢的主要器官，故尿中氨基酸的变化最能反应肝、肾的生理状态。

另外，氨基酸还能反应灼伤、伤寒等方面情况。

植物体内氨基酸含量对研究植物在不同条件下及不同生长发育时期氮代谢变化、植物对氮素的吸收、运输、同化及营养状况等有重要意义。

氨基酸的α-氨基可与水合茚三酮反应，产生蓝紫色化合物，在570nm有特征吸收峰；通过测定570nm吸光度，来计算氨基酸含量。

技术指标：最低检出限：0.798μmol/mL线性范围：1-15μmol/mL注意：实验之前建议选择2-3个预期差异大的样本做预实验。

如果样本吸光值不在测量范围内建议稀释或者增加样本量进行检测。

需自备的仪器和用品：台式离心机、可见分光光度计、水浴锅、1mL玻璃比色皿、可调式移液枪、研钵/匀浆器、无水乙醇、冰和蒸馏水。

操作步骤：一、样本处理（可适当调整待测样本量，具体比例可以参考文献）组织样本：称取约0.1g组织，加试剂一1mL，室温下充分研磨，转移到1.5mL EP管中，盖紧后（防止水分散失）置于沸水浴提取15min；自来水冷却后，10000rpm，4℃离心10min，取上清液，待测。

AccQ-Tag法测氨基酸含量1.所需设备及试剂1.1.设备：a.天平（精度0.1mg）；b.pH计（精度0.01级）；c.单标线吸管（50ml）；d.容量瓶（500ml）；e.溶剂过滤器及滤膜（0.45µm）；f.试管（1.5×15cm，1.5×10cm）；g.样品管（6×50mm）；h.微量进样器（10µl）；i.微量可调移液器（20µl，100µl，1000µl）及吸头；j.旋涡混匀器；k.烘箱（55℃）；l.HPLC系统及AccQ-Tag柱。

1.2.试剂：a.超纯水（≥18MΩ∙cm）；b.乙腈（HPLC级）；c.Waters AccQ-Tag流动相A浓液d.Waters氨基酸水解液标准（H）；e.Waters AccQ-Fluor试剂盒（包括硼酸缓冲液1、衍生剂粉2A、稀释液2B）。

2.流动相A制备：吸取50ml Waters AccQ-Tag流动相A浓液，放至500ml容量瓶中，加超纯水至刻度，用0.45µm滤膜过滤后备用。

3.衍生3.1.标定标准制备3.1.1.1mmol/L色氨酸标准液：称取色氨酸（生化试剂）20.4mg，加超纯水溶解至100ml。

3.1.2.含色氨酸的标定标准：取1支Waters氨基酸水解液标准，打开后吸取1ml，放至一支干净的1.5×15cm试管中，加2.5ml色氨酸标准液，6.5ml超纯水，旋涡混匀，每支Eppendorf 管分装1ml备用。

（此标准含有的色氨酸的浓度与其它氨基酸一样，为0.25mmol/L。

）3.1.3.10倍稀释后的标准可在–20℃保存1个月。

剩余的氨基酸水解液标准可在–20℃保存3个月。

未启封的氨基酸水解液标准可在4℃保存1年。

使用–20℃保存的标准应充分解冻并混匀。

3.2.衍生试剂制备3.2.1.将烘箱预热至55±1℃；3.2.2.取一瓶衍生剂粉2A，轻轻敲动以确保打开前所有粉末落在瓶底；3.2.3.吸取1ml稀释液2B并弃去以冲洗一个干净的微量移液吸头；（警告：稀释液2B为乙腈，可燃且有毒，参考安全数据表。

茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸含量的方法探讨丁永霞【摘要】采用茚三酮显色分光光度法测定食品中α-氨基酸的总含量,通过试验摸索,确定了以甘氨酸为标准品、茚三酮为显色剂的测定方法.试验结果表明,该方法的最佳反应条件为:pH值5.5,在沸水浴中加热显色20 min,常温条件下的最大吸收波长566 nm.用甘氨酸配制系列标准溶液,通过标准曲线法对待测溶液进行定量分析,其相关系数为0.999 5,回收率在95.5％～104.3％范围内,表明该方法具有操作简便、结果准确、重现性良好的特点.【期刊名称】《食品工程》【年(卷),期】2017(000)001【总页数】3页(P55-57)【关键词】茚三酮;分光光度法;α-氨基酸;甘氨酸【作者】丁永霞【作者单位】菏泽市疾病预防控制中心,山东菏泽274010【正文语种】中文【中图分类】TS207.4UV—2550紫外可见分光光度计，日本岛津公司；FA2004N电子分析天平，上海精密科学仪器公司；石英比色皿（1cm）；玻璃比色皿；容量瓶；移液管；吸管；蒸馏烧瓶；加热套；pH试纸。

盐酸溶液，浓度6 mol/L，分析纯；甘氨酸，优级纯；茚三酮试剂，分析纯；乙酸，分析纯；乙酸钠，分析纯；NaOH溶液，浓度1 mol/L，分析纯；酚酞指示剂。

乙酸-乙酸钠缓冲溶液（pH=5.5）：精确称取50 g乙酸钠（CH3COONa·3H20）于烧杯中，加入150mL蒸馏水，用移液管移取2.50mL冰醋酸，加热溶解，冷却后转移到250mL容量瓶中，用馏水定容至刻度。

茚三酮乙二醇溶液（质量浓度3%）：精确称取3 g水合茚三酮，加入50mL乙二醇，低温加热溶解后，转移至100mL容量瓶中，用乙二醇定容至刻度，转移到试剂瓶后置于0℃～5℃冰箱中保存备用（临用时配）。

甘氨酸标准储备液：准确称取0.1000 g甘氨酸标准品，加馏水溶解定容到100mL容量瓶中，摇匀，转移到玻璃试剂瓶后置于0℃～5℃冰箱中备用，此溶液质量浓度为1000 μg/mL。

Amino Acids Kit, Part Number 5063-6588*************(24小时)化学品安全技术说明书GHS product identifier 应急咨询电话（带值班时间）::供应商/ 制造商:安捷伦科技贸易（上海）有限公司中国（上海）外高桥自由贸易试验区英伦路412号（邮编:200131)电话号码： 800-820-3278传真号码: 0086 (21) 5048 2818Amino Acids Kit, Part Number 5063-6588化学品的推荐用途和限制用途无资料。

无资料。

L-Norvaline 无资料。

L-Glutamine 无资料。

L-Asparagine无资料。

L-4-Hydroxyproline无资料。

3,3′-Dithiodipropionic Acid5062-2479FMOC reagent 10 ampoules 1ml ea for AAA5061-3337OPA reagent, 10 mg/ml, 6 ampoules 5061-3335AA, std 10pmol 10/PK 5061-3334AA, std 25pmol 10/PK5061-3333AA, standard 100PMOL 10/PK 5061-3332td 1nmol 10/PK5061-3330AA, standard 250PMOL 10/PK5061-3331部件号:部件号（化学品试剂盒）:5063-6588安全技术说明书根据 GB/ T 16483-2008 和 GB/ T 17519-2013GHS化学品标识:氨基酸试剂盒，部件号 5063-6588推荐用途Sarcosine1 g L-Trytophan1 g -L-Norvaline1 g -L-Glutamine1 g -L-Asparagine1 g -L-4-Hydroxyproline1 g5062-24793,3′-DithiodipropionicAcid1 x 5 g 5061-3337FMOC reagent 10 ampoules1ml ea for AAA10 x 1 ml 5061-3335OPA reagent, 10 mg/ml, 6ampoules6 x 1 ml 5061-3334AA, std 10pmol 10/PK 10 x 1 ml 5061-3333AA, std 25pmol 10/PK 10 x 1 ml 5061-3332AA, standard 100PMOL10/PK10 x 1 ml 5061-3330td 1nmol 10/PK10 x 1 ml 5061-3331AA, standard 250PMOL10/PK 10 x 1 ml:物质或混合物的分类根据 GB13690-2009 和 GB30000-2013紧急情况概述固体。

总氨基酸测定试剂盒说明书一、测定原理：铜离子（Cu 2+）能与各种氨基酸络合产生蓝绿色络合物，在一定波长下颜色的深浅与总氨基酸的含量成正比，故可以用可见光分光光度计测其吸光度，通过换算得到总氨基酸含量。

二、试剂的组成与配制：（80T/78样）试剂一：粉剂×1支，4℃保存6个月。

试剂二：液体5ml×1瓶，4℃保存6个月。

氨基酸反应液的配制：将试剂一加双蒸水至160ml，充分混匀成蓝色混悬液，再缓慢滴加 试剂二，边滴边搅至混悬液全部转换成淡蓝色透明溶液为止，4℃保存（粉剂较难溶解， 试剂二滴加完后还需室温搅拌混匀半小时以上才能溶解完全）。

试剂三：粉剂×1支，4℃保存6个月。

氨基酸显色剂配制：将试剂三加水至80ml 充分混匀。

（注意：有腐蚀性，配制时勿碰皮肤。

） 试剂四：甘氨酸标准品75.07mg/支×6支，4℃保存6个月。

50mmol/L 甘氨酸标准溶液的配制：将75.07mg 的甘氨酸标准品溶于20ml 双蒸水中，充分 混匀，现用现配。

试剂五：液体100ml×1瓶，4℃保存6个月。

三、操作步骤： （一）、尿液的测定：1、操作表：空白管 标准管 测定管 双蒸水（ml）1 50μmol/ml 氨基酸标准液（ml）1 尿液（ml） 1 氨基酸反应液（ml）2 22旋涡混匀氨基酸显色剂（ml）111混匀，3500转/分离心10分钟，取上清液于650nm 处，1㎝光径，双蒸水调零比色。

2、计算公式： (/)(50/)OD OD OD OD mol ml mol ml μμ−=××−尿中T-AA含量样本测试前标准品浓度测定值空白值标准值空白值稀释倍数3、计算举例：取1ml 尿液按操作表进行检测，测得空白管吸光度为0.008，标准管吸光度为0.310，测定管吸光度为0.189，则计算结果为：0.1890.00850129.967/0.3100.008(/)mol ml mol ml μμ−=××=−尿中T-AA含量（二）、血清（浆）的测定：1、操作表：空白管 标准管 测定管 双蒸水（ml）0.3 50μmol/ml 氨基酸标准液（ml）0.3 血清（浆）（ml） 0.3 试剂五（ml） 1.2 1.2 1.2 充分混匀，3500转/分离心10分钟取1ml 上清待测。

实验啤酒中α-氨基酸的测定一、实验目的学习α–氨基氮含量的测定方法，控制麦汁或啤酒质量。

二、实验原理α–氨基氮为α–氨基酸分子上的氨基氮。

水合茚三酮是一种氧化剂，可使氨基酸脱羧氧化，而本身被还原成还原型水合茚三酮。

还原型水合茚三酮再与末还原的水合茚三酮及氨反应，生成蓝紫色缩合物，颜色深浅与游离α–氨基氮含量成正比，可在570nm下比色测定。

三、实验器材与试剂分光光度计，电炉等。

(1)显色剂：称取10g Na2HPO4·12H2O ，6g KH2PO4 ，0.5g水合茚三酮，0.3g果糖，用水溶解并定容至100mL（pH 6.6~6.8），棕色瓶低温保存，可用两周。

(2)碘酸钾稀释液：溶0.2g碘酸钾于60mL水中，加40mL 95％乙醇。

(3)标准甘氨酸贮备溶液：准确称取0.1072g甘氨酸，用水溶解并定容至100 mL，0℃保存。

用时100倍稀释。

四、实验步骤(1)样品稀释：适当稀释样品至含1~3μgα–氨基氮/mL（麦汁一般稀释100倍，啤酒50倍，啤酒应先除气）。

(2)测定：取9支10mL比色管，其中3支吸入2mL甘氨酸标准溶液，另3支各吸入2mL试样稀释液，剩下3支吸入2mL蒸馏水。

然后各加显色剂1 mL，盖玻塞，摇匀，在沸水浴中加热l 6分钟。

取出，在20℃冷水中冷却20分钟，分别加5mL碘酸钾稀释液，摇匀。

在30分钟内，以水样管为空白，在570nm波长下测各管的光密度。

计算：α–氨基氮含量（μg/mL）=（样品管平均O.D./标准管平均O.D.）×2×稀释倍数说明：式中：(样品管平均O.D./标准管平均O.D.）：表示样品管与标准管之间的α–氨基氮之比；2：标准管的α–氨基氮浓度（μg/mL），即（0.1072×14/75）×100；五、注意事项(1) 必须严防任何外界痕量氨基酸的引入，所用比色管必须仔细洗涤，洗净后的手只能接触管壁外部，移液管不可用嘴吸。

品的含量快速检测方法，适合于实验室和生产检 测监控使用及推广。
参考文献
［１］ 夏其昌．蛋白质化学研究技术与进展［Ｍ］．北京：科学出版 社，１９９９．
［２］ 匡海学．中药化学［Ｍ］．北京：中国中医药出版社，２００３． ［３］ 国家卫生部药典委员会．中国人民共和国药典 ２０００ 年版
［Ｍ］．北京：化学工业出版社，２０００． ［４］ 赵余庆．中草药及其制剂质量分析方法［Ｍ］．沈阳：辽宁科
６ 结束语
随着国家不断加大对食品生产企业的监控力 度 、ＱＳ 食 品 安 全 准 入 制 度 和 出 口 食 品 的 ＨＡＣＣＰ 认证推行，含氨基酸类食品生产厂家，必须加强对 产品质量的检测，尤其在对生产过程的质量监控 尤 为 重 要 ，因 此 对 检 测 方 法 更 需 要 简 便 、灵 敏 、快 速、重现性良好、抗干扰性强。我们研究探讨了采 用分光光度法对富含氨基酸类成分的制品中氨基 酸的含量测定方法，就很好地解决了氨基酸类制
取同一批试样，按正文拟定的含量测定方法测 定，重复测定 ８ 次，结果平均值为 ２．３３ｍｇ·ｍＬ－１，变异 系数为 ２．８％。 ３．５ 回收率试验
精密吸取已知含量的样品 ２．５ｍＬ，分别精密加 入丙氨酸标准品溶液 （浓度为 １．０ｍｇ·ｍＬ－１）２．５ｍＬ、 ５．０ｍＬ，按正文拟定的含量测定方法测定，结果平均
目前，市场上许多食品（保健品）中富含氨基酸 类成分，其中以丙氨酸含量最高。丙氨酸是一种氨基 酸，化学式 ａｌａｎｉｎｅ，简写为 ａｌａ，在氨基酸序列中可 简写为 Ａ。，对人体来说，丙氨酸为必需氨基酸。但长 期以来，质检系统缺乏对该类产品进行系统性检验 研究。本试验模仿市场上含中药类食品、保健品的产 品工艺，采用分光光度法测定该类制品中的氨基酸 含量。本法所采用的强酸性阳离子交换树脂柱将样 品中的氨基酸盐置换为氨基酸。实验证明，采用分光 光度法检测含氨基酸类制品的检验方法是可行的。 该法精密度高，抗干扰性强。此项技术在目前食品监 管中具有十分普遍的意义。由于方法简单易行，几乎 可以在一般的实验室使用。

酰基转移酶（AAT）活性检测试剂盒说明书10T可见分光光度法注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。

货号：BC2350规格：10T/9S产品内容：提取液：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂一：液体10mL×1瓶，4℃保存。

试剂二：粉剂×1瓶，-20℃保存。

临用前加蒸馏水0.6mL充分溶解，4℃保存。

试剂三：液体1mL×1支，4℃保存。

试剂四：粉剂×1瓶，4℃避光保存。

临用前加入试剂一0.6mL充分溶解，4℃避光保存；产品说明：AAT是一个多功能蛋白大家族，主要负责催化生物体内各种酰基化和去酰基化反应，在基因表达、代谢和信号传导中具有重要作用。

AAT催化乙酰CoA转移乙酰基到丁醇，同时还原DTNB生成TNB；TNB在412nm有吸收峰，测定412nm吸光度增加速率，来计算AAT活性。

需自备的仪器和用品：可见分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水操作步骤：一、样本的前处理：称取约0.1g样品，加提取液1mL，冰上充分研磨，16000g4℃离心20min，取上清液待测。

二、测定步骤：1、分光光度计预热30min以上，调节波长至412nm，蒸馏水调零。

2、试剂一在37℃水浴保温30min以上。

3、样本测定试剂名称（μL）空白管测定管蒸馏水100-上清液-100试剂一（预热）700700试剂二5050试剂三100100试剂四5050将上述试剂按顺序加入1mL玻璃比色皿中，加试剂四的同时开始计时，在412nm波长下记录10s时的初始吸光度A1和130s后的吸光值A2，计算ΔA空=A2空-A1空；ΔA测=A2测-A1测，ΔA=ΔA测-ΔA空。

注：如果△A测偏低，可以延长反应时间，如测定10s和310s的吸光度，相应修改计算公式中反应时间。

三、AAT活性计算：（1）按样本蛋白浓度计算：单位的定义：37℃中每mL反应体系下每毫克蛋白每分钟催化吸光值变化0.001个单位为1U。

（2）原则曲线旳绘制
管号
1 2 3 4 56 7
o 氨基酸原则溶 液/mL
0
0.5 0.6
0.7 0.8 0.9 1.0
水/mL
1.6 1.1 1.0 0.9 0.8 0.7 0.6
磷酸盐缓冲液/mL 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4 0.4
0 0.5 0.5 0.5
水/mL 磷酸盐缓冲液/mL
1.6 1.1 1.1 1.1 0.4 0.4 0.4 0.4
茚三酮/mL
0.4 0.4 0.4 0.4
按上表加样后混匀，按原则曲线旳环节进行试验，在相同条件下测 定样品旳吸光度，并在原则g/100mL）=
移液管，具塞刻度试管。 试剂：茚三酮、氯化亚锡、磷酸二氢钾、磷酸
氢二钠、原则氨基酸（异亮氨酸）。
试剂配制：（P64） （1）2%茚三酮溶液 （2）pH8.04旳磷酸缓冲液 （3）氨基酸原则溶液：200μg/mL异亮
氨酸原则溶液。
3. 试验环节 （1）样品旳处理：精确吸收0.5mL酱油于 100mL烧杯中，加入5g活性炭和50mL蒸馏 水，置于80℃水浴锅中，保持半小时后过滤 ，用蒸馏水将滤渣清洗数遍，搜集滤液于 100mL容量瓶中，定容至刻线，摇匀备用。
C×K ×100
V×106
式中： C——从原则曲线上查得旳氨基酸含量，μg K——稀释倍数 V——测定时取样量，mL
5. 注意事项 （1）脯氨酸和羟脯氨酸与茚三酮反应呈黄 色，最大吸收波长在440nm处。 （2）有颜色旳样品必需经脱色处理至无色 后方可使用。
1．试验原理 凡具有自由氨基旳化合物，如蛋白质、多肽

摘要采用分光光度法对化妆品中氨基酸含量的测定了研究探讨.氨基酸的氨基与茚三酮水合物反应可生成蓝紫色化合物，该化合物最大吸收峰在568nm 波长处，且此吸收峰值的大小与氨基酸释放出的氨基成正比,因此可作为氨基酸定量分析方法。

该方法简便、灵敏、快速重现性良好，可用于化妆品的产品检验方法。

[13,14]关键词:化妆品；总氨基酸；分光光度法;含量测定目录§1 前言 (4)1。

1 氨基酸的分类 (4)1。

2 氨基酸的应用...................................................。

. (4)1.2。

1 在食品行业的应用 (5)1。

2.2 在医药工业的应用 (5)1。

2。

3 在饲料添加剂行业的应用 (5)1.2。

4 在化妆品行业的应用 (5)1。

2.5 在农业上的应用 (6)1。

2。

6 在其他行业的应用 (6)1.3 氨基酸含量的测定方法 (6)1.3.1 化学法 (6)1。

3.1.1 甲醛滴定法 (6)1.3.1。

2 凯氏定氮法 (6)1。

3。

2 分光光度法 (6)1。

3.3.3 纸色谱法和薄层色谱法 (7)13。

3。

4 气相色谱法 (7)1.3。

3. 5 液相色谱法 (7)1。

3。

3.6 毛细管电泳色谱法 (8)1.3。

3.7 电化学法 (8)§2 材料与方法 (8)2.1 实验原理 (9)2。

2 实验试剂及仪器 (9)2。

2。

1 主要试剂 (9)2.2。

2 主要仪器 (9)2。

3 溶液的配制 (9)2.4 实验方法 (10)2.4.1 测量波长的选择 (10)2。

4.2 显色时间的考察 (10)2。

4.3 标准曲线的绘制 (10)2.4。

4 样品氨基酸的提取 (10)2。

4.5 样品中氨基酸含量测定 (10)§3 结果与讨论 (10)3.1 测量波长的选择 (10)3.2 显色时间的考察 (11)3.3 标准曲线的绘制 (11)3。