第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备

思考题绪论1. 免疫应答主要分为哪几个阶段？2.中枢免疫器官对免疫细胞的发育起什么作用？3.外周免疫器官主要由哪些组织与器官组成？在免疫应答中发挥什么作用？淋巴细胞、B淋巴细胞与NK细胞的主要功能分别是什么？5.补体系统的主要激活途径有何不同6.免疫辅助细胞在特异性免疫应答中发挥什么作用？7.7.临床免疫学主要的研究方向是什么？8.8.免疫学检验可分为几个部分？9.9.临床免疫学及免疫检验在移植免疫、肿瘤免疫中的意义。

10.10.现代免疫学技术包括了哪些方法？第二章抗原抗体反应1．什么是抗原抗体反应？抗原抗体反应的原理是什么？2．抗原抗体的结合力有哪些？3．抗原抗体反应有哪些特点？4．如何理解抗原抗体反应的特异性和交叉反应？5．什么是抗原抗体反应的可逆性？有何应用？6．如何理解抗原抗体反应的亲和力和亲合力？7．抗原抗体反应体系中为何要确定抗原、抗体的最适比例？8．抗原抗体反应有哪些影响因素？9．基于抗原抗体反应的免疫学检测技术有哪些？10．什么是标记免疫技术？标记免疫技术有哪些类型？第三章免疫原和抗血清的制备1．什么是免疫原？2．如何制备可溶性抗原？3．常用的细胞破碎方法有哪些？4．连接半抗原的载体有哪些？制备半抗原性免疫原的方法有哪些？5．纯化抗原的鉴定包括有哪些内容？6．什么是免疫佐剂？免疫佐剂有哪些种类？免疫佐剂的作用机制有哪些？7．什么是抗血清？什么是多克隆抗体？8．如何制备抗血清？9．动物采血有哪些方法？10．抗血清的鉴定包括哪些内容？第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备1．杂交瘤技术是如何问世的？其基本原理是什么？2．什么是单克隆抗体？其特性和局限性如何？与多克隆抗体有何异同？3．杂交瘤细胞的克隆方法有哪些？4．细胞株冻融的原则是什么？5．大量制备单克隆抗体的方法有哪些，各有哪些优缺点？6．单克隆抗体的性质鉴定的方法有哪些？7．叙述单克隆抗体的制备流程和应用。

8．叙述基因工程抗体的概念和优点。

红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体的制备的开
题报告
1. 研究背景
血型是人体基因组中的重要表型，血型分类系统多种多样，主要有ABO血型系统和Rh血型系统。

血型抗原是血细胞表面的特定蛋白质和糖类成分，在输血和器官移植等医学实践中具有非常重要的意义。

因此，
对于血型抗原和抗体的研究和制备具有重要的意义。

目前，红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体成为了研究的热点，
这些抗体的制备可通过某些特异性标志物筛选肝炎病毒抗体、瘤细胞表
面分子抗体、药物代谢酶等。

由于这些抗体具有很高的特异性、敏感性
和稳定性，因此已被广泛用于诊断、治疗以及实验室研究等领域。

2. 研究目的
本研究旨在制备红细胞血型单克隆抗体及基因工程抗体，探究不同
制备方法以及对不同固定的红细胞抗原的适用性，为医学实践提供支持。

3. 研究方法
（1）红细胞血型单克隆抗体的制备
提取出兔、鼠或小鼠等动物的淋巴细胞后，与牛红细胞或猪红细胞
等固定红细胞进行融合，制备出单克隆抗体。

（2）基因工程抗体的制备
采用重组DNA技术合成特定的单克隆抗体，通过细胞处理和分离纯化，制备出基因工程抗体。

4. 研究进展和计划
目前，我们已经完成了红细胞血型单克隆抗体的制备，同时对基因
工程抗体的制备进行了初步实验。

下一步，我们将在不断实验和分析的
基础上，优化制备方法和条件，进一步探究两种抗体对不同血型固定红细胞的适用性差异，完善有关的研究成果。

基因工程制备抗体方案有哪些引言抗体是一种可以识别并结合特定抗原的蛋白质，具有重要的生物学功能和临床应用价值。

传统制备抗体的方法主要是从动物（如小鼠、兔子等）中提取抗体，但该方法存在一些缺点，如周期长、成本高、质量不稳定等。

因此，基因工程技术的发展使得制备抗体的方法得到了革命性的改变，可以通过基因工程技术在体外合成抗体，提高了抗体的质量和稳定性。

本文将介绍基因工程制备抗体的方法和流程，包括抗体的选择和克隆、表达、纯化和鉴定等环节。

通过基因工程方法获得的抗体，可以应用于药物研发、医学诊断、生物学研究等领域，具有广阔的应用前景。

1. 抗体的选择和克隆（1）抗原的选择制备抗体的第一步是选择合适的抗原。

抗原是引发免疫反应的物质，可以是蛋白质、多肽、多糖、药物等。

根据需要制备的抗体类型，可以选择相应的抗原。

例如，如果需要制备单克隆抗体，可选择单个抗原蛋白作为抗原进行制备。

（2）抗体基因的克隆在选择了合适的抗原后，下一步是将抗体基因克隆到表达载体中。

通常可以利用PCR方法从免疫细胞中扩增出抗体基因，并将其插入表达载体中。

选择合适的表达载体是非常重要的，通常选择在哺乳动物细胞或大肠杆菌中表达。

2. 抗体的表达（1）表达载体的构建在决定抗体表达载体后，接下来是进行表达载体的构建。

通常表达载体包括启动子、终止子、选择标记基因等，通过合成或限制性内切酶切割等方法将抗体基因插入表达载体中。

（2）转染和筛选将构建好的表达载体导入宿主细胞中，可以通过转染等方法实现。

转染后，需要进行筛选，筛选出表达抗体的稳定细胞株。

通常可以利用克隆技术选取高表达的细胞株。

3. 抗体的纯化（1）细胞培养和收获经过筛选的稳定细胞株可以进行大规模培养，收获细胞培养上清液。

（2）亲和层析纯化常用的抗体纯化方法包括亲和层析纯化。

可以利用蛋白A/G或其他具有特异性结合抗体的配体进行纯化。

通过这种方法可以高效地将目标抗体从细胞培养上清液中纯化出来。

4. 抗体的鉴定（1）免疫印迹（Western blot）通过Western blot方法，可以验证纯化得到的抗体是否具有结构完整，是否与目标抗原结合。

第四章单克隆抗体与基因工程抗体的制备将单个B细胞分离出来加以增殖形成一个克隆群落，该B细胞克隆产生出针对单一表位、结构相同、功能均一的抗体，称为单克隆抗体。

第一节杂交瘤技术的基本原理杂交瘤技术的原理是利用聚乙二醇（PEG）为细胞融合剂，使免疫的小鼠脾细胞与具有体外长期繁殖能力的小鼠骨髓瘤细胞融为一体，在HAT选择性培养基的作用下，只让融合成功的杂交瘤细胞生长，经过反复的免疫学检测、筛选和单个细胞培养（克隆化），最终获得既能产生所需单克隆抗体，又能长期繁殖的杂交瘤细胞系。

将这种杂交瘤细胞扩大培养，接种于小鼠腹腔，在小鼠腹腔积液中即可得到高效价的单克隆抗体。

杂交瘤技术是一项周期长和高度连续性的实验技术，涉及大量的细胞培养、免疫化学等方法。

具体包括两种亲本细胞的选择与制备，细胞融合，杂交瘤细胞的筛选与克隆化等。

一、杂交瘤技术（一）小鼠骨髓瘤细胞1.细胞株稳定，易于传代培养。

2.细胞株自身不会产生免疫球蛋白或细胞因子。

3.该细胞是次黄嘌呤鸟嘌呤磷酸核糖转化酶（HGPRT）或胸腺嘧啶激酶（TK）的缺陷株。

4.目前最常用的骨髓瘤细胞是NS-1和SP2/O细胞株。

（二）免疫脾细胞免疫时选用与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠，鼠龄8～12周，体重约20g，雌雄均可，但必须分笼。

免疫用抗原尽量提高其纯度和活性，免疫途径多用腹腔内或皮内多点注射法。

如为珍贵微量抗原，可用脾脏内直接注射法进行免疫。

（三）细胞融合细胞融合是产生杂交瘤细胞的中心环节。

PEG（聚乙二醇）有助于细胞融合。

（四）杂交瘤细胞的选择性培养将经过融合的细胞置于含有次黄嘌呤、甲氨蝶呤和胸腺嘧啶核苷的HAT培养基中。

1.脾细胞：在一般培养基中不能生长繁殖。

2.骨髓瘤细胞：采用的小鼠骨髓瘤细胞都是HGPRT或TK代谢缺陷型细胞，在HAT培养基中，不仅合成DNA的主要途径被氨基蝶呤阻断，又因缺乏HGPRT或TK而不能利用次黄嘌呤，虽有TK可利用胸腺嘧啶核苷，但终因缺乏嘌呤不能完整合成DNA，而使骨髓瘤细胞在HAT培养基中不能增殖而死亡。

单克隆抗体制备流程首先，在单克隆抗体制备之前，需要选择一个适当的抗原。

抗原可以是蛋白质、多肽、糖类或其他小分子。

选取抗原时，需要考虑抗原的表达水平、抗原的免疫原性以及抗原的稳定性等因素。

接下来，选择一个合适的实验动物进行免疫。

常用的实验动物有兔子和小鼠。

在免疫之前，需要先给实验动物注射适量的佐剂，以增强免疫效果。

通常，实验动物会被多次免疫，每次免疫之间有一段时间的间隔。

在实验动物免疫一段时间后，可以进行细胞融合以产生混杂瘤细胞。

混杂瘤细胞通常是由B细胞和骨髓瘤细胞融合而成，对于小鼠骨髓瘤细胞，常用的有SP2/0和NS0细胞系。

融合的方法主要有两种：一种是将免疫细胞和骨髓瘤细胞混合，然后使用聚乙二醇（PEG）进行融合；另一种是使用电击脉冲进行细胞融合。

融合细胞会经过适当的培养条件进行筛选和扩增。

在融合细胞扩增过程中，会进行筛选以保证融合细胞是产生单克隆抗体的。

最常用的筛选方法是酶联免疫吸附测定（ELISA）。

抗原会被固定在微孔板上，然后将培养液中的细胞涂覆在孔中。

如果其中一孔中有抗体分泌，则抗原会被结合，并且可以通过添加辣根过氧化物酶（HRP）标记的二抗和基质来检测抗体的存在。

经过筛选和鉴定后，选择一个或多个产生单克隆抗体的细胞进行单克隆扩增。

单克隆扩增时，可以通过细胞有限稀释法以及酵母酶聚合酶链式反应（YAC-PCR）等方法进行。

最后，可以通过收集上述单克隆细胞的上清液或细胞提取物来得到单克隆抗体。

上清液或细胞提取物中的抗体可以通过纯化方法，如蛋白A/G 亲和层析或蛋白L亲和层析等，得到纯化的单克隆抗体。

综上所述，单克隆抗体的制备流程包括抗原选择、免疫动物、细胞融合、筛选和克隆等步骤。

通过这些步骤，可以获得单克隆抗体用于科学研究和临床应用。

简述单克隆抗体的制备过程随着生物技术的发展和应用的广泛，单克隆抗体作为一种重要的生物分子工具，在医学诊断、治疗和科学研究领域发挥着重要作用。

单克隆抗体是通过体外复制细胞免疫应答过程中产生的单一克隆抗体分子，具有高度特异性和亲和力。

下面将简要介绍单克隆抗体的制备过程。

第一步：免疫原的选择制备单克隆抗体的第一步是选择适当的免疫原。

免疫原可以是蛋白质、多肽、糖类、脂类等生物大分子，也可以是一种特定的细胞、细胞表面分子或化合物。

免疫原的选择应根据需要检测或研究的目标来确定。

第二步：免疫动物的选择和免疫过程为了制备单克隆抗体，需要选择适当的免疫动物。

常用的免疫动物包括小鼠、兔子、大鼠等。

免疫过程分为初次免疫和加强免疫两个阶段。

初次免疫是将免疫原注入免疫动物体内，刺激机体产生免疫应答。

加强免疫是在初次免疫后再次注入免疫原，以增强机体的免疫应答。

第三步：细胞融合和杂交瘤的建立细胞融合是制备单克隆抗体的关键步骤。

它是将免疫动物体内产生的抗体产生细胞与骨髓瘤细胞融合，形成杂交瘤细胞。

常用的骨髓瘤细胞包括SP2/0和NS0等。

融合细胞的选择和优化是确保制备高效单克隆抗体的重要因素。

第四步：筛选和克隆单克隆抗体细胞融合细胞后，需要进行单克隆抗体细胞的筛选和克隆。

常用的筛选方法包括限稀稀释法、酶联免疫吸附试验等。

通过这些筛选方法可以筛选出产生目标抗体的单个细胞克隆。

第五步：单克隆抗体的生产和纯化筛选出单克隆抗体细胞后，需要进行大规模培养和生产。

单克隆抗体的生产可以通过体外培养细胞和动物体内生产两种方式进行。

体外生产是将单克隆抗体细胞培养在培养基中，利用生物反应器等设备进行大规模培养。

动物体内生产是将单克隆抗体细胞移植到合适的动物体内，利用动物自身的机制产生单克隆抗体。

之后，通过各种纯化方法，如蛋白A/G亲和层析、离子交换层析、凝胶过滤层析等，从培养物中纯化出单克隆抗体。

第六步：单克隆抗体的特性研究和应用制备得到的单克隆抗体需要进行进一步的特性研究和应用。

中级临床医学检验技术临床免疫学及检验（单克隆抗体与基因工程抗体的制备、凝集反应）模拟试卷1(题后含答案及解析) 题型有：1. A1型题 2. B1型题1．制备单克隆抗体常选用小鼠的哪类细胞作为饲养细胞A．中性粒细胞B．K细胞C．肥大细胞D．成纤维细胞E．腹腔细胞正确答案：E解析：小鼠腹腔细胞含有巨噬细胞，除具有饲养作用外，还可清除死亡破碎细胞及微生物。

知识模块：单克隆抗体与基因工程抗体的制备2．下列有关单克隆抗体特点的叙述中错误的是A．特异性强B．灵敏度高C．高度的均一性D．对pH、温度及盐类浓度耐受性强E．可重复性正确答案：D解析：单克隆抗体纯度高，与抗原结合的特异性强，理化性状高度均一，有效抗体含量高，但抗原抗体反应仍受pH、温度及盐类浓度的影响。

知识模块：单克隆抗体与基因工程抗体的制备3．B细胞杂交瘤技术中细胞融合的选择培养基是A．HAT培养基B．次黄嘌呤培养基C．甲氨蝶呤培养基D．嘧啶核苷培养基E．胸腺嘧啶核苷培养基正确答案：A解析：细胞杂交瘤技术中细胞融合的选择培养基含有三种关键成分：次黄嘌呤(H)、氨基蝶呤(A)、胸腺嘧啶核苷(T)，缩写为HAT培养基。

知识模块：单克隆抗体与基因工程抗体的制备4．多发性骨髓瘤细胞是B淋巴细胞杂交瘤细胞的理想细胞，其原因不包括下列哪项A．稳定和易培养B．自身无分泌功能C．改变细胞恶性变化D．融合度高E．HGPRT缺陷正确答案：C解析：多发性骨髓瘤是浆细胞异常增生的恶性肿瘤，细胞有恶性变化。

知识模块：单克隆抗体与基因工程抗体的制备5．关于单克隆抗体特点的错误叙述A．理化性状高度均一B．生物活性单一C．来源容易D．特异性强E．针对多种抗原决定簇正确答案：E解析：杂交瘤细胞产生的单克隆抗体是针对抗原分子上某一单个抗原决定簇的抗体，其特点是理化性状高度均一、生物活性单一、来源容易和特异性强。

知识模块：单克隆抗体与基因工程抗体的制备6．杂交瘤细胞含有A．两亲本细胞各一半染色体B．两亲本细胞全部染色体C．两个染色体D．融合特有基因信息E．亲代某些特性基因正确答案：B解析：杂交瘤细胞由两个细胞融合而成，含有两亲本细胞全部染色体，同时具有两种细胞的特性。