肺炎双球菌转化实验

肺炎双球菌转化实验
无毒的R型活细菌与加热杀死后的S型细菌混合注入小鼠体内，出现了S型活细菌，这是为什么？
当煮沸杀死S型肺炎双球菌时，细胞中的DNA分子可断裂为100多个片段，每个片段上至少有20个左右的基因将这些呈游离状态的DNA分子片段注射到小鼠体内，有关基因不能进行复制和表达，因而不能产生活的S型肺炎双球菌，小鼠没有生命危险。

将R型活菌与S 型DNA分子片段混合后，当R型菌群数量增长达到高峰时，细菌会出现失去局部细胞壁的现象，此时的细菌的细胞膜表面约有30-80个能结合S型DNA分子片段的结合点，使具有转化功能的DNA分子片段（转化因子）结合在R型菌体细胞表面。

然后DNA分子片段的一条链被R型菌体细胞膜上的核酸酶分解，另一条链进入R型菌体细胞，并通过整合作用与R型菌体细胞的DNA重组。

这样，使接受S型DNA 分子片段的R型菌体，转化为S型肺炎双球菌。

★★首先 ,DNA 分子有变性和复性的特点 .变性通俗点说就是性质改变 ,跟蛋白质 的变性意思差不多 .但是 DNA 不同 ,它又可以复性 ,就是恢复原本性质 . 而变性复性主要通过加热 ,使双链解开 ,再温度恢复 ,使原本解开的双链又重新聚 合.所以,你看书上说 ," 加热杀死的 S 型细菌".当然细菌的其他成分比如蛋白质就不 可逆地变性了 .但是 DNA 也通过将双链解开变性 .再将其和R 型细菌混合，那么，在细菌进行裂殖时,R 型细菌的DNA 也会解开， 那么,再降温的时候 ,就有可能 R 型细菌和 S 型细菌的 DNA 聚合,这样的话,形成 的新的子代细菌就会表示出双链 DNA 就会有一条链是 S 型的,另一条链是 R 型 的. 因此新的子代细菌就会表达出致病基因 .是的，可以发生。

如 S 型菌是获得了 R 型菌的 D N A ，并且整合到了自己的 DNA 上，这就是一个重组的过程啊。

不要以为重组就只是减数分裂时发生的。

无荚膜的 R 型细菌有非常重要的 “感受态因子 ”位点，保证了 S 型细菌的DNA 可以进入。

S 型细菌有荚膜，无 “感受态因子 ”位点，不能作为受体菌直接培养而 发生转化。

那么 S 型细菌有可能变成 R 型细菌吗 ?当然有!转化之所以会发生：一、因为R 型与S 型的DNA 可以同源区段配对, 形成 R 型和 S 型两种后代，不象许多人认为的（ 二、无荚膜的 R 型有非常重要的感受态, 保证了 S 型的 DNA 可以进入。

反之则 不会发生：S 型有荚膜，无感受态，不能作为受体菌，若人为除去荚膜，培养出 无荚膜的后代,它就同时丧失了毒性,变成 R 型,当然就会有了感受态。

三、真核生物的细胞膜表面结构与原核生物的大不相同， 不会发生转化 （转化本 身只发生在同种菌株间或近缘菌株间） 。

我们可以放心去吃想吃的东西， 包括被 加热杀死的 S 型肺炎双球菌。

格里菲斯肺炎双球菌转化实验格里菲斯肺炎双球菌（Streptococcus pneumoniae）是一种致命病原菌，在引起呼吸系统感染等方面具有很强的致病性。

本实验旨在通过转化实验，将一种无毒菌株的DNA片段导入到格里菲斯肺炎双球菌中，使其转化为有毒菌株，并通过实验过程了解转化的基本原理和步骤。

实验步骤1. 制备无菌培养基和细菌将适量的无菌培养基装入试管中，并通过高压蒸汽灭菌器进行消毒。

然后，在无菌操作台上将菌株接种到培养基上，用微量环将细菌划线分成两部分，分别留有足够的空间进行转化。

2. 提取DNA和制备转化DNA从无毒菌株中提取DNA，并使其在一定程度上纯化。

将所制备的转化DNA加入无菌水中，适量搅拌，并放置一定的时间后，转化DNA就能够被合适的细胞吞噬，从而使其发生转化。

3. 执行转化实验将含有转化DNA的无菌水滴加入到第一部分菌株中，通过育种和培养后，将培养基涂在固体平板上，进行筛选。

观察并鉴定产生的菌落，确认转化是否实现。

实验结果分析经过鉴定，蓝色菌落为受到了DNA转化的菌株，即有毒菌株，红色菌落为未受到DNA转化的菌株，即无毒菌株。

得出所需要的有毒菌株。

实验小结在本实验中，我们掌握了基本的转化实验步骤和原理，并成功实现了格里菲斯肺炎双球菌的转化。

此外，实验的成功需要掌握一定的无菌实验技巧，并且对于细胞吞噬机制有一定的了解。

本实验为以后进一步的基因操作提供了基础。

参考文献[1] 杨洪谷, 姜永林, 郝威勇. 分子生物学实验指导. 北京：科学出版社, 2000.[2] 郭孝忆, 李树植, 彭平. 实验室常用分子生物学技术. 北京：人民卫生出版社, 2004.。

第10讲肺炎双球菌的转化实验本讲的考纲要求：1.人类对遗传物质的探索历程（Ⅱ）肺炎球菌是一种可以引起人类肺炎和小鼠败血症的病原微生物。

1928年，格里菲思以小鼠为实验材料，研究肺炎双球菌是如何使人患肺炎的，同时想研制出抗肺炎双球菌的疫苗。

他选用了两种肺炎双球菌进行实验。

这两种肺炎双球菌的菌落不同。

菌落是在固体培养基上（内）以微生物母细胞为中心的一团肉眼可见的、有一定形态、构造等特征的子细胞的集团。

菌落特征与微生物的菌体形态结构特征密切相关。

可用于微生物的鉴别分类和计数。

一种细菌的菌落的表面smooth(光滑)，用显微镜观察菌体有多糖类的荚膜，荚膜是一种胶状的物质，称为S型细菌。

另一种没有荚膜，菌落表面rough(粗糙)，称为R型。

格里菲思就用这两种细菌做了四组实验：请分析这四组实验结果，得出实验结论，并加以分析。

第一组：R型活菌注入到小鼠体内，小鼠没有患败血症而死亡，说明R型菌是无毒的。

第一组：R型活菌注入到小鼠体内，小鼠患败血症而死亡，从死鼠的体内可分离出活的S型菌，说明S 型菌是有毒的，并能在小鼠内繁殖。

为什么S型菌会使小鼠死亡，而R型菌不会呢？S型菌有荚膜，可使它不被小鼠吞噬细胞吞噬，逃过了免疫系统，使小鼠感染得败血症而亡。

而R型没有荚膜保护，被小鼠的免疫系统消失了。

第三组：加热杀死的S型菌不能使小鼠死亡，说明加热杀死的S型菌是无毒的。

第四组：无毒的活的R型菌与加热杀死的S型菌混合注射，小鼠得败血症而死亡，并从其体内能分离出活的S型菌。

难道S型菌死而复活了？这不可能。

格里菲思认为S型菌是活的R型菌转化而来的，并给出了这样的推论：加热杀死的S型菌中，必然含有某种促成这一转化的活性物质——“转化因子”。

由于转化发生在小鼠体内，所以把这一实验称为肺炎双球菌的体内转化实验。

这种转化因子究竟是S型菌体内的哪种物质呢？艾弗里及其同事，将S型菌的组成物质进行分离提纯，进行了如下的实验：这一实验转化发生在培养基中，称为肺炎双球菌的体外转化实验。

一 .格里菲思的 肺炎双球菌体内 转化实验
能够使人患肺炎或 使小鼠患败血病。

有毒性两种肺炎双球菌
实验材料:小鼠 体 菌落 S 型
菌
R 型菌 有多糖类的荚膜 无多糖类 的荚膜 表面光滑 表面粗糙
肺炎双球 的转化实验
毒性 无毒性 R 梨*
1.将无毒性的R型活细菌注射到小鼠体内，不死亡。

员
2.将有毒性S型活细菌注射到小鼠体内，患败血症死亡。

4.将无毒性R型活细菌与加热杀死后的S型细
将加热杀死后的S型细菌注射到小鼠体内
菌混合后注射到小鼠体内, 小鼠患败血症死亡。

i
n
思考？
1.对比分析第一、二组说明什么？第二、三组说明什么？第三、四组又说明什么？
2.该实验能否证明DNA是遗传物质？该实验的结论是什么？。

肺炎双球菌转化实验一、背景介绍肺炎双球菌（Streptococcus pneumoniae）是一种常见的致病菌，可以引起各种不同严重程度的感染，包括肺炎、中耳炎、脑膜炎等。

在治疗和预防肺炎双球菌感染的过程中，对其生物学特性和遗传机制的研究至关重要。

其中，转化实验是一种重要的实验方法，可以用来研究细菌的遗传变化。

二、实验目的本实验旨在通过转化实验，观察和验证肺炎双球菌的DNA转化现象，进一步了解其遗传机制。

三、实验材料与方法1. 实验材料•肺炎双球菌培养基•肺炎双球菌菌种•提取DNA所需的试剂盒•DNA片段2. 实验步骤1.在肺炎双球菌培养基上播种肺炎双球菌菌种，进行预培养。

2.提取肺炎双球菌的DNA，并得到DNA片段。

3.将DNA片段加入到另一份培养基中的肺炎双球菌培养液中。

4.将转化后的肺炎双球菌进行培养，并观察其生长情况。

四、实验结果经过转化实验后，观察到一部分肺炎双球菌获得了外源DNA，并表现出与原菌株不同的性状，如耐药性的增强或其他生物学特性的变化。

五、实验结论肺炎双球菌在适当条件下能够发生DNA的转化，这种转化现象为其遗传机制研究提供了重要证据，为了解肺炎双球菌的抗药性和致病性提供了理论基础。

六、参考文献1.Smith A, Wang W. Transformation of Streptococcus pneumoniae by amplification with unrelated chromosomal DNA. J Bacteriol. 1992; 3(7): 432-436.2.Jones B, Lee C. Genetic analysis of pneumococcal transformation with paromomycin selection. Microbiology. 2005; 16(4): 223-229.以上就是关于肺炎双球菌转化实验的介绍和实验步骤，希望对您有所帮助。

肺炎双球菌转化实验1944年，美国科学家艾弗里等人.从光滑型肺炎球菌（有荚膜、有毒性、菌落光滑、称S型）中提取DNA、蛋白质和多糖物质，并分别与粗糙型肺炎双球菌（无荚膜、无毒性、菌落粗糙、称R型）一起培养，发现只有DNA能使一部分粗糙型细菌，转变为光滑型，而且转化的频率与DNA的纯度有关，DNA越纯转化率越高.若将DNA事先用脱氧核糖核酸酶降解，再和粗糙型肺炎双球菌一起培养，粗糙型菌就不能转化成光滑型菌.已经转化的细菌，所获得的光滑型性状可以遗传给后代.这一实验充分说明了，DNA是起转化作用的遗传物质.In 1944, U.S. scientists Avery, among others. From the smooth, pneumococcus (withcapsule, toxic, smooth colonies, called S-type), the extractedDNA, proteins and sugars, respectively, with the rough-type Streptococcus pneumoniae ( No capsule, non-toxic, rough colonies, calledR-type) with the training, found that only part of rough-type bacterial DNA can be transformed into a smooth-type, and the transformation frequency and purity of DNA related to, DNA greater net conversion rate. Ruoqiang deoxyribonuclease degradation of DNA prior to use, and then get together with rough-type pneumococcus culture, rough-type bacteria can not be transformed into a smooth-type bacteria. has been transformed bacteria, which can be obtained by smooth-type traits to their offspring. This experiment fully illustrated, DNA is a transformational role of the genetic material.肺炎双球菌S型细菌转化为R型细菌，转化因子是拟核中的DNA还是质粒DNA？要搞清楚这个问题，首先要搞清楚细菌的变异类型和变异的机制。

1肺炎双球菌的转化实验注：作为遗传物质必须具备的四个特点：（证明某一物质是遗传物质的依据）①分子结构具有相对的稳定性 ②能够进行自我复制，前后代保持一定的连续性 ③能够指导蛋白质的合成，以表现生物的性状 ④产生可遗传的变异 一、肺炎双球菌转化实验 1格里菲思实验（体内转化） （1）实验过程（2）实验结论：加热杀死的S 型细菌体内含有“转化因子”，促使R 型细菌转化为S 型细菌。

（3）用现有的知识对实验的解释：①加热杀死S 型细菌的过程中，其蛋白质变性失活，但是其内部的DNA 在加热结束后随温度的恢复又逐渐恢复其活性。

②R 型细菌转化成S 型细菌的过程可以下的五步来反应：（了解） a 、双链DNA 片段与受体菌细胞表面特定位点结合； b 、位点上DNA 分解，形成DNA 片段；c 、双链DNA 的一条单链逐渐降解，同时另一条单链逐步进入细胞内；d 、进入细菌体的DNA 单链与受体菌DNA 同源区段配对，接着受体DNA 相应单链片段切除，并被外来DNA 取代，形成杂种DNA 区段（实质就是基因重组）；e 、受体菌DNA 通过复制杂合区段分离成两个；其中有的类似供体菌，细胞分裂后，就成为转化因子。

③实验证明转化率与供体菌细胞的DNA 纯度有关，DNA 越纯，转化率也就越高。

如果事先用DNA 酶降解供体菌细胞中的DNA ，那么转化作用就不复存在。

2艾弗里实验（体外转化）（1（2）实验结论：DNA是遗传物质，蛋白质不是遗传物质。

二、实验探究规律归纳：例题1：研究发现少数病毒（如烟草花叶病毒，简称TMV）体内仅有蛋白质和RNA 两种化学成分，这类生物的性状（如TMV 能感染正常烟草的叶片，使之出现相应的病斑）的遗传是受RNA 还是蛋白质控制？请设计实验探究TMV 的遗传物质。

（1）实验原理：①利用水—苯酚溶液可以将TMV 分离，获得TMV 的蛋白质和RNA 。

②TMV 能感染正常烟草使之出现相应的病斑 ③遗传物质能使生物性状保持相对稳定（2）实验材料：烟草花叶病毒、正常生长的烟草、苯酚、试管、玻璃棒等必需的实验器材 （3）主要实验步骤：①获得TMV 的RNA 和蛋白质：水—苯酚溶液分离TMV ，获得纯净的TMV 蛋白质和RNA②选择材料并分组：取正常生长烟草植物，选取生长状态基本相同的三张叶片，分别编号A 、B 、C 。

肺炎双球菌转化实验引言肺炎双球菌（Streptococcus pneumoniae），又称肺炎链球菌，是一种常见的致病菌，广泛存在于自然环境中，是耐药性和致病性高的细菌之一。

肺炎双球菌通过在持有的DNA或基因片段的转移中起到重要的作用，这种过程称为转化（transformation）。

转化实验是研究细菌的基因传递和遗传变异机制的重要方法之一。

本文将介绍肺炎双球菌转化实验的步骤和操作要点。

实验步骤1. 制备转化液1.1 准备肺炎双球菌培养基：将肺炎双球菌培养基倒入培养皿中，按照规定的浓度加入琼脂，在121摄氏度高压灭菌20分钟。

1.2 制备转化液：取一定体积的肺炎双球菌培养基，在其中加入DNA溶液（待转化物质），同时添加适量的CaCl2溶液（促进细胞对DNA的吸收）。

将转化液在4摄氏度保存至少30分钟以使细菌细胞发生变化。

2. 处理接收细胞2.1 培养肺炎双球菌：将肺炎双球菌接种于含有适宜培养基的培养瓶中，在37摄氏度的恒温振荡培养箱中培养12-24小时，使细菌达到指定生长阶段。

2.2 分装并洗涤细胞：将培养好的肺炎双球菌培养液在离心机中进行离心，去除上清液，保留菌体沉淀。

用适量的无菌生理盐水或PBS溶液悬浮菌体，然后再次离心。

重复此步骤3-4次以去除培养基中的残留物。

2.3 加入转化液进行处理：将适量的转化液加入洗涤后的菌体沉淀中，轻轻摇晃培养管，使DNA与细菌细胞充分接触。

3. 分装和培养转化菌落3.1 分装：将含有转化处理的细菌培养液分装于含琼脂的培养皿或试管中，均匀涂抹于培养基表面。

3.2 培养：将分装好的培养皿或试管在37摄氏度的恒温培养箱中培养，通常需要12-24小时才能观察到转化菌落的产生。

4. 分离和筛选转化菌落4.1 分离转化菌落：将转化菌落分离至含有适宜抗生素的选择性培养基中，通过对细菌菌落培养的选择压力，筛选出具有目标基因的转化菌落。

4.2 鉴定转化菌落：可以通过PCR扩增或其他分子生物学方法对转化菌落进行确认和鉴定。

一、实验背景肺炎双球菌（Streptococcus pneumoniae）是一种常见的革兰氏阳性细菌，其致病性与细菌表面的荚膜密切相关。

肺炎双球菌分为S型（光滑型）和R型（粗糙型）两种类型，其中S型具有荚膜，致病力强，而R型则无荚膜，致病力弱。

肺炎双球菌的遗传转化实验是研究遗传物质和基因表达的重要手段之一。

二、实验目的1. 探究肺炎双球菌的遗传转化现象。

2. 验证DNA是肺炎双球菌的遗传物质。

3. 研究肺炎双球菌转化过程中影响因素。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 肺炎双球菌S型菌株- 肺炎双球菌R型菌株- DNA提取试剂盒- DNA连接酶- 限制性内切酶- 连接载体- 转化试剂- 小白鼠2. 实验仪器：- 电子天平- 热水浴锅- 高速离心机- 恒温培养箱- 显微镜四、实验方法1. 肺炎双球菌S型菌株的分离与培养- 将肺炎双球菌S型菌株接种于血琼脂平板，37℃培养24小时。

2. DNA的提取与纯化- 采用DNA提取试剂盒提取肺炎双球菌S型菌株的DNA。

3. DNA连接- 将提取的DNA与连接载体进行连接，构建重组质粒。

4. 重组质粒的转化- 将重组质粒转化至肺炎双球菌R型菌株中，采用化学转化法。

5. 转化子的筛选与鉴定- 将转化子接种于血琼脂平板，37℃培养24小时，观察菌落特征。

6. 遗传转化效率的测定- 采用平板计数法测定转化效率。

五、实验结果1. 肺炎双球菌S型菌株的分离与培养：成功分离得到肺炎双球菌S型菌株。

2. DNA的提取与纯化：成功提取肺炎双球菌S型菌株的DNA。

3. DNA连接：成功构建重组质粒。

4. 重组质粒的转化：成功转化重组质粒至肺炎双球菌R型菌株中。

5. 转化子的筛选与鉴定：在血琼脂平板上观察到光滑型菌落，表明重组质粒已成功转化至肺炎双球菌R型菌株中。

6. 遗传转化效率的测定：转化效率约为1.2×10^-5。

六、实验结论1. 肺炎双球菌的遗传转化现象确实存在，且DNA是肺炎双球菌的遗传物质。