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一、内标法什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。
在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。
使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。
采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。
理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。
当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。
需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。
在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。
由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。
化学方面的因素包括：1、内标物在样品里混合不好；2、内标物和样品组分之间发生反应，3、内标物纯度可变等。
对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。
Clarity 色谱工作站操作SOP
1.双击桌面上的Clarity 图标，打开色谱工作站，进入登录界面，如
图1；
图1
2.点击“登录”按钮，进入登录对话框，如图2，输入用户名和密
码，点击“确定”按钮，进入色谱工作站；
图2
图3
3.通过点击“方法”菜单进入方法编辑界面，如图4，方法编辑完
成后，点击“发送方法”和“确定”按钮；
图4
4、点击方法保存按钮，保存方法；
图5
5、点击“分析”→“单次分析”菜单，点击“发送方法”按钮，方法发送成功后出现“准备”状态，如图6；
图6
6、点击设备监控界面上的数据采集按钮，运行方法；
图7
注意：运行方法前一定要检查各模块状态，确保各模块状态都在“准备”状态。
7、方法运行完毕后点击设备监视器上的STOP 按钮，停止数据采集；
图8
8、点击“系统运行/停止”按钮停止系统；
图9
9、如果运行上一次的方法，直接从步骤6开始操作，如果需要重新编辑方法从步骤3开始操作。
气质联用-内标法定量流程1.打开工作站，调用标曲离子图（第一级别），点击“色谱图”→“选择积分器”，选择RTE积分器；2.点击“MS信号积分参数”，调整最小峰面积，使峰面积最小的标准品峰能被积分。
点击应用，保存，保存方法建议放在运行标曲离子图的方法文件中。
3.点击“校正”→“设置定量”，输入校正标题（在定量报告中显示的为此标题），选择积分参数文件为2中所保存的积分参数文件。
输入标品及内标物浓度单位，内标物浓度，点击确定。
4.系统自动弹出“编辑化合物”，点击“插入上方”，弹出“定量设置”，在离子图中找到目标峰，右键双击，在质谱图中单击任一位置，系统会自动记录保留时间，输入目标物名称，如果是内标物需勾选“内标物”。
点击“保存”→“退出”，自动弹出“编辑化合物”，左键单击“化合物列表结束”→“插入上方”，依次进行所有目标物的录入。
内标物必须是在所有化合物的第一位，名称前带星号。
5.点击“退出”→“是”，在“更新校正”随便输入一个化合物浓度，在新级别中输入此次校正的标曲的级别。
点击“进行更新”，在弹出窗口中点击内标物前的“+”，拉开此标曲中所有的化合物，点击“校正”，依次修改除内标物外的所有化合物的浓度，点击“确定”，完成此次级别的校正。
6.点击“校正”→“更新一个级别”，以5中所述完成下一级别的校正。
每个级别的编号不能重复，如果需要删除级别，在“更新校正”中点击“删除级别”，选中所要删除的级别点击“进行更新”即可。
如需修改化合物顺序，点击“校正”→“重新排列化合物顺序”。
如需修改化合物信息，点击“校正”→“编辑化合物”。
7.完成所有级别的校正后，点击“方法”→“保存方法”，完成标曲建立。
8.调用所保存的定量方法，选中任一离子图，点击“定量”→“计算”即可计算化合物浓度。
Clarity 中文色谱工作站 定量篇 内标法本资料以含乙醇和叔丁醇（内标物）两种物质的样品为例，介绍了如何使用Clarity工作站进行内标法定量。
校准样品：样品1：含0.4mg/g的乙醇，1mg/g的叔丁醇。
样品2：含1.4mg/g的乙醇，1mg/g的叔丁醇。
样品3：含2.4mg/g的乙醇，1mg/g的叔丁醇。
三个校准样品分析完成后得到的校准色谱图文件存在clatiy安装目录下，work1目录内的calib子目录中，文件名分别是cal04.prm、cal14.prm和cal24.prm。
未知样品：含未知量乙醇，1mg/g的叔丁醇。
分析完成后得到的色谱图文件存在cal子目录中，为cal09.prm。
内标法定量步骤：1、进入校准窗口1.1双击桌面上的clarity工作站图标，启动工作站双击图标1.2以任意用户名登陆工作站，默认用户为“Administrator”单击“确定”1.3点击“校准窗口”图标进入校准视图2、制作第一个浓度级别的校准曲线2.1选择“文件”命令下拉菜单中的“新建”命令或者直接点击工具栏上的“新校准”图标新建一个校准文件。
单击“新建”或者“校“校准选项”2.3设置校准选项①显示模式设为“ISTD”②工作模式设为“校准”③校准方式设为“自动”际浓度单位⑤设置完毕后，单击“OK”确认2.4选择“文件”命令下拉菜单中的“OPEN STANDARD”命令或者直接点击工具栏上的“打开标准”图标打开第一个级别的校准色谱图文件cal04.prm。
单击“Open Standard”或者单击“打开标准”图标选择第一级别的校准色谱图cal04.prm125②选择文件后，单击“确定”2.5选择“校准”命令下拉菜单中的“添加峰”命令或者工具栏上的“添加峰”图标登录目标色谱峰，响应值和保留时间将自动登入化合物列表。
单击“添加峰”或者单击“添加峰”图标选择乙醇的色谱峰，单击鼠标左键确认，同样的方法选择叔丁醇的色谱峰。
色谱内标法定量（多点校准）一）校准曲线的绘制１、由主菜单View进入Data Analysis界面；２、由主菜单的File到Load Signal，调出第一种浓度的标准品的色谱图（第一点），并调整其坐标参数和积分参数等；３、由主菜单Calibration进入New Calibration Table，在Automatic Setup Level 后的对话框中输入1，然后点击OK；４、在校准表上分别输入已知组分的名称及其浓度，右下方即出现对应曲线：1)在Compond栏中输入组分名称；2)在Amt(mg) 栏中输入组分浓度；3)在ISTD栏中，内标那一行设为Yes。
５、由主菜单Calibration进入Calibration Settings，分别修改浓度单位、校准曲线类型和时间窗口等：1)在Amount Units栏中输入组分浓度单位；2)在Type栏中输入曲线类型（Linear＝直线，Power=抛物线等）；3)在Origin栏中选择曲线过不过原点（Ignore=忽略，Include=包含，Force=强制，connect=连接）；4)在Other Peaks栏中设定峰识别时间窗口（一般设为５％）；６、点击OK，退出校准表；７、调出第二种浓度的标准品的色谱图（第二点），并调整其坐标参数和积分参数等；８、由主菜单的Calibration进入Add Level，对照响应组分，分别输入第二点的各组分浓度，点击OK退出；第三点、第四点等类推；９、由主菜单的Calibration进入Calibration Table，可检查、修改校准表上的各参数；１０、由主菜单上的Report ，进入Specify Report，将Calculate: 后改为ISTD （内标法），点击OK退出；二）样品分析１、由主菜单的File到Load Method…，在D:\HPCHEM\1\METHOD\…中调出所需方法；２、调出样品色谱图，调整其坐标参数和积分参数等，预览报告及打印；３、对于同一浓度的标样，可多次平行进样，取其平均值，加以校准：调出同一浓度标准品的色谱图，由主菜单Calibration进入Recalibrate取Average,再OK,即得到同一浓度的两次进样的平均校准表。
内标法的操作方法内标法（Intramolecular Standard Method）是一种利用内标物进行定量分析的方法。
内标物是在样品中添加的已知浓度的物质，与待测物具有相似的化学性质，但可以通过不同的检测方法进行区分。
内标法的使用可以提高分析结果的准确性和可靠性。
下面详细介绍内标法的操作方法。
内标法的操作步骤如下：1. 准备样品：首先需要准备待测物样品。
样品可以是固体、液体或气体，根据不同的样品特点选择合适的处理方法。
2. 准备内标物：选择与待测物化学性质相似的内标物，并确保内标物的纯度和浓度已知。
内标物应该与待测物在样品处理和分析过程中不发生反应，并且有明显的检测信号。
3. 加入内标物：将已知浓度的内标物添加到待测物样品中。
添加的内标物的浓度应该与待测物的浓度在一个可以测量的范围内，通常是待测物的浓度的数倍。
4. 样品处理：根据样品的特性，选择适当的样品处理方法。
对于固体样品，可以进行研磨、溶解或提取处理；对于液体样品，可以进行稀释、浓缩或者调整pH值等处理。
5. 仪器分析：将经过样品处理的样品置于分析仪器中进行测量。
根据待测物和内标物的性质，选择合适的检测方法进行分析。
常用的分析方法包括色谱法、质谱法、光谱法等。
6. 数据分析：对测量结果进行数据处理和分析。
首先要确定内标物和待测物的测量响应因子（Response Factor），即单位浓度下的检测信号大小。
然后，通过内标物和待测物的测量信号比值，确定待测物的浓度。
7. 结果计算：根据内标物和待测物的浓度，计算出待测物的分析结果。
通常采用比例法或插值法来计算。
内标法的优点：1. 准确性高：通过比较待测物和内标物的测量信号，可以减小仪器误差和样品处理过程中的变动对结果的影响，提高分析结果的准确性。
2. 可靠性好：内标物的加入可以对样品处理和分析步骤的效果进行验证，提高数据的可靠性。
3. 方便快捷：内标法不需要单独测定内标物的浓度，只需加入已知浓度的内标物，减少了分析时间和操作步骤。
Clarity 色谱工作站操作SOP
1.双击桌面上的Clarity 图标，打开色谱工作站，进入登录界面，如
图1；
图1
2.点击“登录”按钮，进入登录对话框，如图2，输入用户名和密
码，点击“确定”按钮，进入色谱工作站；
图2
图3
3.通过点击“方法”菜单进入方法编辑界面，如图4，方法编辑完
成后，点击“发送方法”和“确定”按钮；
图4
4、点击方法保存按钮，保存方法；
图5
5、点击“分析”→“单次分析”菜单，点击“发送方法”按钮，方法发送成功后出现“准备”状态，如图6；
图6
6、点击设备监控界面上的数据采集按钮，运行方法；
图7
注意：运行方法前一定要检查各模块状态，确保各模块状态都在“准备”状态。
7、方法运行完毕后点击设备监视器上的STOP 按钮，停止数据采集；
图8
8、点击“系统运行/停止”按钮停止系统；
图9
9、如果运行上一次的方法，直接从步骤6开始操作，如果需要重新编辑方法从步骤3开始操作。
色谱工作站的操作方法一、操作步骤；1、色谱工作站在通用版色谱工作站的基础上，以GB50325-2010及GB/T18883-2002为准则，为方便计算增加的功能：自动套用甲苯的工作曲线计算谱图中所有未知峰的总含量。
可计算单位采样体积中各组份总的含量，并可换算到标准状态下。
可扣除溶剂中各组份的峰面积和室外空气样品中各组份的含量。
2、谱图处理：这步的主要任务是正确地将谱图听峰检测到，并为这些峰确立恰当的基线，以及为重叠的峰确立恰当的分割线。
程序在采集谱图的过程中会对谱图进行实时处理，但也在谱图采集结束后，调节“谱图处理能数”或制定“谱图处理方案”后对谱图进行再处理。
3、定量计算：在第一步中得到了谱图中各个峰的位置和大小就可以在这些信息的基础上有一系列已知浓度的标样计算各气体组份的工作曲线，或反过来有工作曲线计算待测样品中各气体组份的浓度。
4、谱图采集与处理：①在“工具”菜单里执行“选项”命令，在弹出的选项对话框的“操作”页面设置“通道貌岸然同步”一项。
②在“文件“菜单内选择“新建”命令，程序将打开一新窗口，并同时试图寻找一个名为“默认模板”的文件，如果找到这个文件则将其中记载的几张表格内容（如“谱图参数表”、“谱图处理表”、“定量组份表”、“定量方法表”、“分析报告表”）引进到新建窗口的相应相应表格中来，如果没找到程序弹出一对话框没有，故新建窗口中表选择“新建”命令，程序将打开一新窗口，并同时试图寻找一个名为“默认模板”的文件，如果找到这个文件则将其中记载的几张表格内容（如“谱图参数表”、“谱图处理表”、“定量组份表”、“定量方法表”、“分析报告表”）引进到新建窗口的相应表格中来，如果没找到程序弹出一对话框没有，故新建窗口中表格的内容采胜出厂值。
③在“谱图参数表”“信号通道里选择谱图信号的采集通道。
④选择“操作”菜单中的“谱图采集”命令，这时谱图窗口内开始有谱图走动。
⑤如果要调节谱图在横向和纵向上的缩放，请分别调节“谱图参数表”中“满屏时间”和“满屏量程”两个谱图显示参数，也可分别单击这两个参数旁的“满屏”按钮，使当前已采集到的谱图分别在横向和纵向上满屏。
色谱定量要领之阳早格格创做一、归一化法由于组分的量与其峰里积成正比，如果样品中所有组分皆能爆收旗号，得到相映的色谱峰，那么不妨用如下归一化公式估计各组分的含量.(7.34)若样品中各组分的矫正果子相近，可将矫正果子消去，直交用峰里积归一化举止估计.华夏药典用没有加矫正果子的里积归一化法测定药物中各杂量及杂量的总量极限.(7.35)归一化法的便宜是：烦琐、准确、定量截止与进样量沉复性无闭(正在色谱柱没有超载的范畴内)、支配条件略有变更时对付截止做用较小.缺面是：必须所有组分正在一个分解周期内皆流出色谱柱，而且检测器对付它们皆爆收旗号.没有适于微量杂量的含量测定.两、中标法用待测组分的杂品做对付照物量，以对付照物量战样品中待测组分的赞同旗号相比较举止定量的要领称为中标法.此法可分为处事直线法及中标一面法等.处事直线法是用对付照物量配制一系列浓度的对付照品溶液决定处事直线，供出斜率、截距.正在真足相共的条件下，准确进样与对付照品溶液相共体积的样品溶液，根据待测组分的旗号，从尺度直线上查出其浓度，或者用返回圆程估计，处事直线法也不妨用中标两面法代替.常常截距应为整，若没有等于整证明存留系统缺面.处事直线的截距为整时，可用中标一面法(直交比较法)定量.中标一面法是用一种浓度的对付照品溶液对付比测定样品溶液中i组分的含量.将对付照品溶液与样品溶液正在相共条件下多次进样，测得峰里积的仄衡值，用下式估计样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36) 式中W与A分别代表正在样品溶液进样体积中所含i组分的沉量及相映的峰里积.(W)及(A)分别代表正在对付照品溶液进样体积中含杂品i组分的沉量及相映峰里积.中标法要领烦琐，没有需用矫正果子，没有管样品中其余组分是可出峰，均可对付待测组分定量.但是此法的准确性受进样沉复性战真验条件宁静性的做用.别的，为了降矮中标一面法的真验缺面，应尽管使配制的对付照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近.三、内标法采用样品中没有含有的杂物量动做对付照物量加进待测样品溶液中，以待测组分战对付照物量的赞同旗号对付比，测定待测组分含量的要领称为内标法.“内标”的由去是果为尺度(对付照)物量加进到样品中，有别于中标法.该对付照物量称为内标物.正在一个分解周期内没有是所有组分皆能流出色谱柱(如有易气化组分)，或者检测器没有克没有及对付每个组分皆爆收旗号，或者只需测定混同物中某几个组分的含量时，可采与内标法.准确称量W克样品，再准确称量W克内标物，加进至样品中，混匀，进样.丈量待测组分i的峰里积A及内标物的峰里积A，则i组分正在W克样品中所含的沉量W，与内标物的沉量W，有下述闭系：(7.37) 待测组分i正在样品中的百分含量C％为：(7.38)对付内标物的央供；①内标物是本样品中没有含有的组分，可则会使峰沉叠而无法准确丈量内标物的峰里积；②内标物的死存时间应与待测组分相近，但是相互能真足分散(R≥1.5)；③内标物必须是杂度合乎央供的杂物量.内标法的便宜是：①正在进样量没有超限(色谱柱没有超载)的范畴内，定量截止与进样量的沉复性无闭.②只消被测组分及内标物出峰，且分散度合乎央供，便可定量，与其余组分是可出峰无闭.③很适用于测定药物中微量灵验身分或者杂量的含量.由于杂量(或者微量组分)与主要身分含量出进悬殊，无法用归一化法测定含量，用内标规则很便当.加一个与杂品量相称的内标物.加大进样量超过杂量峰，测定杂量峰与内标峰里积之比，即可供出杂量含量.但是样品配制比较贫苦战内标物没有简单找觅是其缺面.一、内标法什么喊内标法?何如采用内标物?内标法是一种间交或者相对付的校准要领.正在分解测定样品中某组分含量时，加进一种内标物量以校谁战与消出于支配条件的动摇而对付分解截止爆收的做用，以普及分解截止的准确度.内标法正在气相色谱定量分解中是一种要害的技能.使用内标法时，正在样品中加进一定量的尺度物量，它可被色谱拄所分散，又没有受试样中其余组分峰的搞扰，只消测定内标物战待测组分的峰里积与相对付赞同值，即可供出待测组分正在样品中的百分含量.采与内标法定量时，内标物的采用是一项格中要害的处事.理念天道，内标物应当是一个能得到杂样的己知化合物，那样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当战被分解的样品组分有基本相共或者尽大概普遍的物理化教本量(如化教结构、极性、挥收度及正在溶剂中的溶解度等)、色谱止为战赞同特性，最佳是被分解物量的一个共系物.天然，正在色谱分解条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分散.需要指出的是，正在少量情况下，分解人员大概比较闭心化台物正在一个搀杂历程中所得到的回支率，此时，他不妨使用一种正在那种历程中很简单被真足回支的化台物做内标，去测定感兴趣化合物的百分回支率，而没有必按照以上所道的采用准则.正在使用内标法定量时，有哪些果素会做用内标战被测组分的峰下或者峰里积的比值?做用内标战被测组分峰下或者峰里积比值的果素主要有化教圆里的、色谱圆里的战仪器圆里的三类.由化教圆里的本果爆收的里积比的变更时常正在分解沉复样品时出现.化教圆里的果素包罗：1、内标物正在样品里混同短佳；2、内标物战样品组分之间爆收反应，3、内标物杂度可变等.对付于一个比较老练的要领去道，色谱圆里的问题爆收的大概性更大一些，色谱上罕睹的一些问题(如渗漏)对付千万于里积的做用比较大，对付里积比的做用则要小一些，但是如果千万于里积的变更已大到脚以使里积比爆收隐著变更的程度，那么一定有某个要害的色谱问题存留，比圆进样量改变太大，样品组分浓度战内标浓度之间有很大的没有共，检测器非线性等.进样量应脚够小并脆持没有变，那样才没有致于制成检测器战积分拆置鼓战.如果认为要领比较稳当，而色谱固瞅去也是仄常的话，应着沉查看积分拆置战树立、斜率战峰宽定位.对付积分拆置爆收猜疑的最有力的凭证是：里积比可变，而峰下比脆持相对付恒定，正在创制内标尺度直线时应注意什么?正在用内标法搞色话定量分解时，先配制一定沉量比的被测组分战内标样品的混同物搞色谱分解，丈量峰里积，搞沉量比战里积比的闭系直线，此直线即为尺度直线.正在本量样品分解时所采与的色谱条件应尽大概与创制尺度直线时所用的条件普遍，果此，正在创制尺度直线时，没有但是要证明色谱条件(如牢固相、柱温、载气流速等)，还应证明进样体积战内标物浓度.正在创制内标尺度直线时，各面本去没有真足降正在直线上，此时应供出头积比战沉量比的比值与其仄衡位的尺度偏偏好，正在使用历程中应定期举止单面矫正，若所得值与仄衡值的偏偏好小于2，直线仍可使用，若大于2，则应沉做直线，如果直线正在铰短时期内即爆收变动，则没有宜使用内标法定量.两、中标法用待测组分的杂品做对付照物量，以对付照物量战样品中待测组分的赞同旗号相比较举止定量的要领称为中标法.此法可分为处事直线法及中标一面法等.处事直线法是用对付照物量配制一系列浓度的对付照品溶液决定处事直线，供出斜率、截距.正在真足相共的条件下，准确进样与对付照品溶液相共体积的样品溶液，根据待测组分的旗号，从尺度直线上查出其浓度，或者用返回圆程估计，处事直线法也不妨用中标两面法代替.常常截距应为整，若没有等于整证明存留系统缺面.处事直线的截距为整时，可用中标一面法(直交比较法)定量.中标一面法是用一种浓度的对付照品溶液对付比测定样品溶液中i组分的含量.将对付照品溶液与样品溶液正在相共条件下多次进样，测得峰里积的仄衡值，用下式估计样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)式中W与A分别代表正在样品溶液进样体积中所含i组分的沉量及相映的峰里积.(W)及(A)分别代表正在对付照品溶液进样体积中含杂品i组分的沉量及相映峰里积.中标法要领烦琐，没有需用矫正果子，没有管样品中其余组分是可出峰，均可对付待测组分定量.但是此法的准确性受进样沉复性战真验条件宁静性的做用.别的，为了降矮中标一面法的真验缺面，应尽管使配制的对付照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近.中标法 external standard method 色谱分解中的一种定量要领，它没有是把尺度物量加进到被测样品中，而是正在与被测样品相共的色谱条件下单独测定，把得到的色谱峰里积与被测组分的色谱峰里积举止比较供得被测组分的含量.中标物与被测组分共为一种物量但是央供它有一定的杂度，分解时中标物的浓度应与被测物浓度相交近，以好处定量分解的准确性.。
内标法实验步骤
内标法通常用于定量分析，具体步骤如下：
1. 选择内标物：选择一种与目标分析物相似的化合物作为内标物，具有类似的化学特性、物理性质和色谱/质谱行为。
2. 加入内标物：在样品或标准品中加入内标物，并加入一定量的稳定同位素内标物（如13C或15N）。
3. 提取样品：根据所需的分析结果，使用合适的样品提取方法提取样品中的目标分析物和内标物。
4. 分离纯化：根据样品的性质，使用适当的分离纯化方法，如柱层析、液液萃取、凝胶层析等方法分离出目标分析物和内标物。
5. 质谱分析和定量分析：使用适当的质谱分析方法（如质谱检测器）对样品进行分析，通过测定目标分析物和内标物之间的相对峰面积比，进行定量分析。
6. 数据计算和处理：将所得的数据进行统计处理，计算出目标分析物的浓度，并进行质量控制、数据校正和数据解释。
GC－solution定量操作（内标法）一、定性操作（定性表的编辑）1.打开所要定量的标准品文件2.点击wizard，进入定性表编辑向导3.点击下一步4.输入所用的定量方法、定量校正水平数（以下以3水平为例）、定性的置信区间（window/band）5.点击下一步，选择要定量的峰及内标峰6.如是内标峰，在Type列中选择ISTD；如是目标峰则在Type列下选择Target7.点击下一步，在name列中命名内标峰及目标峰的名字8.在conc1～conc3各列中输入内标物的浓度及目标物的浓度9.点击完成后将方法另存如出现询问是否要改变当前的方法，单击“是”如出现询问是否要删除旧的校正表及定性表，单击“是”方法另存为calib.lcm二、定量操作（编辑batch表）1.点击助手栏中的top键2.再点击助手栏中的batch processing键3.出现batch表后，选中batch表的第一行，单击右键选择add row加入一行，同法操作加入三行4.定义样品类型，在sample Type列中选择样品的类型校正的第一个水平的Sample Type选择如下图所示校正的第二、第三水平的Sample Type选择如下所示选择完后结果如下5.定义校正计算的方法点击method file列右角下拉箭头出现下框选择所用的校正计算方法6.定义校正的标准品文件依次打开所用的标准品文件7.定义水平数8.在完成Batch表的编辑后应将表另存9.点击助手栏中的START开始校正计算1.校正结束后点击助手栏中的top2.再点击助手栏中的calibration curve键3.打开Data Explore，选择所用的校正方法并将它拖入右边的窗口中，生成校正曲线点击如图的箭头可以查找所定量的目标物的校正曲线。
色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。
(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。
中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。
(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。
缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。
不适于微量杂质的含量测定。
二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。
此法可分为工作曲线法及外标一点法等。
工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。
在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。
通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。
工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。
外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。
将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。
(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。
外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。
但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。
此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。
三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。
定量分析中怎样选择内标法或外标法一内标法什么叫内标法?怎样选择内标物?内标法是一种间接或相对的校准方法。
在分析测定样品中某组分含量时，加入一种内标物质以校谁和消除出于操作条件的波动而对分析结果产生的影响，以提高分析结果的准确度。
内标法在气相色谱定量分析中是一种重要的技术。
使用内标法时，在样品中加入一定量的标准物质，它可被色谱拄所分离，又不受试样中其它组分峰的干扰，只要测定内标物和待测组分的峰面积与相对响应值，即可求出待测组分在样品中的百分含量。
采用内标法定量时，内标物的选择是一项十分重要的工作。
理想地说，内标物应当是一个能得到纯样的己知化合物，这样它能以准确、已知的量加到样品中去，它应当和被分析的样品组分有基本相同或尽可能一致的物理化学性质(如化学结构、极性、挥发度及在溶剂中的溶解度等)、色谱行为和响应特征，最好是被分析物质的一个同系物。
当然，在色谱分析条什下，内标物必须能与样品中各组分充分分离。
需要指出的是，在少数情况下，分析人员可能比较关心化台物在一个复杂过程中所得到的回收率，此时，他可以使用一种在这种过程中很容易被完全回收的化台物作内标，来测定感兴趣化合物的百分回收率，而不必遵循以上所说的选择原则。
在使用内标法定量时，有哪些因素会影响内标和被测组分的峰高或峰面积的比值?影响内标和被测组分峰高或峰面积比值的因素主要有化学方面的、色谱方面的和仪器方面的三类。
由化学方面的原因产生的面积比的变化常常在分析重复样品时出现。
化学方面的因素包括：1、内标物在样品里混合不好；2、内标物和样品组分之间发生反应，3、内标物纯度可变等。
对于一个比较成熟的方法来说，色谱方面的问题发生的可能性更大一些，色谱上常见的一些问题(如渗漏)对绝对面积的影响比较大，对面积比的影响则要小一些，但如果绝对面积的变化已大到足以使面积比发生显著变化的程度，那么一定有某个重要的色谱问题存在，比如进样量改变太大，样品组分浓度和内标浓度之间有很大的差别，检测器非线性等。
