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循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用研究进展1. 引言1.1 乳腺癌患者中循环肿瘤细胞检测的重要性与传统的组织活检相比，循环肿瘤细胞检测具有更高的敏感性和特异性，能够在患者体内实时监测病情变化，为临床医生提供更为全面的信息支持。
通过检测循环肿瘤细胞的数量和特征，可以评估疾病的进展程度、预测患者的生存率，为后续治疗方案的选择提供重要参考依据。
乳腺癌患者中循环肿瘤细胞检测的重要性不容忽视，它为个体化治疗、减少复发率、提高生存率提供了重要的支持和保障。
随着检测技术的不断进步和完善，循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用前景将更加广阔。
1.2 循环肿瘤细胞检测技术的发展历程循环肿瘤细胞检测技术的发展历程始于1999年，当时美国约翰·霍普金斯大学的F. A. Allard等人首次报道了利用免疫磁珠（immunomagnetic beads）结合免疫荧光细胞分离技术（immunofluorescence cell sorting）进行循环肿瘤细胞检测的方法，为后续研究奠定了技术基础。
随后，随着单细胞分析技术的发展，流式细胞术（flow cytometry）和PCR等技术被引入循环肿瘤细胞检测中，使得对肿瘤细胞的检测更为精准和可靠。
在接下来的几年里，随着技术的不断进步和完善，一系列自动化检测系统和精准定量方法相继问世，如Circulating Tumor Cell Chip、EPISPOT、CellSearch等，大大提高了循环肿瘤细胞检测的灵敏度和准确性。
新一代高通量测序技术的引入也为循环肿瘤细胞的分析提供了更多可能，使得其在乳腺癌患者中的应用研究有了更深入的发展。
循环肿瘤细胞检测技术经过多年的发展与进步，已经成为乳腺癌患者管理中不可或缺的重要手段，为临床诊断、治疗和预后评估提供了重要依据。
随着技术的不断革新和完善，循环肿瘤细胞检测在乳腺癌患者中的应用前景将更加广阔。
1.3 研究目的和意义乳腺癌是女性常见的恶性肿瘤之一，对女性的生命健康造成了严重威胁。
循环系统肿瘤细胞检测的进展
孙萍;于雁
【期刊名称】《实用肿瘤学杂志》
【年(卷),期】2004(18)6
【摘要】恶性肿瘤已日益成为人类生命和健康的主要威胁之一。
虽然我们已经对肿瘤采取综合治疗，但目前TNM评价标准判断预后良好的病例治疗后仍发生复发和远处转移。
因此人们必须去寻找更加可靠的评价标准来预测预后及指导治疗。
大量证据表明原发肿瘤早期阶段就有恶性肿瘤细胞脱落到循环系统，
【总页数】3页(P472-474)
【作者】孙萍;于雁
【作者单位】哈尔滨医科大学附属肿瘤医院,哈尔滨,150040;哈尔滨医科大学附属肿瘤医院,哈尔滨,150040
【正文语种】中文
【中图分类】R739
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浩文;刘秀敏;朱洪权
5.循环肿瘤细胞检测在鼻咽癌诊疗中的研究进展 [J], 邓伟明;韦嘉章;李敏;瞿申红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
循环肿瘤细胞的研究进展
平伟; 付向宁; 孙威
【期刊名称】《《医学与哲学》》
【年(卷),期】2011(032)012
【摘要】循环肿瘤细胞(circulating tumor cells,CTCs)指自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞。
CTCs能被看作液体活检,具有实时监测功能,是一种非侵入性的新型诊断工具,有助于早期发现肿瘤的微转移,可评估预后,在治疗的监测及个体化治疗上具有重要的临床意义。
【总页数】3页(P37-38,49)
【作者】平伟; 付向宁; 孙威
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院普胸外科湖北武汉 430030【正文语种】中文
【中图分类】R730.3
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循环肿瘤细胞在肺癌诊疗中的临床应用与进展
孙婧怡;马礼兵
【期刊名称】《实用医学杂志》
【年(卷),期】2018(34)23
【摘要】近几年来在肺癌治疗中非侵入性的\"液体活检\"被不断开发和研究,作为新型生物标志物循环肿瘤细胞(CTC)更是得到研究者们的广泛关注.对肺癌患者具有灵敏度和特异性的CTC进行富集分析,这为深入了解肺癌的生物学以及转移过程提供了有力机会.CTC的分析及实时监测对肺癌患者的早期诊断、治疗、耐药性的评估及预测预后都具有重要价值.本文将对目前CTC在肺癌诊疗中的临床应用与进展做简要阐述和讨论.
【总页数】4页(P3846-3848,3853)
【作者】孙婧怡;马礼兵
【作者单位】桂林医学院附属医院呼吸与危重症医学科,桂林医学院呼吸疾病研究所,广西壮族自治区教育厅高校呼吸疾病重点实验室广西桂林 541001;桂林医学院附属医院呼吸与危重症医学科,桂林医学院呼吸疾病研究所,广西壮族自治区教育厅高校呼吸疾病重点实验室广西桂林 541001
【正文语种】中文
【相关文献】
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媛;李昂;吴健雄;任新玲
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5.循环肿瘤细胞在肺癌诊疗中的临床研究进展 [J], 王猛
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循环肿瘤细胞的分子生物学研究在肿瘤学领域，循环肿瘤细胞一直是备受关注的研究热点。
循环肿瘤细胞指的是从原发肿瘤部位进入循环系统（包括血液和淋巴液）的癌细胞。
这些细胞具有极强的迁移能力和更强的存活能力，可以远距离转移，维持肿瘤的生长。
因此，研究循环肿瘤细胞的生物学特征和调控机制，对于癌症治疗和预防具有重要的意义。
循环肿瘤细胞的分子生物学研究是深入研究该类肿瘤细胞的生物学特征和调控机制。
目前已知的循环肿瘤细胞来源很多，可以从癌细胞原发部位脱落，随着血液或淋巴液运输到远处，也可以是癌细胞通过紫外线辐射或其他刺激造成DNA损伤后受到免疫系统清除而加速进入循环系统。
循环肿瘤细胞的生存和迁移特点在形态、表面标志物、分化程度、细胞凋亡、细胞周期和基因表达等方面存在显著差异，需要深入探究其特异性信号转导和调节机制，为循环肿瘤细胞治疗提供前沿思路和科学依据。
在循环肿瘤细胞的分子生物学研究中，分子标志物的筛选和鉴定是非常重要的基础工作。
目前，研究者通过高通量分子生物学技术发现了许多可能与循环肿瘤细胞存在关联的基因或表达产物，如EPCAM、HER2、KLF4、CXCR4等标志物，这些标志物具有很好的诊断和治疗价值。
例如，癌细胞簇茎模型中表面标志物CD24和CD44被认为是肿瘤干细胞的标志物，在浸润性乳腺癌中，CD24-/CD44+肿瘤干细胞的数量在转移前稳定或下降，但在转移时大幅增加，同时血液中的CD24-/CD44+循环肿瘤细胞也有明显增加。
如此，这些分子标志物的发现为循环肿瘤细胞的筛选和分类、细胞分化程度的判断和追踪，以及治疗的监测和评估提供了良好的方向。
针对循环肿瘤细胞的特异生物学和免疫学特点，研究者发展了多种适应于循环肿瘤细胞的实验方法和技术手段。
一类方法是在线膜过滤法（Isolation by Size of Epithelial Tumor cells）和基础外泌体捕获技术（Cancer Cytoplasmic Hybridization capture）。
循环肿瘤细胞的介绍（上）众所周知，癌症是一类一直处于不断变化状态的疾病。
因此能够实时的观察监测到这种变化意义就尤为重大。
传统的病理检测方法虽然被认为是“金标准”但是这一检测方法需要手术后才能得到病理组织，进行检测。
即使采用穿刺活检办法也不能完整的跟踪整个病程，而且会给病人带来极大的痛苦。
尤其当肿瘤的原位灶很小的时候往往多次穿刺都不能准确地收集到肿瘤组织。
介于以上原因，大家更多的把目光集中在了液态活检上。
这一概念早在上个世纪七十年代就有人提出(Sorrells,1974)近来在癌症的研究上越来越突出其作用。
液态活检顾名思义是指以包括血液、尿液、淋巴液、脑脊液腹水等体液在内的样本作为检测对象的一种检测手段。
目前主要包括游离DNA(Cell free DNA),外泌体（Exosome）和循环肿瘤细胞（Circulating tumor cells）三大类研究对象。
Cell free DNA是血液中肿瘤细胞游离出来的DNA片段，数量稀少不易检测，虽然有相关报道显示Cell free DNA 可以用于癌症的诊断，并使癌症可以提早被发现(Heitzer et al. 2013)，但是仍然会因为血液中含有较高的背景而难以达到检测所需的分辨率，并且无法探知Cell free DNA的来源，并不能提示肿瘤的发病部位。
Exosome是一种包裹了核酸蛋白的囊泡，结构稳定但是不易稳定分离，很多标志物还在探索当中。
循环肿瘤细胞发现的最早，而且作为这三类当中唯一的实体瘤，它们的在医学上的意义值得我们进行更加深入的探索。
循环肿瘤细胞的研究进展循环肿瘤细胞（circulating tumor cells，CTC)是包括除白血病和淋巴瘤来源的肿瘤细胞以外的所有类型的肿瘤实体瘤细胞在血液和淋巴管中扩散的肿瘤细胞。
其实在很早之前就有人观察到了这一现象，Ashworth是第一个提出这一概念的人，他在一名因为癌症导致死亡的患者遗体内发现肿瘤细胞本身与血液中的肿瘤相同，这一事实表明同一个人体内可能存在的多种肿瘤的起源模式。
环状RNA在肿瘤癌变中的作用机制和临床意义
王文君;史志周
【期刊名称】《中国老年学杂志》
【年(卷),期】2017(037)001
【摘要】环状RNA（circRNA）是一种特殊的内源性非编码RNA,1976年在类病毒中被首次发现,随后在病毒和真核生物中也相继发现了circRNA。
circRNA与线性RNA的不同之处在于其3＇端与5＇端相连,形成闭合的共价环状结构,该结构使circRNA较线性RNA更加保守和稳定〔1〕。
最初cireRNA被认为是由选择性剪接错误产生,
【总页数】2页(P229-230)
【作者】王文君;史志周
【作者单位】昆明理工大学医学院，云南昆明 650500;昆明理工大学医学院，云南昆明 650500
【正文语种】中文
【中图分类】R363
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1.肝病患者血清肿瘤标记物含量及肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体受体表达在癌变中的临床意义 [J], 林尤仕;朱明月;谢协驹;李孟森
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肿瘤循环生物学的研究现状与挑战肿瘤循环生物学是研究肿瘤细胞在血液循环中的动态变化及其对体内外环境的适应和响应的学科。
肿瘤细胞可以通过自身的高度可塑性和适应性，在不同的生长环境下表现出巨大的异质性，其中包括表型异质性、基因型异质性以及时空异质性等。
这些异质性的存在，使得肿瘤细胞很难被有效地控制和治疗，也给肿瘤诊断和治疗带来了难题。
肿瘤循环生物学的研究，通过提供体内最真实的肿瘤信息，为解决这些问题提供了一个新的方向。
肿瘤循环生物学的研究主要包括四个方面。
首先是肿瘤细胞在血管内脱落和幸存。
肿瘤细胞在血管内脱落和幸存是肿瘤远处转移和复发的主要途径之一。
其次是肿瘤细胞在循环中的动力学行为。
肿瘤细胞在血液循环中可能进入休眠期或者自我更新，也可能进行不同步的分裂和增殖。
第三个方面是肿瘤细胞和循环系统间的相互作用。
肿瘤细胞可以激活或抑制血管生成，促进或阻碍血管壁的通透性，影响血小板的活化和聚集，从而影响肿瘤细胞在循环中的存活和转移。
最后一个方面是肿瘤循环生物学对分子影像学和基因组学等技术的应用。
肿瘤循环生物学的发展离不开先进的技术手段的支持，如分子影像学和基因组学等技术的应用为肿瘤细胞在循环中的实时监测和高通量分子分析提供了可行的途径。
肿瘤循环生物学的研究虽然已经取得了一些进展，但也面临着一些挑战。
首先，循环系统和肿瘤细胞间的复杂相互作用使得肿瘤循环生物学的研究变得异常困难，这会导致研究结果的复杂性和不确定性。
其次，肿瘤循环生物学的研究需要大量的样本和复杂的数据分析，这对研究团队和设备的要求非常高，也会给研究带来很大的压力。
最后，肿瘤循环生物学的研究需要不断地更新和改进技术手段，才能探索更深层次的问题，这也带来了一定的技术壁垒。
如何突破以上的困难和挑战，推动肿瘤循环生物学的研究呢？以我个人的看法，我们需要继续推动技术创新，从基础研究和技术理论上来得到突破。
例如，发展高通量、实时、无损、标记和非标记细胞监测和分析的方法，高效地解析循环肿瘤细胞的异质性和进化过程；发展物理学、微流控技术和仿生学等科学手段，来模拟和研究肿瘤细胞和循环系统间的相互作用和竞争规律。
循环肿瘤细胞研究进展任文君，孙国平(安徽医科大学第一附属医院肿瘤内科，安徽合肥230022)摘要：循环肿瘤细胞（CTCs）存在于患者外周血中，是造成肿瘤转移和复发的主要原因。
外周血中的CTC是非常罕见的，要求检测方法具有高敏感性及高特异性，成为临床常规检测的巨大挑战，但是检测CTC在协助诊断、早期发现肿瘤的微转移、指导个体化治疗、评价治疗效果及预后方面上具有重要的临床意义。
该文将对其检测方法及临床应用进行探讨。
关键词：循环肿瘤细胞；检测；治疗Ashworth曾在1986年首次发现并提出循环肿瘤细胞（CTCs）的概念［1］。
CTC定义为自发或因诊疗操作由实体瘤或转移灶释放进入外周血循环的肿瘤细胞［2］。
肿瘤转移是一个涉及多步骤多因素的复杂过程，肿瘤细胞由原发灶脱落，侵入循环系统，大部分由于机体的免疫识别、机械杀伤及自身凋亡在短期内死亡，只有极少数存活下来，在远隔脏器或原发脏器中定居，发展为转移灶［3-4］。
有些播散的肿瘤细胞和微小转移灶在切除原发灶后可以保持休眠状态并在若干年后形成转移灶［5］。
因此，在外周血中检测到CTC提示可能有早期转移存在，尤其是临床尚未发现的微转移病灶。
CTC的检测包括以下2个步骤：（1）富集，方法包括形态学或免疫学为基础的技术。
（2）检测，方法包括细胞计数和核酸检测技术。
因为CTC在外周血中是非常罕见的（1个CTC/106 107个单核细胞），富集细胞可提高检测的敏感性，富集之后则通过细胞计数或核酸检测技术利用肿瘤特异性标志物对CTC进行检测及分析。
1富集1．1以形态学为基础的富集膜滤过分离肿瘤细胞技术（ISET）通过肿瘤细胞体积大小进行富集［6］，就像一个微孔过滤器根据CTC的大小差异使其分离，其隔离灵敏度阈值接近每毫升全血一个癌细胞［7］，其优势在于不破坏CTC的形态，利于后续对单个CTC进行形态学、免疫细胞学及遗传学特征的研究，但只适合部分肿瘤，不适合那些体积小于2倍粒细胞大小的肿瘤细胞。
基于密度梯度分离，单核细胞较其他血液成分密度低，因此可依据密度梯度差异将肿瘤细胞和单核细胞从其他血液细胞中分离出来，如Ficoll-Hypaque和Oncoquick。
与传统的Ficoll通信作者：孙国平，男，主任医师，博士生导师，研究方向：消化系统肿瘤，E-mail：sunguoping@anhmu．edu．cn 程序相比较，Oncoquick增加了多孔屏障，使得分离出的细胞更加纯化，检出率更高［8］。
由于这两种富集方法是借助细胞的物理特性，因此缺乏特异性，易导致缺乏相应体积大小及密度梯度的肿瘤细胞的丢失，同时所富集的细胞不仅含有肿瘤细胞，还存在不同种类的其他细胞（特别是单核细胞），在后续检测过程中可能会因为肿瘤细胞的异质性和基因标志物的非特异性，造成假阳性结果。
1．2以免疫学为基础的富集免疫磁性分离技术（IMS），基于特异性免疫识别原理的富集技术，是目前应用最广泛的方法，通过特异性抗体包被的磁珠与细胞表面抗原特异性结合，形成细胞抗原-抗体-磁珠免疫复合物，在外加磁场作用下，将CTC从血细胞中分离出来。
免疫磁性分离方式有2种：阳性分选和阴性分选。
阳性筛选获得目的细胞，阴性筛选去除无关细胞使目的细胞得以纯化，也可将两种模式结合，提高富集效率。
这项技术最大的优势在于可保证分离靶细胞的形态和功能的完整，有利于下一步CTC的计数、免疫细胞化学、PCR 等检测。
目前，免疫磁珠可达纳米级，结合时间短，灵敏度高10－7 10－6。
CellSearch系统是目前FDA唯一批准用于临床富集及检测分析的技术，是一种半自动技术，集合了免疫磁分选技术和免疫细胞化学法的分离检测技术。
涂有抗EpCAM抗体的磁珠与靶细胞结合，在外加磁场作用下被保留下来，接着采用荧光标记（CK8/18/19，DAPI，CD45）来区别CTC与血细胞，CTC 标记为CK8/18/19、DAPI（+），CD45（－），随后采用半自动荧光显微镜Cell-Spotter Analyzer检测分析细胞大小和形态，最终确定CTC，只需要7．5mL血液样本，即可从400多亿血细胞中检测到一个CTC。
这种半自动系统能快速分析样本，并有良好的重复性。
一个多中心研究，有学者提出Cell Search系统有82%的高富集率，且在乳腺癌CTC检测上有极［34］Ikeda T．Stem cells and neonatal brain injury［J］．Cell Tissue Res，2008，331（1）：263－269．［35］尹国才，张长征，张淼涛，等．人胎脑神经干细胞在年幼大鼠脑内的成神经元分化［J］．中国组织工程研究与临床康复，2008，12（12）：2281－2284．［36］Toda H，Takahashi J，Iwakami N，et al．Grafting neural stem cells improved the impaired spatial recognition in ischemic rats［J］．Neu-rosci Lett，2001，316（1）：9－12．［37］吴芳，杨佳勇，张敏，等．脐血间充质干细胞移植对脑性瘫痪儿童神经系统功能的影响：20例分析［J］．中国组织工程研究与临床康复，2008，12（16）：3198－3200．［38］张敏，杨万章，吴芳，等．神经生长因子配合脐血源神经干细胞移植对脑瘫患儿运动功能的影响［J］．中国误诊学杂志，2008，8（23）：5596－5597．［39］杨万章，吴芳，张敏，等．脐血源神经干细胞移植治疗神经系统疾病临床总结和分析［J］．中西医结合心脑血管病杂志，2009，7（3）：287－290．（收稿日期：2012－05－25，修回日期：2012－10－26）·9·安徽医药Anhui Medical and Pharmaceutical Journal2013Jan;17(1)高的特异性及可重复性［9］。
CTC芯片是一项先进的检测技术，基于一个微流体技术平台将CTC分离的，当全血以一严格的速度及剪切力通过芯片时，结合有抗EpCAM抗体的显微位点便直接捕获CTC，这一系统以CK、DAPI作为阳性筛选，CD45作为阴性筛选，CTC 是CK（CAM5．2）及DAPI（+），CD45（－）。
仅需一个步骤，无需对血液样品进行预处理，且分离方式温和，获得活细胞。
在肺癌、结直肠癌、前列腺癌、乳腺癌及胰腺癌中CTC芯片都展现了其极高的敏感性及特异性。
最近，CTC芯片的升级版“HB芯片”是将第一代CTC芯片的显微位点转换为小室流动槽，增加了CTC与涂有EpCAM的凹槽接触机会，新型微流控芯片较原CTC芯片提高了捕获率及血液样本处理量［10］。
其他分离方法还有CAM和NV1066。
虽然目前在CTC 的分离上已取得巨大的进展，但是仍有许多问题亟待解决。
如在CTC向转移灶迁移时可能会经历上皮质间质转换（EMT），丢失上皮特异性标志物如EpCAM和CKs，而发展间叶细胞的特异性标志物如波形蛋白和钙黏蛋白［11-12］，这意味着以上皮细胞为靶细胞的富集技术会因丢失最有侵袭性的肿瘤细胞而受影响。
同时还面临肿瘤细胞异质性的挑战，CTC 可能不表达给定的标记物，造成假阴性结果，而上皮细胞特异性抗原不仅表达于上皮来源肿瘤，还可表达于非肿瘤上皮细胞造成了假阳性结果［13］。
目前需要更多努力来改善CTC的分离技术，设计出一种更准确、强劲的技术。
2检测一旦CTC被收集到，那么就需要识别程序来研究他们的起源和遗传学属性。
目前识别方法包括2大类：细胞计数和核酸方法。
2．1细胞计数的方法流式细胞术（Flow Cytometry，FCM），是集计算机技术、激光技术、流体力学、细胞化学、细胞免疫学于一体，通过着色的单抗与特异性抗原结合来识别CTC，并对其进行多参数、快速的定量分析和分选的一种技术。
对比RT-PCR，流式细胞仪不仅可以得到高统计精度和亚组量化的信息，而且由于其可以快速同步分析多种参量，包括细胞大小、内部颗粒的性状，细胞表面和胞浆抗原，DNA、RNA含量，所以拥有高度特异性。
但是应用流式细胞仪从血液中检测上皮性肿瘤细胞其价值很大程度上依赖于可分析的细胞数量［14］，且目前的流式细胞仪相比RT-PCR敏感性较低，为10－5 10－4［15］。
光纤阵列扫描技术（FAST）是一个快速而准确地定位细胞计数系统，配备了扩大视野的光学收集系统，以每分钟500次的速率连续扫描定位荧光免疫示踪的CTC，这比传统的自动数字显微镜更快，而且无需富集步骤而直接检测，避免了CTC的丢失。
为了避免假阳性结果，建立了一个真阳性和假阳性的数据库来优化图像过滤器［16-17］。
上皮细胞免疫斑点（EPISPOT）是一种基于酶联免疫吸附测定原理的免疫学分析方法，通过检测CTC分泌的特殊蛋白（CKs，MUC，PSA，等）来计数CTC。
EPISPOT的一个特点就是只能识别有生命的细胞，因为死亡的细胞不能分泌足够数量的蛋白来检测［18］。
值得注意的是，活细胞比凋亡细胞更具临床意义，只有完整的、活的CTC才能导致转移灶形成。
检测的CTC分泌的特殊蛋白CK19时，EPISPOT的敏感性较ELISA高2个数量级［19］。
2．2以核酸为基础的方法逆转录聚合酶链反应（RT-PCR），通过分析组织、肿瘤特异性标志物从分子水平检测CTC，是目前最灵敏的技术。
其原理是以特异性mRNA作为模板，反转录成cDNA，再进行PCR扩增，获得目的基因表达。
所以PCR可以通过外周血中的细胞碎片检测到CTC特异性转录，而无需完整的、有活性的CTC。
RT-PCR的灵敏性很高，达10－7 10－6，故可分析极微量RNA。
然而，由于RT-PCR是以放大为原理的，所以很微小的污染也会造成假阳性结果。
实时逆转录聚合酶链反应（Qrt-PCR）的出现，提高了PCR特异性。
首先，通过内部探针与目标序列特异性结合，提高了的特异性。
其次，qRT-PCR对外周血中表达的标志基因设置了一个截断值，高于该值才被认为是CTC的真实信号。
同时由于放大信号的连续测量，假阳性结果很容易被识别［20］。
同时检测多种特异性基因表达可以增加实验的敏感性及特异性。
Chen Y等通过联合CK19，hMAM and CEA来检测早期乳腺癌患者的CTC数目，结果提高了检测灵敏性［21］。
目前，其在临床应用中最大的限制就是，缺乏明确的特异性标志物。
搜索恰当的肿瘤细胞特异性mRNA对于促进CTC检测的特异性及可靠性至关重要。
2．3临床应用目前的血清学标志物和高分辨成像技术仍无法准确识别肿瘤的微小转移和反映治疗的效果。
而从外周血中检测出CTC，提示可能有早期隐匿性转移的存在，检测CTC越来越被认为是肿瘤早期进展的标志。
