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第二部分色谱分析第一章薄层色谱法（TLC）一薄层色谱法概述thin-layer chromatography (TLC);thin layer chromatography薄层色谱法是一种基于混合物组分在固定相和流动相之间的不均匀分配或保留而将其分离的方法。
与HPLC不同，TLC将固定相涂铺在栽板上，使之形成均匀的薄层。
被分离的样品溶液点加在薄层板下沿的位置，再把下沿向下放入盛有流动相（深度约5mm）的密闭缸中，进行色谱展开，实现混合组分分离。
被展开的组分斑点即色谱谱带，通过适当技术对色谱谱带进行处理可得到定性和定量的检测结果。
薄层色谱法具有技术比较简单，操作容易，分析速度快，高分辨能力，结果直观，不需昂贵仪器设备就可以分离较复杂混合物等特点。
二薄层色谱法中的薄层板、薄层板的涂铺、点样和展开（一）薄层板TLC分离的选择性主要取决于固定相的化学组成及其表面的化学性质。
可通过改变涂层材料的化学组成或对材料表面进行化学改性来实现改变薄层色谱分离的选择性。
此外，固定相的物理性质，如比表面积、比空容、平均孔径等也对其色谱行为产生影响。
（1）载体对TLC载体的基本要求为：机械强度好、化学惰性好（对溶剂、显色剂等）、耐一定温度、表面平整、厚度均匀、价格适宜。
（2）固定相TLC固定相包括改性固定相和未改性固定相两类。
硅胶和氧化铝是最常用的两种未改性固定相。
（3）粘合剂在制备薄层板时，一般需在吸附剂中加入适量粘合剂，其目的是使吸附剂颗粒之间相互粘附并使吸附剂薄层紧密的附着在载板上。
常用的粘合剂可分为无机粘合剂和有机粘合剂两类。
（4）荧光指示剂荧光指示剂是便于在薄层色谱图上对一些基本化合物斑点（无颜色斑点、无特征紫外吸收斑点）定位的试剂。
加入荧光指示剂后，可以使这些化合物斑点在激发光波照射下显出清晰的荧光，便于检测。
（二）薄层板的涂铺涂板方法可以分为涂布法、倾注法、喷洒法及浸渍法四类，其中涂布法是应用最广泛的涂板方法。
薄层色谱法的原理及应用
1. 薄层色谱法的概述
•什么是薄层色谱法？
•薄层色谱法的特点
•薄层色谱法的分类
•薄层色谱法的基本步骤
2. 薄层色谱法的原理
•色谱基质的选择
•色谱分离机理
•薄层层析板的制备与选择
•纯化和检测方法
3. 薄层色谱法的应用
•生物学领域的应用
•化学分析中的应用
•药物研发与质量控制中的应用
•食品行业的应用
•环境监测中的应用
•其他相关领域的应用
4. 薄层色谱法的优缺点
•优点：高效、快速、灵敏度高、易操作、耗费样品少等
•缺点：分析物种类受限、分离能力较弱、仪器设备复杂等
5. 薄层色谱法的发展趋势
•技术改进与创新
•自动化与智能化发展
•应用领域的拓展
结语
通过本文，我们了解了薄层色谱法的原理和应用，它是一种重要的分析方法，
被广泛应用于各个领域，如生物学、化学、药物研发、食品行业和环境监测等。
虽然薄层色谱法具有一些局限性，但随着技术的改进和发展，它的优势将进一步发挥，应用领域也会不断拓展。
薄层色谱法的发展趋势将朝着更加高效、智能化和自动化的方向前进。
薄层色谱法
薄层色谱法系将供试品溶液点样于薄层板上，经展开、检视后所得的色谱图，
与适宜的对照物按同法所得的色谱图作对比，用于药品的鉴别或杂质检查的方
法。
1.仪器与材料
（1）薄层板
自制薄层板除另有规定外，玻璃板要求光滑、平整，洗净后不附水珠，晾
干。
最常用的固定相有硅胶G、硅胶GF254、硅胶H 和硅胶HF254，其次有硅藻土、硅藻土G、氧化铝、氧化铝G、微晶纤维素、微晶纤维素F254等。
其颗粒大小，一般要求粒径为5～40µm。
薄层涂布，一般可分为无黏合剂和含黏合剂两种。
前者系将固定相直接涂布
于玻璃板上，后者系在固定相中加入一定量的黏合剂，一般常用10%～15％煅石
膏（CaSO4·2H2O 在140℃加热 4 小时），混匀后加水适量使用，或用羧甲基纤
维素钠水溶液（0.2%～0.5％）适量调成糊状，均匀涂布于玻璃板上。
使用涂布
器涂布应能使固定相在玻璃板上涂成一层符合厚度要求的均匀薄层。
商品薄层板分普通薄层板和高效薄层板，如硅胶薄层板、硅胶GF254薄层
板、聚酰胺薄膜和铝基片薄层板等。
高效薄层板的粒径一般为5~7µm。
（2）点样器同纸色谱法项下。
（3）展开容器应使用适合薄层板大小的玻璃制薄层色谱展开缸，并有严
密的盖子，底部应平整光滑，或有双槽。
（4）显色剂见各品种项下的规定。
可采用喷雾显色、浸渍显色或置适宜
试剂的蒸气中熏蒸显色，用以检出斑点。
（5）显色装置喷雾显色要求用压缩气体使显色剂呈均匀细雾状喷出；浸
渍显色可用专用玻璃器皿或用适宜的玻璃缸代替；蒸气熏蒸显色可用双槽玻璃缸
或适宜大小的干燥器代替。
（6）检视装置为装有可见光、短波紫外光（254nm）、长波紫外光（365nm）光源及相应滤片的暗箱，可附加摄像设备供拍摄色谱用，暗箱内光源应有足够的
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光照度。
2.操作方法
（1）薄层板制备
自制薄层板除另有规定外，将１份固定相和3 份水在研钵中按同一方向研磨
混合，去除表面的气泡后，倒入涂布器中，在玻璃板上平稳地移动涂布器进行涂
布（厚度为0.2～0.3mm），取下涂好薄层的玻璃板，置水平台上于室温下晾干
后，在110℃活化30 分钟，即置有干燥剂的干燥箱中备用。
使用前检查其均匀
度（可通过透射光和反射光检视）。
商品薄层板临用前一般应在110℃活化30 分钟。
聚酰胺薄膜不需活化。
铝
基片薄层板可根据需要剪裁，但须注意剪裁后的薄层板底边的硅胶层不得有破
损。
如在贮放期间被空气中杂质污染，使用前可用适宜的溶剂在展开容器中上行
展开预洗，110℃活化后，放干燥器中备用。
（2）点样除另有规定外，用点样器点样于薄层板上，一般为圆点，点样
基线距底边2.0cm，样点直径为2～4mm（高效薄层板为1～2mm），点间距离可
视斑点扩散情况以不影响检出为宜，一般为 1.0～2.0cm（高效薄层板可不小于
5mm）。
点样时必须注意勿损伤薄层板表面。
（3）展开展开缸如需预先用展开剂饱和，可在缸中加入足够量的展开剂，
必要时在壁上贴两条与缸一样高的宽滤纸条，一端浸入展开剂中，密封顶盖，使
系统平衡或按各品种项下的规定操作。
将点好供试品的薄层板放入展开缸中，浸入展开剂的深度为距薄层板底边
0.5～1.0cm（切勿将样点浸入展开剂中），密封顶盖，待展开至适宜的展距（如：20cm 的薄层板，展距一般为10～15cm，高效薄层板展距一般为5 cm 左右），取出薄层板，晾干，按各品种项下的规定检测。
展开可以单向展开，即向一个方向进行；也可以进行双向展开，即先向一个
方向展开，取出，待展开剂完全挥发后，将薄层板转动90°，再用原展开剂或
另一种展开剂进行展开；亦可多次展开。
（4）显色与检视荧光薄层板可用荧光猝灭法；普通薄层板，有色物质可
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直接检视，无色物质可用物理或化学方法检视。
物理方法是检出斑点的荧光颜色
及强度；化学方法一般用化学试剂显色后，立即覆盖同样大小的玻璃板，检视。
3.系统适用性试验
按各品种项下要求对检测方法进行系统适用性试验，使斑点的检测灵敏度、
比移值（Rf）和分离效能符合规定。
（1）检测灵敏度系指杂质检查时，供试品溶液中被测物质能被检出的最
低量。
一般采用对照溶液稀释若干倍的溶液与供试品溶液和对照溶液在规定的色
谱条件下，在同一块薄层板上点样、展开、检视，前者应显示清晰的斑点。
（2）比移值（Rf）系指从基线至展开斑点中心的距离与从基线至展开剂
前沿的距离的比值。
鉴别时，可用供试品溶液主斑点与对照品溶液主斑点的比移
值进行比较，或用比移值来说明主斑点或杂质斑点的位置。
除另有规定外，比移值（Rf）应在0.2~0.8 之间。
（3）分离效能鉴别时，在对照品与结构相似药物的对照品制成混合对照
溶液的色谱图中，应显示两个清晰分离的斑点。
考察分离效能可采用下列溶液：
将杂质对照品用供试品自身稀释对照溶液溶解制成混合对照溶液；也可将杂质对
照品用待测组分的对照品溶液溶解制成混合对照溶液；或者采用供试品以适当的
降解方法获得的溶液。
上述溶液点样展开后的色谱图中，应显示清晰分离的斑点。
4.测定法
（1）鉴别可采用与同浓度的对照品溶液，在同一块薄层板上点样、展开
与检视，供试品溶液所显主斑点的颜色（或荧光）与位置（Rf）应与对照品溶液
的主斑点一致，而且主斑点的大小与颜色的深浅也应大致相同。
或采用供试品溶
液与对照品溶液等体积混合，应显示单一、紧密的斑点；或选用与供试品化学结
构相似的药物对照品与供试品溶液的主斑点比较，两者Rf应不同，或将上述两
种溶液等体积混合，应显示两个清晰分离的斑点。
（2）杂质检查可采用杂质对照品法、供试品溶液的自身稀释对照法或杂
质对照品法与供试品溶液自身稀释对照法并用。
供试品溶液除主斑点外的其他斑
点应与相应的杂质对照品溶液或系列浓度杂质对照品溶液的主斑点比较，或与供
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试品溶液的自身稀释对照溶液或系列浓度自身稀释对照溶液的主斑点比较，不得
更深。
通常应规定杂质的斑点数和单一杂质量，当采用系列自身稀释对照溶液时，也可规定估计的杂质总量。
