朱顶红种子下胚轴离体培养与植株再生的研究

一种朱顶红组培快繁方法和培养基朱顶红组培快繁方法及其在培养基中的应用引言：朱顶红是一种重要的中药材，具有丰富的药用价值。

然而，由于其种子萌发率低，种苗繁殖困难，种植难度大。

为了解决这一问题，研究人员发展出了朱顶红组培快繁方法，通过培养基提供适宜的营养环境和激素调控，促进朱顶红种苗的快速繁殖。

本文将详细介绍朱顶红组培快繁方法以及其在培养基中的应用。

一、朱顶红组培快繁方法的步骤1. 材料准备：准备朱顶红种子、无菌器皿、无菌工具和培养基等材料。

2. 种子消毒：将朱顶红种子进行表面消毒处理，以保证无菌培养的开始。

3. 种子萌发：将消毒后的种子植入含有适宜激素的培养基中，利用培养基中的营养物质和激素刺激种子快速萌发。

4. 茎段分离：从快速萌发的种子中取出茎段，进行分离。

5. 茎段培养：将茎段植入含有适宜激素的培养基中，促进茎段的生长和分化。

6. 播种扩繁：将生长良好的茎段进行无菌播种，扩大种苗数量。

7. 移栽移植：将播种好的种苗移植至适宜的培养基中，进行进一步的繁殖。

二、朱顶红组培快繁方法的优势1. 快速繁殖：朱顶红组培快繁方法可以大幅度提高种苗繁殖速度，缩短了繁殖周期，节省了时间和成本。

2. 纯度高：通过无菌培养，可以保证朱顶红种苗的纯度，减少杂质的干扰。

3. 生长良好：培养基中的营养物质和激素可以提供朱顶红种苗生长所需的养分和激素，促进其良好的生长和发育。

三、朱顶红组培快繁方法在培养基中的应用1. 培养基成分：培养基的成分是朱顶红组培快繁方法中至关重要的一部分。

培养基中需要包含适宜的碳源、氮源、矿质元素和激素等，以提供种苗生长所需的养分和激素。

2. 激素调控：培养基中的激素可以对朱顶红种苗的生长和发育起到调控作用。

例如，添加适量的生长素可以促进种苗的生长，而添加适量的激素可以促进种苗的分化和增殖。

3. 环境调控：通过调整培养基的pH值、光照强度和温度等环境因素，可以进一步优化朱顶红种苗的生长环境，提高繁殖效果。

(19)国家知识产权局(12)发明专利(10)授权公告号 (45)授权公告日 (21)申请号 202110571408.4(22)申请日 2021.05.25(65)同一申请的已公布的文献号申请公布号 CN 113243295 A(43)申请公布日 2021.08.13(73)专利权人 广东省林业科学研究院地址 510665 广东省广州市天河区广汕一路233号(72)发明人 廖焕琴　杨会肖　杨晓慧　徐放　陈新宇　潘文　朱报著　徐斌　张卫华　(74)专利代理机构 华进联合专利商标代理有限公司 44224专利代理师 黎金娣(51)Int.Cl.A01H 4/00(2006.01)(56)对比文件CN 110447537 A ,2019.11.15CN 104956867 A ,2015.10.07CN 109220791 A ,2019.01.18US 4338745 A ,1982.07.13CN 112690213 A ,2021.04.23廖焕琴等.“朱顶红鳞茎组织培养中的抗褐化研究”.《林业环境与科学》.2020,第36卷(第4期),第1.2.3、第2.3节，表1、4-5.朱旭东等.“朱顶红的组织培养”.《江苏农业科学》.2002,(第6期),第57页第3节.审查员 徐子瑜(54)发明名称朱顶红组培繁育方法(57)摘要本发明公开了一种朱顶红组培繁育方法，包括以下步骤：(a)提供外植体：以基部带有鳞茎盘的鳞片为外植体；(b)不定芽诱导：将消毒后的所述外植体转移至诱导培养基中，培养25～30天获得不定芽苗；(c)增殖培养：c1、将所述不定芽苗先在固体培养基中进行继代培养；c2、培养3～4周后对步骤c1得到的种球进行切割，将切割体转入半固体培养基中进行培养；c3、培养3～4周后对步骤c2得到的种球进行切割，将切割体转入所述固体培养基；(d)移栽成苗：将增殖培养得到的幼苗移栽到基质中进行培养。

权利要求书2页 说明书7页 附图1页CN 113243295 B 2022.06.07C N 113243295B1.一种朱顶红组培繁育方法，包括以下步骤：(a)提供外植体：以基部带有鳞茎盘的鳞片为外植体；(b)不定芽诱导：将消毒后的所述外植体转移至诱导培养基中，培养25~30天获得不定芽苗；(c)增殖培养：c1、将所述不定芽苗先在固体培养基中进行继代培养；c2、培养3~4周后对步骤c1得到的种球进行切割，将切割体转入半固体培养基中进行培养；c3、培养3~4周后对步骤c2得到的种球进行切割，将切割体转入所述固体培养基；所述固体培养基为：MS培养基+2.0mg/L ~2.5mg/L的6‑BA+25g/L ~35g/L的蔗糖+5.5g/L ~6.5 g/L的卡拉胶；所述半固体培养基为：1/2MS培养基+0.8mg/L ~1.2mg/L的6‑BA+25g/L ~35g/L的蔗糖+2.5g/L ~3.5 g/L的卡拉胶；(d)移栽成苗：将增殖培养得到的幼苗移栽到基质中进行培养。

林业科学研究　2008,21(1):96～100F orest Resea rch 文章编号:100121498(2008)0120096205五叶地锦离体培养及植株再生尹凌波1,陈　颖1,孙振元2,杨学军2,赵梁军13(1.中国农业大学观赏园艺与园林系,北京　100094; 2.中国林业科学研究院林业研究所,北京　100091)摘要:以五叶地锦(Pa rthenocissus quinquefolia )子叶柄、下胚轴、叶片为外植体进行离体培养,以1/2MS 、B 5和He ller 为基本培养基,附加不同浓度的细胞分裂素(62BA,KT,T DZ )及生长素(NA A )诱导下胚轴直接再生不定芽。

实验结果表明,暗处理30d,靠近下胚轴的子叶柄接种在1/2MS +0.3mg L -162BA 培养基上,其不定芽分化率最高达64.67%;下胚轴接种在1/2M S +2.0m g L -1KT +0.05m g L -1N AA 和He ller +0.5mg L -1BA +0.1mg L -1NAA 培养基上,其不定芽分化率接近,达到24%左右;无菌苗的叶片接种在B 5+0.5m g L-1T DZ +0.05mgL-1NAA 培养基上,其不定芽分化率达17.7%。

芽增殖培养基为1/2M S +0.5m g L -162BA +0.1mg L -1N AA 增殖系数为3～5,1/2M S +0.5m g L -1I BA +500mg L -1活性炭适于再生幼苗的生根,生根苗经移栽全部成活。

关键词:五叶地锦;子叶柄;下胚轴;叶片;植株再生中图分类号:S723.1文献标识码:A收稿日期:2007206210基金项目国家科技支撑计划“优质抗逆专用地锦新品种选育”(6B D 25)作者简介尹凌波(—),女,硕士生,2y @3通讯作者赵梁军,教授,博士生导师,主要从事园林植物生理生态研究,2z j 53@In vitro Cu ltur e and P l an t Regenera ti on of Pa rth enocissus qu in quefoliaYIN Ling 2bo 1,CHE N Ying 1,SUN Zhen 2yuan 2,Y ANG Xue 2jun 2,ZHA O L iang 2jun1(1.R es earch I n stit u t e of O rna m ental Ho rticu lture and Landscape A rch itect u re,China Agri cultural U niversi t y,B eijing 100094,China;2.Research Institute of Fo restry,C A F,Beijing 100091,Ch i na )Abstrac t:Adventitious shoots were successfully regenerated fr om cotyledon peti oles,hy pocotyl exp lants and leaf ex 2plants of in vitr o cultures of Pa rthenocissus qu inquefolia .They were cultured on half strength Murashine and Skoog (MS ),B 5and H eller ba sal medium supple m ented with va ri ous plant gr owth r egula t ors .Auxins,α2naphthaleneace 2tic acid (NAA)and in combinati on with three cytokinins,benzylam inopurine (BA),kinetin (KT)and thidiazur on (T DZ)were tried.The study showed that the highest regene r a tion rate were obtained by cotyledon peti ole s seg ments nea r t o the hypocotyl under dark ti me of 30days cultur ed on half strengthMS basal m edium supple mented with 0.3m g L -1BA (64.67%),hypocotyl explants cultured on half strength MS basal medium supp le m ented w ith 2.0mg L -1KT and 0.05mg L -1NAA and Helle r basa l m edium supplemented with 0.5m g L -1BA and 0.1m g L -1NAA (both about 24%).Leaf ex p lants cultured on B 5basal m edium supp le m ented w ith 0.5m g L -1T DZ and0105m g L-1NAA,the dif fe r entiati on r a te of adventiti ous budswas as high as 17.7%.U sing ha lf str ength MS a sthe multi p lication m ediu m f or buds supp le m ented w ith 0.5m g L-162BA and 0.1mg L-1N AA ,the m ultiplica 2ti on c oefficient was 3-5.Half strength MS and 0.5m g L -1I BA and 500mg L -1ac tivated ca r bon was suitablefor the r ooting of regene r a ted p lantle ts,and nearly 100%of these plantlets sur vived after transplanted.Key word s:P arthenocissus qu inqu e fo lia ;cotyledon pe tioles exp lants,hypocotyl explants;leaf exp lants;p lant r egen 2e r a tion::200A 01A19:1980E ma il:inlingbo sina .com.:E m ai l :haol 07sina .com第1期尹凌波等:五叶地锦离体培养及植株再生五叶地锦(P a rthenocissu s qu inquefolia(L.) P lanch.)是葡萄科(V itaceae)爬山虎属(P a rthen o2 cissus Planch.)的攀缘性藤本植物,耐旱、耐寒、耐瘠薄,生态适应性强,在广大的干旱、半干旱地区广泛分布,生长速度快,秋季叶色美观,为重要的园林植物。

朱顶红组培繁殖方法朱顶红是一种非常受欢迎的观赏植物，其独特的色彩和形态让人们爱不释手。

然而，由于其繁殖难度较高，许多人在尝试繁殖时遇到了困难。

本文将介绍一种朱顶红组培繁殖方法，希望能够帮助大家成功繁殖这种美丽的植物。

一、组培技术的基本原理组培技术是指利用植物组织培养技术，通过无菌培养方式，将植物的不同部位（如种子、茎、叶片等）培养在含有营养物质的培养基上，使其快速生长和繁殖的过程。

组培技术可以在短时间内大量繁殖植物，同时还可以选择繁殖出具有优良性状的植株，提高植物的品质和产量。

二、朱顶红组培繁殖的步骤1. 选择材料选择健康的朱顶红植株，从中选择生长良好的茎段和叶片，用无菌工具将其切成小段备用。

2. 培养基的配制准备含有适当营养成分的培养基，可以选择市售的植物生长调节剂和营养物质，也可以自行配制。

3. 灭菌处理将培养基放入高压灭菌器中进行灭菌处理，确保培养基无菌。

4. 组培将准备好的朱顶红茎段和叶片放入培养基中，放入恒温培养箱中进行培养。

5. 培养过程中的注意事项在培养过程中应注意以下几点：（1）保持适宜的温度和湿度，避免培养基过干或过湿。

（2）定期更换培养基，避免培养基中的营养物质过多或过少。

（3）避免细菌和真菌的污染，定期检查并及时处理。

6. 移栽经过一段时间的培养，朱顶红茎段和叶片会生长出新的根和叶，此时可以将其移栽到适宜的土壤中进行生长。

三、朱顶红组培繁殖的优点1. 可以大量繁殖采用组培技术可以在短时间内大量繁殖朱顶红植株，提高生产效率。

2. 有选择性组培技术可以根据需要选择繁殖出具有优良性状的植株，提高植物的品质和产量。

3. 无菌培养采用组培技术可以避免细菌和真菌的污染，保证植株的健康和生长。

四、总结朱顶红组培繁殖技术是一种非常有效的繁殖方法，可以在短时间内大量繁殖出健康的植株，提高生产效率。

同时，该技术还可以根据需要选择繁殖出具有优良性状的植株，提高植物的品质和产量。

在实际操作中，应注意保持适宜的温度和湿度，定期更换培养基，避免细菌和真菌的污染等问题。

朱顶红的栽培及养护朱顶红别名百枝莲、孤挺花、百子莲、对红等。

石蒜科孤挺花属。

多年生草本植物，鳞茎大，球形，叶6－8枚，宽带状；伞形花序，花莛中空，花3－6朵，长12－18厘米，花被漏斗状，红色，心及缘上有白条纹，筒部长2.5厘米，喉部有不明显的副花冠，6裂，倒卵形，蒴果球形，3瓣开裂，种子扁平。

原产南美，半阴生，稍耐寒，喜排水良好的砂质壤土。

繁殖与栽培1．蟹殖朱顶红用分球、播种、切鳞茎和组织培养等法繁殖。

分球，是将大球周围着生的小的茎剥下另行栽种。

开花时，可进行人工授粉，使其结种子。

种子采收后，立即播种，约１周后发芽。

苗期可移植：次，地栽3一4年开花。

也可将一个大鳞茎切成8一16块，每块基部需带有部分鳞茎盘，晾至英蔫后插入湿润砂土中，即可生出小鳞墓，经分离栽培后，可以成苗。

用Ms或whlte培养基，以花桓、子房作外植体进行组织培养，3－4个月后可形成不定芽。

2．栽培朱顶红可露地栽培，也可盆栽、无土栽培。

露地栽培，在最低温度－10℃的地区，冬天盖以召盖物，也可越冬。

2－3月问，将前一年收藏的大鳞茎进行整理，把主球四周的小鳞茎全剥下进行繁殖。

将主球的残根修掉，在阳光下晒两天，待伤口干燥后即可栽种。

栽墙地要地势高燥，排水良好。

株行距为１５×３０厘米。

沟深约20厘米，在沟中填人10厘米厚的疏松肥沃胁腐殖土，然后再益薄土，使球的顶部瞩出上面。

栽桓后最好立即用塑料膜召盖，以提高地温，加速生根。

在生长期，耍随着叶片的生长，不断增施肥料，每半月施１次。

作切花的，要在花蕾含苞待放时，从花梗基部剪下。

采花之后继续供水供肥，但要减血施氮肥，增施磷、钾肥，使的茎健壮充实。

秋辰或冬初，应停肥。

停水，使其逐步休眠。

挖珍要选晴天，在土干时挖起。

剪去叶片，除去泥土，咯加干燥后贮戌。

室温保菏5－10℃，室内空气要流通干燥，以防止球根腐烂。

对不开花的小球，在霜冻期应盖以覆盖物防寒。

盆栽，要选用在田间生长3年购大球（直径在7厘米以上），１个球植１盆的，用大于球径２倍的盆，3－4个球集栽于１盆的，用25－30厘米的盆。

利用培育技术进行植物离体切割再生的步骤植物离体切割再生是一种常用的植物繁殖技术，能够大量繁殖经济作物及珍稀植物。

它的步骤主要包括离体培养、组织分化和植株再生三个阶段。

首先是离体培养。

这个过程是从母株中取得组织或器官，然后将其置于含有基本无机盐和碳源的培养基中。

培养基渗透性的调节十分重要。

一方面，过高的渗透性会造成组织失水，导致其死亡；另一方面，过低的渗透性则会使组织吸水过多，导致腐烂。

此外，添加适量的植物激素也是必不可少的。

不同的植物有着不同的培养制度，比如木兰的离体培养对于细胞因子极为敏感，因此需要较高浓度的细胞因子；相反，紫薇的组织再生受减数分裂的影响较大，对于细胞因子的浓度相对较低。

接下来是组织分化。

离体培养的组织或器官在适宜的培养基中会逐渐产生胚胎、休眠芽或无性生殖器官。

在这个过程中，细胞因子的调控起着至关重要的作用。

细胞因子可以被培养基中的植物生长物质替代，但其作用效果会有所降低。

此外，光照条件对于组织分化也具有影响。

一般来说，在组织分化的初期，应选择暗条件，利于胚胎或新植物体的形成；当后期组织进一步生长时，需要适当增加光照。

最后是植株再生。

这是离体培养最终达到的目的。

在组织分化之后，可以将再生的胚胎或苗秧移植至含有适当营养元素和植物激素的培养基中进行继续培养。

新生的平顶山会在一定条件下，逐渐长出新根、新茎、新叶并完全独立生长为一个植株。

虽然离体培养技术是一种常用的植物繁殖技术，但其步骤较为繁琐。

在实际应用时，研究人员通常需要根据具体植物的生长习性和培养条件进行一定的调整和优化。

通过获得大量、无菌、同质化的植株，这种技术在实际应用中具有广泛的潜力。

植物离体切割再生技术不仅可以用于植物的繁殖，还有助于基因工程研究、药用植物生产和栽培改良等方面。

植物离体培养技术的发展必将为植物繁殖与相关研究提供更多的可能与机遇。

朱顶红组培繁殖方法朱顶红，又称红花韭，是一种常见的草本植物，具有美丽的花朵和香味，被广泛用于园林装饰和食用。

然而，朱顶红的繁殖方式较为困难，传统的种子繁殖方法存在着种子不易获得、发芽率低、品质不稳定等问题。

为了解决这些问题，研究人员提出了一种新的繁殖方法——朱顶红组培繁殖方法。

朱顶红组培繁殖方法是一种基于植物组织培养技术的繁殖方法，主要包括组织培养、植株移栽和生长管理三个步骤。

组织培养是朱顶红组培繁殖方法的第一步，其目的是从朱顶红的茎、叶、花等部位中选取优良的组织细胞，并在无菌的培养基上进行培养和繁殖。

具体步骤如下：1. 选取健康无病虫害的朱顶红植株，从其茎、叶、花等部位中取出组织细胞，用无菌的工具切成小片或小块。

2. 将组织细胞放入含有适量植物生长调节剂的培养基中，利用组织培养技术进行培养和繁殖。

在培养过程中，要注意培养基的温度、湿度、光照等因素，以保证组织细胞的正常生长和分化。

3. 经过一段时间的培养，组织细胞会形成小苗或小球，这时可以将其移至含有适量营养物质的培养基中，继续进行生长和繁殖。

植株移栽是朱顶红组培繁殖方法的第二步，其目的是将组培苗移植至土壤中，进行营养生长和生殖生长。

具体步骤如下：1. 选取适宜的土壤，进行消毒处理。

消毒的方法可以是煮沸法、化学消毒法等。

2. 将组培苗从培养基中取出，洗净根系，剪去不健康的部分。

3. 在消毒后的土壤中开挖适当大小的孔，将组培苗轻轻放入孔中，用土壤轻轻覆盖，压实土壤，使其与组培苗紧密结合。

生长管理是朱顶红组培繁殖方法的第三步，其目的是保证植株的正常生长和生殖生长，提高繁殖效率和品质。

具体措施如下：1. 确保土壤湿度适宜，避免过度干燥或过度湿润。

2. 提供适宜的光照和温度条件，促进植株的生长和开花。

3. 定期施肥，补充植物所需的营养物质。

4. 定期除草、松土，保持土壤透气性和肥力。

通过朱顶红组培繁殖方法，可以大大提高繁殖效率和品质，同时还可以克服传统种子繁殖方法的种种问题。

朱顶红组培繁殖方法1 什么是朱顶红组培繁殖法？朱顶红组培繁殖法是一种利用植物组织培养技术繁殖植物的方法，该方法常常用于繁殖朱顶红这种植物。

这种方法利用植物的组织分化和再生能力，通过在适当的培养基上培养组织，促进其分裂增殖，最终得到数量众多、良好生长的幼苗苗，而且与传统繁殖法相比，朱顶红组培繁殖方法在繁殖效果、时间、成本等方面都有所改善。

2 朱顶红组培繁殖法的具体步骤1. 选择良种基质：将果实中的种子取出，去除外壳和去胚，使种子变为空心。

再将空心种子中的菌丝切出，清洗后用PDA（马铃薯蔗糖琼脂培养基）培养。

2. 制备培养基：制备MS培养基，具体的配方为：盐状物0.44g、MS盐5.17g、蔗糖30g、琼脂7g、pH 5.8-6.0，加入蒸馏水中，进行高压灭菌后即可使用。

3. 取嫩茎：将植株嫩茎（直径在0.3-0.5mm之间）用1%双氧水消毒3-5min，冷水冲洗10min后立即使用。

4. 茎段培养：将取好的嫩茎切出茎段，长度一般为0.5-1.0cm之间，放入过高压灭菌的MS培养基中，经光照、温度等条件调节后，可分化出愈伤组织。

5. 转移培养：将发达的愈伤组织进行分离，转移到新的MS培养基中，经过一定时间的增殖，就可以形成植株幼苗。

3 朱顶红组培繁殖法的优点1. 无需休眠期：与传统繁殖方法相比，朱顶红组培繁殖方法无需等待种子进入休眠期，因此可以大大缩短繁殖周期。

2. 繁殖效果高：使用朱顶红组培繁殖方法繁殖的植株通常比普通繁殖方法繁殖的植株品质更高，更容易长成质量好的植株。

3. 成本低：虽然在开始时需要购买一些培养基和其他设备，但长期来说，使用朱顶红组培繁殖方法可以节省成本，并节省时间和劳动力。

4 总结朱顶红组培繁殖法是一种非常实用且有效的繁殖方法，它利用植物分化与再生能力，通过培养所产生的愈伤组织实现植株繁殖。

该方法具有繁殖周期短、繁殖效果高、成本低等优点，不仅适用于朱顶红，而且还可以适用于其他植物种类的繁殖。