辣椒疫霉纤维素合酶蛋白及其编码基因与应用的制作方法

Journal of Northeast Agricultural University东北农业大学学报第52卷第3期52(3):20~252021年3月March 2021辣椒抗疫病基因初步定位张曦，王秀雪，邹春蕾*（辽宁省农业科学院蔬菜研究所，沈阳110161）摘要：辣椒疫病是威胁辣椒生产主要病害，改良品种抗性是解决这一问题最有效途径。

选用对辣椒疫霉菌3号生理小种免疫的高代自交系ZCM334为父本抗源，构建F 1、BC 1F 1、F 2群体分析辣椒抗疫病遗传规律性。

结果表明，在感病对照全部发病时，ZCM334对辣椒疫霉菌3号生理小种抗性由一对显性主效基因控制；利用SLAF-BSA 技术对BC 1F 1抗、感极端分离群体混池测序，将辣椒抗疫病基因定位在辣椒第5号染色体5.1Mb 范围内，候选区域内共有26个候选基因，为下一步目标基因精细定位奠定基础。

关键词：辣椒；疫病；SLAF-BSA ；初步定位中图分类号：S641.3；Q781文献标志码：A文章编号：1005-9369（2021）03-0020-06张曦,王秀雪,邹春蕾.辣椒抗疫病基因初步定位[J].东北农业大学学报,2021,52(3):20-25.DOI ：10.19720/ki.issn.1005-9369.2021.03.003.Zhang Xi,Wang Xiuxue,Zou Chunlei.Preliminary mapping of phytophthora blight resistance genes in pepper[J].Journal of Northeast Agricultural University,2021,52(3):20-25.(in Chinese with English abstract)DOI ：10.19720/ki.issn.1005-9369.2021.03.003.Preliminary mapping of phytophthora blight resistance genes inpepper/ZHANG Xi,WANG Xiuxue,ZOU Chunlei(Vegetable Research Institute,LiaoningAcademy of Agricultural Sciences,Shenyang 110161,China)Abstract:Phytophthora blight is the main disease threatening the production of pepper.Improving the resistance of varieties is the most effective method to solve this problem.The high generation inbred line ZCM334,which was immune to Phytophthora capsici No.3physiological species,was used as the paternal parent resistance source.The F 1,BC 1F 1and F 2populations were constructed to analyze the genetic characteristics of pepper resistance to phytophthora blight.The results showed that the resistance of ZCM334to phytophthora blight was controlled by a pair of dominant gene,when all the susceptible controls diseased.SLAF-BSA technique was used to sequencing the resistant and susceptible populations of BC 1F 1.The phytophthora resistance gene was located in the range of 5.1Mb on chromosome 5of pepper.There were 26candidate genes in the candidate region,and it laid the foundation for the further fine mapping of target genesKey words:pepper;phytophthora blight;SLAF-BSA;preliminary mapping 基金项目：辽宁省青年科技创新人才培养专项资金项目（311024）；辽宁省自然科学基金计划重点项目（20170540506）；辽宁省农业重大专项（2019JHI/10200003）作者简介：张曦（1984-），女，助理研究员，博士，研究方向为辣椒抗病育种。

(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201910169731.1(22)申请日 2019.03.06(71)申请人 江苏丘陵地区镇江农业科学研究所地址 212400 江苏省镇江市句容市华阳镇弘景路1号江苏丘陵地区镇江农业科学研究所(72)发明人 孙国胜　张昌伟　马志虎　许可翠　戴忠良　(74)专利代理机构 南京申云知识产权代理事务所(普通合伙) 32274代理人 王云(51)Int.Cl.C12N 15/82(2006.01)A01H 5/00(2018.01)A01H 6/82(2018.01)(54)发明名称一种辣椒CRISPR-Cas9基因编辑方法及其应用(57)摘要本发明公开了一种辣椒CRISPR/Cas9基因编辑方法及应用，属于基因编辑技术领域。

首先设计s g R N A 引物M M D 1C a C R I S P R -C a s 9-F 和MMD1CaCRISPR -Cas9-R，构建辣椒基因编辑载体；利用植物花粉纳米磁转化技术介导转化，实现对辣椒的基因编辑。

本发明首次在辣椒中使用植物花粉纳米磁转化技术作为基因编辑的转化方法，并通过CRISPR/Cas9基因编辑技术获得单基因敲除突变植株，突变率达到60％；为后续多基因敲除，基因片段插入、替换等奠定技术基础。

权利要求书1页 说明书3页 附图2页CN 109722446 A 2019.05.07C N 109722446A权　利　要　求　书1/1页CN 109722446 A1.一种辣椒C R I S P R-C a s9基因编辑方法，其特征在于，首先设计s g R N A引物MMD1CaCRISPR-Cas9-F和MMD1CaCRISPR-Cas9-R，构建辣椒基因编辑载体；利用植物花粉纳米磁转化技术介导转化，实现对辣椒的基因编辑。

2.根据权利要求1所述的一种辣椒CRISPR-Cas9基因编辑方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)构建辣椒基因花粉纳米磁转化介导转化载体MMD1CaCRISPR-Cas9载体；(2)将载体质粒DNA、纳米磁珠、花粉培养基、辣椒花粉混合后进行磁转化，得到磁转化花粉；(3)将磁转化花粉晾干后，进行人工授粉；(4)收取转化种子后，播种进行鉴定。

辣椒疫霉NPP效应子基因家族生物信息学分析作者：冯宝珍李培谦成娟丽等来源：《江苏农业科学》2014年第07期摘要：NPP（necrosis-inducing Phytophthora protein）是一类效应子，在卵菌疫霉属病原菌中普遍存在，该类蛋白能够激发植物的防御反应，如引起植物细胞死亡、促使寄主防御基因表达及产生乙烯。

利用生物信息学方法对辣椒疫霉（Phytophthora capsici）基因组内的NPP基因家族存在状况进行分析，并对其氨基酸序列组成、基本理化性质、蛋白质三级结构等进行预测分析，旨在了解其结构特征，进而发掘辣椒疫霉的致病相关基因。

结果表明：NPP基因家族有25个成员，其中大部分成员存在多个拷贝。

对25个NPP氨基酸序列进行分析发现，其分子量在12.45～88.9 ku之间；对其中15个NPP蛋白进行三级结构预测发现，它们的三维结构类似，其主要的结构元件为α-螺旋和β-片层；构建了25个NPP蛋白的进化树，进行了分子进化分析。

关键词：辣椒疫霉；NPP基因家族；效应子；生物信息学中图分类号： S436.418.1+9 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2014）07-0028-04收稿日期：2013-10-02基金项目：山西省高校科技项目（编号：20121025）；山西省青年科技研究基金（编号：2013021024-6）作者简介：冯宝珍（1981—），女，山东临沂人，博士，讲师，主要从事分子植物病理学研究。

E-mail：fengbaozhen@。

效应子（effector）是病原物产生的各种能够压制或平衡寄主防御系统的分子。

在侵染过程中，病原物以效应子为关键武器突破寄主的防御系统，一方面能减弱寄主抵抗力以成功侵入，另一方面还能利用寄主的养分以利于自身增殖[1-2]。

许多病原物都能分泌效应子，在细菌、真菌、卵菌及线虫中都发现了效应子[3]。

病原物中存在的效应子有许多种，包括NPP[4]、无毒基因（Avr）[5]、CRN[6]、PcF[7]、ScR[8]、糖类水解酶、果胶酶、几丁质酶以及酯酶[7]等，其中NPP（necrosis-inducing Phytophthora protein）也被称为NLP（NEP1-like protein），此类基因在卵菌、真菌、细菌中普遍存在[8]，但在细菌、真菌基因组内的数量较少，一般为1～4个，而在卵菌基因组中的数量较多，且多数以基因家族形式存在，如在大豆疫霉（Phytophthora sojea）中约有29个，在橡胶疫霉（Phytohthora ramorum）中约有40个[9]。

生物技术进展 2024 年 第 14 卷 第 2 期 263 ~ 270Current Biotechnology ISSN 2095‑2341研究论文Articles产纤维素酶工程菌株的构建及其在醇化烟叶中的应用孔蒙蒙1 ， 卢鹏1 ， 陈千思1 ， 乔学义1 ， 陈善义2 ， 金静静1 ， 郑雪坳1 ， 曹培健1 ， 陶界锰1*1.中国烟草总公司郑州烟草研究院，郑州 450001；2.福建中烟工业有限责任公司技术中心，福建 厦门 361021摘 要：烟叶中过高的纤维素含量使烟叶组织容易破碎，影响加工过程中烟叶的可塑性，使烟叶杂气变重等。

为了获得产纤维素酶的优良菌株，实现醇化烟叶纤维素的有效降解，利用同源重组法成功构建了10株纤维素降解的枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis ）工程菌株。

通过刚果红平板筛选、羧甲基纤维素钠酶活、滤纸酶活及滤纸崩解率等检测，共筛选出C36、CM 、KF 和GH5 4株产纤维素酶能力较强的重组菌株。

将醇化烟叶作为底物进行纤维素降解，发现重组菌株CM 的产纤维酶效率最高，其羧甲基纤维素钠酶活和滤纸酶活分别为39.55和23.52 U ·mL -1。

结果表明，构建的重组菌株能够利用醇化烟叶中的纤维素产生纤维素酶，可为工业生产中醇化烟叶纤维素降解提供理论支撑。

关键词：工程菌株；醇化烟叶；纤维素降解；枯草芽孢杆菌DOI ：10.19586/j.2095­2341.2023.0159中图分类号：Q814， S572 文献标志码：AConstruction of Cellulase Producing Engineering Strains and the Application in Aged Tobacco LeavesKONG Mengmeng 1 ， LU Peng 1 ， CHEN Qiansi 1 ， QIAO Xueyi 1 ， CHEN Shanyi 2 ， JIN Jingjing 1 ，ZHENG Xueao 1 ， CAO Peijian 1 ， TAO Jiemeng 1*1.Zhengzhou Tobacco Research Institute ， China National Tobacco Corporation ， Zhengzhou 450001， China ；2.Technology Center ， China Tobacco Fujian Industrial Co.， Ltd.， Fujian Xiamen 361021， ChinaAbstract ：High cellulose content make the tissue of tobacco leaves broken easily ， affect the plasticity of tobacco leaves during processing ， and make the heavy impurity of tobacco leaves. In order to obtain excellent cellulase producing strains and achieve effective degradation of cellulose in aged tobacco leaves ， ten Bacillus subtilis engineering strains of cellulose -degrading were suc‐cessfully constructed by homologous recombination method. Four recombinant strains C36， CM ， KF and GH5 with strong cellu‐lase production capacity were screened by the Congo red plate method ， carboxymethyl cellulose sodium enzyme activity assay ， filter paper enzyme activity assay and filter paper disintegration rate detection. When aged tobacco leaves were used as substa‐rate ， the recombinant strain CM showed the highest cellulase production efficiency ， and its carboxymethyl cellulose sodium en‐zyme activity was 39.55 U ·mL -1 and filter paper enzyme activity was 23.52 U ·mL -1， respectively. The results indicated that the recombinant strains could utilize cellulose in aged tobacco leaves to produce cellulase ， which could provide theoretical support for cellulose degradation of aged tobacco leaves in industrial production.Key words ：engineered strains ； aged tobacco leaves ； cellulose degradation ； Bacillus subtilis纤维素是一种具有重复单位的多糖聚合物，可看作是植物聚合网络的刚性支架，广泛存在于收稿日期：2023‐12‐12； 接受日期：2024‐01‐05基金项目：烟草行业烟草工艺重点实验室引领计划专项项目(202022AWHZ08)；中国烟草总公司重点研发项目(110202102017；110202201004)。

陈泓妃，顾赛汝，王洪洋，等．致病疫霉酵母双杂交ｃＤＮＡ文库的构建及鉴定［Ｊ］．江苏农业科学，２０２３，５１（１３）：６０－６４．ｄｏｉ：１０．１５８８９／ｊ．ｉｓｓｎ．１００２－１３０２．２０２３．１３．００９致病疫霉酵母双杂交ｃＤＮＡ文库的构建及鉴定陈泓妃，顾赛汝，王洪洋，李灿辉，刘　晶（云南师范大学云南省马铃薯生物学重点实验室／云南师范大学云南省高校马铃薯生物学重点实验室，云南昆明６５０５００） 摘要：致病疫霉是引起马铃薯晚疫病的重要病原菌，在全世界范围内造成了严重的经济损失。

以２种不同致病力的致病疫霉菌株侵染马铃薯叶片５个时间点的混合菌丝样品作为ｃＤＮＡ文库的材料来源，利用Ｇａｔｅｗａｙ法分别构建了初级文库与次级文库，初级文库与次级文库的库容量分别为１．６０×１０７、１．５２×１０７ＣＦＵ，插入片段长度大多在１０００～２０００ｂｐ之间，重组率均达到１００％。

次级文库质粒转化酵母菌构建酵母文库，所得酵母文库滴度为１．００×１０８ＣＦＵ／ｍＬ，转化效率为６×１０８ＣＦＵ／μｇ。

结果表明，本研究构建的酵母双杂交ｃＤＮＡ文库质量较高，完全可以满足互作蛋白高质量、高效率筛选的要求。

该文库为后续深入解析致病疫霉的致病机制奠定了基础。

关键词：致病疫霉；马铃薯；酵母双杂交；ｃＤＮＡ文库 中图分类号：Ｓ４３５．３２ 文献标志码：Ａ 文章编号：１００２－１３０２（２０２３）１３－００６０－０５收稿日期：２０２２－０１－１８基金项目：云南省基础研究计划（编号：２０２００１ＡＵ０７００９１、２０２００５ＡＥ１６００１５）；国家自然科学基金（编号：３２１０１６６５）；广东省基础与应用基础研究重大项目（编号：２０２１Ｂ０３０１０３０００４）；云南师范大学大学生科研训练基金（编号：ＫＸ２０２１１０９）。

作者简介：陈泓妃（１９９７—），女，广西钦州人，硕士研究生，从事病原菌与植物互作机制研究，Ｅ－ｍａｉｌ：１１７５０２２４１５＠ｑｑ．ｃｏｍ。

热带作物学报2020, 41(4): 737 744Chinese Journal of Tropical Crops胡椒4-香豆酸：辅酶A连接酶Pn4CL基因的克隆及表达分析范睿1,2，胡丽松1,2，伍宝朵1,3，郝朝运1,2,3*1. 中国热带农业科学院香料饮料研究所，海南万宁 571533；2. 农业农村部香辛饮料作物遗传资源利用重点实验室，海南万宁 571533；3. 海南省热带香辛饮料作物遗传改良与品质调控重点实验室，海南万宁 571533摘要：根据胡椒4-香豆酸：辅酶A连接酶（4-coumarate:coenzyme A ligase, 4CL）基因的部分序列设计引物，运用RACE方法获得其家族成员的1个全长cDNA，命名为Pn4cl，长度2130 bp，开放阅读框1638 bp，编码545个氨基酸。

预测Pn4CL分子量为59.57 kDa，理论等电点为5.70。

该基因含有AMP-binding（AMP-binding enzyme）、CaiC[Acyl-CoA synthetase (AMP-forming) /AMP-acid ligaseⅡ]、PLN02246、AFD-class I等结合域，具有植物4CL所共有的保守结构域。

系统进化分析表明，Pn4CL与北细辛的同源性最高，同时与木兰分支类植物的4CL聚类在一起，与菊分支的进化距离较近，与蔷薇分支的进化距离较远。

亚细胞定位表明，该蛋白定位在细胞膜上。

Real-time RT-PCR结果表明，该基因受外援激素SA和MeJA诱导表达，同时接种辣椒疫霉菌后，Pn4CL基因的表达量在抗/感2种胡椒中均出现先增加后减少的现象，并且在抗病种质中表达量较高。

研究结果为Pn4CL的功能研究提供了理论依据。

关键词：胡椒；4-香豆酸：辅酶A连接酶；克隆与表达中图分类号：S188 文献标识码：ACloning and Expression Analysis of 4-coumarate: coenzyme A Ligase Gene (Pn4CL)in Piper nigrumFAN Rui1,2, HU Lisong1,2, WU Baoduo1,3, HAO Chaoyun1,2,3*1. Spice and Beverage Research Institute, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences, Wanning, Hainan 571533, China;2. Key Laboratory of Genetic Resources Utilization of Spice and Beverage Crops, Ministry of Agriculture and Rural Affairs, Wan-ning, Hainan 571533, China;3. Hainan Provincial Key Laboratory of Genetic Improvement and Quality Regulation for Tropical Spice and Beverage Crops, Wanning, Hainan 571533, ChinaAbstract: The full-length cDNA encoding 4-coumarate:coenzyme A ligase (4CL), designated as Pn4CL, was isolated from black pepper using RACE. The sequence of Pn4CL was 2130 bp in length, containing a 1638 bp open reading frame, and encoding a polypeptide of 545 amino acids with a calculated molecular weight of 59.57 kDa and a PI of 5.70. The protein had four conserved domains of AMP-binding (AMP-binding enzyme), CaiC (Acyl-CoA synthetase (AMP-forming)/AMP-acid ligase), PLN02246, AFD-class I. Pn4CL had a closer relationship with Asarum heterotro-poides and far from the evolution of Rosids by phylogenetic analysis. The subcellular localization indicated that the protein was on the cell membrane. The expression of Pn4CL could be regulated by exogenous MeJA and SA. When infected with Phytophthora capsici Leon, the expression of Pn4CL was significantly higher in the resistant germplasm than that in the susceptible germplasm by real-time RT-PCR.Keywords: Piper nigrum; 4-coumarate:coenzyme A ligase (4CL); cloning and expressionDOI: 10.3969/j.issn.1000-2561.2020.04.015胡椒（Piper nigrum）有非常重要的药用和工业价值[1-3]。

2021年2月Feb.2021第41卷第2期Vol.41,No.2热带农业科学CHINESE JOURNAL OF TROPICAL AGRICULTURE植物病原卵菌效应蛋白RXLR 和CRN 研究进展郭泽西曲俊杰刘露露尹玲(广西作物遗传改良生物技术重点开放实验室广西南宁530007)摘要卵菌是一类可以侵染动植物以及微生物的病原菌。

植物病原卵菌会导致很多农作物、经济作物产生病害，造成巨大的经济损失。

效应蛋白在植物病原卵菌侵染寄主的过程中发挥关键作用。

本文概述病原卵菌分泌的效应蛋白RXLR 和CRN 的挖掘方法、转运机制以及靶标蛋白筛选的最新研究进展。

这些信息可为深入揭示效应蛋白RXLR 和CRN 的致病机理和与寄主互作机制等提供理论指导，也为未来植物抗病育种和绿色防控等提供研究方向和策略。

关键词卵菌；效应蛋白；RXLR ；CRN中图分类号S432.4文献标识码ADOI ：10.12008/j.issn.1009-2196.2021.02.011Research Progress on RXLR and CRN Effector Proteins of Plant OomycetesGUO ZexiQU JunjieLIU LuluYIN Ling(Guangxi Crop Genetic Improvement and Biotechnology Laboratory,Nanning,Guangxi 530007,China)Abstract Oomycetes are a type of pathogenic bacteria that can infect animals,plants and microorganisms.The plant pathogenic oomycetes can cause diseases in many crops,resulting in huge economic losses.The effector protein plays a key role in the process of host infection by plant pathogenic oomycetes.The latest researches in the mining method,transport mechanism and target protein screening of effector proteins RXLR and CRN secreted by pathogenic oomycetes were reviewed.This information provide theoretical guidance for further revealing the pathogenic mechanism and host interaction mechanism of effector proteins RXLR and CRN,and provide research directions and strategies for plant disease resistance breeding and green control and prevention in the future.Keywords oomycetes ;effector proteins ;RXLR ;CRN从传统的生物分类学来看，卵菌被认为是一种真菌。

辣椒疫霉效应分子RxLR22034的表达纯化及晶体生长李秀奇;冯锐;黄振岭;杨灿灿;张修国;朱春原【期刊名称】《山东农业大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2018(049)003【摘要】辣椒疫霉(Phytophthora capsici)作为一种重要的植物病原卵菌,侵染寄主植物时能够分泌RxLR效应分子,从而激活或抑制植物的防卫反应,引起植物病害的产生.为了深入研究辣椒疫霉效应分子与植物互作的机制及致病机理,本文从辣椒疫霉菌株SD33中克隆得到了RxLR22034效应分子,以大肠杆菌Rosetta (DE3)为宿主,进行了原核表达与纯化,确定了该基因高效表达条件.通过亲和层析及分子筛层析纯化获得高纯度蛋白,借助坐滴法培养优化获得RxLR22034蛋白晶体,X射线衍射获得2.7(A)的蛋白晶体数据,为后续解析RxLR效应分子蛋白三维结构,从结构生物学角度探知辣椒疫霉RxLR效应分子生理生化功能奠定了基础.【总页数】5页(P383-387)【作者】李秀奇;冯锐;黄振岭;杨灿灿;张修国;朱春原【作者单位】山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东农业大学植物保护学院,山东泰安271018;山东农业大学生命科学学院,山东泰安271018【正文语种】中文【中图分类】S436.418.1+2【相关文献】1.辣椒疫霉效应因子RxLR101012的表达纯化与结晶初探 [J], 马璐璐;王玉姣;孙柏华;陈姗姗;张修国2.辣椒疫霉病无毒基因RXLR128001克隆与蛋白表达纯化 [J], 王晓梅;张钟文;杨楠3.辣椒疫霉RxLR19781效应分子原核表达纯化及晶体生长条件的研选 [J], 方海珍;赵立;朱春原4.辣椒疫霉效应分子RxLR19781与其互作蛋白的酵母互作一对一验证 [J], 陈姗姗;艾聪聪;盛慧;孙柏华;冯锐;王中洋;黄恺浩;王晓梅5.辣椒疫霉菌葡聚糖酶抑制蛋白的原核表达、纯化及结晶 [J], 王会征; 兰玉彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

一种链霉亲和素磁珠及其制备方法和应用
链霉亲和素磁珠是一种新型生物材料，它可以在蛋白质分离纯化、酶催化、基因检测等生物技术领域发挥非常重要的作用。

本文将从制
备方法、应用方向等几个方面来详细介绍链霉亲和素磁珠的相关知识。

制备方法：
1、选取高纯度的N-甲基二乙酸丙烯酰胺作为载体材料，通过化
学反应在其表面共价结合上羧甲基二亚胺链霉素分子。

2、通过反应后去除载体颗粒即可制得链霉亲和素磁珠。

3、链霉亲和素磁珠在实际使用中，可以通过磁性质来快速地对
其进行回收和重新利用。

应用方向：
1、蛋白质纯化领域：链霉亲和素磁珠可以通过对目标蛋白质的
亲和作用，快速地将其与混合物中的其他蛋白质分离开来，获得高纯
度的目标蛋白质。

2、酶催化领域：链霉亲和素磁珠作为酶载体，可以快速地将酶
与其它物质分离开来，提高催化反应的效率。

3、基因检测领域：链霉亲和素磁珠可以在DNA片段的末端与特
异性序列结合，快速地将目标DNA分离并进行检测。

总之，链霉亲和素磁珠是一种在生物技术领域中十分具有潜力的
生物材料，它可以在生物制药、医学科学等领域发挥其作用。

在未来
的发展中，链霉亲和素磁珠有望成为生物技术领域不可或缺的重要生
物材料之一。

Optimization of Preparation T echniques of T aq D NA PolymeraseXIAO Cha o2w e n,DU J ua n,LI Wa n2c he nΞΞ(Maize Research Institute,Sichuan Agricultural University,Y aan625014,Sichuan,China)Abstract:By using expression product of enzyme protein,enzyme activity and activity ratio as indexes, preparation techniques are optimized through selection of engineering bacterium lines,transformation methods,induction expression time and IPTG concentration.Total enzyme activity prepared with bac2 terium J M109is higher than DH5α,transformation ratio of electric shock is higher than heat shock, and enzyme protein expression product,enzyme activity and activity ratio induced by110mmol/L IPTG for12h are significantly higher than other concentration and duration of IPTG induction.The results of SDS2PA GE electrophoresis and PCR amplification indicate that the enzyme product prepared with the optimized techniques meets the requirements of molecular biological experiment in purifica2 tion,activity and specificity.All the indexes of the product are better than commercial enzyme prod2 ucts in market.K ey w ords:Taq DNA polymerase;preparation;optimization; E.coliTaq DNA聚合酶制备技术的优化Ξ肖朝文,杜　娟,李晚忱ΞΞ(四川农业大学玉米研究所,四川雅安　625014)摘要:以酶蛋白表达量、酶活性和比活性为指标,从工程菌菌株、转化方法、诱导表达时间、诱导剂浓度4个方面,对Taq DNA聚合酶制备技术进行了优化筛选。