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质粒大抽试剂盒

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质粒提取试剂盒原理

质粒提取试剂盒原理

质粒提取试剂盒原理质粒提取试剂盒是一种用于提取质粒DNA的试剂盒，其原理主要基于离心、蛋白酶消化和硅胶膜吸附等方法。

在进行质粒提取实验时，首先需要将含有目标质粒的细菌培养物进行离心，将细菌沉淀物收集起来。

接着，通过加入蛋白酶等消化酶，将细菌细胞壁和膜等部分消化掉，释放出目标质粒。

最后，利用硅胶膜的吸附作用，将目标质粒吸附在硅胶膜上，再通过洗涤等步骤将杂质去除，最终得到纯净的质粒DNA。

质粒提取试剂盒的原理主要包括以下几个步骤：1. 离心，将含有目标质粒的细菌培养物进行高速离心，使细菌沉淀成为一个团。

这样做的目的是将细菌细胞从培养基中分离出来，为后续的蛋白酶消化提供条件。

2. 蛋白酶消化，将离心后的细菌沉淀物加入蛋白酶等消化酶，通过消化细菌细胞壁和膜等部分，释放出目标质粒。

这一步骤是质粒提取试剂盒中至关重要的一步，能够有效地将目标质粒从细菌细胞中释放出来。

3. 硅胶膜吸附，将经过蛋白酶消化的细菌沉淀物加入硅胶膜柱中，利用硅胶膜的吸附作用将目标质粒吸附在硅胶膜上。

硅胶膜具有很强的吸附能力，可以有效地将目标质粒与其他杂质分离开来。

4. 洗涤，通过洗涤等步骤将杂质去除，最终得到纯净的质粒DNA。

这一步骤是为了去除硅胶膜上的杂质和残余的蛋白酶等物质，使得提取的质粒DNA更加纯净。

总结来说，质粒提取试剂盒的原理是通过离心、蛋白酶消化和硅胶膜吸附等方法，将目标质粒从细菌细胞中提取出来，并最终得到纯净的质粒DNA。

这一原理简单易懂，操作方便，适用于实验室中的质粒提取工作。

通过对质粒提取试剂盒原理的深入了解，可以更好地进行质粒提取实验，并取得准确可靠的实验结果。

质粒抽提试剂盒系列

质粒抽提试剂盒系列

常规质粒抽提试剂盒系列D6942-00 Plasmid Mini Kit I(5) 50D6942-01 Plasmid Mini Kit I(50) 199 D6942-02 Plasmid Mini Kit I(200) 600 D6945-00 Plasmid Mini Kit II(5) 85D6945-01 Plasmid Mini Kit II(50) 495 D6945-02 Plasmid Mini Kit II(200) 1800 D6904-01 Plasmid Midi Kit(10) 500 D6904-03 Plasmid Midi Kit(25) 1170 D6904-04 Plasmid Midi Kit(100) 4050 D6922-00 Plasmid Maxi Kit(2) 250 D6922-01 Plasmid Maxi Kit(5) 360 D6922-02 Plasmid Maxi Kit(20) 1350 D6920-00 Plasmid Giga Kit（2） 845 D6920-01 Plasmid Giga Kit（5） 1976 D6920-02 Plasmid Giga Kit（20） 6455 D3376-00 Yeast Plasmid Kit (5) 108 D3376-01 Yeast Plasmid Kit (50) 495 D3376-02 Yeast Plasmid Kit (200) 1800 D6905-01 Fastfilter Plasmid Midi Kit(5) 320 D6905-03 Fastfilter Plasmid Midi Kit(25) 1350 D6905-04 Fastfilter Plasmid Midi Kit(100) 4950 D6924-01 Fastfilter Plasmid Maxi Kit(5) 405 D6924-03 Fastfilter Plasmid Maxi Kit(25) 1900 D6924-04 Fastfilter Plasmid Maxi Kit(100) 7200 D6929-00 Fastfilter Plasmid Mega Kit(2) 580 D6929-01 Fastfilter Plasmid Mega Kit(5) 1440 D6929-02 Fastfilter Plasmid Mega Kit(20) 4595 D1097-01 EZ-96 Fastfilter Plasmid Kit(4x96) 2000 D1097-02 EZ-96 Fastfilter Plasmid Kit(20x96) 9500 D1095-01 EZ-96 SE Plasmid Kit(4x96) 1520 D1095-02 EZ-96 SE Plasmid Kit(20x96) 6800 D6947-00 X-Press Plasmid（5） 87D6947-01 X-Press Plasmid（50） 435 D6947-02 X-Press Plasmid（200） 1485 D1047-00 EZ-96 X-press Plasmid Kit（1×96） 1060D1047-01 EZ-96 X-press Plasmid Kit（4×96） 3160 D1047-02 EZ-96 X-press Plasmid Kit（20×96） 13268 D1532-00 EZ-96 swift plasmid kit(1*96) 630D1532-01 EZ-96 swift plasmid kit(4*96) 1960 D1532-02 EZ-96 swift plasmid kit(20*96) 9660 无内毒素质粒抽提试剂盒系列D6948-00 Endo-free Plasmid Mini Kit I(5) 100D6948-01 Endo-free Plasmid Mini Kit I(50) 540D6948-02 Endo-free Plasmid Mini Kit I(200) 1980 D6950-00 Endo-free Plasmid Mini Kit II (5) 100D6950-01 Endo-free Plasmid Mini Kit II(50) 675D6950-02 Endo-free Plasmid Mini Kit II(200) 2520 D6915-01 Endo-free Plasmid Midi Kit(10) 630D6915-03 Endo-free Plasmid Midi Kit(25) 1530 D6915-04 Endo-free Plasmid Midi Kit(100) 5670 D6926-01 Endo-free Plasmid Maxi Kit(6) 594D6926-03 Endo-free Plasmid Maxi Kit(25) 2250 D6926-04 Endo-free Plasmid Maxi Kit(100) 8820 D6228-00 Endo-free Plasmid Mega Kit（2） 655D6228-01 Endo-free Plasmid Mega Kit（5） 1500 D6228-02 Endo-free Plasmid Mega Kit（20） 5220 D6234-00 Endo-free Plasmid Giga Kit（2） 1304 D6234-01 Endo-free Plasmid Giga Kit（5） 2898 D6234-02 Endo-free Plasmid Giga Kit（20） 10288 高纯度质粒抽提试剂盒系列D7043-01 HP Plasmid Mini Kit I(50) 484D7043-02 HP Plasmid Mini Kit I(200) 1872 D7045-01 HP Plasmid Mini Kit II（50） 585D7045-02 HP Plasmid Mini Kit II（200） 2160 D7004-01 HP Plasmid DNA Midi Kit (10) 585D7004-02 HP Plasmid DNA Midi Kit (50) 2700 D7022-01 HP Plasmid DNA Maxi Kit(5) 675D7022-02 HP Plasmid DNA Maxi Kit(20) 2475 大型质粒抽提抽提试剂盒系列D2156-00 BAC/PAC DNA Kit （5）D2156-01 BAC/PAC DNA Kit （50） 484D2156-02 BAC/PAC DNA Kit （200） 1800 D1055-01 EZ-96 Fastfilter BAC/PAC DNA Kit （4x96） 2500D1055-02 EZ-96 Fastfilter BAC/PAC DNA Kit （20x96） 12000 D1056-01 EZ-96 BAC/PAC DNA Kit （4x96） 1500 D1056-02 EZ-96 BAC/PAC DNA Kit （20x96） 7000 D2157-01 Endo-free BAC/PAC DNA Kit （50） 550D2157-02 Endo-free BAC/PAC DNA Kit （200） 2100 D2154-00 BAC/PAC DNA Maxi Kit (2) 305D2154-01 BAC/PAC DNA Maxi Kit(5) 688D2154-02 BAC/PAC DNA Maxi Kit (20) 2390 单链DNA抽提试剂盒系列D1900-01 M13 DNA Kit(4x96) 3150 D6900-01 M13 DNA Kit (50) 495D6900-02 M13 DNA Kit (200) 1800 D6908-00 M-13 DNA Isolation Maxi Kit（2） 326D6908-01 M-13 DNA Isolation Maxi Kit（5） 725D6908-02 M-13 DNA Isolation Maxi Kit（20） 2464 磁珠质粒抽提试剂盒系列M1250-01 Mag-Bind Plasmid Mini Kit(50) 250M1250-02 Mag-Bind Plasmid Mini Kit(200) 950M1256-01 EZ-96 Mag-Bind Plasmid Mini Kit(4x96) 1800 M1256-02 EZ-96 Mag-Bind Plasmid Mini Kit(24x96) 8640 M1259-01 Mag-Bind Plasmid Mega Kit(5) 1100 M1259-02 Mag-Bind Plasmid Mega Kit(20) 3600 磁珠无内毒素提取试剂盒系列M1258-01 EZ-96 Mag-Bind Endo-free Plasmid Mini Kit(4x96) 2480 M1258-02 EZ-96 Mag-Bind Endo-free Plasmid Mini Kit(24x96) 12360 M1252-01 Mag-Bind Endo-free Plasmid Maxi Kit(5) 480M1252-02 Mag-Bind Endo-free Plasmid Maxi Kit(20) 1600 M1253-01 Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(5) 2400 M1253-02 Mag-Bind Endo-free Plasmid Mega Kit(20) 8640 M1257-01 Mag-Bind Plasmid Maxi Kit(5) 500M1257-02 Mag-Bind Plasmid Maxi Kit(20) 1800。

质粒提取试剂盒 (2)

质粒提取试剂盒 (2)

质粒提取试剂盒简介质粒提取试剂盒是一种用于从细菌中提取质粒的试剂盒。

质粒是一种可以在细菌细胞内自主复制的环状DNA分子，广泛应用于基因工程和分子生物学研究中。

质粒提取试剂盒通过一系列化学和物理方法，可以快速、高效地提取细菌中的质粒，并纯化出目标质粒，供后续实验使用。

组成质粒提取试剂盒一般包含以下主要试剂：1.细菌裂解缓冲液：用于破坏细菌细胞膜，释放细菌内的质粒和其他细胞组分。

2.蛋白酶K：用于降解细菌细胞中的蛋白质，减少蛋白质对质粒提取的干扰。

3.碱式溶液：用于中和细菌裂解液中的酸性成分，以保持适宜的酸碱平衡。

4.酚/氯仿混合溶液：用于分离DNA和蛋白质。

DNA会转移到酚相，而蛋白质则会转移到氯仿相。

5.洗涤缓冲液：用于去除酚/氯仿混合溶液中的残余蛋白质和杂质。

6.乙醇：用于沉淀DNA。

7.纯化缓冲液：用于溶解和稀释沉淀的DNA，以得到纯净的质粒DNA。

使用步骤步骤一：细菌培养和扩增1.首先，选择含有目标质粒的细菌菌落，将其接种到含有适当抗生素的琼脂培养基上。

2.在恒温振荡培养箱中以适当的温度和时间对细菌进行培养，使其形成细菌液培养物。

3.将细菌液培养物按照说明进行扩增，获得足够的细菌量以便后续提取质粒。

步骤二：质粒提取1.向适量的细菌液培养物中加入适量的细菌裂解缓冲液，充分混匀。

2.在室温下孵育一段时间，使细菌细胞完全裂解。

3.加入适量的蛋白酶K，消化掉细菌细胞中的蛋白质。

4.加入碱式溶液，中和酸性成分。

5.加入等体积的酚/氯仿混合溶液，轻轻倒置试管，使混合溶液充分混合。

6.离心混合溶液，使溶液分为上层酚相、中间界面层和下层氯仿相。

7.将上层酚相转移到新的离心管中。

8.加入等体积的洗涤缓冲液，轻轻倒置试管，使混合溶液充分混合。

9.离心洗涤溶液，将上层酚相转移到新的离心管中。

10.重复洗涤步骤，直到洗涤液清澈无色。

11.加入冰冷的乙醇，使DNA沉淀。

12.用洗涤缓冲液洗涤DNA沉淀。

13.用乙醇洗涤DNA沉淀。

质粒提取试剂盒

质粒提取试剂盒

质粒提取试剂盒
质粒提取试剂盒是一种用于从细菌中提取质粒的实验工具。

质粒是细菌中的一种环状DNA分子，常用于基因工程和遗传学研究。

质粒提取试剂盒通常包含以下主要试剂：
1. 细菌裂解缓冲液：用于破坏细菌细胞壁和细胞膜，释放质粒。

2. 酚/氯仿溶液：用于提取DNA，并去除细菌的碎片和蛋白质。

3. 乙酸缓冲液：用于沉淀DNA。

4. 纯化缓冲液：用于纯化提取的质粒DNA。

使用质粒提取试剂盒的步骤一般包括以下内容：
1. 收集细菌：在培养基上培养转染了目标质粒的细菌。

2. 细菌浸液：将培养的细菌转移到裂解缓冲液中，使其充分裂解。

3. 加入酚/氯仿溶液：将酚/氯仿溶液加入细菌浸液中，混合均匀，并离心分离液相。

4. 收集DNA：将DNA上清液收集到新离心管中，并加入乙酸缓冲液，沉淀DNA。

5. 洗涤DNA：倒掉上清液，用乙酸缓冲液洗涤DNA沉淀。

6. 溶解DNA：将纯化缓冲液加入DNA沉淀中，将DNA溶解。

通过质粒提取试剂盒，可以方便地从细菌中提取质粒DNA，并进行后续的分子生物学实验。

无内毒素质粒大提取试剂盒中文操作指南

无内毒素质粒大提取试剂盒中文操作指南

详细内容：. ® (无内毒素质粒大抽提). 在升地培养瓶中加入培养基,然后加入菌种于℃摇床培养小时；文档收集自网络，仅用于个人学习:为获得最好地结果，请接种培养过夜地菌种（）.并强烈推荐使用()品系用于常规地质粒提取，如和.注意：菌液地培养时间不能超过小时；文档收集自网络，仅用于个人学习. 收集培养基至适当地离心管，室温下，×离心分钟沉淀；. 吸尽并去除培养基，用干净地吸水纸吸尽壁上多余地液体.加到细菌培养物中，涡旋和枪头抽打细菌以重悬细胞；文档收集自网络，仅用于个人学习注：充分重悬细菌沉淀物对获得高产量地质粒是相当关键地.充分重悬后溶液是均匀地，不存在小块物质；请尽量吸弃残余地培养基以防止稀释加入地溶液；文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入，轻轻颠倒旋转混匀次至获得澄清地裂解液；室温放置分钟可以有是必须地.避免剧烈振荡混匀而打断染色体，降低质粒地纯度.（使用后请盖紧盖子且于室温保存）；文档收集自网络，仅用于个人学习. 将取出活塞，将其放置于架子上；. 加入，轻轻颠倒混匀几次至出现絮状沉淀.这可能需要放置分钟并间断颠倒混匀；文档收集自网络，仅用于个人学习. 立即将裂解液转移到中，垂直放置分钟.这时白色地絮状沉淀物会漂上溶液地上层，裂解液可能开始流出过滤器，用新地管子收集细菌裂解液，并将活塞轻轻插入过滤器中；文档收集自网络，仅用于个人学习. 握住过滤器，轻轻推动活塞将裂解液打到收集管中；注意不要将任何杂质打到收集管中；. 加入体积地（蓝色）到收集液中，轻轻颠倒旋转混匀次，冰浴放置分钟；注意：加入后，溶液应变得浑浊，但冰浴静置后溶液应是澄清地.文档收集自网络，仅用于个人学习. ℃孵育分钟，溶液重新变为浑浊.室温下，×离心分钟，（蓝色）分层于离心管底部.文档收集自网络，仅用于个人学习. 把上面地水相（上清液）转移到新地离心管中，加入体积地，轻轻颠倒旋转混匀次.注意：转移上清液时不要吸到任何溶液，因为其含有高浓度地内毒素；文档收集自网络，仅用于个人学习. 平衡柱子：用套在收集管中，加入至柱子中，室温下×离心分钟；去除滤过液并重复使用收集管；文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入澄清地裂解液至柱子中，×离心分钟.去除滤过液并重新收集管；. 将剩余地裂解液加到柱子上，按上述条件离心，去除滤过液并重新使用收集管；. 加入至柱子中，×离心分钟，去除滤过液并重新使用收集管；文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入(已用乙醇稀释)至柱子中，×离心分钟，去除滤过液并重新使用收集管；文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入至柱子中，×离心分钟，去除滤过液和收集管；文档收集自网络，仅用于个人学习. 将柱子套在新地离心管中，加入或水至柱子地基质.室温下×离心洗脱.文档收集自网络，仅用于个人学习. ® ( )文档收集自网络，仅用于个人学习. 按步骤准备澄清地裂解液；. 平衡柱子：将同真空装置相连接，加入至柱子中，提供真空分钟至裂解液完全滤过膜；文档收集自网络，仅用于个人学习. 将澄清地裂解液至柱子中，提供真空让所有地溶液滤出柱子；加入至柱子，提供真空吸尽液体；文档收集自网络，仅用于个人学习. 加入（已经用无水乙醇稀释）至柱子中，提供真空让溶液滤出柱子；文档收集自网络，仅用于个人学习. 重用至柱子中，提供真空让溶液滤出柱子；溶液滤出柱子后，将柱子转移至收集管中，另外提供真空分钟，室温下，×离心分钟以洗脱.第二次洗脱可能是需要地；文档收集自网络，仅用于个人学习. 去除柱子，然后将产物保存于℃.。

威格拉斯生物技术(北京)有限公司 质粒大量提取纯化试剂盒

威格拉斯生物技术(北京)有限公司 质粒大量提取纯化试剂盒
注意事项：
1) 从大量的菌液或菌体提取质粒时，可按比例提高Buffer I、Buffer II和Buffer III的用 量，以充分裂解菌体，提高质粒的回收量和纯度。
2) 提取步骤7和纯化步骤5中，充分溶解沉淀对提高质粒产量和纯度非常重要。 3) 操作中要动作轻柔，防止机械剪切可能对DNA的损失。 4) 可在纯化的各个步骤前后留取数微升的DNA溶液，最后电泳鉴定比较提取和纯化
4 l）
0.5 ml -20℃
试剂盒可作20次（<150ml菌液/次）质粒提取纯化。常温运输。RNase A于-20℃保存， 首次使用时加入Buffer I中混匀，置4℃保存。Buffer IV与Buffer VI置4℃保存，其余溶 液保存于室温。有效期6个月。
0.5 ml Buffer I，完全溶解沉淀团块（可用宽口吸管轻轻吹打辅助溶解）。移入新 的1.5 ml离心管中，室温放置10~20 min。 8) 质粒粗提物用台式离心机室温高速离心2 min，上清移入新的1.5 ml离心管中。
质粒纯化： 1) 0.5 ml质粒粗提液中加入100 μl Buffer IV（杂质清除液A），轻轻混匀，12,000 x g
电话：（010）58941231, （010）58941232 传真：（010）58941232
网址：
电子邮件：runon@
如在步骤6未见沉淀担心dna丢失可保留上清液待完成全部操作后电泳鉴定以确定是否获得终产物数百微克高纯度的质粒dna离心后沉淀在管的侧壁上可能无法看到明显团块
威格拉斯生物技术（北京）有限公司
质粒大量提取纯化试剂盒
(Plasmid Maxprep Kit)
产品说明：
本试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，采用全新技术，通过几次离心去除 蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280 通常在1.9左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的 工作中。纯化过程均在Eppendorf管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱， 不用酚氯仿抽提；无论细菌裂解释放出的质粒在1mg以下还是在10mg以上, 基本都可 完全回收，不必担心质粒DNA的丢失。本方法提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小， 即使是10kb甚至100kb以上的大型质粒或超大型质粒，只要碱裂解法能够提取，就可 以有效纯化。纯化过程约需1.5~2小时。

质粒提取试剂盒原理

质粒提取试剂盒原理
质粒提取试剂盒是一种用于提取质粒DNA的试剂盒，其原理是利用离心、溶解、吸附、洗脱等步骤将目标DNA从细胞裂解液中分离出来。

下面将详细介绍质
粒提取试剂盒的原理及各个步骤的作用。

首先，细菌裂解液中的细胞膜和细胞壁会被破坏，使得细胞内的质粒DNA暴
露出来。

接着，加入试剂盒中的一种缓冲液，能够使DNA和其他细胞成分分离开来，使得DNA能够在后续步骤中被提取出来。

然后，通过离心将细胞碎片和其他
杂质沉淀到管底，上清液中的DNA得以分离。

接下来，将上清液加入试剂盒提供
的柱子中，DNA会在柱子上被特定的材料吸附住，而其他杂质则会被洗脱掉。

最后，用洗脱缓冲液将DNA从柱子上洗脱下来，得到纯净的质粒DNA。

质粒提取试剂盒的原理是基于DNA的物理性质和化学性质，通过不同步骤的
组合实现对质粒DNA的高效提取。

在整个提取过程中，试剂盒提供的各种缓冲液
和柱子起着至关重要的作用，能够使DNA得以分离和纯化。

这种原理简单而高效，适用于从各种细菌中提取质粒DNA，为后续的分子生物学实验提供了可靠的DNA
样本。

总的来说，质粒提取试剂盒的原理是通过细胞裂解、DNA分离、DNA吸附、
洗脱等步骤，将目标DNA从细胞裂解液中提取出来。

这种原理简单易行，操作方便，适用于实验室中的质粒DNA提取工作。

希望通过本文的介绍，能够让大家对
质粒提取试剂盒的原理有一个更加清晰的认识，为实验工作的顺利开展提供帮助。

QIAGEN质粒大提试剂盒

产品简介本试剂盒采用独特的硅胶模吸附技术，高效专一地结合质粒DNA。

同时采用特殊的溶液P4和过滤器CS1，可有效的出去内毒素、蛋白质杂志；整个提取过程仅需1h，方便快捷。

使用本试剂盒提取的质粒DNA可适用于各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接、转化和细胞转染多种细胞等试验。

推荐每次菌液使用量：高拷贝质粒推荐使用量为100ml，得率一般在500-1500μg左右；低拷贝质粒推荐使用量为200ml，得率一般在200-600μg左右。

注意事项：请务必在使用本试剂盒之前阅读此注意事项。

1.溶液P1在使用前先加入RNase A （将试剂盒中提供的RNase A全部加入)，混匀，置于2-8℃保存。

2.第一次使用前应按照试剂瓶标签的说明先在漂洗液PW中加入无水乙醇。

3.使用前先检查平衡液BL，溶液P2和P4是否出现结晶或者沉淀，如有结晶或者沉淀现象，可在37℃水浴中加热几分钟，即可恢复澄清。

4.注意不要直接接触溶液P2和P4，使用后应立即盖紧盖子。

5.使用过滤器时请将推柄小心缓慢地从过滤管中抽出，避免滤膜因压力而松动。

6.提取的质粒量与细菌培养浓度，质粒拷贝数等因素有关。

如果所提质粒为低拷贝质粒或大于10kb的大质粒，应加大菌体使用量，同时按比例增加P1、P2、P4的用量；洗脱缓冲液推荐在65-70℃水浴中预热，可以适当延长吸附和洗脱时间，以提高提取效率。

7.实验前使用平衡液BL处理吸附柱，可以最大限度激活硅基质膜，提高得率。

8.用平衡液处理过的柱子最好立即使用，放置时间过长会影响使用效果。

质粒DNA 浓度及纯度检测得到的质粒DNA可用琼脂糖凝胶电泳和紫外分光光度计检测浓度与纯度。

OD260值为1相当于大约50μg/ml双链DNA。

纯化的质粒DNA OD260/OD280通常在1.8-2.0左右，可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的实验中。

操作步骤：1.柱平衡步骤：向吸附柱CP6中（吸附柱放入50ml收集管中）加入2.5ml的平衡液BL，8000rpm（~8228×g）离心2min，倒掉收集管中的废液，将吸附柱重新放回收集管中。

无内毒素质粒 DNA 大量提取试剂盒


5 12,000 rpm 室温离心 12min，收集上清。 6 将上清置于 DNA 纯化柱中，静置 5 min。
●
如果收集的上清液过多，超过 DNA 纯化柱容积（15 ml），可 将上清分次加入 DNA 纯化柱中。
7 12,000 rpm 离心 2min，弃滤液。
●
此时质粒 DNA 被吸附于 DNA 纯化柱中的硅胶膜上。
溶液 W 初次使用前用无水乙醇按 1: 1.5 稀释，即含 60% 乙醇。 ● 溶液Ⅱ、溶液Ⅲ、溶液 PB 中含碱和变性剂，请不要直接 接触皮肤。 ● 上述产品组分均可单独购买，详见产品索引。
质量控制 从大肠杆菌提取 pGEM 质粒 DNA。提取的质粒DNA 质 量通过琼脂糖凝胶电泳、限制性酶切和序列测定分析。 保存条件 RNase A：可室温保存 1 年以上。RNase A 为浑浊溶液。初 次使用本试剂盒时，请将 RNase A 全部加入到溶液Ⅰ中，均 匀混合后于 4℃保存。可保存 6 个月。 其他试剂：室温保存。 若溶液Ⅱ出现沉淀，请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使 用。沉淀的出现不会影响质粒 DNA 的纯化结果。 注意事项-------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------------● ● ● ●
● ● ●
若溶液Ⅱ出现沉淀，请于 37℃保温溶解。待恢复至室温后使用。沉淀的出现 不可剧烈混和，否则会使染色体 DNA 断裂。 此步骤不宜超过 5 min。
不会影响质粒 DNA 的纯化结果。

无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书

无内毒素质粒大量提取试剂盒说明书货号：D1150规格：10T保存：常温干燥保存，复检期为一年。

试剂盒内容：试剂盒组成D1150-10TRNase A1ml内毒素清除剂100ml溶液P140ml溶液P240ml溶液P340ml结合液120ml漂洗液2×15ml洗脱液30ml吸附柱10个收集管20个说明书1份注意：使用前请先在漂洗液中加入无水乙醇，加入体积请参照瓶体上的标签。

溶液P1在使用前先加入RNaseA （将试剂盒中提供的RNaseA全部加入），混匀，置于2-8℃保存。

如非指明，所有离心步骤均为使用台式离心机在室温下离心。

产品说明：本试剂盒采用碱裂解法裂解细胞，根据离心吸附柱在高盐状态下特异性地结合溶液中的DNA的原理特异性提取质粒DNA。

离心吸附柱中采用的硅基质材料能高效、专一地吸附DNA，可最大限度去除杂质蛋白及细胞中其他有机化合物。

本试剂盒内的内毒素清除剂，可最大限度地除去内毒素。

从50-100ml大肠杆菌LB培养液中，可快速提取200-300μg高纯度高拷贝的质粒DNA，提取率达85-90%。

使用本试剂盒提取的质第1页共3页粒DNA纯度高，可直接用于细胞转染等要求较高的实验，以及其他各种常规操作，包括酶切、PCR、测序、连接和转化等试验。

操作步骤:1、取50-100ml细菌培养物，11000rpm离心1min，尽量吸除上清（菌液较多时可以通过多次离心将菌体沉淀收集到一个离心管中）。

2、向留有菌体沉淀的离心管中加入4ml溶液P1(请先检查是否已加入RNaseA），使用移液器或旋涡振荡器彻底悬浮细菌细胞沉淀。

注意：如果菌块未彻底混匀，会影响裂解导致质粒提取量和纯度偏低。

3、向离心管中加入4ml溶液P2，温和地上下翻转6-8次使菌体充分裂解。

注意：混匀一定要温和，以免污染细菌基因组DNA，此时菌液应变得清亮粘稠，作用时间不要超过5min，以免质粒受到破坏。

4、向离心管中加入4ml溶液P3，立即温和地上下翻转6-8次，充分混匀，此时会出现白色絮状沉淀。

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分则适当延长离心时间。时间过长或离心速度过快会使沉淀过于紧密，不利于加入溶液I后散开沉淀。直接倒掉上清，再 倒入约50毫升菌液并重复上述操作，然后倒置于吸水纸上(可用普通草纸)，使液体流尽。如果细菌密度明显偏低，可考虑 使用更多菌液，再重复上述操作1-2次。对于高拷贝质粒所用菌量每管一般不能超过150毫升，对于低拷贝质粒所用菌量 每管一般不能超过200毫升。过量的细菌会导致后续的裂解不充分。 每管加入5毫升溶液I，重悬细菌沉淀。确保沉淀完全散开，无可见细菌团块。 确认溶液I中已添加了RNase A。最高速度vortex 10-20秒或更长时间，悬起沉淀。一定要充分混匀，对着光亮处观察应呈 均匀的悬浊液，无明显细菌团块或絮块。如果没有vortex，可以用枪吹打沉淀使沉淀逐渐散开。 每管加入5毫升溶液II，轻轻颠倒离心管4-6次，室温放置3-5分钟，使细菌完全裂解，溶液透明。 切勿vortex！vortex或其它剧烈操作会导致基因组DNA断裂，易导致最终所得质粒被基因组DNA污染。颠倒4-6次后，溶液 应变得透明，无团块或絮状物。如果加入溶液I后细菌没有完全散开，那么颠倒4-6次后，可能还会有团块或絮状物。遇到 有少量团块或絮状物产生的情况，可以增加颠倒次数3-5次，但总裂解时间不可超过5分钟。 每管加入5毫升溶液III，随即颠倒离心管4-6次混匀，可见白色絮状物产生。 切勿vortex！颠倒次数也不宜过多，否则易导致最终所得质粒的质量下降。 最高速(>5,000rpm)室温离心10-20分钟。 如果速度较高例如10,000rpm左右，一般离心10分钟已经足够。离心更长时间例如20分钟，会使沉淀更加紧密，更集中于 管底，对于进一步提高质粒质量会有所帮助。速度较低时必须适当延长离心时间，使沉淀更加充分。离心时可以准备好 质粒纯化柱，自制漏斗等，并在纯化柱上标上记号。 将上一步骤离心后的上清倒入或吸入到质粒纯化柱内。最高速离心2分钟，倒弃收集管内液体。 质粒倒入质粒纯化柱后，可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。 在质粒纯化柱内加入7毫升溶液IV，最高速离心2分钟，洗去杂质，倒弃收集管内液体。 加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。 最高速再离心2分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。 注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。 将质粒纯化柱置于50毫升离心管上，加入2毫升溶液V至管内柱面上，放置2分钟。 也可以用重蒸水或 MiliQ 级纯水替代溶液 V，但是水的 pH 应不小于 6.5。溶液 V 加入后放置时间稍长，对于增加质粒产 量会略有帮助。 最高速离心2分钟，所得液体中加入10毫升溶液VI，混匀后加到原质粒纯化柱内。 加入溶液VI后必须混匀！可颠倒混匀，混匀后切勿离心。 最高速离心2分钟，倒弃收集管内液体。 在质粒纯化柱内加入15毫升溶液IV，最高速离心2分钟，进一步洗去杂质，倒弃收集管内液体。 加入溶液IV后可以不用等待，直接离心。倒弃收集管内的液体后，保留收集管继续使用。 最高速再离心2分钟，除去残留液体并使痕量乙醇完全挥发。 注意：倒弃收集管内液体后再离心，才能彻底去除微量的溶液IV。微量的溶液IV会影响质粒的质量。 将质粒纯化柱置于50毫升离心管上，加入2毫升溶液V至管内柱面上，放置2分钟。 也可以用重蒸水或MiliQ级纯水替代溶液V，但是水的pH应不小于6.5。溶液V加入后放置时间稍长，对于增加质粒产量会 略有帮助。如想得到较高浓度的质粒，可以加入1.3毫升溶液V洗脱。 最高速离心2分钟，所得液体即为转细胞级超纯质粒。 通常所得质粒浓度为0.1-0.3mg/ml左右。如果想得到高浓度的质粒，可以采用常规的乙醇沉淀方法浓缩质粒。
105ml 105ml 150ml 84ml×3 (第一次使用前每瓶加入126ml无水乙醇) 90ml 210ml 105µl 20个 20个 1份
保存条件：
室温保存，一年有效。
注意事项：
¾ ¾ ¾ ¾ ¾ ¾ ¾ ¾ 第一次使用前把试剂盒提供的RNase A全部加到溶液I (悬浮液)中，混匀，并在瓶上做好标记。加入RNase A后4℃存放。 第一次使用前在每瓶溶液IV (洗涤液)中加入126ml无水乙醇，混匀，并在瓶上做好标记。 温度较低时，溶液II和溶液III可能会有沉淀产生。使用前必须检查一遍。如有沉淀，37℃水浴加热溶解，混匀后使用。溶 液II请勿过分剧烈混匀，否则会产生大量气泡。 溶液II使用完后，一定要盖紧瓶盖，防止被空气中二氧化碳酸化。 溶液II有强碱性，溶液II、溶液III和溶液VI对人体都有刺激性，操作时请小心，并注意适当防护。 本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。 废液收集管在一次抽提中需多次使用，切勿中途丢弃。 为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
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包装清单：
产品编号 D0026-1 D0026-2 D0026-3 D0026-4 D0026-5 D0026-6 D0026-7 — — — 产品名称 溶液I (悬浮液) 溶液II(裂解液) 溶液III (结合液) 溶液IV (洗涤液) 溶液V (洗脱液) 溶液VI (DNA纯化结合液) RNase A (100mg/ml) 大抽质粒纯化柱 废液收集管 说明书 包装
质粒大量抽提试剂盒
产品编号 D0026 产品名称 质粒大量抽提试剂盒 包装 20次
产品简介：
¾ ¾ 碧云天的质粒大量抽提试剂盒(Plasmid Maxi Preparation Kit)是一种用于从大肠杆菌中进行大量质粒的快速抽提的试剂盒。 本试剂盒采用了一种新型的离子交换柱。在特定条件下，使质粒能在离心过柱的瞬间，结合到质粒纯化柱上，在一定条 件下又能将质粒充分洗脱，从而实现质粒的快速纯化。无需酚氯仿抽提，无需酒精沉淀，6个样品只需不足90分钟即可完 成。 两步过柱纯化，使质粒纯度进一步提高，达到转细胞级要求。 每个质粒纯化柱可以结合的质粒量的上限大于500微克。每个纯化柱可用于抽提100毫升左右用LB培养过夜的大肠杆菌。 抽提所得质粒的OD值一般在1.80左右。抽提获得的质粒量会受质粒拷贝数等因素影响。抽提获得的质粒DNA的OD值也 会因菌种不同等原因而略有波动。 由本试剂盒所得质粒可直接用于转染细胞，DNA测序，PCR，基于PCR的突变，体外转录，转化细菌，内切酶消化等。 本试剂盒抽提的含Firefly luciferase 或Renila luciferase报告基因的质粒，用Lipofectmine 2000或Fugene 6转细胞，报告基因 检测结果表明仅0.5微克受SV40启动子控制的质粒转化12孔板内的一孔原代贴壁细胞，总RLU值约为五百万，测定时间为 10秒。 内毒素(endotoxin)含量低。用对内毒素敏感的细胞转染受内毒素响应的报告基因质粒，与Qiagen昂贵的Endotoxin Free大抽 试剂盒相比，检测结果完全一致。
使用说明：
1. 取过夜菌至50毫升离心管内，5000g离心1分钟收集细菌沉淀，弃上清。再重复一次，每管共收集100毫升过夜菌沉淀。 通常大肠杆菌宜用LB培养过夜(16小时左右)至OD值为2-4。建议5000g(通常为5000rpm左右)室温离心1分钟，如沉淀不充

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