食品微生物实验之革兰氏染色

革兰氏染色法的原理摘要：革兰氏染色反应是细菌重要的鉴别特征，所以学习微生物学，进行革兰氏染色实验是很重要的。

为保证染色结果的正确性，采用规范的的染色操作方法是十分必要。

本实验主要对大肠杆菌（Escherichia coli）、金黄色葡萄球菌（Staphyloccocus aureus Rosenbach）、枯草杆菌（Bacillus subtilis）进行革兰氏染色，观察它们的染色特征，辨别是革兰氏阴性还是阳性，从而掌握其染色方法。

染色方法与过程很清晰，但实验结果中金黄色葡萄球菌(S.aureus Rosenbach）多组呈现假阴性。

本实验的主要目的是熟悉并掌握革兰氏染色方法及原理，但要想做出很好的染色得多加练习。

本实验还可以锻炼显微镜操作技术和无菌操作技术。

关键词：革兰氏染色大肠杆菌(E.coli) 金黄色葡萄球菌(S.aureus Rosenbach) 枯草杆菌(B.subtilis)引言革兰氏染色是微生物学中最重要的鉴别染色方法，它可以直接将细菌分为革兰氏阴性和革兰氏阳性。

革兰氏染色法可将细菌分为革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-）两种类型，这是由这两种细菌细胞壁结构组成与结构的差异所决定的。

经过一定的染色过程后，革兰氏阳性的细菌会因为细胞壁肽聚糖的含量高，脂质含量低而保持第一次染色的蓝紫色。

革兰氏阴性细菌细胞壁的脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，蓝色被洗脱，复染后变为红色。

革兰氏染色原理很简单，染色时需注意要注意使用处在活跃生长期的细菌，涂片不宜过厚，严格控制脱色时间。

大肠杆菌(E.coli)是革兰氏阴性细菌，金黄色葡萄球菌(S.aureus Rosenbach)与枯草杆菌 (B.subtilis)都是革兰氏阳性细菌，染色后在显微镜下容易区别。

同时它们的形态各异，可以根据具体颜色和形态差异来判断染色是否成功。

本实验还涉及到高倍油镜的使用。

使用油镜与用一般的镜头不同，具体使用在实验方法中描述。

革兰染色实验报告革兰染色实验报告一、实验目的：通过革兰染色法，观察并区分细菌的革兰氏阳性和革兰氏阴性的特征，进一步了解革兰氏染色的原理和过程。

二、实验原理：革兰染色是病原微生物鉴定和分类的重要方法之一，可用于判断微生物是革兰氏阳性菌还是革兰氏阴性菌。

原理是革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌细胞壁组成不同，前者细胞壁中含有厚壁的murein层和一些多糖类物质，后者细胞壁中只含有薄壁的murein层，革兰染色的原理是根据这一差别来进行染色。

染色步骤如下：1.准备菌液：取一株具有不完全结构的细菌菌落，悬浮在蒸馏水中制备菌液。

2.烘干菌液：从菌液中取一滴，滴在清洁的玻片上，用火焰烘烤几秒钟，待菌液干燥。

3.革兰素溶液：制备革兰染色工作溶液，将1%的革兰素溶液稀释到10倍。

4.染色过程：将烘干的菌液滴在玻片上，滴上革兰素溶液，静置1分钟后用蒸馏水洗净，然后在玻片上滴上碱性紫试剂，再用蒸馏水冲洗，最后在玻片上滴上碘试剂，再用蒸馏水冲洗，使背景显色。

将玻片在浓度逐渐增大的乙酸酒精中漂洗，直到玻片漂洗后无色即可，然后用蒸馏水冲洗。

最后，在玻片上滴上红染试剂，染色10秒钟后用蒸馏水冲洗干净，晾干后，镜下观察。

三、实验步骤：1.准备菌液：取一株细菌菌液，用蒸馏水制备悬浮液。

2.烘干菌液：取一滴菌液滴在玻片上，用火焰烘干几秒钟，使菌液干燥。

3.加染料：滴上革兰素溶液，静置1分钟后用蒸馏水冲洗。

4.加试剂：滴上碱性紫试剂，再用蒸馏水冲洗；滴上碘试剂，再用蒸馏水冲洗。

5.漂洗：用浓度逐渐增大的乙酸酒精漂洗，直到玻片漂洗后无色。

6.染色：滴上红染试剂，染色10秒钟后用蒸馏水冲洗干净，晾干后，放在显微镜下观察。

四、实验结果和分析：在显微镜下观察，发现革兰染色后，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝色，而革兰氏阴性菌呈红色。

革兰氏阳性菌的细胞壁厚，染色较蓝色。

而革兰氏阴性菌的细胞壁薄，染色较红色。

这是由于革兰染色方法中经过上述的染色步骤，革兰氏阳性菌能够保留革兰蓝的颜色，而革兰氏阴性菌会被红染剂覆盖掩盖住。

微生物的革兰氏染色实验报告.doc 微生物的革兰氏染色实验报告一、实验目的和要求本次实验的目的是学习并掌握革兰氏染色的基本原理和操作方法，了解革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的细胞壁结构和染色特性的差异，以及革兰氏染色在微生物学研究和临床诊断中的应用价值。

实验要求学生掌握革兰氏染色的步骤和注意事项，能独立进行革兰氏染色操作，并能对染色结果进行正确分析和解释。

二、实验原理和方法革兰氏染色是一种常用的细菌分类和鉴定方法，其基本原理是通过不同的染色步骤和处理条件，使细菌细胞壁上的化学成分产生不同的反应，从而导致细菌细胞呈现出不同的颜色。

革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，主要由肽聚糖和磷壁酸组成，能够抵抗革兰氏染色的脱色剂乙醇的处理，因此能够保留结晶紫的颜色，呈现出紫色。

而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，主要由脂蛋白、磷脂和脂多糖组成，容易被乙醇脱色，再用复染剂番红染色后呈现出红色。

革兰氏染色的具体步骤如下：1.涂片：在干净的载玻片上滴一滴无菌水，用接种环取少量细菌与水滴充分混合，制成薄而均匀的涂片。

2.固定：将涂片在空气中自然干燥或用火焰固定。

3.初染：用结晶紫染色液染色1-2分钟，用水冲洗。

4.媒染：用碘液媒染1分钟，用水冲洗。

5.脱色：用95%乙醇脱色30秒-1分钟，用水冲洗。

6.复染：用番红染色液染色1-2分钟，用水冲洗。

7.镜检：用油镜观察并记录细菌的颜色和形态。

三、实验步骤和结果本次实验选用大肠杆菌（E. coli）和金黄色葡萄球菌（S. aureus）作为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌的代表，按照上述步骤进行革兰氏染色操作。

具体步骤如下：1.在干净的载玻片上滴一滴无菌水，用接种环取少量大肠杆菌和金黄色葡萄球菌分别与水滴充分混合，制成薄而均匀的涂片。

2.将涂片在空气中自然干燥或用火焰固定。

3.用结晶紫染色液染色1-2分钟，用水冲洗。

4.用碘液媒染1分钟，用水冲洗。

5.用95%乙醇脱色30秒-1分钟，用水冲洗。

6.用番红染色液染色1-2分钟，用水冲洗。

革兰氏染色法实验报告革兰氏染色法实验报告引言：革兰氏染色法是微生物学中常用的染色方法之一，它可以将细菌分为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌两类。

本实验旨在通过革兰氏染色法的应用，观察不同菌落的染色效果，进一步了解细菌的结构和分类。

实验材料与方法：1. 实验菌株：选择了两种细菌，分别为革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌。

2. 培养基：使用了含有足够营养物质的琼脂培养基。

3. 革兰氏染色试剂：包括结晶紫、碘酒和乙醇。

4. 实验器材：无菌培养皿、移液管、显微镜等。

实验步骤：1. 在无菌培养皿上分别接种革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌，并在恰当的温度下培养。

2. 将培养皿中的菌落取出，用无菌移液管加入适量的生理盐水，悬浮菌落。

3. 取一滴悬浮的菌液，滴于载玻片上，用火焰消毒玻片。

4. 将滴有菌液的玻片放在炉子中，用火焰烘烤至完全干燥。

5. 滴加结晶紫染色液，静置片面染色1分钟。

6. 用自来水冲洗玻片，直至水洗净。

7. 滴加碘酒，静置片面染色1分钟。

8. 用自来水冲洗玻片，直至水洗净。

9. 滴加乙醇，静置片面脱色30秒。

10. 用自来水冲洗玻片，直至水洗净。

11. 用吸水纸轻轻吸干玻片上的水分。

12. 将玻片放在显微镜下，观察菌落的染色效果。

实验结果与讨论：在显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈紫色，革兰氏阴性菌呈红色。

这是因为在革兰氏染色法中，结晶紫染色液可以渗透进细菌细胞的胞质，使细菌呈紫色。

而碘酒可以形成结晶紫-碘复合物，使细菌细胞内的染色物质更稳定，不易被乙醇脱色。

乙醇的作用是脱去细菌细胞外的结晶紫，但革兰氏阳性菌由于细胞壁较厚，结晶紫不易脱色，因此呈紫色；而革兰氏阴性菌由于细胞壁较薄，结晶紫易被脱色，因此呈红色。

通过实验可以发现，革兰氏染色法是一种简单而有效的方法，可以快速区分细菌的类型。

革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在细胞结构上有所不同，革兰氏阳性菌的细胞壁较厚，含有较多的胞质，而革兰氏阴性菌的细胞壁较薄，胞质较少。

这种区别导致了革兰氏染色法的染色效果不同。

细菌的革兰氏染色与显微观察一、实验原理革兰氏染色原理：细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同造成的。

革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结，当用乙醇处理时，由于脱水而引发网状结构的孔径变小，通透性降低，从而使结晶紫-碘的复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的蓝紫色。

革兰氏阴性菌的细胞壁肽聚糖层较薄、类脂含量高，所以当脱色处理时，类脂质被乙醇(或丙酮)溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘的复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。

显微镜成像原理：现代普通光学显微镜利用目镜和物镜两组透镜系统来放大成像，故又常被称为复式显微镜。

显微镜的光学系统中，物镜的性能最为关键，油镜的放大倍数最大，对微生物学研究最为重要。

在载玻片与镜头之间加滴镜油主要是为了增加照明亮度和增加显微镜的分辨率。

以油代替空气作为光的传播介质，减少光线的折射或全反射，使观察到的像更加清晰。

二、实验器材1.菌落：大肠杆菌24h营养琼脂斜面培养物、金黄色葡萄球菌约24h营养琼脂斜面培养物、枯草芽孢杆菌12～18h营养琼脂斜面培养物。

2.溶液或试剂：蒸馏水、碘液、结晶紫染色液、95%酒精、番红染色液、香柏油。

3.仪器：显微镜、载玻片、接种环、酒精灯、镊子、擦镜纸。

三、实验步骤革兰氏染色：1.涂片取出载玻片，点燃载玻片，燃尽载玻片上的酒精和灭菌，在中间轻轻点一小滴蒸馏水，用接种环在试管的斜面培养基上，轻轻挑取少量菌体，整个过程试管口都要处在酒精灯的上方，而且速度要快，以防污染培养基。

然后在载玻片的小水滴以转圈的动作涂片，待水滴混浊后停住，等其干燥、固定。

2.初染滴加结晶紫(以刚好将菌膜覆盖为宜)于菌落上，染色1～2min ，倾去染色液，有细水从载玻片上方向下冲洗，至洗出液为无色，将载玻片上水甩净。

3.媒染滴加碘液冲去残水，并覆盖约1min，水洗。

4.脱色将载玻片上面的水甩净，将载玻片倾斜，在白色背景下，用滴管加95%的酒精脱色，直至流出的酒精刚好不出现蓝色，立即用水冲净酒精，将载玻片上水甩净。

革兰氏染色原理
革兰氏染色原理是一种具有广泛应用的微生物检测技术，它是一种可以通过染色的方法来检测微生物的方法。

其实，革兰氏染色原理是由德国医学家阿尔弗雷德·革兰在1880年首次提出的，他发现，不同种类的微生物分子可以经过染料染色的过程而被检测出来。

革兰氏染色原理是一种检测微生物的快速、简便的方法，它是利用特定染料染色不同物质，从而检测微生物的一种方法。

其原理是：染料会与微生物体表面上的特定物质结合，从而使微生物发生染色变化，从而形成特定色彩，从而达到检测微生物的目的。

革兰氏染色原理有着广泛的应用，它可以用来检测大多数微生物，包括细菌、真菌以及支原体等。

在医学领域，它可以用来检测病原体的类型，检测病原体的数量，以及病原体的药物敏感性，等等。

此外，它还可以用于环境污染检测、食品安全检测等。

由于革兰氏染色原理的优点，使其广泛应用于医学、环境以及食品领域。

从而为医学、环境以及食品安全等提供了有效的检测手段。

微生物的革兰氏染色一、实验目的：1、学习并初步掌握革兰氏染色法；2、了解革兰氏染色的原理；3、巩固显微镜的使用。

二、实验原理：革兰氏染色是细菌学中最重要的鉴别染色法。

染色步骤分为四个部分：1、初染：加入碱性染料结晶紫固定细菌图片；2、媒染：加入碘液，碘与结晶紫形成一种不溶于水的复合物；3、脱色：利用有机溶剂乙醇或丙酮进行脱色；4、复染：复红配成碳酸复红作为复染剂。

G-和G+细胞壁的比较：1、阳性（G+）菌细胞壁特点：细胞壁厚，只有一层，主要由肽聚糖构成，肽聚糖含量高，结构紧密，脂类含量低。

当乙醇脱色时，细胞壁肽聚糖层孔径变小，通透性降低，结晶紫和碘的复合物被保留在细胞壁内，复染后仍显紫色（如芽孢杆菌）。

2、阴性（G-）菌细胞壁特点：细胞壁薄，由两层构成，内壁层和外壁层，细胞壁中脂类中脂类物质含量较高，肽聚糖含量较低，网状结构交联程度低，乙醇脱色时溶解了脂类物质，通透性增强，结晶紫与碘的复合物易被乙醇抽提出来，因此，革兰氏阴性菌细胞被脱色，当复染时，脱掉紫色的细胞的细胞壁又着上红色（例如大肠杆菌）。

三、实验步骤：1、取一个载玻片，将其洗净并沿一个方向擦拭干净，直至液体不再其上收缩为止；将接种环整平，用灼烧过的接种环在混匀的菌种中取菌，按常规方法图片，应涂大，不宜过厚。

2、将涂片用火焰固定，不宜烤得太狠，否则菌种呈假阳性。

3、滴加1滴结晶紫染液，染色1min，水洗。

4、滴加革兰氏碘液，作用1min，水洗5、滴加脱色乙醇，脱色30~40s，不宜脱色太狠，否则菌种呈假阴性。

6、水洗，滴加番红复染液，复染1min，水洗，晾干7、镜检并拍照。

四、注意事项：1、选用活跃生长期菌种染色，老龄的革兰氏阳性细菌会被染成红色而造成假阴性。

2、涂片不宜过厚，以免脱色不完全造成假阳性。

3、脱色是革兰氏染色是否成功的关键，脱色不够造成假阳性，脱色过度造成假阴性。

实验结果与讨论：1、结果：高倍镜下观察的菌体图像：大肠杆菌金黄色葡萄球菌2、思考与讨论：。

1.革兰氏染色的机理和步骤机理：G+、G-主要由其CW化学成分的差异而引起对乙醇的通透性，抗脱色能力的差异。

主要有肽聚糖的厚度和结构所决定。

G+的CW:肽聚糖层厚，脂质含量低。

乙醇脱色时CW脱水，孔径减少，透性降低，不易脱色，呈初染得蓝紫色。

G-的CW：肽聚糖层薄，脂质含量高。

乙醇脱色时，类脂被乙醇溶解，透性升高，细胞被复染显红色。

步骤：①涂片：在干净的载玻片上滴一滴水，用接种环挑取菌体均匀涂布于水中。

②固定：将玻片靠近酒精灯火焰，蒸干水分，但不要烤焦。

③初染：用碱性颜料结晶紫对菌液涂片进行初染。

④媒染: 以碘液媒染1min，水洗，吸干水分。

(细胞内形成结晶紫与碘的复合物，增强相互作用）⑤脱色(关键步骤）：以95%的乙醇脱色30s，应适当振荡均匀，是乙醇脱色完全。

⑥水洗，吸干。

⑦复染：??(第2张）复染30s，水洗吸干。

⑧干燥镜检。

2、用渗透皮层膨胀学说解说芽孢耐热机制。

芽孢的耐热性在于芽孢衣对多价阳离子和水分的透性很差，以及皮层的离子强度很高，这就使皮层产生了极高的渗透压去夺取芽孢核心中水分，其结果造成皮层的充分膨胀和核心的高度失水，正是这种失水的核心才赋予芽孢极强的耐热性。

3、引起微生物培养过程中PH变化的几种可能反应，并说明如何能够维持微培PH稳定。

答：培养过程中，由于营养物质被分解利用，代谢产物的形成与积累，会导致PH变化。

（第2张中的图）还与培养基的C/N比有关，C/N高，经培养基后PH显著下降，C/N 低，经培养基后PH明显上升。

PH调节：①加入缓冲剂--------常用:一氢二氢磷酸盐，K2HPO4 呈碱性，KH2PO4 酸性，只在一定的PH范围内调节（6.4--7.2）②大量产酸的菌株，加CaCO3调节，CaCO3难溶于水，不会使培养液的PH过度增加，但可不断中和微生物产的酸。

③培养液中存在天然的缓冲系统，如AA，肽，Pr均属两性电解质，也起缓冲的作用。

④过酸：治标------加NaOH、Na2CO3中和，治本-----加适量氮源：NaNO3、Pr、NH3·H2O；增加通风量。

革兰氏染色实验报告实验目的，通过革兰氏染色实验，观察和比较革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的显微镜下的形态特征，从而对细菌进行初步鉴定。

实验材料和方法：1. 实验材料，革兰染色试剂（碘液、靛洋红、洗涤液）、玻璃片、无菌吸管、显微镜、革兰氏阳性菌培养液、革兰氏阴性菌培养液。

2. 实验步骤：（1）取一张无菌玻璃片，用无菌吸管分别取革兰氏阳性菌培养液和革兰氏阴性菌培养液滴于玻璃片上。

（2）将玻璃片放在火焰上加热，使细菌液均匀分布在玻璃片上。

（3）用吸管滴加碘液，静置1分钟后倾倒干净。

（4）用吸管滴加靛洋红，静置1分钟后用水冲洗干净。

（5）将玻璃片挂在显微镜载玻片上，用100倍镜观察。

实验结果：在显微镜下观察，革兰氏阳性菌呈紫色或蓝紫色，球菌呈葡萄簇状，链球菌呈链状排列；革兰氏阴性菌呈红色或粉红色，杆菌呈杆状或弯曲状排列。

实验结论：通过本次实验，我们成功地进行了革兰氏染色，观察到了革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌在染色后的形态特征。

革兰氏染色是一种简单而有效的细菌初步鉴定方法，对于临床医学和微生物学研究具有重要意义。

实验注意事项：1. 实验过程中要保持玻璃片的无菌状态，避免外界污染。

2. 染色试剂的使用要按照规定比例和顺序进行，避免试剂浓度不足或过高影响染色效果。

3. 在观察细菌形态时，要注意调节显微镜的焦距和光线，以获得清晰的观察效果。

4. 实验结束后，要及时清洗实验器材，保持实验台面的清洁。

总结：革兰氏染色实验是微生物学实验中常用的一种方法，通过本次实验的学习和实践，我们对革兰氏染色的原理和步骤有了更深入的理解，并且掌握了正确的操作技巧。

革兰氏染色在细菌鉴定和临床诊断中具有重要的应用价值，希望通过今后的学习和实验，能够进一步提高自己的实验操作能力和科研水平。

革兰氏染色实验报告革兰氏染色实验报告引言：革兰氏染色是微生物学中一项重要的实验技术，它能够将细菌分为革兰阳性和革兰阴性两类。

本次实验旨在通过革兰氏染色的方法，观察和区分不同类型的细菌。

实验材料与方法：本次实验所使用的材料包括：革兰染色试剂盒、革兰阳性细菌培养物、革兰阴性细菌培养物、无菌玻璃片、显微镜等。

1. 准备工作：首先，将革兰染色试剂盒取出并按照说明书中的步骤进行试剂的配制。

确保试剂的浓度和比例正确。

2. 样本制备：将革兰阳性细菌培养物和革兰阴性细菌培养物分别取出一小部分，用无菌棉签将其均匀涂抹在两块无菌玻璃片上。

3. 革兰染色操作：将涂有细菌的玻璃片依次经过以下步骤进行染色：a. 将玻璃片在火焰中迅速燃烧一下，以杀灭细菌。

b. 将玻璃片放入革兰碘液中浸泡1分钟，使细菌固定。

c. 用蒸馏水冲洗玻璃片，去除多余的碘液。

d. 将玻璃片放入革兰洗涤液中浸泡30秒，去除细菌外层的染色剂。

e. 用蒸馏水冲洗玻璃片，去除多余的洗涤液。

f. 将玻璃片放入革兰颜色素中浸泡1分钟，使细菌染色。

g. 用蒸馏水冲洗玻璃片，去除多余的颜色素。

h. 将玻璃片放入革兰酒精溶液中浸泡30秒，使细菌脱色。

i. 用蒸馏水冲洗玻璃片，去除多余的酒精溶液。

j. 将玻璃片放入革兰颜色素中浸泡1分钟，使细菌重新染色。

k. 用蒸馏水冲洗玻璃片，去除多余的颜色素。

l. 将玻璃片晾干。

4. 显微镜观察：将染好色的玻璃片放置在显微镜上，调节倍率和焦距，观察细菌的形态和染色情况。

结果与讨论：通过显微镜观察，我们可以清晰地看到革兰阳性细菌和革兰阴性细菌在染色后的差异。

革兰阳性细菌：在显微镜下观察，革兰阳性细菌呈现出紫色或蓝色，形态较为饱满，细胞壁厚而坚固。

典型的革兰阳性细菌有葡萄球菌和链球菌等。

革兰阴性细菌：在显微镜下观察，革兰阴性细菌呈现出红色或粉红色，形态相对较小且较细长，细胞壁较薄。

典型的革兰阴性细菌有大肠杆菌和沙门氏菌等。

革兰氏染色的原理是基于细菌细胞壁的差异。