色谱分析中归一化法、外标法、内标法的区别

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

色谱定量方法时间：2021.03.12 创作：欧阳文一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36) 式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

色谱定量方法一、归一化法由于组分得量与其峰面积成正比,如果样品中所有组分都能产生信号,得到相应得色谱峰,那么可以用如下归一化公式计算各组分得含量。

（7、34）若样品中各组分得校正因子相近,可将校正因子消去,直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子得面积归一化法测定药物中各杂质及杂质得总量限度。

（7、35）归一化法得优点就是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关（在色谱柱不超载得范围内）、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点就是:必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质得含量测定.二、外标法用待测组分得纯品作对照物质,以对照物质与样品中待测组分得响应信号相比较进行定量得方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法就是用对照物质配制一系列浓度得对照品溶液确定工作曲线,求出斜率、截距。

在完全相同得条件下，准确进样与对照品溶液相同体积得样品溶液,根据待测组分得信号，从标准曲线上查出其浓度,或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替.通常截距应为零,若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线得截距为零时，可用外标一点法（直接比较法）定量. ﻫ外标一点法就是用一种浓度得对照品溶液对比测定样品溶液中ｉ组分得含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样,测得峰面积得平均值，用下式计算样品中i组分得量:ﻫＷ=A(W)/（A）(７、36）ﻫ式中W 与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分得重量及相应得峰面积。

(W）及（A）分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分得重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其她组分就是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法得准确性受进样重复性与实验条件稳定性得影响.此外,为了降低外标一点法得实验误差，应尽量使配制得对照品溶液得浓度与样品中组分得浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有得纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分与对照物质得响应信号对比，测定待测组分含量得方法称为内标法。

色谱定量方法之马矢奏春创作创作时间：二零二一年六月三十日一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比, 如果样品中所有组分都能发生信号, 获得相应的色谱峰, 那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量.(7.34)若样品中各组分的校正因子相近, 可将校正因子消去, 直接用峰面积归一化进行计算.中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度.(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、把持条件略有变动时对结果影响较小.缺点是：必需所有组分在一个分析周期内都流超卓谱柱, 而且检测器对它们都发生信号.不适于微量杂质的含量测定.二、外标法用待测组分的纯品作对比物质, 以对比物质和样品中待测组分的响应信号相比力进行定量的方法称为外标法.此法可分为工作曲线法及外标一点法等.工作曲线法是用对比物质配制一系列浓度的对比品溶液确定工作曲线, 求出斜率、截距.在完全相同的条件下, 准确进样与对比品溶液相同体积的样品溶液, 根据待测组分的信号, 从标准曲线上查出其浓度, 或用回归方程计算, 工作曲线法也可以用外标二点法取代.通常截距应为零, 若不即是零说明存在系统误差.工作曲线的截距为零时, 可用外标一点法(直接比力法)定量.外标一点法是用一种浓度的对比品溶液比较测定样品溶液中i组分的含量.将对比品溶液与样品溶液在相同条件下屡次进样, 测得峰面积的平均值, 用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36) 式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积.(W)及(A)分别代表在对比品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积.外标法方法简便, 不需用校正因子, 不论样品中其他组分是否出峰, 均可看待测组分定量.但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响.另外, 为了降低外标一点法的实验误差, 应尽量使配制的对比品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近.三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对比物质加入待测样品溶液中, 以待测组分和对比物质的响应信号比较, 测定待测组分含量的方法称为内标法.“内标”的由来是因为标准(对比)物质加入到样品中, 有别于外标法.该对比物质称为内标物.在一个分析周期内不是所有组分都能流超卓谱柱(如有难气化组分), 或检测器不能对每个组分都发生信号, 或只需测定混合物中某几个组分的含量时, 可采纳内标法.准确称量W克样品, 再准确称量W克内标物, 加入至样品中, 混匀, 进样.丈量待测组分i的峰面积A及内标物的峰面积A, 则i组分在W克样品中所含的重量W, 与内标物的重量W, 有下述关系：(7.37) 待测组分i在样品中的百分含量C％为：(7.38)对内标物的要求；①内标物是原样品中不含有的组分, 否则会使峰重叠而无法准确丈量内标物的峰面积；②内标物的保管时间应与待测组分相近, 但彼此能完全分离(R≥1.5)；③内标物必需是纯度合乎要求的纯物质.内标法的优点是：①在进样量不超限(色谱柱不超载)的范围内, 定量结果与进样量的重复性无关.②只要被测组分及内标物出峰, 且分离度合乎要求, 就可定量, 与其他组分是否出峰无关.③很适用于测定药物中微量有效成份或杂质的含量.由于杂质(或微量组分)与主要成份含量相差悬殊, 无法用归一化法测定含量, 用内标法则很方便.加一个与杂质量相当的内标物.加年夜进样量突出杂质峰, 测定杂质峰与内标峰面积之比, 即可求出杂质含量.但样品配制比力麻烦和内标物不容易找寻是其缺点.。

色谱定量方法时间：2021.02.05 创作：欧阳科一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36) 式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

浅谈归一化法、内标法、外标法及标准加入法，明白区别很重要！1.归一化法把所有出峰的组分含量之和按100%计的定量方法，称为归一化法。

各成分校正因子一致时可用该法，该法简便、准确，特别是进样量不容易准确控制时，进样浓度及进样量的变化的影响很小。

其他操作条件，如流速、柱温等变化对定量结果的影响也很小。

GC应用广于HPLC。

2.外标法（标准曲线法、直接比较法）首先用欲测组分的标准样品绘制标准工作曲线。

具体作法是：用标准样品配制成不同浓度的标准系列，在与欲测组分相同的色谱条件下，等体积准确量进样，测量各峰的峰面积或峰高，用峰面积或峰高对样品浓度绘制标准工作曲线，此标准工作曲线应是通过原点的直线。

若标准工作曲线不通过原点，说明测定方法存在系统误差。

标准工作曲线的斜率即为绝对校正因子。

当欲测组分含量变化不大，并已知这一组分的大概含量时，也可以不必绘制标准工作曲线，而用单点校正法，即直接比较法定量。

单点校正法实际上是利用原点作为标准工作曲线上的另一个点。

因此，当方法存在系统误差时（即标准工作曲线不通过原点），单点校正法的误差较大。

因此规定，y=ax+b 。

b的绝对值应不大于100%响应值是y的2%。

标准曲线法的优点：绘制好标准工作曲线后测定工作就很简单了，计算时可直接从标准工作曲线上读出含量，这对大量样品分析十分合适。

特别是标准工作曲线绘制后可以使用一段时间，在此段时间内可经常用一个标准样品对标准工作曲线进行单点校正，以确定该标准工作曲线是否还可使用.标准曲线法的缺点：每次样品分析的色谱条件（检测器的响应性能，柱温度，流动相流速及组成，进样量，柱效等）很难完全相同，因此容易出现较大误差。

另外，标准工作曲线绘制时，一般使用欲测组分的标准样品（或已知准确含量的样品），因此对样品前处理过程中欲测组分的变化无法进行补偿。

3.内标法选择适宜的物质作为欲测组分的参比物，定量加到样品中去，依据欲测组分和参比物在检测器上的响应值（峰面积或峰高）之比和参比物加入的量进行定量分析的方法称为内标法。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

归一化法、内标法、外标法是色谱定量分析中常用的
方法：
归一化法、内标法、外标法是色谱定量分析中常用的方法：
1.归一化法：将色谱峰的面积与标准物的质量直接比较，从而得到组分的含
量。

它是最简便的定量方法，但它的准确性受进样量的重复性和实验条件稳定性的影响。

即使进样量不准确，对结果亦无影响，操作条件的变动对结果影响也较小。

适用于试样中所有组分都能流出色谱柱，并且在色谱图上都显示色谱峰的样品测定。

但若试样中的组分不能全部出峰，则不能应用此方法。

2.内标法：选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，
以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法。

此法的优点是在进样量不超限的范围内，定量结果与进样量的重复性无关。

缺点是样品配制比较麻烦和内标物不易找寻。

3.外标法：用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的
响应信号相比较进行定量的方法。

此法的优点是方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

缺点是此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

请根据实际需要和实验条件选择合适的定量分析方法。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

归一化法外标法内标法的区别Modified by JEEP on December 26th, 2020.色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。

归一化法、外标法、内标法的区别(总4页)-CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1-CAL-本页仅作为文档封面，使用请直接删除色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i 组分的量：W＝A(W)／(A)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

色谱分析中面积归一化法、外标法、内标法适用范围及优缺点简介在色谱分析中，即我们常用的高效液相色谱分析（HPLC）和气相色谱分析（GC）分析中，进行分析时，通常采用三种方法：面积归一化法、外标法、内标法。

这三种方法的适用范围及各自的优缺点是什么呢？在这里简单做一介绍。

1、归一化法。

即在一定分析条件下，样品经过直接溶解，过滤等操作以后,直接进分析仪器检测，得到色谱图。

通常用于粗略检查样品中的各出峰成分含量，用于定性和粗略的定量。

优点：与进样量准确度无关、与仪器和分析条件有关。

缺点：a.在此条件之下，所有有效组分必须出峰，且所有组分必须在一个分析周期内流出色谱峰；b.定量计算必须先知道各成分的校正因子，校正因子的求出较麻烦。

2、易挥发性的油脂类化合物和混合性气体、液体，可用GC归一化法进行定量检测。

例如食用油里面各成分的含量测定。

2、外标法。

用待测组分的纯品作为对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号（即峰面积大小）相比较进行定量的方法。

优点：简便；只关注待测成分出峰，不需要所有成分出峰。

缺点：a.必须有被测组分的纯品作为标准对照物；b.此方法准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

3、内标法。

选择样品中不含有的纯物质作为内标物加入待测样品中，以待测组分和内标物的响应信号（即峰面积大小）对比，对待测组分定量的方法。

优点：a.是一种比较准确的定量方法；b.定量结果与进样量重复性无关（在色谱柱不超载范围内）；c.只需要内标物与被测物出峰，达到一定的分离度即可；d.常用于样品的GC定量检测以及微量成分含量检测；缺点：配置较麻烦；内标物需要跟待测组分在同样条件下出峰，且分离度较好，所以选择合适的内标物比较困难。

如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！如有侵权请联系告知删除，感谢你们的配合！。

色谱定性与定量分析（归一化法、内标法和外标法）色谱法是根据色谱峰的面积或高度进行定量分析的。

色谱定量计算方法很多，目前比较广泛应用的有归一化法、内标法和外标法。

1. 归一化法如果试样中所有组分均能流出色谱柱并显示色谱峰，则可用此法计算组分含量。

设试样中共有n个组分，各组分的量分别为m1，m2，……，mn，则i种组分的百分含量为：归一化法的优点是简便、准确，进样量的多少不影响定量的准确性，操作条件的变动对结果的影响也较小，对组分的同时测定尤其显得方便。

缺点是试样中所用的组分必须全部出峰，某些不需定量的组分也需测出其校正因子和峰面积，因此应用受到一些限制。

2. 内标法当试样中所有组分不能全部出峰，或只要求测定试样中某个或几个组分时，可用此法。

准确称取m(g)试样，加入某种纯物质ms(g)作为内标物，根据试样和内标物的质量比ms/m及相应的色谱峰面积之比，基于下式可求组分i的百分含量Wi%：因为所以内标物的选择条件是：内标物与试样互溶且是试样中不存在的纯物质；内标物的色谱峰既处于待测组分峰附近，彼此又能很好地分开且不受其它峰干扰；加入量宜与待测组分量相近。

内标法的优点是定量准确，操作条件不必严格控制，且不象归一化法那样在使用上有所限制。

缺点是必须对试样和内标物准确称重，比较费时。

3. 外标法(亦称标准曲线法)该法是在一定色谱操作条件下，用纯物质配制一系列不同的浓度的标准样，定量进样，按测得的峰面积对标准系列的浓度作图绘制标准曲线。

进行试样分析时，在与标准系列严格相同的条件下定量进样，由所得峰面积从标准曲线上即可查得待测组分的含量。

外标法的优点是操作和计算简便，不需要知道所有组分的相对校正因子，其准确度主要取决于进样量的准确和重现性，以及操作条件的稳定性。

色谱分解中里积归一化法、中标法、内标法适用范畴及劣缺面简介之阳早格格创做正在色谱分解中，即咱们时常使用的下效液相色谱分解（HPLC）战睦相色谱分解（GC）分解中，举止分解时，常常采与三种要领：里积归一化法、中标法、内标法.那三种要领的适用范畴及各自的劣缺面是什么呢？正在那里简朴干一介绍.1、归一化法.即正在一定分解条件下，样品通过曲交溶解，过滤等支配以来,曲交进分解仪器检测，得到色谱图.通时常使用于大略查看样品中的各出峰身分含量，用于定性战大略的定量.便宜：与进样量准确度无闭、与仪器战分解条件有闭.缺面：a.正在此条件之下，所有灵验组分必须出峰，且所有组分必须正在一个分解周期内流出色谱峰；b.定量估计必须先知讲各身分的矫正果子，矫正果子的供出较贫苦.2、易挥收性的油脂类化合物战混同性气体、液体，可用GC归一化法举止定量检测.比圆食用油内里各身分的含量测定.2、中标法.用待测组分的杂品动做对于照物量，以对于照物量战样品中待测组分的赞同旗号（即峰里积大小）相比较举止定量的要领.便宜：烦琐；只闭注待测身分出峰，没有需要所有身分出峰.缺面：a.必须有被测组分的杂品动做尺度对于照物；b.此要领准确性受进样沉复性战真验条件宁静性的做用.3、内标法.采用样品中没有含有的杂物量动做内标物加进待测样品中，以待测组分战内标物的赞同旗号（即峰里积大小）对于比，对于待测组分定量的要领.便宜：a.是一种比较准确的定量要领；b.定量截止与进样量沉复性无闭（正在色谱柱没有超载范畴内）；c.只需要内标物与被测物出峰，达到一定的分散度即可；d.时常使用于样品的GC定量检测以及微量身分含量检测；缺面：摆设较贫苦；内标物需要跟待测组分正在共样条件下出峰，且分散度较佳，所以采用符合的内标物比较艰易.。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

C.%-―7 -------------- -------- T -------------------- L X 100 =二L‘ 1广X 100%扎求+血去+血迟十…+血£匸扎灵⑺34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)A.a%- ---------------- ---------- x 100^爲十血十缶十・*■十百丸归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关（在色谱柱不超载的范围内）、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量＜外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W= A(WY / (Ay(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)三及(A Y分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比,如果样品中所有组分都能产生信号,得到相应的色谱峰,那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7、34)若样品中各组分的校正因子相近,可将校正因子消去,直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7、35)归一化法的优点就是:简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点就是:必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱,而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质,以对照物质与样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法就是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线,求出斜率、截距。

在完全相同的条件下,准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液,根据待测组分的信号,从标准曲线上查出其浓度,或用回归方程计算,工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零,若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时,可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法就是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样,测得峰面积的平均值,用下式计算样品中i组分的量:W＝A(W)／(A)(7、36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i 组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便,不需用校正因子,不论样品中其她组分就是否出峰,均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性与实验条件稳定性的影响。

此外,为了降低外标一点法的实验误差,应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中,以待测组分与对照物质的响应信号对比,测定待测组分含量的方法称为内标法。

归一化法、外标法、内标法的区别色谱定量方法一、归一化法由于组分的量与其峰面积成正比，如果样品中所有组分都能产生信号，得到相应的色谱峰，那么可以用如下归一化公式计算各组分的含量。

(7.34)若样品中各组分的校正因子相近，可将校正因子消去，直接用峰面积归一化进行计算。

中国药典用不加校正因子的面积归一化法测定药物中各杂质及杂质的总量限度。

(7.35)归一化法的优点是：简便、准确、定量结果与进样量重复性无关(在色谱柱不超载的范围内)、操作条件略有变化时对结果影响较小。

缺点是：必须所有组分在一个分析周期内都流出色谱柱，而且检测器对它们都产生信号。

不适于微量杂质的含量测定。

二、外标法用待测组分的纯品作对照物质，以对照物质和样品中待测组分的响应信号相比较进行定量的方法称为外标法。

此法可分为工作曲线法及外标一点法等。

工作曲线法是用对照物质配制一系列浓度的对照品溶液确定工作曲线，求出斜率、截距。

在完全相同的条件下，准确进样与对照品溶液相同体积的样品溶液，根据待测组分的信号，从标准曲线上查出其浓度，或用回归方程计算，工作曲线法也可以用外标二点法代替。

通常截距应为零，若不等于零说明存在系统误差。

工作曲线的截距为零时，可用外标一点法(直接比较法)定量。

外标一点法是用一种浓度的对照品溶液对比测定样品溶液中i组分的含量。

将对照品溶液与样品溶液在相同条件下多次进样，测得峰面积的平均值，用下式计算样品中i组分的量：W＝A(W)／(A)(7.36)式中W与A分别代表在样品溶液进样体积中所含i组分的重量及相应的峰面积。

(W)及(A)分别代表在对照品溶液进样体积中含纯品i组分的重量及相应峰面积。

外标法方法简便，不需用校正因子，不论样品中其他组分是否出峰，均可对待测组分定量。

但此法的准确性受进样重复性和实验条件稳定性的影响。

此外，为了降低外标一点法的实验误差，应尽量使配制的对照品溶液的浓度与样品中组分的浓度相近。

三、内标法选择样品中不含有的纯物质作为对照物质加入待测样品溶液中，以待测组分和对照物质的响应信号对比，测定待测组分含量的方法称为内标法。